實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué):第五節(jié)　藥理學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇與應(yīng)用

一、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥理學(xué)研究中的選擇與應(yīng)用

（一)鎮(zhèn)靜催眠和抗精神病藥物實(shí)驗(yàn)

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：研究動(dòng)物行為藥理學(xué)最常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、貓、鴿、猴等。實(shí)驗(yàn)時(shí)常用兩個(gè)種屬的動(dòng)物。第一種是用實(shí)驗(yàn)比較方便的動(dòng)物，如小鼠、大鼠。第二種是用非嚙齡類動(dòng)物，最好選用猴子或猩猩。選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)注意各種系動(dòng)物的特點(diǎn)。第二種適用于作刺激研究，因?yàn)榇笫笠曈X、嗅覺較靈敏，做條件反射等實(shí)驗(yàn)反應(yīng)良好。但大鼠對(duì)許多藥物易產(chǎn)生耐藥性。貓和狗的自然行為多樣而穩(wěn)定，常用于神經(jīng)藥理、神經(jīng)生理以及生為觀察的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。猴子和猩猩則更接近于人類。大鼠和小鼠的活動(dòng)在夜間比白天多，故研究中樞神經(jīng)抑制藥在夜間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)較好。不同種屬的動(dòng)物對(duì)藥物的反應(yīng)可以有明顯差異。如嗎啡對(duì)大鼠、兔、狗和猴的作用是抑制性的。便對(duì)小鼠、貓、鵝和馬的作用是興奮性的。所以做實(shí)驗(yàn)時(shí)要包括不同種屬的動(dòng)物。

2．藥物對(duì)動(dòng)物一般活動(dòng)的影響：常用且簡易的方法是采用直接觀察法，觀察動(dòng)物的一般行為和特殊情緒，如激怒、躁狂、瞳孔大小、對(duì)捕捉抵抗等行為。為便于記錄，可用評(píng)定行為改變和行為分級(jí)的方法，采用定性和定量來記錄動(dòng)物行為。如常用Norton對(duì)猴、貓、地鼠的行為定量分級(jí)，將對(duì)照組和用藥組動(dòng)物進(jìn)行定時(shí)觀察，并按下述行為分級(jí)法打分記錄（表10-28)，求出每組平均數(shù)，進(jìn)行七檢驗(yàn)，確定有無顯著性。

表10-28　Norton行為分級(jí)法

3．常用催眠藥對(duì)各種動(dòng)物的影響：各種動(dòng)物的催眠劑量見表10-29。

表10-29　藥物對(duì)各種動(dòng)物的催眠劑量（荻原彌四郎1971)

*表示腹腔注射

（二)抗精神病藥物的行為實(shí)驗(yàn)

去水嗎啡能增強(qiáng)大白鼠舔、嗅、咬等定向行為，這是由于藥物增強(qiáng)黑質(zhì)--經(jīng)紋狀體腦內(nèi)多巴胺（DA)能系統(tǒng)功能的緣故。安定劑抑制大白鼠的定向運(yùn)動(dòng)的作用強(qiáng)度與安定劑抑制腦內(nèi)DA能受體功能有相關(guān)性。常選用150～200克大白鼠，皮下注射去水嗎啡2mg/kg，作定向運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)。

去水嗎啡引起的攀爬行為是動(dòng)物黑質(zhì)－紋狀狀體系統(tǒng)內(nèi)DA能功能增強(qiáng)的表現(xiàn)。Costentin發(fā)現(xiàn)小白鼠注射去水嗎啡后喜歡垂吊在鐵絲網(wǎng)上，應(yīng)用安定劑可拮抗去水嗎啡引起的小白鼠垂吊現(xiàn)象，這一拮抗作用與安定劑作用的強(qiáng)弱有較好的平行關(guān)系。

僵住癥是動(dòng)物錐體外系運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)的一種表現(xiàn)，常選用150～200克大白鼠作此實(shí)驗(yàn)。

（三)抗驚厥和抗震顫麻痹藥實(shí)驗(yàn)

1．化學(xué)物質(zhì)引起驚厥法：常選用小白鼠，也可采用大白鼠，貓或兔則可作特殊觀察。采用戊四唑驚厥法，在小鼠皮下注射85mg/kg（最大也有用150mg/kg，此劑量已是LD₉₈)，腹腔注射為100mg/kg（最大175mg/kg)作實(shí)驗(yàn)時(shí)，不同種系小鼠可有不同反應(yīng)，Bastian曾比較過由8處供應(yīng)的4個(gè)種系的小鼠，其中CFW種小鼠在持續(xù)驚厥后立即死亡的發(fā)生率為100%，而其它3種有10～30%動(dòng)物在持續(xù)驚厥后存活很長時(shí)間不死亡。因此作藥物活性比較時(shí)，應(yīng)選用同一品種。

2．聽源性發(fā)作法：某些敏感動(dòng)物（主要是鼠類)在受到強(qiáng)鈴聲刺激時(shí)，能產(chǎn)生一種定型的運(yùn)動(dòng)性發(fā)作，稱為“聽源性發(fā)作”（Audiogenic　seizure)，這是研究抗癲癇藥物的一種常用模型。如果選用DBA/2J系小鼠（聽源陽性鼠)供科研用。也可采用一些藥物來提高大鼠聽源性發(fā)作陽性率。如在亞驚厥劑量的戊四唑（16mg/kg)、士的寧（1mg/kg)、若味毒（1mg/kg)或咖啡因（150mg/kg)作用基礎(chǔ)上，給予鈴聲刺激，可使部分聽源陰性鼠也能產(chǎn)生發(fā)作。上述藥物所致的陽性發(fā)作率分別為47.%、66.5%、38.4%、18.1%。

3．慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇模型：各種動(dòng)物的大腦皮質(zhì)感覺動(dòng)物區(qū)是致癇敏感區(qū)之一，特別是猴極易在此區(qū)形成癲癇病灶。將鋁劑注入到中央前回和中央后回比單注入中央前回易于形成；將鋁劑注入到猴和貓的顳葉前部，可引起運(yùn)動(dòng)性和精神運(yùn)動(dòng)性發(fā)作；大腦皮質(zhì)其區(qū)區(qū)域不敏感。此外，還報(bào)導(dǎo)注于杏仁殼核也可引起發(fā)作。病理模型的形成以猴最為敏感，貓次之，其他動(dòng)物不敏感。所以，常選用猴作此實(shí)驗(yàn)，麻醉后無菌條件以猴最為敏感，貓次之，其他動(dòng)物不敏感。所以，常選用猴作此實(shí)驗(yàn)，麻醉后無菌條件下將消毒后的4%氫氧化鋁乳劑用皮內(nèi)針頭注到前腦和后腦皮質(zhì)感覺運(yùn)動(dòng)區(qū)，注射兩點(diǎn)或數(shù)點(diǎn)，勿使藥液外流于軟腦膜內(nèi)，可在注后35-60天，出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作。如果鋁劑形成的病灶嚴(yán)重，也可在注后2-3周發(fā)作。

鈷可引起大白鼠、小白鼠和貓的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇，而猴對(duì)鈷卻不敏感，常選用大白鼠，在麻醉消毒下，開顱將消毒的市售鈷粉（200篩孔)約30mg，放在皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的前側(cè)（面積為10mm2)，安好電極，縫合，動(dòng)物約在放置鈷粉后2～3周，出現(xiàn)置鈷對(duì)側(cè)肢體發(fā)生陣攣，少數(shù)動(dòng)物于局部陣攣后出現(xiàn)全身發(fā)作。

點(diǎn)燃效應(yīng)（Kindling　Effect,KE)引起發(fā)作是一種較好的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇模型。其形成方法是以一定的刺激強(qiáng)度和時(shí)間間隔刺激腦的一定部位。動(dòng)物常選用大白鼠、貓、猴、兔等。刺激強(qiáng)度：大白鼠杏仁核和海馬為50～400μA，貓為100～500μA，猴和狒狒為200～400μA。

4．抗震顫麻痹藥物篩選方法：目前篩選抗震顫麻痹藥物的方法，常采用藥物誘發(fā)震顫和損傷錐體外系某些核團(tuán)以誘發(fā)震顫。如常選用豚鼠藥物誘發(fā)震顫法，按0.002%水楊酸毒扁豆堿溶液以0.3mg/kg劑量注往前右側(cè)頸動(dòng)脈，注射速度要嚴(yán)格控制在20～25秒之間，并在注射時(shí)暫夾住左側(cè)頸動(dòng)脈，以保證藥液進(jìn)右側(cè)椎動(dòng)脈。動(dòng)物多于注射毒扁豆鹼后15～20秒出現(xiàn)癥狀，典型陽性反應(yīng)是頭左偏，身體強(qiáng)迫性向左側(cè)旋轉(zhuǎn)作環(huán)形運(yùn)動(dòng)，同時(shí)可伴有眼球左偏并向?qū)��?cè)震顫，全部癥狀持續(xù)5分鐘。還可選用小白鼠，按25mg/kg腹腔注射0.25%檳榔鹼溶液；腹腔注射0.5%匹魯卡品，50mg/kg；腹腔注射0.0014%氯化震顫素0.14mg/kg，均可出現(xiàn)明顯震顫。

（四)鎮(zhèn)痛藥物實(shí)驗(yàn)

目前國內(nèi)外篩選鎮(zhèn)痛藥的常用致痛方法，概括有物理性（熱、電、機(jī)械)和化學(xué)性刺激法。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，其中以熱、電刺激及鉀離子皮下透入致痛法使用居多。常用的動(dòng)物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、狗、猴等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的痛反應(yīng)指標(biāo)為嘶叫、舔足、甩尾、掙扎及皮膚、肌肉抽搐等。

應(yīng)用猴子研究鎮(zhèn)痛劑的依賴性較為理想，因?yàn)殒?zhèn)痛劑對(duì)它的信賴性表現(xiàn)與人較接近，戒斷癥狀又較明顯且易于觀察，已成為新鎮(zhèn)痛劑進(jìn)入臨床試用前必須的試驗(yàn)。

（五)解熱、抗炎藥實(shí)驗(yàn)

炎熱和炎癥都是臨床常見的癥狀。實(shí)驗(yàn)室常用病毒、細(xì)菌、細(xì)菌產(chǎn)物、內(nèi)毒素和抗原抗體復(fù)合物引起發(fā)熱，也有用微量前列腺素（PGE)直接注入動(dòng)物腦室或丘腦下部原抗體復(fù)合物引起發(fā)熱，也有用微量前列腺素（PGE)直接注入動(dòng)物腦室或丘腦下部進(jìn)行致熱。

常用的致炎方法有以血管通透性增加為主的足蹠浮腫法、無菌性胸（腹)膜炎、佐劑性關(guān)節(jié)炎、紫外線紅斑法、放射線照射法以及其它菌性炎癥；有觀察白細(xì)胞游走的羧甲基纖維素囊法、大白鼠角膜法、毛細(xì)管法和小室濾膜法；有制造肉芽腫模型的棉球法、紙片法、瓊脂法、巴豆油囊袋法和受精雞卵法等。此外亦有用妊娠大白鼠子宮自發(fā)收縮為指標(biāo)，間接反應(yīng)炎癥過程的方法。

實(shí)驗(yàn)性炎癥應(yīng)該選用哺乳類動(dòng)物，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷牟煌�采用不同種屬的動(dòng)物。例如足跖浮腫模型須采用大白鼠，形成過敏性炎癥應(yīng)首選豚鼠，而家兔則最易產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)。此外，幼小動(dòng)物（如小狗、小兔、小白鼠)炎癥反應(yīng)相當(dāng)微弱，甚至可以完全不出現(xiàn)。家兔對(duì)刺激的炎癥反應(yīng)與其毛色有關(guān)，白毛兔比有色毛兔的炎癥強(qiáng)度和炎癥經(jīng)過均較劇烈。曾致炎組織比初次炎癥刺激時(shí)反應(yīng)微弱，因此不宜在同一部位反復(fù)復(fù)制炎癥。

動(dòng)物種屬、年齡和形態(tài)特點(diǎn)，對(duì)發(fā)熱反應(yīng)有明顯影響。例如小白鼠、豚鼠，有時(shí)包括大白鼠，均不宜用于復(fù)制發(fā)熱模型。這些動(dòng)物的恒溫機(jī)能差，對(duì)發(fā)熱刺激的反應(yīng)低，有時(shí)對(duì)熱源性物質(zhì)的刺激體溫反而下降。而兔的發(fā)熱反應(yīng)典型恒定，因而常用。但須注意，家兔年齡在20～30天以內(nèi)者可不發(fā)生發(fā)熱反應(yīng)，而體重在2kg左右者，結(jié)果最為滿意。大白鼠則以體重150～200g為最適宜。同種動(dòng)物形態(tài)上的差異也會(huì)影響到體溫反應(yīng)，如毛家兔和長毛狗的體溫比短毛者上升的慢。狗對(duì)外界環(huán)境的變動(dòng)反應(yīng)穩(wěn)定，但小白鼠和大白鼠的體溫波動(dòng)很大。動(dòng)物長時(shí)間捆綁時(shí)，體溫可顯著降低。當(dāng)動(dòng)物掙扎時(shí)則可使體溫升高。因此通常把動(dòng)物固定在木盒內(nèi)，以限制其多余的活動(dòng)。給動(dòng)物注射菌液或內(nèi)毒素時(shí)，注射量并不與發(fā)熱反應(yīng)強(qiáng)度成正比。注入量過大時(shí)的體溫可不上升，故劑量的選擇必須恰好處。靜注菌液或內(nèi)毒素等引起的發(fā)熱較皮下注射迅速而強(qiáng)烈。但注射化學(xué)刺激劑則必須注射到動(dòng)物皮下才會(huì)引起較強(qiáng)反應(yīng)�？赡苁窃擃愇镔|(zhì)刺激皮下組織造成無菌性炎癥所致。

（六)中樞興奮藥實(shí)驗(yàn)

去水嗎啡對(duì)不同種屬動(dòng)物具有不同的作用，對(duì)某些動(dòng)物（如狗、貓)可引起頑固性嘔吐；對(duì)另一些動(dòng)物（如馬、牛、嚙齒類動(dòng)物)則可引起驚恐、運(yùn)動(dòng)性增高和強(qiáng)制性的嚙齒動(dòng)物（Guawing)；鴿則引起強(qiáng)烈性的啄鑿。為了研究藥物對(duì)去水嗎啡的作用，多認(rèn)為選用具有溫和嚙齒作用的小白鼠為宜。以觀察藥物能否拮抗去水嗎啡引起的小白鼠嚙齒動(dòng)作，來測定其中樞興奮的強(qiáng)度。

引起食欲抑制的藥物大多為中樞興奮藥，所以測定藥物對(duì)動(dòng)物食物攝取量的影響。可作為中樞興奮藥的篩選指標(biāo)之一。常選用貓來研究食欲抑制藥物有無耐藥性及其發(fā)生速度。亦可選用小白鼠或采用全硫葡萄糖（Aurthioglucose)喂飼的小白鼠肥胖模型來研究食欲抑制藥。

二、傳出神經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一)一般實(shí)驗(yàn)方法和動(dòng)物的選擇

在測定新藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)（LD₅₀)時(shí)，動(dòng)物如出現(xiàn)豎毛，活動(dòng)增加，激動(dòng)興奮，以致發(fā)展為強(qiáng)直一陣攣性抽搐，可初步考慮為擬交感藥。進(jìn)而可觀察其動(dòng)物（或貓)血壓的反應(yīng)，如興奮α-受體，則對(duì)血壓影響較大，并反射地使心率減慢，如興奮β受體，可見血壓下降和心率明顯增快。為了較確切地區(qū)分其對(duì)α、β受體的作用，還可采用α受體阻斷藥酚妥拉明，β受體阻斷藥心得安等作為工具。除血壓實(shí)驗(yàn)外，尚可采用貓瞬膜，貓（或狗)在體腸活動(dòng)等實(shí)驗(yàn)方法。利用一些體外實(shí)驗(yàn)可分析擬交感藥的作用部位，其中最敏感的實(shí)驗(yàn)之一是大白鼠胃底條，此外有兔頭肌、離體兔耳、豚鼠氣管鏈、豚鼠回腸和雞盲腸等制備�？捎靡阎�的α或β-受體興奮劑作為標(biāo)準(zhǔn)，觀察它們與α或β-受體阻斷藥的相互作用，而確定其作用部位。

乙酰膽鹼具有毒蕈堿樣及菸堿樣作用，前者可被阿托品阻斷，后者可被神經(jīng)節(jié)阻滯藥及橫紋機(jī)松馳藥阻斷。凡是通過直接或間接作用興奮副交感效應(yīng)點(diǎn)的藥物可出現(xiàn)流淚、流涎、排尿和排便癥候群。因此在小白鼠LD₅₀實(shí)驗(yàn)中可獲得初步印象，進(jìn)而分別觀察其對(duì)血壓、唾液、瞳孔及胃腸道等反應(yīng)。在貓血壓實(shí)驗(yàn)、蛙心、蛙腹直肌、水蛭背肌等標(biāo)本上可檢定擬膽堿藥和觀察抗膽堿藥的作用，亦可用整體實(shí)驗(yàn)如抑制大白鼠胃潰瘍，抑制大白鼠腸內(nèi)活性炭下移等方法觀察之。

（二)心血管實(shí)驗(yàn)

血壓實(shí)驗(yàn)是檢驗(yàn)傳出神經(jīng)藥物極其敏感的方法，一般采用急性血壓實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物中以狗、貓、兔和大白鼠常用。兔不適用于降壓實(shí)驗(yàn)，因其易于死亡。實(shí)驗(yàn)可用麻醉或毀腦動(dòng)物，因麻醉動(dòng)物的血壓常有三級(jí)波動(dòng)（第一級(jí)波動(dòng)，又稱脈搏性波動(dòng)，系每次心搏影響血壓所致，第二級(jí)波動(dòng)，又稱呼吸性波動(dòng)，即吸氣時(shí)，血壓微升，呼氣時(shí)血壓微降；第三級(jí)波動(dòng)，系血管運(yùn)動(dòng)中樞以稍長間隔，興奮性周期性改變)，使血壓升降不穩(wěn)。如動(dòng)物毀腦后，可排除脊髓以上的中樞神經(jīng)神經(jīng)對(duì)血壓的影響，只出現(xiàn)第一級(jí)波動(dòng)，血壓曲線極不平衡。

離體兔主動(dòng)脈條實(shí)驗(yàn)：兔主動(dòng)脈上含有α-受體，它是測定作用于α-受體藥物的一個(gè)很好標(biāo)本，已被廣泛用來鑒定和分析擬交感藥及其對(duì)抗藥的作用。兔主動(dòng)脈制備曾試制過多種形式，如主動(dòng)脈環(huán)、片及條狀等，但兔主動(dòng)脈螺旋條是最合適的方法之一。此標(biāo)本有較多優(yōu)點(diǎn)，如一個(gè)主動(dòng)脈可制作3～4個(gè)標(biāo)本，可供配對(duì)試驗(yàn)，對(duì)低濃度擬交感藥就很敏感，組織穩(wěn)定性好，可維持較長時(shí)間。

（三)消化道平滑肌實(shí)驗(yàn)

多種動(dòng)物的離體腸道可用來試驗(yàn)傳出神經(jīng)藥物，一般多用離體豚鼠及兔的腸道。豚鼠回腸的自發(fā)活動(dòng)較少，描記時(shí)有穩(wěn)定的基線，適合作藥物鑒定用。兔腸（尤其空腸)具有規(guī)則的擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)，適用于觀察藥物對(duì)此動(dòng)物的影響。豚鼠回腸標(biāo)本加負(fù)荷后已完全松馳，因此加入擬交感藥不會(huì)使其更松馳。

離體豚鼠回腸可用于觀察乙酰膽堿（Ach)和擬膽堿藥的劑量－反應(yīng)關(guān)系；可檢定Ach和擬膽堿藥的含量。離體兔空腸有節(jié)律性收縮活動(dòng)，可觀察腎上腺素（4μg)、去毒豆堿（2μg)等藥物對(duì)空腸擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)的影響。大白鼠胃底條是檢定兒茶酚胺類藥物和5-羥色胺（5-HT)最敏感的標(biāo)本。主要觀察藥物對(duì)胃縱行肌的作用，因標(biāo)本中環(huán)形肌已切斷。經(jīng)檢定兒茶酚胺對(duì)其敏感度要比大白鼠子宮標(biāo)本大10～100倍。雞食道由副交感神經(jīng)支配，因此離體雞食道標(biāo)本適合于試驗(yàn)擬副交感藥物。由于其作用不能完全被神經(jīng)節(jié)阻斷藥所阻滯，故不宜用于試驗(yàn)作用于神經(jīng)節(jié)的藥物。

（四)其它平滑肌等實(shí)驗(yàn)

大白鼠子宮中腎上腺素能受體主要是β-受體，最適用于試驗(yàn)β興奮劑和β-阻斷劑。它對(duì)異丙腎上腺素最敏感，腎上腺次之，對(duì)去甲腎上腺素極不敏感，因此亦可用來檢定含腎上腺素與去甲腎上腺素的混合液中前者的含量。

虹膜括約肌受副交感神經(jīng)支配，當(dāng)此神經(jīng)興奮或應(yīng)用擬膽堿藥時(shí)，瞳孔縮小，抗膽堿藥使瞳孔散大，虹膜輻射肌受交感神經(jīng)支配，此神經(jīng)興奮或應(yīng)用擬交感藥后使瞳孔散大。因此可利用動(dòng)物的瞳孔來測試某藥系擬膽堿藥、抗膽堿藥或擬交感藥。常選用兔和貓的瞳孔進(jìn)行試驗(yàn)。貓瞳孔對(duì)藥物反應(yīng)較靈敏。不麻醉狗的瞳孔不穩(wěn)定，擬交感藥對(duì)其作用極短暫。

離體貓脾條對(duì)兒茶酚胺類很敏感，適用于檢測擬交感藥和α-阻滯藥。脾條對(duì)擬交感藥的反應(yīng)較慢，開始迅速收縮后，即慢慢上升，3～5分鐘收縮達(dá)高峰，恢復(fù)亦慢，即使接觸低濃度的擬交感藥，亦需5分鐘恢復(fù)，如用引起最大反應(yīng)的濃度時(shí)，常需2小時(shí)才恢復(fù)。此標(biāo)本對(duì)異丙腎上腺素不敏感，一般濃度達(dá)2×10-5M才出現(xiàn)反應(yīng)，5×10-2M達(dá)最大反應(yīng)。

水蛭的背肌和蛙復(fù)直肌一樣，Ach使之收縮，用毒扁豆毒堿處理后，對(duì)Ach敏感性大增，此時(shí)Ach的劑量即使低到10^-5M或以下，亦能使懸于5ml浴槽中的肌肉收縮，因此適用于測試微量的未知擬膽堿藥。亦適于測定刺激神經(jīng)（如貓頸上神經(jīng))后釋放的Ach量。

蛙復(fù)直肌標(biāo)本可用來檢測阻斷神經(jīng)肌接點(diǎn)的藥物反應(yīng)和檢定Ach和擬膽堿藥，方法簡便易行，結(jié)果較正確。但在檢定Ach時(shí)，在有毒扁豆堿存在的條件下，其敏感性不及豚鼠回腸和水蛭背肌。

（五)影響傳出神經(jīng)遞質(zhì)的藥物實(shí)驗(yàn)

1．貓瞬膜：貓的瞬膜形大且反應(yīng)靈敏，因此是進(jìn)行瞬膜實(shí)驗(yàn)首選和最適合的動(dòng)物。狗和兔雖然也有瞬膜，但形小，用藥后變化較小，且兔的瞬膜反應(yīng)性有不同，故后兩種動(dòng)物一般不采用。瞬膜由頸上神經(jīng)節(jié)后纖維支配，屬腎上腺素能神經(jīng)，瞬膜內(nèi)存有α-受體。貓的瞬膜標(biāo)本在鑒別神經(jīng)節(jié)阻滯藥和α-受體阻滯藥研究中也是常用的方法之一。如受試藥物是神經(jīng)節(jié)阻滯藥，則刺激節(jié)前纖維和注入酰膽堿均無瞬膜反應(yīng)，而刺激節(jié)后維或注入去甲腎上腺素仍有瞬膜反應(yīng)。若受試藥物是影響遞質(zhì)的，則刺激節(jié)前纖維、節(jié)后纖維或給乙酰膽堿均無瞬膜反應(yīng)，給去甲腎上腺素瞬膜反應(yīng)仍存在，甚至增強(qiáng)其反應(yīng)，以資鑒別這兩類藥物。

2．兔腸系膜神經(jīng)：離體兔腸系膜神經(jīng)一回腸實(shí)驗(yàn)常選用兔的回腸制備較為合適，因?yàn)橥媚c的擺動(dòng)動(dòng)物（鐘擺運(yùn)動(dòng))波輻射較大。豚鼠的腸制備也可用，但擺動(dòng)波輻小，用藥后抑制反應(yīng)不易看出。貓、狗等腸壁厚，對(duì)兒茶酚胺類藥物和其它藥物反應(yīng)遲鈍，故不選用。刺激腸系膜神經(jīng)（系腎上腺系能神經(jīng))可抑制回腸的擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)。如受試藥物能阻斷這一抑制反應(yīng)，而不影響甚至增強(qiáng)去甲腎上腺素或腎上腺素對(duì)回腸擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)的抑制作用，則可推斷該藥是腎上腺素能神經(jīng)阻斷滯藥。

3．兔耳：兔耳灌流法是篩選腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥和α-受體阻滯藥常用的方法之一。前一類藥物能抑制耳大神經(jīng)刺激引起的血管收縮反應(yīng)，使灌流量增加，但去甲可腎上腺素或腎上腺素引起的血管收縮反應(yīng)反而增強(qiáng)，使其灌流量減少。根據(jù)上述作用，可以鑒別這兩類藥物。根據(jù)1960年Hukoric在離體兔耳灌流研究中認(rèn)為耳大神經(jīng)除含有腎上腺素能神經(jīng)外，還有少部分膽堿能神經(jīng)。用腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥后膽堿能神經(jīng)的作用表現(xiàn)得更充分，因此，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，用阿托品8μg阻斷其毒蕈堿樣作用，使其不干擾腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥物研究。

4．貓脾神經(jīng)：脾神經(jīng)-脾標(biāo)本制備在腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥或α-受體阻滯藥的研究中是常用的方法之一。前一類藥使用后，刺激神經(jīng)，使脾靜脈血中去甲腎上腺素含量降低；后一類藥使用后，則使去甲腎上腺素含量增加，以此來鑒別兩類藥物。常選用貓來作此實(shí)驗(yàn)。

5．豚鼠下腹神經(jīng)－輸精管：下腹神經(jīng)是交感神經(jīng)節(jié)后纖維，支配輸精管或子宮。該實(shí)驗(yàn)在研究腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥和α受體阻滯藥中是常用的方法之一。受試藥物能阻滯刺激下腹神經(jīng)引起的輸精管或子宮收縮作用，卻不能影響去甲腎上腺素或腎上腺素的反應(yīng)，甚至可增強(qiáng)其作用，則可確定該藥為腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥。豚鼠的輸精管對(duì)交感胺的收縮反應(yīng)較子宮迅速，洗去后恢復(fù)也較快，因此常選用豚鼠作此標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)。

6．兔交感神經(jīng)－心房：離體兔交感神經(jīng)－心房標(biāo)本主要用于觀察腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥的作用。刺激交感神經(jīng)，引起心率加速，收縮力加強(qiáng)。這類藥使用后，阻斷上述反應(yīng)，但不能對(duì)抗去甲腎上腺素或腎上腺素對(duì)心臟的興奮作用。此標(biāo)本制備除主要選用兔外，小貓（1～2Kg重)、豚鼠也可采用。

7．大白鼠血壓：R.Lesic等在大白鼠血壓實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)毒扁豆堿能引起升壓反應(yīng)，而在狗、貓、鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，該藥主要引起降壓反應(yīng)。利血平能阻斷大白鼠對(duì)毒主扁豆堿的升壓作用。切除兩側(cè)腎上腺，不影響其升壓反應(yīng)，便橫斷脊柱，其升壓反應(yīng)立即消失。因此，他們認(rèn)為大白鼠對(duì)毒扁豆堿的升壓反應(yīng)可能是中樞性的，再通過外周交感神經(jīng)表現(xiàn)出來。毒扁豆堿引起的大白鼠升壓反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂捎脕硌芯坑绊懩I上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)釋放的藥物。如某藥物使用后，再注射毒扁豆堿，其升壓作用消失，便去甲腎上腺素或腎上腺素的升壓作用仍不變，甚至增強(qiáng)，則可能提示該藥為腎上腺素能神經(jīng)阻滯藥。

（六)作用于膽堿受體和腎上腺素受體的藥物實(shí)驗(yàn)

膽堿受體有M和N兩種，當(dāng)M受體興奮時(shí)，表現(xiàn)為心率減慢，心收縮力減弱，血壓下降，胃腸道平滑肌收縮，瞳孔縮小，唾液分泌增加，支氣管平滑肌收縮等，已知典型的M受體阻滯藥阿托品等能阻滯上述作用。欲確定一個(gè)未知藥是否作用于M膽堿受體，其作用性質(zhì)是興奮、抑制或阻斷，可選離體豚鼠回腸、兔的瞳孔、兔的唾液腺分泌、大鼠或貓的血壓、離體蛙心和離體兔右心房等實(shí)驗(yàn)，與已知藥匹魯卡品或阿托品對(duì)照，即可獲得明確結(jié)論。N-膽堿受體分為N₁和N₂兩種。N₁膽堿受體興奮時(shí)，植物神經(jīng)節(jié)興奮及腎上腺髓質(zhì)分泌。在阿托品化貓，凡不具有血管收縮作用而能使血壓升高的藥物，初步可認(rèn)為其作用部位在N1膽堿受體。N2膽堿受體興奮時(shí)骨骼肌收縮，可采用水蛭背肌或蛙腹直肌標(biāo)本實(shí)驗(yàn)，即能得到結(jié)果。

二苯羥乙酸奎寧酯（Quinuclidiny1Benzilate,QNB)是一個(gè)M-受體阻滯藥，它能與M-膽堿受體緊密結(jié)合，維持時(shí)間較長，為研究M-膽堿受體提供了一個(gè)有效的工具。節(jié)后擬膽堿藥或節(jié)后抗膽堿藥都能與M-膽堿受體結(jié)合，因此均可降低³H-QNB的結(jié)合率。常選用豚鼠的回腸作此實(shí)驗(yàn)。此外，還可選用豚鼠的心臟、肺臟、腦及脾臟，這些組織勻漿均具有與³H-QNB結(jié)合的M-膽堿受體。但在肝臟、腎臟及隔肌則不存在與³H-QNB結(jié)合的M受體。

腎上腺素受體有α和β兩種，當(dāng)α受體興奮時(shí)，表現(xiàn)為皮膚、粘膜及內(nèi)臟壓管收縮，胃腸道平滑肌松弛，瞳孔散大，瞬膜收縮，子宮收縮等。已知典型的α受體阻滯藥酚妥拉明和妥拉蘇林等能阻斷上述作用。常選用離體兔主動(dòng)脈條、離體豚鼠或大鼠輸精管、離體貓脾條、離體大白鼠胃底條、離體兔空腸等作α受體作用實(shí)驗(yàn)。β受體興奮時(shí)，表現(xiàn)為心率加快，心收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)加速，骨骼肌血管和冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張，胃腸道平滑機(jī)松弛，支氣管擴(kuò)張，糖原和脂肪分解等。由于β受體又分β₁、β₂兩種，對(duì)于這兩種亞型受體作用的觀察，一般是以心臟效應(yīng)作為觀察β₁受體作用，而以氣管、支氣管效應(yīng)作為觀察β₂受體作用。已知典型的β受體阻滯藥心得安等能阻斷上述作用。常選用離體蛙心、離體原位蛙心排出量、兔心灌注、在位貓（或兔)心實(shí)驗(yàn)、兔（豚鼠)離體心房實(shí)驗(yàn)、離體大白鼠子宮、離體豚鼠氣管片等作β受體作用實(shí)驗(yàn)。

未妊娠兔的離體子宮對(duì)α受體興奮藥十分敏感，可使之強(qiáng)烈收縮，故可用于鑒定α受體興奮藥或阻滯藥。脂肪組織存在β受體，凡能興奮β受體的藥物均能引起游離脂肪酸的釋放增加。如預(yù)先加入β受體阻滯藥，則可使游離脂肪酸的釋放量明顯減少，甚至完全阻斷，故此法亦用來鑒定作用于β受體的藥物。常選用不饑餓的雄性大白鼠，麻醉下取其副睪脂肪墊作實(shí)驗(yàn)。子宮平滑肌收縮為α受體興奮反應(yīng)，目前常選用兔子宮平滑肌膜與³H-DHE（即³H-Dihydrocryptne,是一個(gè)α受體阻滯藥)進(jìn)行體外培養(yǎng)，³H-DHE與子宮平滑肌膜上α受體結(jié)合，25℃不超過17分鐘，即能完全達(dá)到結(jié)合，而且結(jié)合穩(wěn)定性較好，至少可維持39分鐘，常用來鑒定α受體。

（七)骨骼肌松弛藥實(shí)驗(yàn)

在進(jìn)行神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥試驗(yàn)研究時(shí)，動(dòng)物品種的選擇是十分重要的，因神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的效應(yīng)有明顯的動(dòng)物種屬差異，只有選用在反應(yīng)性質(zhì)和程度與人相似的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果才對(duì)臨床用藥有較高的參考價(jià)值。

不同種動(dòng)物對(duì)同一種神經(jīng)肌接點(diǎn)阻滯藥的反應(yīng)不同，如貓、狗、兔、大白鼠對(duì)十烴季銨和筒箭毒的敏感性各不相同，其間差異見圖10-8、表10-30所示。不同種屬動(dòng)物對(duì)神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥反應(yīng)的差異不僅表現(xiàn)在作用強(qiáng)度上，而且反應(yīng)在作用性質(zhì)上，如貓對(duì)琥珀酰膽堿、十烴季銨的反應(yīng)與人近似，呈單純?nèi)�極化型阻斷作用，而在兔、豚鼠、大白鼠常表現(xiàn)為雙相阻斷作用。雞對(duì)十烴季鋟特別敏感，大白鼠對(duì)筒箭毒敏感，人對(duì)十烴季銨與筒箭毒的反應(yīng)介于貓對(duì)狗之間而與貓近似。雖然蛙、兔、小雞、小白鼠等動(dòng)物在神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的試驗(yàn)研究上各有應(yīng)用價(jià)值，如蛙可在不用人工呼吸的條件下作用于觀察神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的作用，小雞可用于區(qū)別去極化型阻斷藥與非去極化型阻斷藥，兔垂頭法可用于觀察神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的效應(yīng)和鑒定其效價(jià)，小白鼠用于神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的初篩，但以貓對(duì)神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥的的反應(yīng)與人最近似，故貓是必不可少的試驗(yàn)動(dòng)物，但也不是一切試驗(yàn)均需要在貓身上進(jìn)行。

圖10-3不同種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)十烴季銨和筒箭毒的敏感性

表10-30　一些神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷藥對(duì)人、貓、大白鼠的相對(duì)效價(jià)*

*每格中上面數(shù)字是以筒箭毒用為1m算出的相對(duì)強(qiáng)度。插號(hào)中數(shù)字為產(chǎn)生90-95%神經(jīng)肌接點(diǎn)阻斷作用所需劑量。

三、心血管系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一)血壓測量

插管直接測壓法：在研究中經(jīng)常應(yīng)用動(dòng)物急性血壓試驗(yàn)來分析藥物等對(duì)循環(huán)系統(tǒng)的影響，常用的動(dòng)物有狗、貓、家兔和大白鼠。猴、羊、豚鼠、小鼠、雞、鳥和蛙的血壓值和急性測壓法雖有報(bào)告，但極少用于藥物對(duì)血液循環(huán)影響的常規(guī)研究。各種動(dòng)物的血壓值可參看表10-31。

表10-31　各種動(dòng)物的血壓值

大白鼠血壓除對(duì)個(gè)別藥物（如毒扁豆堿)反應(yīng)異常外，對(duì)絕大多數(shù)的升壓和降壓物質(zhì)的反應(yīng)都和人或大動(dòng)物（如狗、貓)是一致的，并且反應(yīng)十分靈敏，目前它是檢定體液或組織中去甲腎上腺素等升壓物質(zhì)含量的常用動(dòng)物之一。大白鼠來源容易解決，較經(jīng)濟(jì)、用藥量少、所占工作面小。缺點(diǎn)是動(dòng)物小，操作較因難，血管較細(xì)小，易發(fā)生血液凝固，故須預(yù)先注射肝素抗凝。用狗作實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)很多，如血壓恒定，較大白鼠、家兔等小動(dòng)物更接近人體，對(duì)藥物反應(yīng)靈敏并與人基本一致；血管和神經(jīng)較粗，管壁彈性強(qiáng)，便于手術(shù)操作和適用于分析藥物對(duì)循環(huán)系統(tǒng)的作用機(jī)制；心搏力量強(qiáng)，能描繪出完好的血壓曲線；用作藥物篩選時(shí)，可反復(fù)應(yīng)用。缺點(diǎn)是來源較困難，人體貴，不適用于需要?jiǎng)游飻?shù)量較多的實(shí)驗(yàn)。貓用于血壓試驗(yàn)時(shí)除有與狗相同的優(yōu)缺點(diǎn)外，特別值得指出的是更適用于藥物對(duì)循環(huán)系統(tǒng)作用機(jī)制的分析，因?yàn)樨埐粌H有瞬膜，便于分析藥物對(duì)交感神經(jīng)節(jié)和節(jié)后部分的影響，而且易于制備脊髓貓以排除脊髓以上的中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)血壓的影響。此外，貓?bào)w重較狗輕（實(shí)驗(yàn)可用1.8～2.5kg體重的貓)，用藥量較省。家兔來源容易，性情溫和，故亦常用血壓試驗(yàn)。但并不理想，因?yàn)榧彝脼椴菔硠?dòng)物，個(gè)體間血壓差異大，對(duì)藥物反應(yīng)不及上述各種動(dòng)物恒定和靈敏，較脆弱，尤其是長毛大耳家兔易死亡，故它不適用于血壓試驗(yàn)，血管較小和心搏力量較弱，插管內(nèi)易發(fā)生血凝塊。而且約有20～30%的家兔在頸動(dòng)脈上向甲狀腺分出的一根小動(dòng)脈，碰到這一情況，宜將此分枝反線結(jié)扎剪斷，否則在其上方插入動(dòng)脈插管后，當(dāng)檢壓計(jì)加壓或開放動(dòng)脈夾時(shí)，較大量的枸櫞酸鈉可經(jīng)過此側(cè)技，造成家兔深吸氣和血壓激烈波動(dòng)，枸櫞酸鈉倒入心臟而死亡。

不插管（間接)測壓法：在不插管測壓法中最常用的動(dòng)物是狗、大白鼠和家兔。大白鼠不插管測壓法，常選用大白鼠尾容積測壓法、鼠尾搏動(dòng)投影響測壓法和鼠腳測壓法。狗不插管測壓法選用頸動(dòng)脈皮橋法、脛動(dòng)脈間接測壓法和股動(dòng)脈穿刺測壓法。家兔不插管測壓常選用頸動(dòng)脈皮橋測壓法和兔耳測壓法。

（二)實(shí)驗(yàn)性高血壓

1934年，Goldblatt曾證實(shí)，狹窄狗腎動(dòng)脈可產(chǎn)生持續(xù)性高血壓，這一實(shí)驗(yàn)研究引起了人們的普遍重視。隨后，世界各地相繼開展了高血壓病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，建立了不同的高血壓動(dòng)物模型，并提出了各種有關(guān)高血壓病病原的學(xué)說。急性實(shí)驗(yàn)性高血壓模型，常選用的動(dòng)物有狗、貓、大白鼠、家兔和猴等。引起急性實(shí)驗(yàn)性高血壓的方式很多，如直接刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)、通過神經(jīng)反射、外源性兒茶酚胺類或其它體液性加壓物質(zhì)的注射等。實(shí)驗(yàn)一般多在麻醉動(dòng)物身上進(jìn)行。

直接刺激中樞神經(jīng)法，采用埋藏電極或借助于立位定各器，是刺激大白鼠或猴的側(cè)下丘腦防御警覺區(qū)，可使動(dòng)物血壓明顯升高，心率加快和心輸出量增加等。神經(jīng)反射性高血壓可選狗進(jìn)行，以波長0.1毫秒、頻率5～50次/秒的方波gydjdsj.org.cn/wsj/刺激狗的隱神經(jīng)、喉上神經(jīng)或精神迷走神經(jīng)中樞端，刺激時(shí)間為15秒，可使狗的收縮壓和舒張壓均升高20～100mmHg。腎源性加壓物質(zhì)的注射法，選用大白鼠、家兔或狗，實(shí)驗(yàn)前將動(dòng)物兩側(cè)腎臟摘除，手術(shù)后幾小時(shí)或經(jīng)24小時(shí)后，給動(dòng)物靜脈注射或滴注腎提取物、腎素或人工合成的血管緊張素（Angiotensin)均可使血壓明顯升高。切除動(dòng)物腎臟后幾小時(shí)，血中血管緊張素原（Angiotensinogen)即開始上升。24小時(shí)后可增達(dá)高峰，大白鼠血中血管緊張素原值可增加14～15倍，狗約增加3倍。從而大大提高了動(dòng)物對(duì)外源性腎臟加壓物質(zhì)的敏感性。體液性加壓物質(zhì)注射法，選用狗、貓或兔按2～8μg/Kg劑量靜脈注射腎上腺素或去甲腎上腺素時(shí)，可引起血壓顯著而短暫的升高。給大白鼠靜脈注射0.5～3μg腎上

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神經(jīng)原型高血壓，可選用狗、大白鼠和家兔等，通過機(jī)能性方法或物理方法作用于動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)而誘發(fā)條件反射性高血壓和皮層性高血壓模型。選用出生后的小白鼠誘發(fā)隔離性高血壓，如采用大白鼠隔離飼養(yǎng)，高血壓發(fā)生率和血壓升高程序均不及小白鼠顯著。大灰鼠長時(shí)期處于噪音或鑰匙叮噹響聲刺激造成的聽源性緊張情況下，可誘發(fā)神經(jīng)原性高血壓，它與人的高血壓病相類似，適用于降壓藥物的篩選。大灰鼠正常平均收縮壓±標(biāo)準(zhǔn)差為113±8mmHg，噪音刺激3個(gè)月后升高到130～140mmHg，有40%的動(dòng)物收縮壓高達(dá)160mmHg。采用大白鼠與家鼠雜交所生的大灰鼠，比純種大白鼠較易起聽源性高血壓。大灰鼠以選用120天年齡的適宜。選用狗或兔小腦延髓池內(nèi)注入白內(nèi)陶土生理鹽水混懸液，可使動(dòng)物顱內(nèi)壓升高，隨后血壓亦逐漸升高，血壓高峰值可超過原值50～80mmHg，并可恒定地維持幾個(gè)月，但此法誘發(fā)高血壓的百分率不超過半數(shù)。去抑制性高血壓，常選用家兔，切斷其主動(dòng)脈的減壓神經(jīng)，或選用狗，切斷頸動(dòng)脈竇區(qū)神經(jīng)所引起的高血壓。采用狗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選擇寬臉面的狗，因?yàn)檫@種狗較易找到頸動(dòng)脈竇。

腎性高血壓，常選用狗、家兔和大白鼠，將動(dòng)物一側(cè)腎動(dòng)脈狹窄，腎動(dòng)脈血流量減少50%以上或同時(shí)狹窄兩側(cè)腎動(dòng)脈，均可導(dǎo)致血壓長期升高。狹窄家兔腎動(dòng)脈分枝部上方的腹主動(dòng)脈，或造成腎臟小動(dòng)脈及其分枝的多發(fā)性栓塞，均可形成高血壓。采用玻璃紙或橡皮?

■［此處缺少一些內(nèi)容］■

選用狗、貓、家兔、豚鼠和大白鼠。測量時(shí)麻醉要選擇好，家兔、豚鼠及經(jīng)過訓(xùn)練的狗等可不用麻醉記錄清醒狀態(tài)下的心電圖。有時(shí)為避免動(dòng)物掙扎，特別是某些藥物刺激動(dòng)物引起掙扎時(shí)以及小動(dòng)物如大白鼠、小白鼠則需加用全身麻醉。常用的戊巴妥鈉對(duì)心臟有一定抑制，特別是當(dāng)靜脈注射快時(shí)，可加快心率，使ST段移位，T波倒置。吸入性麻醉藥氯仿對(duì)心臟毒性大，除非為引起心律失常，不可用于心電圖麻醉。乙醚能加快心率，氟烷減慢心率，烏拉坦和氯醛糖對(duì)心臟毒性較小。在麻醉深度方面宜保持穩(wěn)定，補(bǔ)加過量麻醉藥可影響心電圖。體位對(duì)心電圖波形有影響，故應(yīng)選擇適當(dāng)體位。小動(dòng)物如豚鼠甚至頭的位置都影響心電圖波形。狗的前肢和肩部位置對(duì)心電圖波形式影響最大，故在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)保持固定體位。麻醉動(dòng)物一般用仰位固定，便于安放胸前電極。但也有人認(rèn)為麻醉大白鼠以俯位固定為好。清醒動(dòng)物用俯位固定較少引起掙扎，馴服的狗可安靜地在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上記錄心電圖；如有掙扎，可用特制的布兜托在腹下，四肢從布兜的四個(gè)孔穿出，將狗懸吊在狗架橫梁上，狗四肢離地，可減少掙扎。狗經(jīng)過訓(xùn)練可避免掙扎。測量動(dòng)物心電圖用的電極，一般常選用皮下針頭電極，即把電極聯(lián)接于注射針頭或針灸用細(xì)針刺入動(dòng)物皮下。要注意針頭與電極的聯(lián)接必須十分緊密，接觸良好，否則容易產(chǎn)生干擾，以致記錄失敗。宜選用6～7號(hào)大小的注射針頭。針頭的頭部必須干凈無血污。為使之與電極密切接觸，需內(nèi)墊以金屬片或?qū)⑨橆^錘扁，以使金屬面密合。針頭插入皮下是時(shí)勿過深，以兔插入肌肉時(shí)，肌肉顫動(dòng)易造成干擾。如用平板電極，則需先剪毛或用硫化鋇、硫經(jīng)堿脫毛，并涂以導(dǎo)電膏或鹽水。電極安放順序?yàn)榧t-右前肢，黃一左前肢，綠一左后肢，黑一右后肢，白—胸前。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，胸前可放一個(gè)或幾個(gè)電極。導(dǎo)聯(lián)選擇取決于實(shí)驗(yàn)需要，一般為從心電圖記錄心率或記錄心律失常發(fā)生可選肢導(dǎo)聯(lián)任何一個(gè)有P波、R波及T波直立的導(dǎo)聯(lián)。如Ⅱ、aVF，或選胸前反映左。由于胸前導(dǎo)聯(lián)的電極離心臟近，電壓高，波形明顯。家兔以上的較大動(dòng)物按人的心電圖記錄定標(biāo)和紙速即可，即1mV=10mm，紙速25mm/秒。大白鼠等較小動(dòng)物電壓較低，為使記錄清晰，電壓定標(biāo)可放大為1mV=15或（20)mm，又因小動(dòng)物的心率快，當(dāng)超過150～200次/分時(shí)，用25mm/秒，紙速記錄波形重疊，不便分析，可加快紙速為50mm/秒，圖形更為清楚。

動(dòng)物體位，麻醉影響心電圖外，還應(yīng)注意季節(jié)溫度，豚鼠T_Ⅱ和T_avI在冬季自發(fā)倒置者比春季要少得多。冷血?jiǎng)游锏男呐K活動(dòng)與季節(jié)溫度關(guān)系密切，低溫下蟾蜍心率可減少為每分鐘10次以下，T波可消失，高溫時(shí)心率可超過100次/分，T波也增高。小動(dòng)物心電圖受呼吸影響較大，基線可隨呼吸上下擺動(dòng)。狗的P波在Ⅲ導(dǎo)聯(lián)吸氣時(shí)直立，呼氣時(shí)可倒置。

動(dòng)物的體重越輕、年齡越幼小者有心率越快的傾向；鳥類一般較快，而冷血?jiǎng)游镙^慢；小鼠、大鼠、豚鼠等小動(dòng)物心率很快，兔、貓等次之，狗、猴等略慢些，但也比人快很多。各種溫血?jiǎng)游锖屠溲獎(jiǎng)游锏男穆屎托碾妶D正常值可見表12-27至表12-30。在分析動(dòng)物心電圖時(shí)供參考。

（四)抗心肌缺氧缺血藥

腦垂體后葉素能使冠狀動(dòng)脈痙攣，造成急性心肌供血不足；加以外周阻力增加，導(dǎo)致心臟負(fù)荷加重，在心電圖上可見到心肌缺血變化。藥物若能防治這種心肌缺血變化，被認(rèn)為可能有抗心肌缺血的價(jià)值。此法記錄的心電圖具有心肌缺血的特異性。常選用家兔，從耳緣靜脈注射腦垂體后葉素2.5μ/kg（用生理鹽水稀釋為3ml)，時(shí)間30秒。由于靜脈推注引起的心肌缺血心電圖變化急劇，不便判斷藥物，可改用靜脈滴注法，即在10分鐘時(shí)恒速滴入上述量的腦垂體后葉素。因家兔心電圖變化持續(xù)時(shí)間較長，心電圖記錄持續(xù)到15～30分鐘。靜滴可持續(xù)更久。滴注后家兔心電圖可現(xiàn)出T波先升高緩低平、雙相、倒置，ST段抬高，心率變慢，P-R及Q-T間期延長，還偶有竇性心律失常、室性早搏、室性心動(dòng)過速等心律失常變化。

異丙腎上腺素為強(qiáng)的β受體興奮藥，能通過加快心率增強(qiáng)心肌收縮力等環(huán)節(jié)增加心肌耗氧量，造成心臟負(fù)荷過重，心肌微循環(huán)障礙，連續(xù)應(yīng)用可形成心肌梗塞樣變化，用心電圖和病理切片可檢測病變程序。常選用豚鼠、家兔或狗，豚鼠和狗每天皮下注射異丙腎上腺素2～8mg/kg，家兔10～16mg/kg，連續(xù)兩天�？梢娦碾妶DT波由正變負(fù)或雙相，并伴有ST段抬高；竇性心動(dòng)過速，早搏或其它心律失常。豚鼠心臟病理變化有：白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，心肌纖維腫脹、斷裂、橫紋消失，甚至溶解，發(fā)生玻璃樣變和脂肪變性等。

結(jié)扎豚鼠、家兔、貓、狗、猴、豬等動(dòng)物在左冠狀動(dòng)脈前支均可引起心肌梗塞。其中選用家兔和狗最多且效果明顯。

心肺灌流是分析藥物對(duì)心臟作用的經(jīng)典方法。一般用狗或貓，但用小動(dòng)物有其優(yōu)點(diǎn)，研究強(qiáng)心甙心可采用豚鼠；而研究心肌耐缺氧，則宜選用大白鼠。在大白鼠心肺灌流標(biāo)本上，可研究心肌耐缺氧能力，還可同時(shí)分析心輸出量、血壓、心率等因素與心肌耐缺氧能力的關(guān)系。常選用雄性、體重250～300克左右大白鼠為宜。體重過小或過大，影響耐缺氧時(shí)間。大白鼠心肺灌流，最麻煩是出現(xiàn)肺水腫，影響心臟存活時(shí)間及實(shí)驗(yàn)結(jié)果。減輕心臟前負(fù)荷可以緩和肺水腫的產(chǎn)生。

饒曼人等報(bào)導(dǎo)在白鼠對(duì)強(qiáng)心甙的作用雖較貓敏感性低671倍，但研究一般藥物對(duì)心臟收縮力、心輸出量、靜脈壓的影響，較狗、貓心肺制備節(jié)省大量人力、物力。采用大白鼠心肺灌流法用以研究心肌耐缺氧能力，較小白鼠在密閉容器內(nèi)觀察常壓或減壓時(shí)的死亡時(shí)間，能更準(zhǔn)確地代表心臟耐缺氧能力，而且能測定藥物對(duì)心輸出量、血壓、心率、心收縮力等功能的影響，有利于分析藥物延長耐缺氧時(shí)間的影響因素。但實(shí)驗(yàn)條件、技術(shù)操作都有一定要求，動(dòng)物用量及工作量也較大，作為篩選藥欠簡便，作為分析抗心絞痛藥物的作用原理，則較為合適。

強(qiáng)心甙生物檢定，常選用健康體重260～380克家鴿、1.5～4公斤貓、200～600克豚鼠和體重相差不超過7%的蛙作實(shí)驗(yàn)。

（五)血管阻力測定

器官或局部血管恒速灌流泵法：根據(jù)血管阻力（R)與灌流壓（P)成正比，與流量（Q)成反比的原理，可以用各種流量計(jì)測定血流量，并且同步記錄動(dòng)脈血壓（即灌注壓)，用上述原理即可推算出血管阻力，常選用體重12公斤以上的狗作實(shí)驗(yàn)，可采用內(nèi)頸動(dòng)脈灌流法、椎動(dòng)脈灌流法、后肢血管灌流法、腎動(dòng)脈灌流法等測定血管阻力。還可選用體重250克以上的大白鼠，采用后肢及腎動(dòng)脈灌流法來測定血管阻力。大白鼠腹主動(dòng)脈與下腔靜脈緊貼在一起，分離腹主動(dòng)脈時(shí)，不要弄破下靜脈造成出血；插入腹主動(dòng)脈灌流用的塑料管位置要適當(dāng)，以保持后肢灌流通暢，如有扭曲，血管阻力急劇升高，造成人為誤差。塑料插近可拉成葫蘆形，以便結(jié)扎固定于腹主動(dòng)脈內(nèi)；為使血壓穩(wěn)定，可輸注適量6%小分子右旋糖酐。大白鼠血壓和血管阻力對(duì)藥物反應(yīng)敏感，且大白鼠消耗藥量少，又節(jié)約人力，最適合于篩選新藥和研究心血管藥理。但大白鼠血壓和阻力記錄有時(shí)不及狗穩(wěn)定，對(duì)某些藥物反應(yīng)的特異性及動(dòng)物種屬的差異還有待積累資料。

藥物對(duì)血管的作用，除了在整體動(dòng)物身上觀察分析其作用外，還可在離體情況下進(jìn)行。其原理都是使動(dòng)物的器官與身體血液循環(huán)隔斷聯(lián)系，人工地用適當(dāng)?shù)娜芤海ㄈ缏迨弦?從動(dòng)脈近心端灌入，并以一定壓力使灌流液經(jīng)組織毛細(xì)血管至靜脈流出，以維持器官的生理功能，從灌流液的流量可反應(yīng)該器官的血管阻力變化情況。常選用兔耳、下肢、肝、腎、腸系膜血管灌流。帶神經(jīng)離體兔耳血管灌流法用于分析舒約縮血管的作用部位。藥物注射于軀體或另一兔耳，如能增加或減少帶神經(jīng)的兔耳灌流量，說明是間接作用，如藥物直接注入帶神經(jīng)的兔耳上才發(fā)生反應(yīng)，則是直接作用。離體兔耳血管灌流法用以觀察分析舒縮血管藥物對(duì)兔耳血管的直接作用。離體兔耳血管因無中樞控制，血管張力降低，對(duì)收縮血管藥敏感；對(duì)擴(kuò)張血管藥敏感性稍低，灌流壓應(yīng)根據(jù)流量酌情調(diào)節(jié)。

大白鼠離體膈肢交叉灌流法，從甲鼠的頸動(dòng)脈引出血液，灌注到受血?jiǎng)游镆沂蟮碾x體后肢，通過接受器和泵使灌注血回到甲鼠頸靜脈。在該制備中，利用乙離離體后肢只保留神經(jīng)與其它部分聯(lián)系，故藥物只能通過神經(jīng)影響后肢；而給予甲鼠的藥物，則只通過血流來影響所灌注的后肢血管；以此來觀察分析藥物是直接作用還是通過神經(jīng)起作用。還可采用大白鼠離體后肢灌流法和大白鼠離體后肢自身灌流法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。大白鼠腎臟灌流實(shí)驗(yàn)法可用于研究腎血管阻力等血液動(dòng)力學(xué)變化及腎臟重吸收、分泌等生理生化功能。

四、消化系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一)消化系統(tǒng)分泌實(shí)驗(yàn)

1．胃液分泌實(shí)驗(yàn)　胃液收集常選用狗和大白鼠。由狗右側(cè)嘴角插入胃管收集胃液，大白鼠則需剖腹，從幽門端向胃內(nèi)插入一直徑約3mm的塑料管，在緊靠幽門處結(jié)扎固定，以收集胃液，可進(jìn)行胃酸的測定和胃蛋白酶的測定。

2．胰液分泌實(shí)驗(yàn)　胰液收集可選用狗、兔或大白鼠。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，狗在主胰管開口十二指腸降部，距幽門12cm左右處，要將十二指腸翻轉(zhuǎn)，在其背面即可找到。兔的胰腺很分散，胰管位于十二指腸的升段，距離幽門約17cm左右處。分別向主胰管內(nèi)插入細(xì)導(dǎo)管收集胰液。大白鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結(jié)扎和另行插管，就可分別收集到膽汁和胰液。大白鼠的胰液很少，插入內(nèi)徑約0.5mm的透明導(dǎo)管后，以胰液充盈的長度作為觀察胰液分泌的指標(biāo)。慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)可選用狗作胰瘺手術(shù)后收集胰液。

3．膽汁分泌實(shí)驗(yàn)為了觀察某些藥物對(duì)泌膽、排膽以及存在于膽系內(nèi)結(jié)石的影響，需要研究用藥前后膽汁流量及其成分的變化。膽汁可分別給動(dòng)物作膽囊瘺和總膽管瘺收集。膽囊瘺常選用狗、貓、兔和豚鼠進(jìn)行，而以狗為佳。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，以右肋緣下橫切口的暴露最為滿意。如欲觀察肝膽汁的分泌情況需要結(jié)扎膽囊管或選用大鼠，因后者無膽囊，所以作總膽管造瘺手術(shù)常選用大白鼠。收集膽汁后可進(jìn)行各種膽汁的化學(xué)分析。

（二)消化系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

1．動(dòng)物離體標(biāo)本實(shí)驗(yàn)消化道平滑肌具有肌源性運(yùn)動(dòng)的特點(diǎn)，動(dòng)物離體的腸段、膽囊、乃至胃腸肌片，只要具有合適的存活環(huán)境就可保持其運(yùn)動(dòng)機(jī)能。這是藥理學(xué)研究中常用的一種離體實(shí)驗(yàn)方法，這具有實(shí)驗(yàn)條件較易控制、操作較簡單、用一般儀器設(shè)備即能工作等優(yōu)點(diǎn)，從而應(yīng)用較廣。

標(biāo)本制備大都選用兔、豚鼠、大白鼠等動(dòng)物的組織，也可利用手術(shù)中取下或猝死剖檢時(shí)取下的消化道器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

取禁食24小時(shí)的動(dòng)物，通常用擊頭致斃法處死，以避免麻醉或失血等對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)能的影響。立即常規(guī)剖腹，取出所需的胃、腸、膽囊等，去除附著的系膜或脂肪等組織。迅速放在充氧（或含5%CO₂)、保溫（37℃)的保溫液中，并以注射器用保溫液將管腔內(nèi)的食物殘?jiān)�洗凈。操作時(shí)動(dòng)作要輕柔，沖洗時(shí)不宜采取高壓以免疫組織攣縮。

若以肌片為標(biāo)本，一般剪取1～5mm寬，1～2cm長的一段即可。若用動(dòng)物的腸管做實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常取十二腸或回腸。十二指腸的興奮性、切律性較高，呈現(xiàn)活躍的舒縮運(yùn)動(dòng)�；啬c運(yùn)動(dòng)比較靜息，其運(yùn)動(dòng)曲線的基線比較穩(wěn)定。所用的標(biāo)本大都取1.5cm左右一段即可。以狗的膽囊做實(shí)驗(yàn)時(shí)可截取4mm寬，2cm長的全層肌片。兔、豚鼠等的膽囊較小，取材時(shí)常與膽管一起摘下。兔的膽囊可沿其長軸一剖為二，豚鼠則可以整個(gè)膽囊或取其半進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。做膽管的離體實(shí)驗(yàn)量，通常取狗的總膽管，將相聯(lián)的十二指腸組織切除，留下乳頭以及膽道末端括約肌組織。

離體胃、腸運(yùn)動(dòng)的電活動(dòng)，除了峰形電位外還可記錄到周期性的慢波。它們?cè)谖改c道的不同部位以及不同種屬的動(dòng)物間存在一定差異（見表10-32)。

表10-32　離體胃腸組織的慢波頻率（次/分)

2．消化器官運(yùn)動(dòng)在體實(shí)驗(yàn)　利用整體動(dòng)物觀察消化道動(dòng)物的方法很多，諸如腸管懸吊法、內(nèi)壓側(cè)定法、生物電記錄法、腹窗直視法以及X線檢查等等。這皯方法各有所長，也各有其不足之處，在進(jìn)行藥理研究時(shí)可以酌情選用。

常選用狗、貓或兔，擇其健康成年者，性別不構(gòu)。由于巴比妥麻醉劑對(duì)消化道運(yùn)動(dòng)有抑制作用，故有些作者用貓或兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，愿意用烏拉坦1.0～1.5g／kg靜脈或腹腔注射進(jìn)行麻醉。觀察膽道系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)則以母狗為佳，因?yàn)槔吖�角較大容易暴露。在禁食12～24小時(shí)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

進(jìn)行膽道口括約肌部膽道內(nèi)壓測定實(shí)驗(yàn)時(shí)，大都選用狗或貓，也可用兔。狗的膽道位置較深，要求良好的手術(shù)暴露。貓的總膽管相對(duì)地較粗，操作也較容易，但手術(shù)耐受性稍遜于狗。兔的總膽管容易瓣認(rèn)，壺腹部明顯地呈現(xiàn)于十二指腸第1段的表面，但組織纖維，操作時(shí)務(wù)必仔細(xì)。狗的總膽管粗約2～3mm，位于十二指腸降部、循小網(wǎng)膜右緣而下，在下腔靜脈之前、門脈之右。

（三)催吐、鎮(zhèn)吐、厭食實(shí)驗(yàn)

1．催吐和鎮(zhèn)吐實(shí)驗(yàn)常選用狗和貓做實(shí)驗(yàn)。給狗皮下注射鹽酸阿樸嗎啡1mg/kg；注后2～3分鐘就可以引起惡性嘔吐。用1%硫酸銅或硫酸亞鉛溶液50ml給狗灌胃，約2～3分鐘后也可引起嘔吐，但幾乎無惡性現(xiàn)象。

2．厭食實(shí)驗(yàn)　這是防治肥胖病及其并發(fā)癥的研究內(nèi)容之一�？梢赃x用狗、貓、大鼠、小鼠等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，猴因有頰囊，且有精神因素參與，故選用者不多。狗容易嘔吐，也有行為因素，故也不理想。一般多選用大白鼠。

（四)消化系統(tǒng)常見病動(dòng)物模型

1．胃病　急性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠。實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)，以水楊酸制劑（如20ml的阿司匹林或水楊酸溶液)按100mg/kg給藥，或以10ml的醋酸或不同濃度的鹽酸（1、10、100ml)，或同種動(dòng)物膽汁、2ml的�；悄懰�、15%的乙醇等單獨(dú)或幾種合用灌胃，4小時(shí)后動(dòng)物胃內(nèi)發(fā)急性彌慢性炎癥變化。

慢性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用慢性胃瘺狗，每日經(jīng)瘺灌70～75℃的熱水300ml，連續(xù)60天后可引胃粘膜萎縮，胃酸減少甚至缺失。還可用同種或自身的胃液（按4～5ml/kg取胃液，并濃縮50倍)，或胃粘膜的生理鹽水的組織勻漿與Freund佐劑以1：1配成乳劑，皮下注射進(jìn)行免疫，隔15～30天再注射一次，即可誘發(fā)致胃粘膜發(fā)生細(xì)胞浸潤及萎縮性病變。

急性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用200～250g的成年大白鼠，用浸水刺激造成應(yīng)激性潰瘍。

結(jié)扎大白鼠幽門可誘發(fā)成胃潰瘍，其成功率與動(dòng)物禁食情況以及結(jié)扎后經(jīng)歷的時(shí)間等有關(guān)。一般誘發(fā)成功率達(dá)85～100分，是最常用的模型之一。

組織胺法常選用雄性白色豚鼠，禁食18～24小時(shí)，全麻下找出十二指腸，在十二脂腸的膽管開口上方夾一動(dòng)脈夾造成狹窄，以使胃液潴留并防止十二脂液返流入胃。皮下注射磷酸組織胺水溶液（2.5～7.5mg/kg，根據(jù)動(dòng)物品種而劑量不同)，1小時(shí)后即可恒定地復(fù)制出胃潰瘍。

慢性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠�？捎脽崂臃ɑ虼姿峤�潰造成胃壁損傷形成潰瘍。熱烙法是在無菌剖腹后，以3mm粗的15W電烙鐵加熱至45℃左右，灼烙腺胃約5秒種后粘膜出現(xiàn)水腫，6小時(shí)后有明顯出血。醋酸浸潰法可用10%或20%醋酸溶液0.05ml，用0.01ml刻度的結(jié)核菌素注射器利用26號(hào)皮內(nèi)針頭作胃壁粘膜注射或以棉簽蘸100％醋酸溶液通過內(nèi)徑5mm的玻璃管涂敷胃漿膜面或剖開胃腔涂于粘膜面引起腐蝕性潰瘍。

2．腸病　腸梗阻實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用狗。在單純結(jié)扎腸管24小時(shí)后，即可見梗阻以上腸段明顯擴(kuò)張。也可采取結(jié)扎腸系膜血管、人工造成腸套或腸扭轉(zhuǎn)等方法復(fù)制。

腸粘膜實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ屯ǔ＿x用狗，不能選草食動(dòng)物，因其闌尾無論在結(jié)構(gòu)或機(jī)能上均與人的闌尾有較大差別。狗雖也差別，但狗的闌尾粗而長，容易處理。

潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢赃x用大白鼠，通過免疫方法制備。一般是用同種或異種動(dòng)物的結(jié)腸粘膜勻漿加Freund佐劑，給大白鼠足跖肉墊內(nèi)注射，約10天后隨著血清抗結(jié)腸粘膜抗體滴度的升高和便血，在盲腸與結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎變化。也可給兔結(jié)腸漿膜下反復(fù)多次注射卵白蛋白或向兔的上腸系膜動(dòng)脈內(nèi)注射內(nèi)毒素均可造成潰瘍性結(jié)腸炎變化。

3．腹膜炎　細(xì)菌性腹膜炎是以生理鹽水稀釋肉湯培養(yǎng)的大腸桿菌液，制成1×108/ml菌量的懸液，給豚鼠腹腔注射可以規(guī)律性地引起嚴(yán)重的腹膜炎，大都在24～48小時(shí)內(nèi)死亡。若菌量小，毒力低，有進(jìn)就不易造成實(shí)驗(yàn)性腹膜炎，用大鼠和小鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)尤其如此。

4．胰腺炎　急性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛蠖歼x用雄狗，且以體重在15公斤以上者為佳。較小的狗狗胰管細(xì)，雌狗脂肪多，均可影響手術(shù)操作。在無菌操作下，分離出主胰管。若在結(jié)扎主胰管的同時(shí)，飼以高蛋白、高脂肪食物，或注射促胰激素使胰液分泌增加，可以誘發(fā)一過性的胰腺水腫，如果在結(jié)扎胰管的同時(shí)暫時(shí)阻斷胰動(dòng)脈或以有活性的胰蛋白酶作動(dòng)脈內(nèi)注射則可導(dǎo)致現(xiàn)血性胰腺炎。

慢性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠或豚鼠，以含0.5％量的dl-乙硫氨酸飼料喂養(yǎng)動(dòng)物1～2個(gè)月；或每日用該藥250mg作腹腔注射，連續(xù)10天即可引起胰腺泡破壞和炎細(xì)胞浸潤。也可選用大白鼠，用20％乙醇置于滴瓶中代替飲水，讓動(dòng)物自由吮吸，持續(xù)8個(gè)月以上，即可使胰腺細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，線粒體和胞漿呈退行性變。若飲用20～30個(gè)月則可出現(xiàn)腺泡萎縮、腺管上皮增殖，小葉內(nèi)有散在結(jié)締組織增生以及腺管內(nèi)出現(xiàn)蛋白栓等變化。

5．膽結(jié)石　使動(dòng)物膽道發(fā)生感染，膽汁淤積，膽固醇代謝發(fā)生障礙等均可使動(dòng)物膽道形成膽石。復(fù)制膽石模型的方法很多，食餌法，常選用敘利亞地鼠，體重60g左右，喂高糖、不含非飽和脂肪酸飼料（蔗糖74%、酪蛋白21%、食鹽4.4%、膽堿0.1%、濃縮魚肝油0.5%)，每只地鼠5～9g/次，每天2次，14～21天膽囊內(nèi)形成明顯結(jié)石，22天后成石率高達(dá)100%。也有選用健康雌性豚鼠，飼鼠基礎(chǔ)食料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、豬油1%、纖維素1%、膽酸0.02%、膽固醇0.05%的成石飼料，2個(gè)月后在90%的豚鼠膽囊中產(chǎn)生了以膽色素為主的結(jié)石，其成份和結(jié)構(gòu)與人類的膽色素結(jié)石相似。

感染成石法常選用健康成年家兔、大白鼠成狗。采用無菌手術(shù)，暴露家兔十二指腸，從十二指腸乳頭插入塑料管，由此管注入蛔蟲卵或大腸桿菌，同時(shí)還可從此管抽取膽汁進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和分析。注入蛔蟲卵后7個(gè)月，膽囊內(nèi)可形成結(jié)石。狹窄成石法常選用健康成年家兔、狗或猴，但家兔的誘發(fā)率高。無菌手術(shù)探明膽道及膽囊正常，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住兔膽囊頸部，以產(chǎn)生部分梗阻。結(jié)果6個(gè)月后家兔膽囊中有明顯結(jié)石形成。

切除迷走神經(jīng)干成石法常選用成年狗或兔。采用無菌手術(shù)探明家兔膽道及膽囊正常，然后暴露胃、賁門及食管，將食管懸吊，暴露兩側(cè)迷走神經(jīng)干，分離后從食管下端切除兩側(cè)迷走神經(jīng)干各1.5～2cm，手術(shù)后4～5周有膽固醇結(jié)石形成。

異物植入成石法常選用成年健康狗或兔。動(dòng)物麻醉后，在無菌操作下暴露膽囊，在膽囊底部剪一小口，植入蛔蟲碎片或人膽石、線結(jié)、橡皮等，用小圓針荷包縫合剪口，植入2～3月后膽囊內(nèi)可見到多數(shù)黑色細(xì)砂，植入的異物可被墨綠色的膽石成份所包裹，若植入數(shù)個(gè)異物則有時(shí)可以被粘結(jié)成一個(gè)大的團(tuán)塊。

五、呼吸系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一)鎮(zhèn)咳藥的篩選實(shí)驗(yàn)

豚鼠對(duì)化學(xué)刺激物或機(jī)械刺激都很敏感，刺激后能誘發(fā)咳嗽；刺激其喉上神經(jīng)亦能引起咳嗽，加之一般實(shí)驗(yàn)室較易得到，因此，豚鼠是篩選鎮(zhèn)咳藥最常用的動(dòng)物。貓的生理?xiàng)l件下很少咳嗽，但受機(jī)械刺激或化學(xué)刺激后易誘發(fā)咳嗽，而貓較豚鼠難得，故貓選用于刺激喉上神經(jīng)誘發(fā)咳嗽，在初篩的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步肯定藥物的鎮(zhèn)咳作用。狗不論在清醒或麻醉?xiàng)l件下，化學(xué)、機(jī)械，電等刺激胸膜、氣管粘膜或頸部迷走神經(jīng)均能誘發(fā)咳嗽；狗對(duì)反復(fù)應(yīng)用化學(xué)刺激所引起的咳嗽反應(yīng)較其他動(dòng)物變異少，故特別適用于觀察藥物的鎮(zhèn)咳作用及持續(xù)時(shí)間。但狗從經(jīng)濟(jì)上和來源上較豚鼠和貓都昂貴、困難，只能用于進(jìn)一步肯定藥物的鎮(zhèn)咳作用。

兔對(duì)化學(xué)刺激或電刺激不敏感，刺激后誘發(fā)噴嚏的機(jī)會(huì)較咳嗽為多，故兔很少用于篩選鎮(zhèn)咳藥。小白鼠和大白鼠用化學(xué)刺激雖能誘發(fā)咳嗽，但噴嚏和咳嗽動(dòng)作很難區(qū)別，變異較大，特別是反復(fù)刺激時(shí)變異更大，實(shí)驗(yàn)可靠性較差。根據(jù)國內(nèi)有關(guān)單位的經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為小白鼠作為初篩鎮(zhèn)咳藥的動(dòng)物是可取的。

（二)呼吸道平滑肌實(shí)驗(yàn)

離體氣管法是常用的篩選平端藥的實(shí)驗(yàn)方法之一。常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，豚鼠的氣管對(duì)藥物的反應(yīng)較其它動(dòng)物的反應(yīng)更敏感，且更接近于人的支氣管，因此豚鼠的氣管可作為常用的標(biāo)本（表10-33)。

表10-33　不同動(dòng)物的氣管敏感性（g/ml)　

注：①狗的氣管對(duì)乙酰膽堿極度敏感（10^-9)。

②貓、兔和大白鼠的氣管對(duì)組織胺不敏感。

肺支氣管灌流法是測定支氣管肌張力的研究方法之一，方法簡便、可靠，所得的結(jié)果反映全部氣管平滑肌張力情況。常選用豚鼠和兔，也可用小白鼠。

藥物引喘實(shí)驗(yàn)常選用豚鼠，不少藥物以氣霧法給予豚鼠可引起支氣管痙攣、窒息，從而導(dǎo)致抽搐而跌倒。這種動(dòng)物模型可用于觀察藥物的支氣管平滑肌松弛作用。目前最常用的引喘藥物是組織胺和乙酰刞鹼。實(shí)驗(yàn)時(shí)豚鼠必須適用幼鼠，體重不超過200g，并引喘潛伏期不超過120秒。

六、泌尿系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用

（一)利尿藥及腎功能測定實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的選擇應(yīng)用

1．利尿藥及抗利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)：要判斷所試藥物是否有利尿作用，可選用大白鼠、小白鼠、貓或狗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中以大白鼠較為常用。對(duì)人體有利尿作用的藥物均可在大白鼠實(shí)驗(yàn)中獲得較好的利尿效果，但汞撒利的作用較差。因此篩選利尿藥實(shí)驗(yàn)的首選動(dòng)物雖多采用大白鼠，必要時(shí)還應(yīng)再選用另一種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，加以驗(yàn)證。

收集動(dòng)物尿液的方法可分為兩大類：一是用代謝籠收集較小動(dòng)物24小時(shí)以內(nèi)的尿液量，稱為“代謝籠實(shí)驗(yàn)法”，適用于大白鼠及小白鼠。為了防止尿液的蒸發(fā)和糞便的污染，可選用特別的集尿裝置或用濾紙吸導(dǎo)尿液加以稱重，用此類方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)環(huán)境（氣溫和濕度)的影響較大，應(yīng)予控制，室溫以20℃左右為宜。二是直接自輸尿管或膀胱收集尿滴，適用于貓、狗、家兔和大白鼠，實(shí)驗(yàn)可在較短時(shí)間內(nèi)完成，受外界環(huán)境影響也較少，但動(dòng)物處于麻醉狀態(tài)下，與清醒動(dòng)物還有區(qū)別。欲進(jìn)行清醒動(dòng)物的利尿?qū)嶒?yàn)，可采用膀胱瘺法，即預(yù)選給狗或貓進(jìn)行膀胱瘺手術(shù)，二周后切口愈合，再將動(dòng)物固定于特制支架上收集尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)中，家兔不是首選動(dòng)物，但因其價(jià)廉易得，某些初篩實(shí)驗(yàn)也可用家兔代替家犬進(jìn)行直接集尿的實(shí)驗(yàn)．過去曾用膀胱套管法，由膀胱做切口插入套管，再做荷包縫合，但方法復(fù)雜，套管內(nèi)的尿液往往不能順利流出，不如用聚乙烯塑料套管直接插入輸尿管為好。常選用2kg以上健康雄性家兔作實(shí)驗(yàn)。

2．腎清除率測定實(shí)驗(yàn)：腎清除率是檢查腎功能的一項(xiàng)重要方法。它表示腎臟對(duì)血液里某物質(zhì)的清除能力，還可以了解腎血流量，游離水的生成和重吸收等方面的情況。狗和大鼠均可用來作清除率試驗(yàn)。大鼠較易獲得，較易飼養(yǎng)，成本低，實(shí)驗(yàn)時(shí)藥品消耗少，在急性實(shí)驗(yàn)時(shí)較易在清醒狀態(tài)下作清除率測定。

菊糠清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠進(jìn)行。清除率是指每毫升血漿“清除”物質(zhì)的比例。血漿里物質(zhì)大多能被腎小球?yàn)V過，又能被腎小管細(xì)胞分泌或重吸收。唯獨(dú)菊糖僅被腎小球?yàn)V過，而不被腎小管細(xì)胞分泌重吸收gydjdsj.org.cn/rencai/，故它的清除率就是腎小球?yàn)V過率。

游離水清除率實(shí)驗(yàn)常選用健康成年狗進(jìn)行，游離水清除率實(shí)驗(yàn)，是一種測定尿中游離水生成的方法。利用這種方法可以衡量腎臟對(duì)尿液濃縮和稀釋的能力，分析利尿藥對(duì)尿濃縮和稀釋機(jī)制的影響，從而推測利尿藥的作用部位。

對(duì)氨基馬尿酸清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗，但以大白鼠更為常用。對(duì)氨基馬尿酸的清除率可作為有將腎血漿流量的客觀指標(biāo)。

3．截流分析實(shí)驗(yàn)：截流分析實(shí)驗(yàn)常選用10kg以上健康狗做實(shí)驗(yàn)。截流技術(shù)系一種分析腎小管各段運(yùn)轉(zhuǎn)功能的方法，利用這種方法可對(duì)利尿藥作用部位進(jìn)行初步分析。

4．腎小管微穿刺實(shí)驗(yàn)：腎小管微穿刺（Micropuncture)技術(shù)，于1941年開始應(yīng)用于哺乳動(dòng)物腎臟研究，近年來更獲得很大進(jìn)展，發(fā)展了微量注射，微量灌流等技術(shù)，對(duì)離子及其他物質(zhì)在腎小管的不同節(jié)段中的轉(zhuǎn)動(dòng)過程，作了精確的闡明；用于利尿劑的研究，則可探測對(duì)單個(gè)腎單位功能的影響以及藥物的作用部位。該實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗進(jìn)行。如欲穿刺集合管，可用幼年大白鼠或金地鼠；如欲穿刺腎小球，常用Munich-Wistar大白鼠，因其腎小球位置表淺，易于穿刺。大鼠體重一般采用200～250g較好。

（二)泌尿系統(tǒng)疾病的動(dòng)物模型

1．腎炎

⑴腎小球腎炎：Masugi型腎炎動(dòng)物模型是選用羊抗兔腎血清引起兔或大白鼠的腎小球腎炎。羊抗兔血清制備是選用體重2kg左右健康兔處死后取出腎臟，插入導(dǎo)管，反復(fù)用生理鹽水沖洗，然后將皮質(zhì)與髓質(zhì)分開，用腎皮質(zhì)5g研成勻漿與弗氏完全佐劑混勻成10ml，再加生理鹽水使總量達(dá)30ml。此混懸液給綿羊皮下或肌肉多處注射共4次，每2周1次，于末次注射后2周采羊血分離出血清，用等量兔紅細(xì)胞吸附，置于4℃一整夜以吸去血清中可能存在的抗兔血細(xì)胞抗體，經(jīng)離心，取上清液置于56℃水浴中半小時(shí)滅活。通過上述處理的血清給健康兔靜脈注射，每次0.5～2.0ml，隔半小時(shí)一次，約連續(xù)注射3～5次出現(xiàn)蛋白尿?yàn)闃?biāo)志，可認(rèn)為已形成了嚴(yán)重的腎小球腎炎。

⑵慢性腎小球腎炎：動(dòng)物模型是用異種動(dòng)物（兔、大白鼠、狗)腎小球基底膜和弗氏佐劑，給綿羊或獼猴注射，可復(fù)制成慢性腎小球腎炎。獼猴以選用2.2～4,5kg體重的健康猴較好。

⑶異種蛋白引起的腎炎：可先由靜脈注入異種蛋白以使動(dòng)物致敏，然后將蛋白直接從動(dòng)脈作決定性注射，以引起急性腎炎。兔耳靜脈注入不稀釋的雞蛋白1～6ml，每次間隔4～5天，共注射4～5次，末次致敏注射后6～12天手術(shù)，在無菌條件下，打開腹腔分離出腎動(dòng)脈，經(jīng)由套在注射器上特殊玻璃小管，向一側(cè)或兩側(cè)注入不稀釋的雞蛋白1～3ml，作為決定性的攻擊。在注入蛋白后，用手指壓迫和用線結(jié)扎腎動(dòng)脈約5～6分鐘。經(jīng)上述處理的動(dòng)物大多數(shù)皆能造成典型的腎炎病變。給狗腹腔注射馬血清，每次5ml，6天1次，共注射13次，于第14次向腎動(dòng)脈注入5ml馬血清也可引起實(shí)驗(yàn)性腎炎。本法造成的腎炎病變，與人類腎炎的病理改變很相似。

⑷ECHO9病毒引起腎小球腎炎：選用出生6天的HAM/ICR系小鼠，每只用含ECHO9病毒的腎組織培養(yǎng)液0.1ml腹腔注射，注射6天后，幼鼠腎組織學(xué)改變類似于急性腎小球腎炎。腎小球細(xì)胞增生，腎小管內(nèi)有透明管型。注射2～3周，幼鼠腎小球損害可達(dá)高峰，6周后減輕甚至消失。

2．自身免疫腎小管間質(zhì)性腎炎

腎臟含有特殊的抗原，它僅存在于小腎皮質(zhì)。用兔腎皮質(zhì)中腎小管的基底膜與弗氏完全佐劑免疫豚鼠，可造成自身免疫腎小管間質(zhì)腎炎。在無菌條件下，取出新西蘭兔的腎臟，用等滲的氯化鈉溶液灌注，置于－25℃冰箱中過夜,而后取出緩慢地融化。去掉腎髓質(zhì)部分，將皮質(zhì)搗碎，通過150目金屬篩后，盛于冷容器中，先用鹽水清洗，接著用pH7.1的磷酸緩沖液反復(fù)清洗，再經(jīng)過1500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。因腎小球較腎小管沉淀得快，經(jīng)顯微鏡證實(shí)，棄去細(xì)胞殘?jiān)�，將含有豐富腎小管的上層液與弗氏完全佐劑制成腎小管基底膜的乳化劑（TBM乳劑)，這種制劑中含有腎小管約90%和少量腎小球。每毫升含和TBM濕重15mg。選用體重400～500g的雄性豚鼠，每2周在背部皮膚分別選6個(gè)點(diǎn)作皮下注射，每點(diǎn)注乳劑0.1ml。經(jīng)32天后處死動(dòng)物�？梢娔I臟腫脹，表面有小瘀斑。組織學(xué)檢查可見有典型的間質(zhì)性腎性病變。

3．腎病

（1)升汞中毒性腎�。河貌煌瑵舛鹊纳�汞溶液給狗、家兔和大白鼠皮下或肌肉注射，可造成基本病變相似的壞死性腎病。給實(shí)驗(yàn)前造成輸尿管瘺或膀胱瘺的狗。用2%升汞溶液按20mg/kg的劑量由腹部皮下注射。1～2小時(shí)后，尿量急劇增多，為原來的5～10倍，比重由1.007降至1.001。數(shù)小時(shí)后，尿量開始下降，第二天發(fā)展為少尿或無尿，比重增高1.045～1.049，有少量蛋白。家兔用1%升汞溶液皮下注射，每次0.75～0.80ml，每天1次，5天可致腎病發(fā)生。大白鼠、小白鼠按6～15mg/kg的劑量皮下注射。小白鼠對(duì)升汞敏感性個(gè)體差異大，但也能發(fā)生明顯的壞死性腎病。適用體重190～250g大白鼠按12mg/kg的升汞劑量肌肉注射。24小時(shí)內(nèi)動(dòng)物腎功能受損，腎小球?yàn)V過率進(jìn)行性減少，近曲小管水的重吸收減少以及管內(nèi)壓降低，尿量可少于3ml/24小時(shí)。

（2)藏紅花紅O造成的腎�。哼x用家兔作實(shí)驗(yàn)。用加熱37℃的任-洛氏液配制成1%藏紅花紅O溶液，由兔耳緣靜脈注入，總量為30mg，分2次注入，間隔3小時(shí)。注后24小時(shí)動(dòng)物血清尿素氮顯著增高，血清鉀、鈉也升高，伴有不同程度代謝性酸中毒。藏紅花紅O可選擇性地引起近端和遠(yuǎn)端明曲管上皮廣泛壞死，造成的模型與臨床表現(xiàn)較一致，故在國內(nèi)較為常用。

3．腎結(jié)石、膀胱結(jié)石

在動(dòng)物身上復(fù)制泌尿系統(tǒng)的結(jié)石是比較困難的，也不能復(fù)制人體結(jié)石形成的全部復(fù)雜過程。一般是以異物移植入膀胱內(nèi)，也有用維生素A的食物飼養(yǎng)動(dòng)物或清注細(xì)菌等方法造成。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用乙二醇（Ethylene　Glycol)和乙醛酸鈉（Sodium　Glyoxylate)中毒時(shí)，在腎內(nèi)形成草酸鈣結(jié)晶，有利于結(jié)石的發(fā)生。

（1)植入異物造成膀胱結(jié)石：選用大白鼠，無菌手術(shù)切開膀胱，植入異物后縫合，術(shù)后加強(qiáng)護(hù)理，經(jīng)4～10周后，多數(shù)動(dòng)物可形成結(jié)石。異物可選用石臘、人的泌尿道結(jié)石碎塊、鉛、鋅、磷等，使其大小不得超過3～4mm直徑，金屬異物應(yīng)是均勻一致的圓形物，平均重疊約2.5mg。

（2)食餌性的泌尿系結(jié)石：選用大白鼠（也可用小白鼠、豚鼠或家兔)飼喂維生素A缺乏的食物而引起。最好選用出生一個(gè)月左右的幼年雄性大白鼠（雄性動(dòng)物體內(nèi)維生素較雌性少，且生長較快)，每3天稱重1次，用維生素A缺乏的食物飼養(yǎng)，經(jīng)過10～14天后動(dòng)物體重下降，生長停滯，有干眼病表現(xiàn)。在30～60天中14%動(dòng)物發(fā)生了膀胱結(jié)石，經(jīng)180～250天后，膀胱結(jié)石發(fā)生率可達(dá)88%，腎結(jié)石為41%。