目 錄
藥用植物學(xué)部分
實驗室規(guī)則…………………………………………………………………………(1)
實驗注意事項………………………………………………………………………(1)
實驗報告的寫作要求………………………………………………………………(1)
實驗一 顯微鏡的構(gòu)造、使用及植物細(xì)胞后含物………………………………(3)
實驗二 植物的組織………………………………………………………………(7)
實驗三 根的內(nèi)部構(gòu)造……………………………………………………………(10)
實驗四 莖的內(nèi)部構(gòu)造……………………………………………………………(12)
實驗五 葉的內(nèi)部構(gòu)造及花的組成………………………………………………(14)
實驗六 果實和種子………………………………………………………………(17)
實驗七 植物分類(一)……………………………………………………………(19)
實驗八 植物分類(二)……………………………………………………………(21)
植物標(biāo)本的采集與制做……………………………………………………………(23)
實驗室規(guī)則
一、按實驗室公布的名單、座號就坐,不得隨意調(diào)換。
二、遵守實驗時間,不無故遲到、早退和缺席。如中途有事離開實驗室,必須征得教師同意。
三、愛護(hù)實驗儀器用品,嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,個人所用儀器用具使用后要擦試干凈,若有丟失、損壞按規(guī)定賠償。
四、要愛護(hù)一切實驗用標(biāo)本、材料。實驗進(jìn)行前,不得隨意亂動或挑選,觀察后放回原處,不得私自帶出室外。試劑及消耗性的材料,應(yīng)按規(guī)定用量使用,不得浪費。五、除特殊情況經(jīng)教師同意外,實驗報告應(yīng)在實驗課結(jié)束前交給指導(dǎo)教師。
六、實驗結(jié)束后,將實驗桌上物品整理好,公共用具應(yīng)放回原處。
實驗注意事項
一、實驗前的準(zhǔn)備工作
(一)根據(jù)教學(xué)日歷進(jìn)度,復(fù)習(xí)與本次實驗有關(guān)的課堂講授內(nèi)容。
(二)仔細(xì)閱讀本次實驗指導(dǎo)內(nèi)容,要求明確實驗?zāi)康,弄懂實驗方法,預(yù)先想好自己實驗進(jìn)行的步驟,做到實驗時心中有數(shù),保證完成實驗要求。
(三)準(zhǔn)備好各種自備的實驗用品(報告紙,2H或3H鉛筆、橡皮、短尺、小刀等)。
二、實驗過程中的幾點要求
(一)保持實驗室安靜,不得高聲說笑或隨便離開座位。
(二)注意聽取教師的指導(dǎo),做到實驗認(rèn)真,觀察仔細(xì),獨立思考,做好記錄和實驗報告。
(三)安排好實驗課時間,在規(guī)定的實驗時間內(nèi)完成本次實驗,交實驗報告。
三、實驗結(jié)束時的幾點要求
(一)每個人自己所用實驗儀器用品必須洗擦干凈,放到指定位置,個人保管的用品要收好,上鎖。
(二)填寫顯微鏡使用記錄。
(三)值日生負(fù)責(zé)整理桌面,清掃地面,擦黑板及其它衛(wèi)生工作,并檢查水、電,關(guān)窗,鎖門。
實驗報告的寫作要求
一、按照每次實驗報告的要求,一律用繪圖鉛筆(3H)在實驗報告紙上繪圖或做文字記錄,不得用鋼筆或圓珠筆。
二、繪圖時,應(yīng)注意所繪圖在實驗報告紙上的位置要適中,大小要恰當(dāng),鉛筆要削尖,先在報告紙上鉛筆起圖稿,切勿另紙作稿。觀察核對修改后,再用平滑的線條描繪清晰,不要涂抹,在圖下面注明各圖名稱,井用平行直線向右側(cè)引出注明各部分的名稱。
三、繪圖的要求
(一)簡圖:是以不同的符號表示不同細(xì)胞或組織的輪廓,以及彼此間的比例。但不反映每個細(xì)胞的情況,可用不同的符號表示各種組織,繪簡圖常用的符號如下:
表皮 木栓組織 韌皮部
木質(zhì)部 射線厚角組織
纖維 石細(xì)胞薄壁組織
分泌組織 簇晶針晶
方晶 砂晶 淀粉粒
(二)組織詳圖:常與簡圖配合,共同表示某種藥材結(jié)構(gòu)的顯微特征,描繪在顯微鏡下可見的生藥組織,細(xì)胞的形狀和細(xì)胞彼此間關(guān)系。能比較真實地反映生藥組織、細(xì)胞的實際情況。一般組織詳圖只需繪出有代表性的橫切面的1/4或從外表到中心較窄的一部分,如下圖所示:
或 或
實驗一 顯微鏡的構(gòu)造、使用及植物細(xì)胞后含物
一、目的要求
(一)了解顯微鏡的一般構(gòu)造和保養(yǎng)。初步學(xué)會正確的使用顯微鏡。
(二)學(xué)會臨時裝片的制作方法。
(三)了解淀粉粒,草酸鈣結(jié)晶的種類、形態(tài)特征。
二、儀器用品、材料
蒸餾水 每桌一瓶
吸水紙 適量
馬鈴薯塊莖 適量
字母裝片 每人一片
黃柏皮橫切片 每室各一份
地骨皮橫切片 每室各一份
半夏塊莖橫切片 每室各一份
大黃粉末 每室各一份
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)顯微鏡的構(gòu)造
主要分機(jī)械部分及光學(xué)部分
1、機(jī)械部分
鏡座:為顯微鏡最下部分。常為馬蹄形或長方形、圓形等作穩(wěn)定鏡身之用。有的在鏡座中附有照明裝置。
鏡柱:連于鏡座向上的直立短柱。用以支持和連接鏡臂、載物臺等部件。直筒顯微鏡在鏡柱和鏡臂處連接有傾斜關(guān)節(jié)。它可以使鏡身傾斜到一定角度,便于觀察。
鏡臂:為連接于鏡柱上呈彎臂形的結(jié)構(gòu)適于握取。
載物臺:供放置標(biāo)本用的方形或圓形平臺。中央有通光孔以透過光線。臺面上裝有螺旋推進(jìn)器,不但可固定標(biāo)本片,還可借助右方兩個旋鈕調(diào)整標(biāo)本片的位置,也有的顯微鏡在載物臺的左或右下側(cè)有共軸的縱橫向移動螺旋。轉(zhuǎn)動大螺旋標(biāo)本片夾可前后移動,轉(zhuǎn)動小螺旋可使標(biāo)本片夾左右移動,以便觀察標(biāo)本片的不同部位。
鏡筒:為顯微鏡上部的中空直筒。筒的上端用以按插接目鏡。鏡筒有垂直的和傾斜兩種。直筒的下端裝有轉(zhuǎn)換器;斜筒的下方連接棱鏡室,棱鏡室下端連接轉(zhuǎn)換器。
轉(zhuǎn)換器:或稱物鏡轉(zhuǎn)換器,位于鏡筒或棱鏡室下端呈圓盤形。其上有3~4個圓孔,用以旋裝接物鏡。借轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)動可以調(diào)換不同倍數(shù)的接物鏡。在轉(zhuǎn)換器圓盤內(nèi)裝有彈簧片,用以卡住圓盤使接物鏡固定在正對載物臺通光孔的位置。
調(diào)節(jié)輪:在鏡柱或鏡臂的兩側(cè),有兩對大小不同的調(diào)節(jié)輪,轉(zhuǎn)動此調(diào)節(jié)輪可使載物臺(或鏡筒)上下移動,借此調(diào)節(jié)焦距以便觀察物像(注意須記住調(diào)節(jié)輪旋轉(zhuǎn)方向與載物臺或鏡筒升降的關(guān)系)。
有的顯微鏡大、小調(diào)節(jié)輪為安裝在一個中軸上的共軸裝置,并在右邊粗調(diào)節(jié)輪內(nèi)側(cè)有一個較窄的調(diào)節(jié)輪,可用以調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)輪的松緊。此輪按順時針方向旋轉(zhuǎn),粗調(diào)節(jié)輪即偏緊,反之即偏松。(注意使用時不可調(diào)得過松,否則載物臺會自動下滑,影響觀察。此輪調(diào)到合適時即不要經(jīng)常轉(zhuǎn)動)。在左邊粗調(diào)節(jié)輪內(nèi)側(cè)有一個限位調(diào)節(jié)環(huán),其上連一凸柄,此環(huán)旋緊即使粗調(diào)節(jié)輪限位。達(dá)到保護(hù)鏡頭安全的作用。
2、光學(xué)部分:由接目鏡、接物鏡、棱鏡室、聚光器、虹彩光圈、反光鏡等部分組成。
接目鏡:由兩片透鏡鑲于金屬筒上構(gòu)成,插于鏡筒上端。目鏡筒內(nèi)可裝有指針,(用一根毛發(fā)粘于橫隔上構(gòu)成)以做指示物象之用。在目鏡上刻有4X、10X、……(X表明放大倍數(shù))。
接物鏡:由2~4片透鏡鑲于金屬筒中構(gòu)成,旋裝在轉(zhuǎn)換器上。物鏡上也刻有4、10、40、90等字樣表明該物鏡的放大倍數(shù)。低倍鏡頭放大4、8、10倍,鏡頭較短。放大40倍、45倍的為高倍鏡頭、鏡頭也較長。而90、95或100倍的是油浸鏡頭、鏡頭最長。我們一般不用此種鏡頭。顯微鏡的放大倍數(shù)是接目鏡的放大倍數(shù)與接物鏡的放大倍數(shù)的乘積。
棱鏡室:僅斜筒顯微鏡裝有此部分,位于鏡筒與轉(zhuǎn)換器之間,呈凸起的球形或類球形,內(nèi)裝三棱鏡,可將接物鏡直入的光線折射入接目鏡內(nèi)以便觀察。
聚光器:位于載物臺下,由幾個透鏡鑲合而成。其作用是集合由反光鏡折射來的光線,搬動聚光器調(diào)節(jié)柄,可調(diào)節(jié)其升降。有的顯微鏡在聚光鏡一側(cè)有一個調(diào)節(jié)輪,可調(diào)節(jié)聚光器上下移動以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱,聚光器上升則光線強(qiáng),反之則弱。
虹彩光圈:附于聚光器下面,由多數(shù)薄金屬片嵌合而成,借其搬柄的左右滑動可使金屬片聚合或分開,以此調(diào)節(jié)透光孔的大小。
調(diào)光玻璃架:為附于聚光器下端的園環(huán),放置濾光玻璃用。
反光鏡:位于聚光器下面,借其連軸插在鏡柱上或固定在鏡座上。反光鏡能向任何方向轉(zhuǎn)動,以便將光線反射到鏡內(nèi)。反光鏡的一面為平面鏡;另一面為凹面鏡。平面鏡反射的光線較散可在強(qiáng)光下使用;凹面鏡反射的光線較集中,光線較強(qiáng),可在光線弱時使用。
(二)顯微鏡的使用方法
1、放好使用位置:由鏡箱內(nèi)取出顯微鏡時,應(yīng)右手緊握鏡臂,左手平托鏡座,直立取出。然后平穩(wěn)、輕放在實驗臺上自已左前方位置,約離臺緣5~10厘米處,右方放置實驗指導(dǎo)、實驗報告紙等物。
2、對光:轉(zhuǎn)動大調(diào)節(jié)輪使載物臺下降(或提高鏡筒),轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器將低倍接物鏡移到鏡筒正下方,對準(zhǔn)通光孔,直到有“卡達(dá)”聲,說明鏡頭已定好位置。打開虹彩光圈。轉(zhuǎn)動反光鏡對著光源方向使光線反射入鏡內(nèi),同時左眼對準(zhǔn)接目鏡觀察,調(diào)整反光鏡或聚光器,直到使視野均勻明亮。
3、低倍鏡的使用:對好光后,將準(zhǔn)備觀察的標(biāo)本片放置在載物臺上,使材料對準(zhǔn)載物臺上的通光孔,用彈夾固定(注意要蓋玻片向上,不要放反)。轉(zhuǎn)動大調(diào)節(jié)輪使載物臺緩緩上升,同時自側(cè)面密切注意標(biāo)本片與接物鏡之間的距離,到標(biāo)本片距物鏡約0.5~1厘米時,即可停止轉(zhuǎn)動。然后用左眼向目鏡內(nèi)觀察(右眼要同時睜開)。同時逆時針轉(zhuǎn)動大調(diào)節(jié)輪使載物臺徐徐下降,當(dāng)降到焦距時,在鏡內(nèi)可看到標(biāo)本的物像,若物像不夠清楚,可用小調(diào)節(jié)輪稍加調(diào)節(jié)即可。
若旋轉(zhuǎn)大調(diào)節(jié)輪太快,載物臺下降過低致使超過焦距物像不能顯現(xiàn)時,千萬不要在眼睛觀察接目鏡的同時,旋轉(zhuǎn)大調(diào)節(jié)輪使載物臺上升,以防標(biāo)本片碰到物鏡,遇此情況應(yīng)照上法重新操作;可用字母標(biāo)本片練習(xí)低倍鏡的使用,并注意鏡內(nèi)所呈物像是正像還是倒像?
4、高倍鏡的使用:使用高倍鏡時必須先用低倍鏡找到所要觀察的結(jié)構(gòu),調(diào)節(jié)清晰,并將要放大觀察的部分移至視野的中央,再直接轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器,調(diào)換高倍接物鏡。此時需注意兩點,第一是要認(rèn)準(zhǔn)高倍接物鏡鏡頭,不要將油鏡頭錯當(dāng)做高倍鏡鏡頭。第二是調(diào)換高倍接物鏡時不要轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)輪升降載物臺,否則焦距不對將影響高倍鏡的使用。
當(dāng)調(diào)換好高倍接物鏡以后,鏡頭距標(biāo)本片很近,因此觀察操作時要特別小心,這時只需要用小調(diào)節(jié)輪稍微調(diào)整焦距即可看到放大了的清楚的物像。注意在使用高倍鏡時切勿轉(zhuǎn)動大調(diào)節(jié)輪,以免壓碎標(biāo)本片及損傷鏡頭。若高倍鏡下找不到物像時,必須重新用低倍鏡找到后再按上述方法操作字母裝片反復(fù)練習(xí)低倍鏡及高倍鏡的使用。
5、用后整理:觀察完畢后,將物鏡轉(zhuǎn)離通光孔。取下標(biāo)本片、升高載物臺,還原聚光器等,然后將顯微鏡按原位輕輕放入箱內(nèi)、上鎖。
(三)顯微鏡的保護(hù)法
1、使用顯微鏡前,必須認(rèn)真檢查,若發(fā)現(xiàn)有損壞或丟失零件應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師。
2、取、放顯微鏡時應(yīng)謹(jǐn)慎小心,做到按要求輕拿輕放,不要碰撞。
3、未經(jīng)指導(dǎo)教師許可,不得隨意拆卸鏡頭或取下顯微鏡的任何附件。
4、必須保持顯微鏡的清潔,光學(xué)鏡片要用擦鏡紙擦拭、機(jī)械部分可用紗布擦凈。如鏡頭沾有污物或油垢、可用擦鏡紙沾少許二甲苯擦凈,不可用手指、廢紙、手絹、抹布等擦拭。
(四)細(xì)胞后含物的觀察:
1、淀粉粒臨時裝片的制備與觀察
制做臨時裝片,需預(yù)先備好潔凈的載玻片及蓋玻片,用前要擦拭干凈,具體擦法如下:
用左手拇指與食指拿住載玻片的兩短邊,用右手拇指、食指將干凈紗布夾于載玻片的兩面,沿玻片長邊往返擦拭,擦?xí)r兩指用力要均勻直至擦干凈為止。用同樣方法擦蓋玻片,由于蓋玻片極薄,擦?xí)r用力要輕而均勻,以免玻片破碎。
取擦拭干凈的載玻片,在中央加一滴水,然后用鑷子從切成小塊的馬鈴薯塊莖上刮取白漿,放在水滴中攪一攪,按正規(guī)操作蓋上蓋玻片,先于低倍鏡下觀察,可見淀粉粒大多呈卵橢圓形,將形狀清楚的淀粉粒移到視野中央,換過高倍鏡仔細(xì)觀察淀粉粒的結(jié)構(gòu)。在卵圓形淀粉粒較小的一端有臍點。圍繞臍點可見明暗相間的紋理即為層紋。馬鈴薯的淀粉粒除了單粒外,還可以看到少數(shù)復(fù)粒和半復(fù)粒。選擇典型清楚的淀粉粒繪圖。
2、草酸鈣結(jié)晶——于示教鏡下觀察幾種草酸鈣結(jié)晶
簇晶:在大黃粉末臨時裝片中,為大型簇狀結(jié)晶,由許多三菱形結(jié)晶的基部接合而成。
針晶:于半夏塊莖橫切片中可見在許多大型的粘液細(xì)胞內(nèi)含有針晶束。
方晶:觀察黃柏皮橫切片,在染成粉紅色的纖維束周圍有許多菱形或方形的透明結(jié)晶。
砂晶:觀察地骨皮橫切片,在一些薄壁細(xì)胞中有許多灰色的細(xì)小三角形或不規(guī)則砂粒形的結(jié)晶即為砂晶。
四、實驗報告
繪馬鈴薯淀粉粒圖,并注明各部。
實驗二 植物的組織
一、目的要求
(一)掌握保護(hù)組織、機(jī)械組織、輸導(dǎo)組織的特征及在植物體內(nèi)的存在部位。
(二)認(rèn)識幾種常見的分泌組織。
(三)學(xué)會徒手切片的制作方法。
二、儀器用品、 實驗材料
①新鮮藿香莖
②南瓜莖縱切片(每人一片)
桔皮橫切片(一片示教)
川芎根莖橫切片(一片示教)
南瓜莖橫切片(一片示教)
黃柏粉末(每室一份)
5%氫氧化鉀溶液
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)保護(hù)組織:藿香莖橫切臨時裝片的制作與觀察
取藿香嫩莖切成2~3厘米一段,將橫切面削平,沾上一點水,以防止新鮮材料變干,并增加潤滑,使組織不易切碎。用左手拇指和食指夾住材料,下端用中指托住,右手拿刀片,使刀刃向內(nèi)并與材料的斷面平行。自材料的左前方向右后方反復(fù)拉移刀片,即可將材料切成很薄的片。反復(fù)切時,要隨時在斷面上沾水。將切下的薄片放入盛有清水的培養(yǎng)皿中,選取最薄的一片,按正規(guī)操作制成的臨時裝片。先在低倍鏡下觀察,可見莖呈現(xiàn)四方形,四角具有突出的棱脊。莖最外為一層表皮,表皮外具有許多毛茸狀附屬物,尤其在四角處更多。選取清楚的一角,換高倍觀察非腺毛,腺毛及腺鱗的特征。
(二)機(jī)械組織
1、厚角組織
取上述藿香莖徒手切片進(jìn)行觀察,在四個棱脊處表皮下均可見厚角組織。細(xì)胞呈多角形,每一細(xì)胞角隅處壁顯著增厚。
2、厚壁組織(示教)
石細(xì)胞及纖維——黃柏皮粉末示教
在示教鏡下觀察石細(xì)胞及纖維,比較其結(jié)構(gòu)有何異同?
(三)輸導(dǎo)組織:導(dǎo)管與篩管
取南瓜莖縱切片于低倍鏡下,首先自一側(cè)逐漸向內(nèi)觀察切片的整體情況。其中染成粉紅色的帶有環(huán)狀或網(wǎng)狀花紋的部分即木質(zhì)部中的導(dǎo)管。在木質(zhì)部兩側(cè)即為韌皮部,分清各部后,可觀察下列結(jié)構(gòu):
導(dǎo)管:細(xì)胞壁加厚部分呈環(huán)狀、螺旋狀或網(wǎng)紋狀。注意你所觀察的切片中有幾種類型的導(dǎo)管。
篩管:位于導(dǎo)管的兩側(cè),由長筒形細(xì)胞上下相連而成,細(xì)胞間的橫隔壁上有許多小孔即篩孔。此橫隔壁即篩板。
在示教鏡下觀察南瓜莖橫切片中的篩板,與縱切片中的篩板比較。
(四)分泌組織
1、桔皮橫切片——示溶生分泌腔(示教)
于示教顯微鏡下觀察,可見在外果皮部分有許多大型類圓形、橢園形的腔,即為溶生分泌腔。有何特征?
2、川芎根莖橫切片——示裂生分泌腔(示教)
在示教顯微鏡下,在切片的外側(cè)(韌皮部)部位,可見類圓形的腔,即“裂生分泌腔”,注意這種分泌腔與桔皮所見分泌腔有何不同?
(五)顯微制片法:
1、粉末制片法:一般需用過5~6號篩的粉末,用水或稀甘油、50%水合氯醛液裝片。
取何首烏粉末少許,置載玻片上,攤平,加水1~2滴,用解剖針托著蓋玻片使其輕輕蓋下,以濾紙片吸去溢出的液體與材料,揩干后即可置顯微鏡下觀察。注意何首烏粉末中草酸鈣簇晶較多而大(視野稍暗一些易觀察);淀粉粒很多,單粒類球形、臍點星狀、點狀或三叉狀,復(fù)粒由2~9分粒組成。
透化法:取何首烏粉末少許,放在載玻片的中央偏右一些,滴加水合氯醛液2滴,用解剖針調(diào)和均勻,在酒精燈上用小火微微加熱透化(要使載玻片保持平穩(wěn),慢慢移動,且勿使液體沸),在加熱過程中,要隨時添加水合氯醛液,千萬勿蒸干,加熱到粉末微透明為止,帶載玻片微冷卻后再加水合氯醛溶液少許,用解剖針將粉末攪勻,加上蓋玻片即可鏡檢,透化后的粉末片與用水裝的片比較有何不同。
2、組織解離法:為了更好的觀察單個細(xì)胞,特別是石細(xì)胞、纖維、導(dǎo)管、管胞等的形狀,可將它們從組織中解離出來,成為單個的狀態(tài),辦法是用化學(xué)試劑處理,使組織各細(xì)胞間的胞間層溶解,從而使細(xì)胞分離,組織解離方法可按藥材的性質(zhì)選用不同的試劑。常用以下方法:
(1)氫氧化鉀法:藥材內(nèi)薄壁組織占大部分,木化組織少或分散存在時可選用此法。取少量材料(黨參)切成像火柴桿粗細(xì)的小條置試管中,加5%氫氧化鉀溶液2~5ml,在沸騰水浴中加熱,至用玻璃棒壓擠材料能離散為止(一般約30分鐘左右即可),傾去堿液,材料用水洗滌后,去少許,在載玻片上用解剖針挑開,用稀甘油制成臨時裝片即可觀察。
(2)硝鉻酸法:薄壁組織少、木化組織較多或集成較大的群束,要將成群的纖維和石細(xì)胞分開可用此法。將材料(關(guān)木通)放在小燒杯中,加20%硝酸與20%鉻酸的等量混合液適量浸沒材料,于室溫放置,隨時檢查至用玻璃棒壓材料能離散為止,解離時間視材料的堅硬程度和木化程度而定,一般約需30~60分鐘,必要時也可水浴加熱,以加速解離,至合乎要求為止,可洗去酸液,取材散開,制成臨時裝片觀察。
四、實驗報告
繪藿香莖橫切1/4表皮及其附屬物,并注明各部。
實驗三 根的內(nèi)部構(gòu)造
一、目的要求
(一)掌握單子葉植物根和雙子葉植物次生根的內(nèi)部構(gòu)造特征
(二)掌握單子葉植物根與雙子葉植物次生根內(nèi)部構(gòu)造的區(qū)別
(三)了解根的異形構(gòu)造特征
二、實驗材料
直立百部塊根橫切片 每人一片
苦參根橫切片 每人一片
懷牛膝根橫切片(示教) 每室一片
顯微測量尺 每人一套
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)單子葉植物根的內(nèi)部構(gòu)造——觀察直立百部塊根橫切片
取直立百部塊根橫切片,先用低倍鏡觀察整個輪廓區(qū)分各部,再換高倍鏡詳細(xì)觀察各部結(jié)構(gòu)特征。自外向內(nèi)構(gòu)造如下:
1、根被:為3~4列略呈多角形的細(xì)胞,少數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞壁上可見致密的半徑向細(xì)條紋狀增厚,根被外面表皮細(xì)胞已被壓縮。
2、外皮層:與根被相接的一層細(xì)胞,多呈五或六邊形,排列整齊,細(xì)胞角隅處略有增厚。
3、中皮層:占根的大部分,為薄壁細(xì)胞,向內(nèi)漸增大。
4、內(nèi)皮層:為皮層最內(nèi)方的一層細(xì)胞,排列緊密,細(xì)胞扁長圓或長方形,可見被染成粉紅色的凱氏帶及凱氏點。
5、中柱鞘:1~2列比內(nèi)皮層細(xì)胞稍大的薄壁細(xì)胞。
6、韌皮部和木質(zhì)部間隔排列,構(gòu)成特有的輻射型維管束。韌皮部內(nèi)側(cè)有單個的或2~3個成束的非木化纖維。木質(zhì)部有導(dǎo)管3~5個及木纖維、木薄壁細(xì)胞,偶爾在髓部外緣有少數(shù)單個或兩個并列的導(dǎo)管。
7、髓:位于中心部分,由類圓形大型薄壁細(xì)胞組成。排列疏松,其間散有單個或2~3個成束的細(xì)小纖維,在橫切片中呈類方形或多邊形,其周圍常有較小的薄壁細(xì)胞。
(二)雙子葉植物根的內(nèi)部構(gòu)造(次生構(gòu)造)——觀察苦參根的橫切片:
取苦參根橫切片,先用低倍鏡觀察內(nèi)部組織概況,然后用高倍鏡自外向內(nèi)觀察下列結(jié)構(gòu):
1、周皮:主要可見木栓組織及栓內(nèi)層。木栓組織為數(shù)列切向排列的扁長方形木栓細(xì)胞,栓內(nèi)層細(xì)胞形狀略不規(guī)則,注意其排列情況如何?在木栓組織與栓內(nèi)層之間有的部分可看到木栓形成層,細(xì)胞極扁平,且常可見細(xì)胞核。(考慮木栓形成層屬于何種組織?應(yīng)具備何種特征?)
2、次生皮層:緊接栓內(nèi)層的數(shù)列不規(guī)則橢圓形薄壁細(xì)胞,有細(xì)胞間隙細(xì)胞內(nèi)含多數(shù)淀粉粒,且可見草酸鈣方晶。
3、維管束:韌皮部細(xì)胞較小,有多數(shù)韌皮纖維束(或晶纖維束)。束中形成層較明顯,由多列小而扁的分生組織細(xì)胞組成。束間形成層不明顯。木質(zhì)部導(dǎo)管自中心向外呈放射狀排列成束,每束中均有木纖維束(或晶纖維束)。中心有少數(shù)細(xì)小導(dǎo)管。
4、射線:由木質(zhì)部直通皮層的多列薄壁細(xì)胞,內(nèi)含淀粉粒及草酸鈣方晶。
(三)雙子葉植物根的異形構(gòu)造——觀察懷牛膝根的橫切片。
于示教鏡下觀察,中心為初生木質(zhì)部,其外為次生維管束形成兩束,再向外為異型維管束排列成三圈。
四、實驗報告
根據(jù)觀察繪直立百部塊根橫切部分簡圖,并注明各部。
實驗四 莖的內(nèi)部構(gòu)造
一、目的要求:
(一) 熟悉單子葉植物地上莖的內(nèi)部構(gòu)造特征
(二) 掌握雙子葉植物草質(zhì)莖和木質(zhì)莖的內(nèi)部構(gòu)造特征
(三) 掌握莖與根內(nèi)部構(gòu)造的區(qū)別
二、實驗材料:
紫蘇莖橫切片 每人一片
木槿莖橫切片 每人一片 ’
石斛莖攢切片 每人一片
白茅根莖橫切片 每人一片
三、實驗內(nèi)容與方法:
(一)雙子葉植物草質(zhì)莖的內(nèi)部構(gòu)造——觀察紫蘇莖橫切片
于低倍鏡下觀察紫蘇莖橫切面呈方形,四角凸出呈半圓狀,四邊處略向內(nèi)凹,自外至內(nèi)組織構(gòu)造如下:
1、表皮:為一列長方形的細(xì)胞切向排列,表面有腺毛、非腺毛及腺鱗。
2、皮層:靠近表皮為1~2層厚角組織,四個角處厚角組織發(fā)達(dá),其內(nèi)為l~3層皮層薄壁細(xì)胞,內(nèi)含葉綠體。
3、維管束:四角內(nèi)側(cè)各有一大型維管束,四邊凹人部內(nèi)側(cè)各有3~5個小型維管束。韌皮部狹窄,其外側(cè)均有纖維束,連續(xù)排列成環(huán)(如取材較嫩則見不到)。形成層較明顯成環(huán)。在大型維管束中木質(zhì)部導(dǎo)管呈半徑向整齊排列。
4、髓:薄壁細(xì)胞疏松,中央常形成空腔,薄壁細(xì)胞中可見短針狀,柱狀結(jié)晶。
(二)雙子葉植物木質(zhì)莖的內(nèi)部構(gòu)造——觀察木槿莖橫切片:
首先在低倍鏡下觀察,區(qū)分出周皮、皮層、維管束及髓各部,然后自外向內(nèi)詳細(xì)觀察各部組織特征:
1、周皮:注意組成周皮的木栓層、木栓形成層及栓內(nèi)層各自細(xì)胞的特征。木栓層外側(cè)有少數(shù)石細(xì)胞。
2、皮層:極薄,細(xì)胞類圓形或不規(guī)則,有些細(xì)胞內(nèi)含草酸鈣簇晶。
3、初生韌皮部纖維成束分布于韌皮部外側(cè),纖維壁厚,木化,由高倍鏡下可見孔溝,其外有壓縮的初生韌皮部。
4、韌皮部:為初生韌皮部纖維內(nèi)側(cè)近似三角形部分,與呈漏斗狀外寬內(nèi)窄的韌皮射線相間排列。韌皮纖維呈切線向帶狀,與韌皮薄壁細(xì)胞半徑向間隔分布,在接近形成層部分可看到明顯的篩管與伴胞。
5、形成層成環(huán)。
6、木質(zhì)部發(fā)達(dá),注意其導(dǎo)管的大小排列及年輪的情況。
7、射線:韌皮射線發(fā)達(dá),多呈外寬內(nèi)窄的漏斗形,細(xì)胞內(nèi)含草酸鈣簇晶,木射線窄,多由l~2列細(xì)胞組成,且細(xì)胞多呈網(wǎng)孔狀增厚。
8、髓:薄壁細(xì)胞向中心漸大。
(三)單子葉植物地上莖的內(nèi)部構(gòu)造——觀察石斛莖橫切片
1、表皮:為一列小而扁,排列緊密的細(xì)胞,外被較厚的角質(zhì)層。
2、基本組織:為表皮以內(nèi)大型類圓形薄壁細(xì)胞。內(nèi)含淀粉粒。
3、維管束:分散于基本組織中。有限外韌型維管束。韌皮部及木質(zhì)部外側(cè)有纖維束包圍。維管束周圍的一些薄壁細(xì)胞的壁呈網(wǎng)狀增厚且木化。
(四)單子葉植物地下莖的內(nèi)部構(gòu)造一觀察白茅根莖橫切片,于低倍鏡下觀察可見。
1、表皮及下皮纖維:表皮為一列類方形細(xì)胞,有的細(xì)胞外壁稍凹入,內(nèi)含淡黃色二氧化硅小塊。下皮纖維1—4列,壁厚,木化。
2、皮層較厚由10余列薄壁細(xì)胞組成。于皮層中散有10余個小圓形葉跡維管束,其外有纖維包圍。皮層內(nèi)常形成多數(shù)裂隙。
3、內(nèi)皮層由一層內(nèi)壁極厚,外壁較薄的細(xì)胞組成。胞腔內(nèi)有與內(nèi)壁粘連的乳突狀二氧化硅無柄鐘乳體。
4、中柱:中柱鞘由1~2層厚壁細(xì)胞組成。中柱內(nèi)散列分布多數(shù)有限外韌型維管束,各維管束均由纖維組成的鞘包圍。中柱中央常呈空洞。
四、實驗報告
繪紫蘇莖橫切片1/4詳圖,并注明各部。
實驗五 葉的內(nèi)部構(gòu)造及花的組成
一、目的要求
(一)掌握一般雙子葉植物葉片組織構(gòu)造特征。
(二)熟悉花的組成部分,了解花各部的主要類型。
二、儀器用品、實驗材料
解剖鏡、解剖器、放大鏡、培養(yǎng)皿、刀片
曼陀羅葉片橫切片 每人一片
新鮮或浸制材料:何首烏葉、桃花、木槿花、泡桐花、白扁豆花、向日葵花、桔梗花
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)雙子葉植物葉片的組織構(gòu)造——觀察曼陀羅葉橫切片
取曼陀羅葉橫切片于低倍鏡下觀察,兩側(cè)長條形部分為葉片部分;中央凸出近似圓形部分為葉主脈部分。主脈凸出明顯的一面為葉的下表面(背面);另一面則為上表面(腹面)。分清以上各部后,換用高倍鏡詳細(xì)觀察各部組織特征。
1、表皮:上、下表皮均為一列扁平細(xì)胞,且均有氣孔及毛茸,注意上下表皮氣孔分布情況,在氣孔處可見相對的兩個小型細(xì)胞即保衛(wèi)細(xì)胞,其間的空隙即氣孔,氣孔內(nèi)側(cè)與氣孔下室相通。
2、葉肉組織:柵欄組織為一列柱狀細(xì)胞,排列緊密,其長徑與上表皮垂直,細(xì)胞內(nèi)含較多葉綠體。海綿組織5~7列細(xì)胞,注意細(xì)胞的形狀及排列情況與柵欄組織有何不同?與柵欄組織相接的一列海綿組織細(xì)胞中大多數(shù)含一個草酸鈣簇晶,形成結(jié)晶層。
3、葉脈:除葉片中央的主脈外,在兩側(cè)葉片的葉肉中尚可見一些橫切或縱切的小型葉脈,試考慮為何在橫切面上可看到多數(shù)不同切面的小葉脈。
詳細(xì)觀察葉主脈的結(jié)構(gòu),主脈在葉片背面形成顯著的突起。上下表皮內(nèi)方均有厚角組織細(xì)胞,維管束雙韌型呈淺槽狀,其外有薄壁細(xì)胞包圍。偶爾可見含草酸鈣砂晶的薄壁細(xì)胞。
(二)何首烏葉下表皮氣孔的觀察
取新鮮何首烏葉,撕取下表皮作成臨時裝片。
1、表皮細(xì)胞:在低倍鏡下觀察,形狀不規(guī)則,側(cè)壁呈彎曲狀,表皮細(xì)胞之間可見氣孔。
2、氣孔結(jié)構(gòu):在高倍鏡下觀察氣孔,可見兩個半月形含有葉綠體的保衛(wèi)細(xì)胞,其間圍繞的狹長縫隙即氣孔。注意保衛(wèi)細(xì)胞與周圍的表皮細(xì)胞(即副衛(wèi)細(xì)胞)間排列的方式屬于哪種類型?
(三)花的組成
取桃花一朵,放在培養(yǎng)皿中,自外向內(nèi)依次觀察下列各部。
1、花梗與花托
(1)花梗:花基部殘留極短的細(xì)枝,是花與莖或花軸相連的部分。
(2)花托:花梗頂部略膨大的部分,花的其他部分均著生其上。
2、花被:分兩部分
(1)花萼:位于花的最外輪,由萼片組成,注意萼片的形狀 數(shù)目以及是否聯(lián)合。
(2)花冠:為花萼以內(nèi),由花瓣組成,注意花瓣的連合與分離情況。
3、雄蕊群:由多個雄蕊組成,觀察雄蕊的數(shù)目及在花冠內(nèi)著生的部位,然后仔細(xì)觀察一個雄蕊,其結(jié)構(gòu)可分為兩部分。
(1)花藥:雄蕊頂端黃色、膨大的部分,每一花藥分離為兩個藥瓣。
(2)花絲:與花藥相連的絲狀部分。
4、雌蕊群:位于花的中心部分,小心地用鑷子除去部分花被及雄蕊,可看到完整的雌蕊,自下而上可分為:
(1)子房:雌蕊基部膨大的部分,內(nèi)有子房室,室內(nèi)著生胚珠,你如何能以子房判斷它是由幾個心皮形成的?
(2)花柱:自子房向上延伸的細(xì)長柱狀部分。
(3)柱頭:花柱頂端略膨大的部分。試考慮若柱頭分成二或三叉說明什么問題?觀察完花的各部結(jié)構(gòu)后,用刀片將子房橫切成兩半,注意其子房室及胚珠著生的情況。
(四)花的類型
首先考慮前面觀察的桃花屬于哪種類型的花,記錄下來,然后再取蜀葵花、泡桐花、桔;(或沙參花)、向日葵的邊花與心花,各一朵,放于培養(yǎng)皿內(nèi),加水浸泡。仔細(xì)觀察每一朵花的各部組成,記錄哪些花是完全花?哪些花是不完全花?哪種花是兩性花?哪種花是單性花?仔細(xì)觀察花被的特征,記錄哪種花是合瓣花?哪種花是離瓣花?哪些花是輻射對稱花?哪些花是兩側(cè)對稱花?觀察過程中注意不要將花損壞以便觀察各種花的雄蕊類型,子房與花被的相關(guān)位置及胎座的類型,并做好記錄。
(五) 雄蕊的類型
仍以上述各種花分別觀察雄蕊的類型
1、分生雄蕊:觀察桃花,雄蕊多數(shù),長短相近,彼此分離。
2、二強(qiáng)雄蕊:觀察泡桐花,注意有幾個雄蕊?長短如何?
3、單體雄蕊:取木槿花(或蜀葵花),小心去掉部分花瓣,觀察其雄蕊各部聯(lián)合、分離情況。花絲下部聯(lián)合,上部及花藥分離。
4、聚藥雄蕊:取向日葵頭狀花序心部管狀小花朵,仔細(xì)觀察其雄蕊,僅花藥處靠合而花絲分離。
(六) 雌蕊的類型
取桃花、白扁豆花、桔;、蘋果(或梨)花分別放入培養(yǎng)皿中,小心地用鑷子分開花被,觀察子房與花托及花被、雄蕊之間的位置關(guān)系,可見子房的位置不同。
1、子房上位:桃花、白扁豆花子房著生于扁平或略凸出的花托上,注意其與花托是否愈合;ǖ钠渌糠种谧臃肯碌幕ㄍ猩,這種花稱下位花。與周位花有何區(qū)別?
2、子房半下位(中位):以桔;ㄅc上面觀察的桃花比較。
3、子房下位:以蘋果(或梨)花與上面觀察的桔;、桃花比較。
四、實驗報告
根據(jù)花的解剖觀察,繪出桃花的外形解剖圖,并注明各部。
實驗六 果實和種子
一、 目的要求
(一) 熟悉果實的主要類型,并掌握其主要特征
(二) 熟悉雙子葉植物有胚乳種子及無胚乳種子的組成部分及各部分的形態(tài)特征
二、 儀器用品、實驗材料
解剖器、放大鏡、培養(yǎng)皿
枸杞、白扁豆果實、白菜(或蘿卜)果實、薺菜果實、蓖麻果實、牽牛果實、小茴香果實、八角茴香果實、桑椹、蓖麻種子、蠶豆種子(浸泡)
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)果實的主要類型:
1、單果:一朵花只有一個雌蕊(單雌蕊或復(fù)雌蕊)發(fā)育成果實。
肉果:主要觀察漿果。取枸杞果實一個,注意其外果皮薄,中、內(nèi)果皮無明顯界限,肉質(zhì),種子多數(shù)。
干果:主要觀察雙懸果、莢果、蒴果、長角果和短角果。
(1)莢果:觀察白扁豆果實背縫線與腹縫線的情況,注意由幾個心皮形成,內(nèi)部種子著生在什么位置。
(2)蒴果:觀察蓖麻果實及牽牛果實,從外表數(shù)一數(shù)它們是由幾心皮雌蕊形成的果實?內(nèi)部有幾室?并注意每種的開裂方式。
(3)長角果與短角果:取蘿卜的長角果與薺菜的短角果對比觀察,注意它們各由幾個心皮形成?輕輕用鑷子從一側(cè)剝?nèi)ゲ糠止ぃ梢娭醒刖咭患俑裟。注意種子在其上著生的情況。
(4)雙懸果:取一完整呈橢圓形的小茴香果實,是由兩個可由中央縱向分離開的分果組成。有解剖刀輕輕從中央將其分開(注意用力要輕,不要將中央相連處弄斷),則可看到二分果的頂端與二分叉狀的分果柄上端相連,分果柄基部與果柄頂端相連。
2、聚合果:觀察八角茴香果實,數(shù)一數(shù)它是由幾個單果聚合而成的?每個單果均為一蓇葖果,注意其開裂方式并思考這種果實是由何種類型的雌蕊形成的?
3、聚花果:觀察桑椹,由多個小果著生在一個果軸上。這種果實從來源上與聚合果有何不同?
(二)種子的類型及構(gòu)造特征:
1、有胚乳種子——觀察蓖麻種子
取蓖麻種子一粒,首先看其外形及種皮表面結(jié)構(gòu)特征。外形扁橢圓形,一面略平,另一面略凸出,種皮硬脆而光亮有花紋,種子一端有一白色海綿狀物為種阜。種阜靠近種子較平的一面與種皮相接處有一近似菱形疤痕為種臍。自種臍向上沿較平的一面中央上伸的一條略隆起的線為種脊。種脊末端略凸起的部分為合點。
種皮及外部特征看完后,剝?nèi)シN皮,內(nèi)部白色肥厚的部分是胚乳,沿種子寬面自中央將胚乳縱切開,上切面可看到胚,其中兩片白色而薄的子葉緊貼在胚乳內(nèi)側(cè),其上可見明顯的分枝狀葉脈,在子葉下端連有一短圓錐狀物,其末端即胚根,向上為胚莖及胚芽。
2、無胚乳種子——觀察蠶豆種子
取浸泡過的蠶豆種子一粒,首先觀察外部結(jié)構(gòu)特征,種子一端有黑色橫長疤痕為種臍。種臍旁有一小孔,用手輕輕擠蠶豆,有水從孔中流出,此孔即種孔。在種孔相對一側(cè)有一稍隆起的合點,自合點向下至種臍的隆起線為種脊。
觀察完外部特征后,剝?nèi)シN皮,可見兩片肥厚的子葉,一側(cè)連有胚莖,胚莖的一端連胚根,另一端連胚芽。注意比較蠶豆種子與蓖麻種子有何不同。
四、實驗報告
繪蠶豆種子外形及縱剖圖,注明各部。
實驗七 植物分類(一)
蓼科(Polygonaceae) 毛茛科(Ranunculaceae)
豆科 (Leguminosae) 傘形科 (Umbelliferae)
一、目的要求
(一)掌握蓼科、毛茛科、豆科、傘形科的主要特征,并認(rèn)識這幾科中的部分藥用植物。
(二)初步學(xué)會從形態(tài)方面鑒別藥用植物的方法。
二、儀器用品、實驗材料
解剖鏡、解剖器、放大鏡、培養(yǎng)皿
新鮮或浸制材料:紅蓼花序、黃芪花(或洋槐花)、紫荊花、合歡花序、白芷花序、柴胡花序
臘葉標(biāo)本:紅蓼、何首烏、大黃、烏頭、芍藥、白頭翁、白芷、黃芪、甘草、柴胡、合歡、苦參
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)蓼科
1、紅蓼臘葉標(biāo)本的觀察及花的解剖
紅蓼莖直立,莖節(jié)明顯;單葉互生,于葉腋處可見托葉鞘成筒狀,包圍莖,下部膜質(zhì),褐色;上部草質(zhì),綠色,花序生于葉腋或枝頂。若有果實,觀察其特征?赐昱D葉標(biāo)本后取浸制的紅蓼花,解剖觀察花的形態(tài)、特征,注意其花被是聯(lián)合的還是分離的?雄蕊的數(shù)目?雌蕊的特征?
2、蓼科其他藥用植物的觀察
取何首烏、大黃的臘葉標(biāo)本,觀察莖、葉、花、果實等方面的特征,總結(jié)出蓼科植物的主要特征。
(二)毛茛科
取烏頭、芍藥、白頭翁的臘葉標(biāo)本,觀察莖、葉、花、果實等方面的特征,總結(jié)出毛茛科植物的主要特征。
(三)豆科
1、黃芪臘葉標(biāo)本的觀察及花(或洋槐花)的解剖
黃芪葉互生,單數(shù)羽狀復(fù)葉,注意其小葉的形狀,各部特征如何?觀察花序、花冠各屬哪種類型?莢果膜質(zhì)?赐昱D葉標(biāo)本后,取一朵浸制的黃芪花,觀察花萼、花冠的形態(tài)、特征,雄蕊的數(shù)目聯(lián)合情況,雌蕊的特征。
同法解剖觀察紫荊花、合歡花與黃芪花(或洋槐花)有何不同。
2、豆科其他藥用植物的觀察
取甘草、苦參及合歡的臘葉標(biāo)本,觀察葉、花、果實等方面的特征,總結(jié)出豆科的主要特征。
(四)傘形科
1、白芷臘葉標(biāo)本的觀察及花的解剖
白芷根粗大,圓錐形,莖上有縱棱,葉互生,莖上部葉柄常擴(kuò)大呈鞘狀,注意其葉片分裂情況,屬于哪種類型?若標(biāo)本上有果實,注意其形狀、特征,這種果實應(yīng)屬于哪種類型?看完臘葉標(biāo)本后,取浸制的白芷傘形花序一個放于培養(yǎng)皿中,觀察其小傘梗的多少,排列方式,苞片的特征,然后用鑷子取下一朵小花,用放大鏡觀察花各部分的特征。
同法觀察柴胡的花序及小花,注意其與白芷有何不同?
2、傘形科其他藥用植物的觀察
取柴胡的臘葉標(biāo)本與白芷對照觀察傘形科的特征。
四、實驗報告
根據(jù)解剖觀察繪黃芪花(或洋槐花)的外形解剖圖,并注明各部。
實驗八 植物分類(二)
唇形科(Labiatae) 菊科(Compositae)
天南星科 (Araceae)百合科 (Liliaceae)
一、目的要求
掌握唇形科、菊科、天南星科、百合科的主要特征,并認(rèn)識這幾科中的部分藥用植物。
二、儀器用品、實驗材料
解剖鏡、解剖器、放大鏡、培養(yǎng)皿
新鮮或浸制材料:蒲公英頭狀花序、向日葵花序、益母草花、萱草花、
臘葉標(biāo)本:蒲公英、益母草、天南星、半夏、蒼術(shù)、菊花、丹參、黃芩、
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)唇形科
1、益母草臘葉標(biāo)本的觀察及花的解剖
以益母草為代表觀察唇形科的主要特征:莖四菱形,用放大鏡觀察莖表面,可見倒生毛茸。葉對生,注意在莖上不同部位的葉形狀有何不同?輪傘花序,觀察花序的位置、排列、小花開放的先后次序等。
自浸制的花序上取下一朵已開放的花,觀察花萼、花冠的特征。剖開花冠后注意雄蕊幾枚,長短如何?雌蕊有何特征?
2、唇形科其他藥用植物的觀察
取丹參、黃芩臘葉標(biāo)本,從莖、葉、花等各部觀察它們所具有的唇形科的特征,以及每種藥用植物的突出特征。
(二)菊科
1、蒲公英臘葉標(biāo)本的觀察及花的解剖
蒲公英葉基生,葉片倒披針形,為規(guī)則羽狀深裂。花莖常單一不分支,頂端生一頭狀花序總苞片二列,全部為舌狀花,瘦果長圓形,頂端生有白色冠毛。
取蒲公英頭狀花序一個,觀察其花托形態(tài)特征、總苞片的層數(shù)以及舌狀小花的形態(tài)特征。用鑷子取下一朵舌狀花,放入培養(yǎng)皿中觀察,花萼成為多數(shù)冠毛,花冠呈舌狀,子房下位,柱頭呈分叉狀。數(shù)一數(shù)共有幾個雄蕊?雄蕊花藥、花絲聯(lián)合情況如何?
2、向日葵花的解剖觀察
取向日葵頭狀花序,總花托呈盤狀,密生多數(shù)小花,邊緣均為舌狀花,中央均為管狀花。分別摘取舌狀花及管狀花各一朵,觀察各部分特征,并與蒲公英的舌狀花進(jìn)行比較有何異同?
3、菊科其他藥用植物的觀察
取蒼術(shù)、菊花的臘葉標(biāo)本,觀察各部特征,結(jié)合以上解剖觀察的各種頭狀花序,總結(jié)菊科的主要特征。
(三)天南星科
觀察天南星及半夏的臘葉標(biāo)本,均有生于地下的塊莖,注意兩種植物的葉有何不同?花單性,肉穗花序,天南星為雌雄異株,半夏為雌雄同株,雄花生于上部,雌花在下。果實均為漿果。
(四)百合科
1、萱草花的解剖
取萱草花一朵,于培養(yǎng)皿中觀察花被共有幾片?排成幾輪?然后從花的一側(cè)分開花被,觀察雄蕊的數(shù)目及生長位置與花被的關(guān)系,雌蕊的特征。最后縱剖子房,觀察胎座的類型。
2、百合科其他藥用植物的觀察
取知母、麥冬、玉竹的臘葉標(biāo)本,分別觀察塊根或根莖、葉、花、花序及果實的特征,總結(jié)出百合科植物的主要特征。
四、實驗報告
繪菊科植物蒲公英的舌狀花及向日葵的管狀花外形解剖圖,并注明各部。
野外實習(xí)參考資料植物標(biāo)本的采集與制做
采集一株植物的全部或一部分,經(jīng)過壓制,干燥而制做的標(biāo)本叫做臘葉標(biāo)本。臘葉標(biāo)本制做簡便,保存長久,可幫助我們識別和研究各種植物,對于中草藥的鑒定以及野生資源普查都起著很大的作用.
一、采集用具
1、植物標(biāo)本夾:是由木條、木板、竹條或粗鉛絲制成的兩塊長方形的夾板,大約長60cm,寬40cm。附一長繩及一寬帶。
2、吸水紙:用于夾放標(biāo)本,吸收其中水分。最好用薄草紙等吸水性強(qiáng)的紙。
3、采集筒:一般為白鐵皮制成,野外采集的植物來不及壓制時可暫放入筒內(nèi)保存。
4、枝剪:用于采集木本植物的枝條。
5、鏟或小鎬:用以挖掘植物。
6、放大鏡、解剖針、鑷子,解剖觀察花或其他微細(xì)部分以及壓制標(biāo)本時用。
7、廣口瓶:內(nèi)盛5%福爾馬林或FAA固定液(用福爾馬林5ml,冰醋酸5ml,70%乙醇90m1配成),用以保存花、果實等小型標(biāo)本,以做進(jìn)一步觀察或留做切片用。
8、標(biāo)本號牌:為較厚的白色硬紙片。一端系一根細(xì)線以系在標(biāo)本上。
9、野外采集記錄本及鉛筆。
二、采集時注章事項
首先要注意標(biāo)本的完整。采集草本植物標(biāo)本應(yīng)盡量完整。包括根,莖、葉、花、果實等各部分;ê凸麑嵤氰b定植物種類的重要依據(jù),但多數(shù)植物的花、果實難以同時采到,必須依生長季節(jié)分次采集才能完整。若為喬木或灌木則可采帶花、果和葉的枝條,同時做記錄并編上號碼掛上標(biāo)本號牌。雌雄同株或異株的植物,應(yīng)從枝條上分別采取雌雄性標(biāo)本,采集藥用植物標(biāo)本必須特別注意將藥用部分采下附在標(biāo)本上。如藥用樹皮,則應(yīng)采一塊樹皮,編成同號然后釘在標(biāo)本臺紙上。尤其是根類藥材,一定要采掘根部一同保存。
作為標(biāo)本的第一手資料,野外記錄是很重要的,植物標(biāo)本經(jīng)壓制后,一些生活時的狀況會有改變。如花、果變色,葉片白粉消失,氣、味變化等,而這些特征對于鑒定是很重要的,所以必須在采集時逐項記錄。另外,在采集標(biāo)本時,還要注意調(diào)查植物的土名以便使土名和中文通用名稱統(tǒng)一起來。
三、壓制標(biāo)本的方法及注意事項
1、展開壓平:野外采集的新鮮標(biāo)本,如在野外來不及壓制時,可在帶回的當(dāng)天加以整理、壓制。整理時,可對木本植物進(jìn)行修剪,使之大小略小于訂標(biāo)本的臺紙,并盡可能表現(xiàn)其自然狀態(tài)。如枝葉太密或花、果太多時,可適當(dāng)去掉一部分。草本植物較小的可整株壓入,翻轉(zhuǎn)部分葉片,使其背面朝上,以便鑒定。若遇較高大的草本植物時,可將莖反折成V形或N形,如草本植物太高大,不好折壓,可在一株上選擇形態(tài)有代表性的上、中、下三段。肉質(zhì)多汁或干后葉片易落的植物,可在壓制前在沸水中浸數(shù)分鐘,以迅速殺死細(xì)胞,使之加快干燥,防止脫葉。大型果實或塊根、鱗莖可切取縱橫切面各一薄片壓制,也可任其露于標(biāo)本夾外風(fēng)干。整理時要對照野外記錄,補(bǔ)充遺漏的記錄或補(bǔ)掛標(biāo)本號牌,經(jīng)整理的標(biāo)本即可進(jìn)行壓制,在標(biāo)本夾內(nèi)隔幾層紙壓一個標(biāo)本,然后捆緊放于干燥處。
2、干燥:新鮮標(biāo)本含多量水分,必須除去。但干燥太快,標(biāo)本易皺縮不平;干得太慢,標(biāo)本腐爛生霉,變黑及葉片脫落。所以,新壓的標(biāo)本每日必須換干紙1—2次,開始的1或2次換紙時要注意將折疊的枝、葉、花、果等小心用鑷子展開攤平。3天后可視標(biāo)本干燥的程度而隔天換一次紙,直到全干為止。換下的濕紙曬干后可繼續(xù)使用。
3、裝訂與保存:標(biāo)本完全干燥后,可進(jìn)行消毒處理與裝訂。常用的消毒法是用氯化汞液浸。方法是將1%氯化汞的95%乙醇溶液,放在長方形搪磁盤內(nèi),再將壓好的標(biāo)本浸入此液。待全體浸沒后立即取出來夾于吸水紙中,干后即可裝訂。
裝訂時標(biāo)本在臺紙上位置要安排恰當(dāng),臺紙右下角要留出貼標(biāo)鑒的位置,野外記錄可貼于紙的左上角;一份臘葉標(biāo)本從采集到裝訂,要花費很多人力和時間,因此要注意保存好,防止蟲蛀或霉,在使用中也要加以愛護(hù),保存標(biāo)本的完整性。
生藥學(xué)部分
實驗一 生藥的理化鑒定(1)…………………………………………………… (25)
實驗二 生藥的理化鑒定(2)…………………………………………………… (29)
實驗三 冬蟲夏草、茯苓、貫眾、麻黃等生藥鑒別 …………………………… (33)
實驗四 大黃、何首烏、黃連,川烏、白芍等生藥的鑒定…………………………(36)
實驗五 yin羊藿、防己、厚樸、五味子、肉桂等生藥的鑒別 …………………(39)
實驗六 延胡索、板藍(lán)根、大青葉、山楂苦杏仁等生藥的鑒別 …………………(42)
實驗七 黃芪、甘草、槐米、黃柏等生藥鑒別……………………………………(45)
實驗八 人參、三七、沉香、丁香等生藥鑒別 ……………………………………(48)
實驗九 當(dāng)歸、川芎、柴胡、白芷、小茴香、馬錢子等鑒別…………………(51)
實驗十 龍膽、薄荷、丹參、黃芩等生藥鑒別…………………………………(54)
實驗十一洋金花、地黃、金銀花、天花粉等生藥鑒別…………………………(57)
實驗十二桔梗、茵陳、紅花、蒼術(shù)、木香等生藥鑒別…………………………(60)
實驗十三麥冬、知母、砂仁、半夏、天麻等生藥鑒別…………………………(63)
實驗十四動物、礦物類生藥 ………………………………………………………(67)
實驗十五中成藥的顯微鑒定 ………………………………………………………(69)
實驗十六生藥的綜合鑒定 …………………………………………………………(71)
附錄一 顯微繪圖法 ………………………………………………………………(72)
附錄二 顯微測量法 ………………………………………………………………(75)
附錄三 組織透化法…………………………………………………………………(78)
附錄四 常用試劑及配置方法………………………………………………………(79)
附錄五 石蠟切片法…………………………………………………………………(82)
實驗一 生藥的理化鑒定(1)
一、 實驗?zāi)康?/b>
(一)掌握生藥中糖類、苷類成分與氰苷、酚苷、蒽苷的理化性質(zhì)和定性反應(yīng)并能應(yīng)用于生藥鑒定中,以確證生藥中這些成分是否存在。
(二)學(xué)會生藥理化鑒定的常用方法。(微量升華法、灰分測定法)
二、實驗材料、儀器及試劑
試管架、試管、量筒、具塞試管、燒杯、三角燒瓶、水浴鍋、吸管、濾紙、小漏斗。馬福爐、天平、坩鍋、干燥皿、Fehling試劑、α-萘酚試劑、10%的鹽酸試液、10%氫氧化鈉試液、苦味酸鈉試紙、氫氧化鉀試液、硫酸亞鐵試液、稀鹽酸試液、1%三氯化鐵、5%三氯化鐵試液、醋酸鎂甲醇溶液、濃硫酸。
三、實驗內(nèi)容與方法
1、單糖、多糖與苷類成分的鑒別 取玉竹0.5g,剪碎,置50ml三角瓶中,加蒸餾水10ml,瓶口放一小漏斗(空氣冷凝,防止水分蒸發(fā)太多),水浴溫?zé)?0分鐘,濾過藥渣加適量水,再濾過,合并濾液至10ml,備用。
(1)費林(Fehling試驗)試驗:取濾液lml于50ml燒杯中,加堿性酒石酸銅試劑(Fehling)試劑8ml(臨用時由甲液與乙液等量混和而成,置沸水浴加熱5分鐘,觀察有無磚紅色沉淀產(chǎn)生(尤其要觀察瓶壁處))。
反應(yīng)原理:
(2)α-萘酚試驗(Molish試驗):取玉竹粉末0.5~1g,加蒸餾水10ml。水浴溫?zé)?~10min,濾過,取濾液1ml于大試管中,加α-萘酚試劑2~3滴,搖勻,沿管壁,緩慢加入濃硫酸1m1,保留二層液面,觀察二液面交界處有無形成紫紅色環(huán)。
反應(yīng)原理:
2、氰苷的鑒別
(1)苦味酸鈉試驗:取苦杏仁1粒,研碎后置具塞試管中,加水?dāng)?shù)滴濕潤,管口懸掛苦味酸鈉試紙,密塞,將試管置60"℃水浴中溫?zé),觀察試紙逐步由黃變紅。
(2)普魯士藍(lán)試驗:取苦杏仁1粒,研碎后置試管中,加水?dāng)?shù)滴濕潤,立即用濾紙包扎管口,并加氫氧化鉀試液1滴使?jié)駶櫍瑢⒃嚬苤?0"C水浴溫?zé)峒s10分鐘后,于試紙上加硫酸亞鐵溶液1滴,并加稀鹽酸和5%三氯化鐵試液各1滴,濾紙即顯藍(lán)色。
3、酚苷的鑒別 取牡丹皮0.5g,加乙醇5ml,水浴溫?zé)?分鐘,取上清液2ml于試管中,滴加1%三氯化鐵試劑1滴,即呈紫紅色。
反應(yīng)原理:
ROH+(Fe(H2O)6)3+→[Fe(H2O)5(ROH)]3+→[Fe(H2O)5RO]2++H3O+(ROH示丹皮酚)
4、蒽苷的鑒別
(1)堿液反應(yīng):取大黃粉少許于小試管中,加10%氫氧化鈉試液,即呈紅色,繼續(xù)加10%鹽酸使中和,藥液變黃色,再加氫氧化鈉試液又顯紅色。
(2)Borntrager(保恩特來格)反應(yīng):取大黃粉約0.5g于試管中,加10%氫氧化鈉試液2ml,振搖后過濾,得紅色濾液,加10%鹽酸酸化后,溶液轉(zhuǎn)為黃色,加乙醚2ml,振搖后靜置分層,分取黃色的乙醚液于另一試管中,再加l0%氫氧化鈉試液1ml,振搖勻后靜置分層,則堿液層又顯紅色。
(3)醋酸鎂反應(yīng):取大黃粉末約0.2g于試管中,加乙醇3ml,水浴溫?zé)?分鐘,濾過,得濾液,加l%醋酸鎂甲醇溶液2滴,振搖后觀察,溶液漸呈橙紅色。
(4)微量升華:如圖5所示,取大黃粉末少許于金屬圈內(nèi)、小火徐徐加熱數(shù)分鐘,可見黃色升華物附著載玻片上,將玻片取下翻轉(zhuǎn)后,在顯微鏡下檢視,低溫升華時可見針狀結(jié)晶、高溫時可見羽毛狀結(jié)晶,滴加堿液后,結(jié)晶消失,并呈紅色。
5、生藥中灰分的測定
總灰分測定 取粉碎后過二號篩的三七粗粉約3g,置熾灼至恒重的坩堝中,精密稱定(精確至0.01g),放馬福爐中緩緩熾熱,至完全灰化時,逐漸升溫到500~600℃,完全灰化至恒重。根據(jù)殘渣重量,計算三七中含灰分的百分?jǐn)?shù)。
酸不溶性灰分的測定 取上面所得灰分,加入稀鹽酸約10ml,用表面皿覆蓋,水浴上加熱10分鐘,表面皿用5ml熱水沖洗,洗液入坩堝,用無灰濾紙過濾,坩堝內(nèi)殘渣用水洗于濾紙上,并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。將濾渣連同濾紙移至同一坩堝內(nèi),干燥并熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量,計算三七中含酸不溶性灰分的百分?jǐn)?shù)。
四、實驗報告
1.記錄各鑒別反應(yīng)的步驟與結(jié)果,并說明反應(yīng)原理(可用化學(xué)反應(yīng)式表示)。
2.計算出三七的總灰分、酸不溶性灰分的百分含量。
五、思考題
1.怎樣鑒別某生藥含單糖、多糖或苷類成分?
2.灰分測定的原理是什么?
3.總灰分和酸不溶性灰分與生藥品質(zhì)的關(guān)系是什么,舉例說明。
實驗二 生藥的理化鑒定(2)
一、實驗?zāi)康?/b>
(一)掌握生藥中黃酮苷類、皂苷類、強(qiáng)心苷類、香豆精苷類的理化性質(zhì)和定性反應(yīng),并能應(yīng)用于生藥鑒定中。
(二)掌握生藥中生物堿類、鞣質(zhì)類、氨基酸與蛋白質(zhì)類的理化性質(zhì)和定性鑒別反應(yīng)。
(三)學(xué)會應(yīng)用熒光分析法、薄層層析法,水份測定法鑒別生藥。
二、實驗材料、儀器及試劑
槐米、桔梗、穿山龍、地高辛片(tabellae digoxin)、白芷、粉防己、硫酸阿托品注射液、五倍子、檳榔、天花粉。
試管、試管架、量筒、燒杯、水浴鍋、50ml三角燒瓶、濾紙、蒸發(fā)皿、紫外分析燈、硅膠板、層析瓶。
乙醇、1%鹽酸、碘化鉍鉀試劑、碘化鉀碘試劑、碘化汞鉀試劑、硅鎢酸、明膠氯化鈉溶液、三氯化鐵試劑、飽和溴水、醋酸鉛試劑、飽和石灰水、茚三酮試劑、10%氫氧化鈉溶液、0.5%硫酸銅試劑、鎂粉、1%三氯化鋁甲醇液、10%鹽酸試液、0.9%氯化鈉溶渡,2%紅細(xì)胞懸浮液、醋酐、濃硫酸、冰醋酸、三氯化鐵-冰醋酸試劑、K-K試劑、3,5-二硝基苯甲酸乙醇試液、乙醚、7%鹽酸羥胺甲醇溶液、20%氫氧化鉀甲醇溶液、稀鹽酸、1%三氯化鐵乙醇溶液、甲苯、醋酸乙酯、甲酸。
槐花乙醇提取液、遠(yuǎn)志生理鹽水提取液、夾竹桃醇提取液、粉防己酸性乙醇液;核桃楸皮、秦皮和秦皮甲素乙醇提取液。
三、實驗內(nèi)容與方法
1、黃酮苷的鑒別 取槐米粗粉約0.5g,加乙醇10ml,水浴溫?zé)?分鐘,濾過,得濾液。
(1)鹽酸-鎂粉還原反應(yīng):取上述濾液2ml于大試管中,加鎂粉少許振搖,滴加濃鹽酸數(shù)滴,觀察到產(chǎn)生許多泡沫,同時溶液漸變櫻紅色。
(2)三氯化鋁反應(yīng):取上述濾液2ml于試管中,加1%三氯化鋁甲醇溶液1ml,振搖,可見溶液漸變鮮黃色。
2、皂苷的鑒別 取桔梗與穿山龍粗粉各1g,分別置50ml三角燒瓶中,加水l0ml,煮沸2分鐘,濾過,濾液加水至10ml,備用。
(1)泡沫試驗:分別取上述濾液各2ml,置2個試管中,密塞或以手指壓住管口,強(qiáng)烈振搖數(shù)分鐘,觀察是否產(chǎn)生大量泡沫,放置10分鐘后,再記錄泡沫的高度。
另取桔梗與穿山龍濾液各4ml,分置4支試管中,每支2ml濾液,其中一支桔梗與一支穿山龍濾液中分別加10%鹽酸試液調(diào)節(jié)pH為l,另一支桔梗與另一支穿山龍濾液中分別加10%氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH為13,將酸堿兩管濾液同時強(qiáng)烈振搖數(shù)分鐘,觀察泡沫高度?梢娊酃H芤旱乃釅A兩管泡沫高度相同。而穿山龍堿液管的泡沫比酸液管高。
(2)溶血試驗:取遠(yuǎn)志生理鹽水提取液2ml置一試管中,另取一試管加0.9%NaCl溶液2ml,于二支試管中分別加2%紅細(xì)胞球懸浮液1ml,搖勻后放置,注意觀察哪支試管溶液變清。
3、強(qiáng)心苷的鑒別 分別取新鮮夾竹桃葉1片剪碎與地高辛3片,各置50ml三角燒瓶中,加70%乙醇10ml,用空氣冷凝裝置水浴加熱5分鐘,濾過,得濾液,并加水至10ml,備用。
(1)α-去氧糖反應(yīng)(Keller-Kiliani反應(yīng)):取夾竹桃濾液2ml于蒸發(fā)皿中.水浴蒸干,加三氯化鐵-冰醋酸試液lml使殘渣溶解,并轉(zhuǎn)入小試管中,沿管壁緩緩滴加濃硫酸1ml,觀察兩液層交界處有無棕色環(huán)產(chǎn)生,上層醋酸液呈何顏色?另取地高辛濾液2ml,同樣操作,觀察結(jié)果。
(2)3,5-二硝基苯甲酸反應(yīng)(Kadde反應(yīng)),取濾液1ml于試管中,濾液中加新配制的3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液1ml,觀察溶液是否變成紫色。
反應(yīng)原理(C17上不飽和內(nèi)酯環(huán)反應(yīng))
4、生物堿的鑒別 取粉防己粗粉0.5g,置50ml三角燒瓶中,加乙醇15ml、用空氣冷凝裝置、水浴回流10分鐘,濾過。濾液置蒸發(fā)皿中,于水浴蒸干,殘渣加l%鹽酸5ml使溶,濾過,濾液分置4支小試管中,每試管1ml,分別滴加下表中生物堿沉淀劑各2滴,觀察沉淀的顏色與數(shù)量(以+++、++、+表示)。
同時取4支去硫酸阿托品注射液,啟封后按下表滴加生物堿沉淀劑,并記錄反應(yīng)結(jié)果。
碘化鉍鉀 | 碘化鉀碘 | 碘化汞鉀 | 硅鎢酸 | |
粉防己提取液 | ||||
硫酸阿托品注射液 |
5、熒光分析法:取秦皮,核桃核桃楸皮粉末各1g,放入三角燒瓶中,分別加入乙醇l0ml,水浴回流提取l0分鐘,放冷過濾。濾液作供試品。另取秦皮甲素(七葉樹苷),加乙醇制成每1ml含5mg的標(biāo)準(zhǔn)液做對照品。將三者分別點于濾紙上,置365nm紫外分析燈下觀察熒光反應(yīng)。
6、薄層層析法:(兩人做一份)
樣品、標(biāo)準(zhǔn)品的制備:同熒光分析法。
制板:取硅膠G2克加入0.5%羧甲基纖維素鈉的水溶液6ml,攪拌均勻,倒在6cm×22cm干凈的玻璃板上鋪勻,放置水平位置,自然干燥,干后于105℃活化一小時,活化后置干燥器中備用。
展開劑:甲苯:醋酸乙酯:甲酸:乙醇=3:4:l:2
點樣:距玻璃板下端一厘米處,分別點上秦皮、核桃楸皮的提取液及秦皮甲素的標(biāo)準(zhǔn)液。
展開方式:傾斜上行法。展距約15cm。
晾干后,置365nm紫外分析燈下觀察熒光斑點并描繪出層析圖譜,計算秦皮甲素的Rf值。
7、水分測定法(甲苯法)
當(dāng)歸約50g。水分測定裝置一套,如圖6.
【實驗內(nèi)容、方法及步驟】
1、甲苯的制備 取甲苯約250m1,加少量蒸餾水振搖,放置后棄水層.再蒸餾甲苯后備
用。
2、測定 取經(jīng)粉碎的當(dāng)歸粗顆粒約20g,精密稱定(準(zhǔn)確至0.01g),置A瓶中,加甲苯約20ml,如圖連接,再從冷凝管頂部加甲苯充滿B的狹窄部分,將A置可調(diào)溫電熱套中加熱至苯沸騰,調(diào)節(jié)溫度使2滴/秒,至B管的水量不再增加,將冷凝管內(nèi)部用甲苯?jīng)_洗,再用飽蘸甲苯的長刷把管壁上的甲苯推下,繼續(xù)蒸餾5分鐘,放冷至室溫,待水分與甲苯完全分離,檢讀水量,并換算成當(dāng)歸中含有水分的百分?jǐn)?shù)。
生藥中的水分含量%=【水分量(ml)÷樣品量(g)】×100%
四、實驗報告
1、記錄有關(guān)鑒別反應(yīng)、化學(xué)定性、熒光分析與微量升華的實驗結(jié)果。
2、繪出秦皮、核桃楸皮的薄層分析圖譜并計算出秦皮甲素的Rf值。
3、計算出當(dāng)歸的水分含量。
五、思考題
1、某生藥的乙醇提取液與鹽酸-鎂粉反應(yīng)不顯紅色,則能否否定其存在黃酮類成分?
2、試述K-K反應(yīng)的原理。
3、生藥中含水量與生藥品質(zhì)有何關(guān)系?
實驗三 冬蟲夏草、茯苓、貫眾、麻黃等生藥鑒別
一、目的要求
掌握冬蟲夏草、茯苓、豬苓、貫眾、麻黃的性狀鑒別、顯微鑒定特征及理化鑒別方法。
二、儀器、用品、藥品
白瓷板、小勺、解剖針、酒精燈、試管、吸水紙、鑷子、載玻片。水合氯醛、蒸餾水、5%氫氧化鉀、20%氫氧化鈉、碘—碘化鉀試液、碘試液、碘化鉍鉀,碘化汞鉀、2%麻黃堿酸性水溶液,2%硫酸銅試劑、l0%氫氧化鈉、乙醚。
冬蟲夏草、茯苓個、豬苓個、茯苓皮、茯苓塊、茯神、豬苓片、貫眾個、貫眾飲片、麻黃。
草麻黃(雌、雄株)臘葉標(biāo)本。
冬蟲夏草子座橫切片、綿馬貫眾、莢果蕨貫眾、草麻黃莖橫切片。
茯苓、豬苓粉末、草麻黃粉末。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一) 性狀鑒定
1、茯苓poria和豬苓polyporus
觀察并比較茯苓、豬苓二者在外形,顏色、表面特征、斷面顏色及質(zhì)地等方面有何不同?再觀察茯苓皮、赤茯苓、茯神和豬苓飲片各有何特征,如何區(qū)分?
2、冬蟲夏草Cordyceps注意冬蟲夏草的蟲體似蠶,具20~30條環(huán)節(jié),腹面有足8對,子座棕色,長圓柱形,頂端稍膨大,其內(nèi)密生子囊殼(子實體)。
3、觀察多種貫眾,注意形狀、大小和葉柄斷面特征。
4、麻黃Herba Ephedrace:觀察草麻黃的藥材,并取草麻黃臘葉標(biāo)本觀察,注意其莖節(jié)、葉片等有何特征。再分別觀察雌株與雄株,注意花序的著生位置與特征等。
注意與中麻黃及木賊麻黃的區(qū)別。
草麻黃Ephedra Sinica:少分枝,節(jié)上鱗片2片。裂片呈銳三角形,頂端反卷,基部約1/2合生成筒狀。
木賊麻黃E.equlsetina:小枝多分枝,節(jié)上鱗片2,裂片呈鈍三角形,多不反卷,基部約2/3合成鞘狀。
中麻黃E.intermedia: 小枝多分枝,節(jié)上鱗片3,裂片三角狀圓形,微反曲,基部約1/3合成或不合生。
(二)顯微鑒定
1、取茯苓粉末,用水或5%氫氧化鉀裝片,鏡檢可見:
茯苓:多為無色不規(guī)則的顆粒狀團(tuán)塊或末端圓鈍的分枝狀團(tuán)塊,菌絲細(xì)長,多無色,可見少數(shù)棕色菌絲,無草酸鈣結(jié)晶。
2、冬蟲夏草子座橫切面:子囊殼近表生,基部陷于子座內(nèi),幾列?內(nèi)有多數(shù)細(xì)長的子囊,注意壁的厚度、孔口;子囊孢子2~4個,線形,具有多數(shù)橫隔。
3、取綿馬貫眾的葉柄橫切片觀察:注意表皮、下皮層、內(nèi)皮層及束鞘細(xì)胞的特征。維管束的類型、數(shù)目及排列方式。細(xì)胞間隙大,有的間隙有單細(xì)胞間隙腺毛,呈球形或棒狀,含棕色分泌物。注意:莢果蕨貫眾葉柄橫切有何不同。
4、麻黃:
①取草麻黃莖橫切片,置顯微鏡下觀察可見,切面呈圓形或橢圓形,具多數(shù)棱脊,呈波狀凹凸。
表皮:外被厚的角質(zhì)層,細(xì)胞外壁增厚,壁上有細(xì)小草酸鈣砂晶.兩棱線間有內(nèi)陷氣孔,保衛(wèi)細(xì)胞切面呈三角形,內(nèi)外壁均增厚木化。
皮層:外側(cè)2~3列細(xì)胞徑向延長,似柵狀,每一棱脊的表皮內(nèi)側(cè)有非木化的下皮纖維束。薄壁細(xì)胞中含草酸鈣砂晶與方晶,纖維束散在。
維管束:韌皮部外側(cè)具新月形纖維束,形成層幾成環(huán),木質(zhì)部三角形,木化,多少連成環(huán),偶見麻黃式穿孔板。
髓:薄壁細(xì)胞中含紅棕色物質(zhì),偶見環(huán)髓纖維。
②取麻黃粉末少許,放在載玻片的中央偏右一些,滴加水合氯醛溶液2滴,用解剖針調(diào)和均勻,在酒精燈上以小火微微加熱透化(要使載玻片保持平穩(wěn),慢慢移動,且勿使液體沸),在加熱過程中,要隨時添加水合氯醛溶液,千萬勿蒸干,加熱到粉末微透明為止,待載玻片冷卻后再滴加水合氯醛溶液少許,用解剖針將粉末攪勻,加上蓋玻片,即可鏡檢,可見:
表皮碎片:黃棕色,表皮細(xì)胞表面觀長方形,壁上布滿草酸鈣砂晶,有的可見氣孔。
氣孔:多位于表面碎片上,表面觀內(nèi)陷,長圓形,保衛(wèi)細(xì)胞多單個,似電話筒狀。
皮層纖維:黃色,成束或單個散在,壁極厚,壁上布滿砂晶(嵌晶纖維)。
導(dǎo)管:多成束,多為螺紋與孔紋導(dǎo)管,偶見麻黃式穿孔板(導(dǎo)管分子橫壁傾斜,有數(shù)個圓形的穿孔排成1~3列)。
色素塊:紅棕色,散在,形狀不規(guī)則。
(三)理化鑒定
1、分別取茯苓、豬苓粉末少量,置白瓷板的凹窩內(nèi),各加入碘化鉀碘l~2滴,放置片刻后,茯苓呈深紅色,豬苓呈棕褐色(檢查多糖);取茯苓粉末約0.1g于試管中,加水5ml,煮沸,加碘試液3滴,溶液顯黃色,應(yīng)不顯藍(lán)色或紫紅色(檢查淀粉及糊精);分別取茯苓,豬苓粉末少量,置白瓷板凹窩內(nèi),各加入適量20%氫氧化鈉溶液茯苓呈粘膠狀,豬苓不呈粘膠狀(與茯苓區(qū)別)。
2、麻黃的沉淀反應(yīng):取2%麻黃堿水溶液,在白瓷液的兩個凹窩內(nèi)各滴l~2滴,再分別加入碘化鉍鉀和碘化汞鉀試劑l~2滴,前者產(chǎn)生桔黃色沉淀,后者不產(chǎn)生沉淀。
3、麻黃的雙縮脲反應(yīng):取2%麻黃堿酸性水溶液2ml于試管中,加入2%硫酸銅試劑數(shù)滴,再加入l0%氫氧化鈉至微過量(約5滴),呈紫紅色,然后加入等量乙醚,輕輕振搖,放置數(shù)分鐘后,醚層顯紫色,水層呈藍(lán)色。
四、實驗報告:
(一)繪草麻黃粉末特征圖,茯苓粉末特征圖。
(二)記錄草麻黃的理醫(yī)學(xué)全在線化鑒別結(jié)果。
(三)記錄茯苓理化鑒別的實驗結(jié)果。
五、思考題:
(一)麻黃活性成分是什么?橫切片和粉末有哪些重要鑒別特征?
(二)綿馬貫眾的藥材性狀和顯微特征有哪些?
(三)茯苓主要含有何種成分,有何藥理作用?
(四)茯苓與豬苓主要區(qū)別點是什么?
(五)冬蟲夏草的入藥部位,鑒別點是什么?何謂真菌類植物?常用真菌類生藥有哪些?
實驗四 大黃、何首烏、黃連、川烏、白芍等生藥的鑒定
一、實驗?zāi)康?/b>
1、掌握大黃、何首烏、黃連、川烏、白芍實驗觀察的各項內(nèi)容。
2、了解牛膝、牡丹皮等生藥的性狀鑒別特征。
二、實驗材料,儀器及試劑
1、藥材及飲片:大黃、何首烏、黃連(味連、雅連、云連)、川烏、附子(黑附片、白附片)、白芍(赤芍)、虎杖、牛膝、川牛膝、牡丹皮、升麻、威靈仙、白頭翁。
2、藥材橫切片:大黃根莖、何首烏、味連、附子。
3、藥材粉末:大黃、何首烏、黃連。
4、儀器試劑:試管、試管夾、酒精燈,微量升華器、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、紗布、紫外分析燈。10%NaoH、10%HCI、氨水、乙醚、30%硝酸。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)性狀鑒定:
1、大黃Raidx Rhlzoma Rheiz:觀察大黃生藥性狀,判斷其為根還是根莖。注意形狀、顏色、紋理、質(zhì)地。髓部有無星點?其形狀,大小和分布如何?嗅之有特殊香氣,味苦,嚼之粘牙,有砂粒感。
2、何首烏:Radix Polygoni Multdlori:注意其外部顏色,斷面黃棕色或淡紅棕色,粉性。中央有較大的木心。皮部可見“云錦花紋”(異型維管束)。
3、黃連Rhizoma Coptidls:味連呈簇狀分枝,形如倒雞爪,表面有棕褐色側(cè)根,節(jié)密生,結(jié)節(jié)狀隆起。上具褐色鱗片。部分節(jié)間平滑(習(xí)稱過橋),斷面皮部和髓部暗棕色,木部鮮黃色,味極苦。比較雅連、云連與味連的不同點。
4、烏頭與附子Radix Aconiti et Radix AconitiLateralis Preparata:烏頭多為母根,呈瘦長的倒圓錐形,上具殘莖,表面皺縮不平,散生小瘤狀側(cè)根或摘除子根的痕跡。斷面灰白色、粉性,味麻。
鹽附子:為子根,圓錐形,飽滿,表面附鹽霜。頂端具芽痕,周圍有瘤狀突起的支根(釘角),側(cè)面具與母根摘離痕跡。斷面灰棕色,中間略淺,可見多角形的形成層環(huán)紋、味咸而麻舌。
白附片:縱切片,黃白色,半透明。
黑附片:為縱切片,呈黑棕色,角質(zhì),近邊緣可見稍突起的木質(zhì)部。
5、白芍與赤芍:Radix Paeonlae Alba and RadixPaeoniae Rubra。白芍:根呈圓柱形,表面何色?質(zhì)堅實,角質(zhì)樣,切斷面何色?木部具放射狀紋理。味微苦酸。赤芍:根表面暗棕色至紫棕色,有橫向突起的皮孔,外皮易剝落,質(zhì)地如何?斷面和白芍有何不同?味微苦酸澀。
6、結(jié)合講義,觀察虎杖、懷牛膝、川牛膝、牡丹皮、升麻、威靈仙、白頭翁的性狀鑒別特征。
(二)顯微鑒別
1、大黃:取大黃根莖橫切片,自外向內(nèi)依次觀察:木栓層和皮層大多已除去,偶有部分殘余,正常維管束為外韌型,形成層細(xì)胞扁平,排列成環(huán),外側(cè)為韌皮部、韌皮射線較平直,內(nèi)含棕色物質(zhì);內(nèi)側(cè)為木質(zhì)部,木射線內(nèi)也含棕色物質(zhì),導(dǎo)管稀疏排列。
髓:大,由大型薄壁細(xì)胞組成,異型維管束分布在髓內(nèi);薄壁細(xì)胞內(nèi)含草酸鈣簇晶和眾多淀粉粒。
每個異型維管束自外向內(nèi)有以下構(gòu)造。
木質(zhì)部:位于形成層外側(cè),導(dǎo)管徑向排列,稀疏。
形成層:環(huán)狀,由數(shù)列扁平細(xì)胞組成。
韌皮部:位于形成層內(nèi)側(cè),有時可見大型粘液腔。
射線:由1至數(shù)列薄壁細(xì)胞組成,自韌皮部向外星芒狀射出,細(xì)胞內(nèi)含深棕色物質(zhì)。
2、取何首烏橫切片,置顯微鏡下觀察:
木栓層:為多列整齊扁平的木栓細(xì)胞,充滿紅棕色物質(zhì)。
皮層:較寬,由何種細(xì)胞組成?皮層內(nèi)散生的異型維管束為近圓形的復(fù)合維管束,偶有單個維管束,均為外韌型。
韌皮部:窄小。
形成層:呈環(huán)狀。
木質(zhì)部:導(dǎo)管較少,周圍有管胞及木纖維環(huán)繞,中心可見初生木質(zhì)郡,薄壁細(xì)胞內(nèi)可見淀粉粒和草酸鈣簇晶,有些薄壁細(xì)胞中充滿紅棕色物質(zhì)。
3、取黃連(味連)根莖橫切片,置顯微鏡下觀察可見。
木栓層:為數(shù)列扁平的木栓細(xì)胞,有的其間散有石細(xì)胞,木栓層外側(cè)常有殘留的表皮層和鱗葉維管束。
皮層:寬廣。其間散有單個或成群的石細(xì)胞,可見橫走的根跡維管束。
韌皮纖維:位于韌皮部外惻,成束,外方常伴有少數(shù)石細(xì)胞。
維管束;外韌型,成斷續(xù)的環(huán)狀排列,束間射線寬廣;束間形成層不明顯。木質(zhì)部細(xì)胞均木化。
髓:由薄壁細(xì)胞組成。雅連可見單個或成群的石細(xì)胞。
取黃連粉末做成臨時裝片,鏡檢可見。
石細(xì)胞:多見。淡黃棕色,類多角形.紋孔明顯。
木纖維:多成束。黃色、壁厚。
韌皮纖維:成束。黃色、壁厚。
另外可見木栓細(xì)胞(表面觀);鱗葉細(xì)胞(細(xì)胞長方形,壁彎曲);導(dǎo)管碎片等。
4、取附子根橫切片,置顯微境下觀察可見:
后生皮層:位于最外方,為數(shù)列棕色木栓化細(xì)胞,多破裂,皮層細(xì)胞間散在石細(xì)胞,單個或3~5個成群。
內(nèi)皮層:明顯。為一列排列整齊的扁平細(xì)胞,換高倍鏡觀察可見凱氏點。
韌皮部:寬廣,小型篩管群徑向散列,細(xì)胞內(nèi)無淀粉粒。
形成層:呈不規(guī)則多角形。
本質(zhì)部:導(dǎo)管多呈“V”字形排列,有時可見初生木質(zhì)部。
髓:明顯。
薄壁細(xì)胞中充滿淀粉粒。
(三)理化鑒別
1、微量升華:取何首烏粉末少許,微量升華后,在顯微鏡下可見何種類型結(jié)晶?加堿液有無顏色變化?
2、Borntrager反應(yīng):取大黃粉末0.5克,置試管中,加10%氫氧化鈉5毫升,微振搖,觀察顏色變化。取上清夜2毫升加鹽酸至溶液為黃色;再加等量乙醚,輕輕振搖,放置片刻。醚層應(yīng)顯黃色。分取醚層,加氨試液,振搖,氨液層應(yīng)顯紅色,醚層變?yōu)楹紊?上述顏色變化的原理是什么?/p>
3、黃連的定性反應(yīng)(示教)
取黃連粉末少許于載玻片上,加30%硝酸1-2滴,放置5-10分鐘后鏡檢,可見針簇狀的硝酸小檗堿結(jié)晶。為何產(chǎn)生此反應(yīng)?
又取黃連飲片,置紫外燈下觀察,顯金黃色熒光,木質(zhì)部尤為明顯。
四、實驗報告
1、繪黃連根莖橫切面簡圖。
2、記述何首烏、大黃、黃連理化鑒定結(jié)果。
五、思考題
1.附子根的組織構(gòu)造與正常雙子葉植物次生根的構(gòu)造有何不同?
2.味連性狀,顯微結(jié)構(gòu)上有哪些鑒別特征?它所含的主要成分是什么?如何鑒別?
3.大黃藥材斷面有哪些突出特征?橫切面髓部常見什么樣的結(jié)構(gòu)?
實驗五 yin羊藿、防己、厚樸、五味子、肉桂等生藥的鑒別
一、實驗?zāi)康?/b>
1.掌握yin羊藿、防己、厚樸、五味子、肉桂等藥材的實驗觀察各項內(nèi)容
二、實驗材料、儀器及試劑
1.藥材及飲片:yin羊藿、防己(廣防己、木防己)、厚樸、五味子、肉桂(桂枝)、北豆根、辛夷、烏藥
2.藥材橫切片:yin羊藿、五味子、肉桂
3.藥材粉末:肉桂、防己
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)性狀鑒別
1.yin羊藿:Herba Epimedii 莖細(xì)長平滑,黃綠或棕黃色,葉片卵圓形,中間片較兩側(cè)葉片大,先端尖,葉基部深心形,兩側(cè)小葉基部偏斜,邊緣有細(xì)毛狀鋸齒,上表面綠色或黃綠色,無毛,下表面灰綠色,有稀疏毛茸,葉片近革質(zhì)而脆,氣弱,味極苦。
2.防己(粉防己):RadixStephaniae Tetrandrae 根在形狀上有何特征?表面何色?具明顯橫向突起的皮孔?v剖面黃白色,有維管束條紋。質(zhì)堅重,斷面平坦,灰白色、粉性。另取廣防己生藥,比較兩者的異同點。
3.厚樸:Cortex Magnoliae 觀察厚樸生藥(包括干皮、枝皮與根皮)的性狀特征,注意其卷曲形式,外表面與內(nèi)表面色澤、斷面特征,質(zhì)地與氣味。
4.五味子:Fructus Schisandrae 北五味子果實呈皺縮的不規(guī)則形,表面紫紅色或暗紅色,顯油潤,果肉柔軟,內(nèi)含種子1—2粒;種子腎形,表面黃棕色,具光澤,種皮硬脆,種仁淡黃色,果肉味酸甜,種子破碎微有香氣,味微咸而辛。
南五味子:取南五味子與北五味子生藥進(jìn)行比較,注意兩者的異同點。
5.肉桂:Cortex Cinnamomi 取企邊桂和油桂筒觀察:注意兩者的外表面顏色,特征,內(nèi)表面顏色,劃痕,折斷面特征,氣味等方面的異同點。注意板桂的形狀。
6.參照講義,觀察北豆根、辛夷、烏藥的性狀特征。
(二)顯微鑒別
1.yin羊藿:取yin羊藿葉橫切片,置顯微鏡下觀察可見
上表皮:1列細(xì)胞近方形,外具角質(zhì)層。
下表皮:l列細(xì)胞近方形,有氣孔,有時可見殘留非腺毛。
葉肉:柵欄組織2—3列細(xì)胞,短小,排列不整齊,有的細(xì)胞中含深色物;海綿組織細(xì)胞排列疏松,支脈維管束明顯,周圍異細(xì)胞中含草酸鈣棱晶或柱晶。
主脈:薄壁細(xì)胞木化,維管束3個,外韌型;木質(zhì)部具導(dǎo)管與纖維。
2.厚樸干皮橫切面鏡檢可見
木栓層:由多列細(xì)胞組成,栓內(nèi)層為2~4列石細(xì)胞。
皮層:較寬厚,散有多數(shù)石細(xì)胞群,石細(xì)胞多呈分枝狀,靠內(nèi)層有切向延長的橢圓形油細(xì)胞散在,壁稍厚。
韌皮部:占大部分,射線寬1~3列細(xì)胞,韌皮纖維眾多,壁極厚,油細(xì)胞散在。
3.取五味子橫切片觀察
(1)果皮:外果皮 為1列長方形表面細(xì)胞、壁稍厚、外被角質(zhì)層、間有油細(xì)胞。
中果皮 10余列薄壁細(xì)胞,其間散有小形外韌型維管束。
內(nèi)果皮 細(xì)胞1列,方形,較小,排列緊密。
(2)種皮:最外層1列柵狀石細(xì)胞,其下為3~4列類圓型石細(xì)胞,較大;石細(xì)胞層內(nèi)側(cè)為數(shù)列薄壁細(xì)胞,種脊部位有維管束;往里為油細(xì)胞層,由l列長方形油細(xì)胞組成,含有棕黃色揮發(fā)油,再往里為3~5列小形細(xì)胞,最里面為內(nèi)種皮,細(xì)胞壁增厚。
(3)胚乳:細(xì)胞多角形,細(xì)胞壁較厚,細(xì)胞內(nèi)含脂肪油滴及糊粉粒。
取五味子粉末做成臨時裝片鏡檢可見:
①種皮外層石細(xì)胞:表面觀多角形或長多角形,壁厚孔溝極細(xì)密。
②種皮內(nèi)層石細(xì)胞:呈類多角形或不規(guī)則形,紋孔較大而密。
③外果皮細(xì)胞:表面觀類多角形,垂周壁連珠狀增厚,角質(zhì)線紋明顯;油細(xì)胞散在于表皮中,類圓型,內(nèi)含揮發(fā)油。尚可見中果皮薄壁細(xì)胞、纖維、淀粉粒、內(nèi)胚乳細(xì)胞等。
4.取肉桂橫切片觀察
木栓層:木栓細(xì)胞數(shù)列,最內(nèi)層木栓細(xì)胞外壁增厚,木化。
皮層:散有石細(xì)胞、油細(xì)胞及粘液細(xì)胞。
中柱鞘:有石細(xì)胞群,排列成環(huán),外側(cè)伴有纖維束。
韌皮部:較厚?梢姾癖诶w維和油細(xì)胞,射線l~2列,含細(xì)小草酸鈣針晶,薄壁細(xì)胞中含有淀粉粒。
取肉桂粉末做成臨時裝片,鏡檢可見:
①纖維:大多單個散在,長梭形,壁極厚,木化,紋孔及孔溝不明顯。
②石細(xì)胞:較多,類方形或類圓型,壁厚,有的一面菲薄。
③油細(xì)胞:類圓型或長圓形,有時尚會有黃色揮發(fā)油滴。
④草酸鈣針晶:眾多,細(xì)小散在或成束,常存在于射線細(xì)胞中。
⑤木栓細(xì)胞:表面觀呈多角形,木化,常含棕色物質(zhì)。
四、實驗報告
繪肉桂粉末特征圖。
五、思考題
1.防己的藥材性狀有哪些主要特征?其所含的主要成分是什么?如何鑒別?
2.厚樸有哪些規(guī)格,各有何特征?
3.南五味子與北五味子有何異同點?
4.肉桂的商品規(guī)格有哪些,藥材性狀、顯微方面有哪些鑒別特征?
實驗六 延胡索、板藍(lán)根、大青葉、山楂、苦杏仁等生藥的鑒別
一、實驗?zāi)康?/b>
1、掌握延胡索、板藍(lán)根、大青葉、山楂、苦杏仁實驗觀察的各項內(nèi)容
二、實驗材料、儀器及試劑
1、藥材及飲片:延胡索、板藍(lán)根、大青葉(蓼蘭葉、菘蘭葉)、山楂(野山楂)、苦杏仁、浸泡苦杏仁(甜杏仁)、青黛、杜仲、枇杷葉、木瓜
2、藥材橫切片:延胡索、板藍(lán)根、苦杏仁
3、透化標(biāo)本:蓼蘭葉
4、臘葉標(biāo)本:蓼蘭、菘蘭
5、藥材粉末:延胡索、蓼蘭葉
6、儀器試劑:研缽、酒精燈、具塞試管、試管夾、苦味酸鈉試紙、稀鹽酸、0.5N硫酸、l%鐵氰化鉀、1%三氯化鐵、重鉻酸鉀溶液。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)性狀鑒別:
1、延胡索:Rhizoma Corydalis 塊莖呈不規(guī)則扁球形,有的呈倒圓錐形。表面灰黃色或灰棕色,有不規(guī)則網(wǎng)狀細(xì)皺紋,上端有略凹陷的莖痕,底部中央略凹呈臍狀,有數(shù)個圓錐狀小凸起(根痕)。質(zhì)堅硬,斷面棕黃色角質(zhì)樣,有蠟樣光澤,味苦。
2、板藍(lán)根:Radix Isatidis 圓柱形、淡棕黃色,表面有橫長皮孔樣突起,有支根痕。根頭部膨大,頂端有盤狀凹陷的莖基。周圍有輪狀排列的葉柄殘基和密集的疣狀突起。質(zhì)堅實,斷面粉性,味微甜而后苦澀。
3、大青葉:Folium Isatidis 結(jié)合原植物標(biāo)本觀察菘藍(lán)與蓼藍(lán)葉,注意二者在顏色、葉片形狀、葉緣、葉基、托葉及質(zhì)地、氣味等方面的不同點。
4、山楂:Fructus Crataegi 類球形,深紅色,有光澤,表面有細(xì)小白色斑點。頂有凹窩,邊緣有宿萼,基部有細(xì)果柄或柄痕。果核5枚,弓形。果肉深黃至淡棕色。氣清香,味酸微甜。
5、苦杏仁:Semen Armeniacae Amarum 取浸泡的苦杏仁,注意其形狀和顏色,基部對稱否?基部中央有一棕色合點,由此散出行多深棕色的脈紋,種子尖端為種孔,近尖端邊緣處有短線狀種臍,種臍與合點間為線形種脊。剝開種皮可見兩枚白色肥厚子葉,加水研磨,有苯甲醛氣味。味苦。
甜杏仁:較大,基部對稱,味淡,加水研磨苯甲醛氣味較弱.
6、參照講義,觀察青黛、杜仲、枇杷葉、木瓜等藥材的性狀特征。
(二) 顯微鑒定
1、延胡索:取延胡索塊莖橫切片顯微鏡下觀察
①皮層細(xì)胞10余層,扁平。外側(cè)2~3層常木化,具細(xì)密紋孔.
②韌皮部寬廣,篩管與管狀分泌細(xì)胞伴生,成環(huán)狀散列。
③木質(zhì)部常分為4~7小束,疏列成環(huán)狀,中央有較寬的髓。
粉末觀察:
①薄壁細(xì)胞類多角形,類方形或類圓形,含糊化淀粉粒。
②厚壁細(xì)胞類多角形,長條形,壁念珠狀增厚,木化、紋孔密集。
③石細(xì)胞單個散在或少數(shù)成群。
④管狀分泌細(xì)胞、導(dǎo)管可見。
2、板藍(lán)根:取板藍(lán)根橫切片鏡下觀察
①木栓層為數(shù)層細(xì)胞。
②韌皮部寬廣,射線明顯。
③形成層成環(huán)。
④木質(zhì)部導(dǎo)管類圓形,木纖維成束。
⑤薄壁細(xì)胞中含淀粉粒。
3、取已透化好的蓼藍(lán)葉和蓼蘭粉末,做成臨時裝片,鏡檢可見:
氣孔:表皮細(xì)胞間嵌有氣孔,為不典型的平軸式(兩個付衛(wèi)細(xì)胞不等大)
草酸鈣簇晶:位于葉肉細(xì)胞內(nèi),多而明顯。
多列式非腺毛:以葉緣、葉脈、側(cè)脈上多見,壁厚、木化、有紋孔。
腺毛:以下表皮為多,為黃色圓點狀,高倍鏡下可見腺毛頭部由2~8個細(xì)胞組成。
4、取苦杏仁種子橫切片觀察
①種皮:表皮細(xì)胞1例,其間有近圓型橙黃色的石細(xì)胞,上半部突出于表皮外,下半部埋在表皮組織中,有大的紋孔。
②營養(yǎng)層:位于表皮下方,細(xì)胞皺縮,散有細(xì)小維管束。
③內(nèi)種皮:細(xì)胞1列,含黃色物質(zhì)。
④胚乳:外胚乳為1列頹廢細(xì)胞,內(nèi)胚乳為1列長方形細(xì)胞,內(nèi)含糊粉粒及脂肪油。
⑤子葉:由薄壁細(xì)胞組成含有糊粉粒及脂肪油。
(三) 理化鑒別
1、取延胡索粉末2g,加0.5N硫酸溶液10ml,振搖,濾過。取濾液2ml,加1%鐵氰化鉀溶液0.4ml與1%三氯化鐵溶液0.3ml的混合液,顯深綠色,漸變藍(lán)色,放置后有深藍(lán)色沉淀;另取濾液加重鉻酸鉀數(shù)滴,產(chǎn)生黃色沉淀。
2、苦杏仁甙的鑒別:取苦杏仁l~2枚研碎,放人試管中加水或稀鹽酸濕潤,再取苦味酸鈉試紙一條懸掛于試管口,管口用塞子連同試紙上端一同塞;然后稍加熱,過幾分鐘后試紙由黃變成磚紅以,為什么?
四、實驗報告
1、繪延胡索、蓼藍(lán)葉粉末特征圖。
2、記述延胡索、苦杏仁理化鑒別結(jié)果。
五、思考題
1、延胡索的主要化學(xué)成分是什么?有何藥理作用?若想增強(qiáng)其療效,應(yīng)采用何種炮制方法?
2、如何進(jìn)行葉類藥材的鑒別研究?
3、北方常用大青葉有哪幾種?在性狀、顯微上它們有何區(qū)別,為什么都能做大青葉使用?
實驗七 黃芪、甘草、槐米、黃柏等生藥鑒別
一、目的要求
(一) 掌握黃芪、甘草、黃柏、槐米的性狀顯微特征
(二) 掌握槐米的理化鑒別
二、實驗用品、試劑、材料
黃芪、紅芪、甘草、槐米、番瀉葉、川黃柏、關(guān)黃柏生藥及飲片,黃芪的偽品。黃芪、甘草、黃柏的橫切片。甘草、黃柏粉末;泵准状继崛∫骸Ⅺ}酸、鎂粉、試管。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一) 性狀鑒定
1、黃芪Radix Astragaly:圓柱形。表面灰黃或淺棕。有縱皺、皮孔及支根痕,外皮脫落處可見網(wǎng)紋。質(zhì)柔韌,纖維性強(qiáng),具粉性,斷面顯菊花心。味甘而有豆腥氣。
類同品:紅芪。表面紅棕色,栓皮易脫落,質(zhì)堅硬,致密。
注意偽品黃芪與正品的區(qū)別。
2、甘草Radis Glycyrrhizae根呈圓柱形。表面紅棕色或灰棕色。有明顯的皺紋和橫長的皮孔,外皮有時呈鱗片狀剝裂而露出黃色內(nèi)皮。質(zhì)堅實。折斷時有粉塵散出。斷面纖維性、淡黃色,形成層環(huán)明顯,氣微,味甜而特異。
根莖:園柱形,表面可見芽或芽痕,斷面中央有髓。
3、槐米Flos Sophorae lmmaturus:注意花蕾的形狀,大小和顏色。上部為黃白色的花冠,下部為黃綠色的鐘狀花萼。
4、黃柏Cortex Phellodendri觀察黃柏生藥(川黃柏和關(guān)黃柏)的性狀特征,注意木栓層的有無與厚度,表面特征,平滑或粗糙,有無皮孔,分布及形狀如何?色澤如何?二種有無不同?折斷面和橫斷面特征各如何?同時注意氣味及粘性。
5、番瀉葉 Folium Sennae:狹葉番瀉葉:卵狀披針形。革質(zhì)。先端尖而有銳刺,葉基不對稱。有的表面有橫斜壓紋。
尖葉番瀉葉:寬披針形或長卵形,光端尖或微突,葉基不對稱。無橫斜壓紋。
我們實驗所用藥材有混合品。其中還有少量耳葉番瀉葉,小葉片呈卵圓形或倒卵形,先端鈍圓,微凹或具刺突、葉基對稱或不對稱,表面多為紅棕色,被有灰白色毛茸。
(二)顯微鑒定
1、黃芪根橫切片:
木栓層:數(shù)列木栓細(xì)胞,栓內(nèi)層由厚角細(xì)胞組成,切向延長。
韌皮部:纖維成束或單個散在,纖維與篩管群、薄壁細(xì)胞交互排列,近栓內(nèi)層處有時可見石細(xì)胞及縱向管狀木栓組織(外為數(shù)層木栓細(xì)胞,中央為木化纖維及薄壁細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)含棕色物質(zhì))。
木質(zhì)部:導(dǎo)管單個或2~3個相聚,導(dǎo)管間有木纖維束及木薄壁細(xì)胞。
射線:發(fā)達(dá),輻射狀排列,外側(cè)常彎曲,有裂隙。
薄壁細(xì)胞中含淀粉粒。
2.甘草:
取甘草根莖橫切片:自外向內(nèi)觀察其組織的特征是:
木栓層:為數(shù)列至20~30列細(xì)胞,紅棕色;排列整齊。
皮層:較窄。為數(shù)列薄壁細(xì)胞,纖維群散在。
韌皮部:篩管群常壓縮變形而頹廢成條狀;韌皮纖維壁厚、成束,微木化其周圍薄壁細(xì)胞中多含草酸鈣方晶;韌皮射線多彎曲,常有裂隙。
形成層:束內(nèi)形成層明顯,為數(shù)列扁平細(xì)胞,束間形成層不明顯。
木質(zhì)部:導(dǎo)管較大,木纖維多成群,其周圍薄壁細(xì)胞中也含草酸鈣方晶,木射線較平。
髓部:根中心無髓。根莖中心有髓。薄壁細(xì)胞中含眾多細(xì)小淀粉粒。
取甘草粉末,制成臨時裝片鏡檢可見:
①晶鞘纖維:眾多,多成束;含晶細(xì)胞的壁增厚,非木化。纖維細(xì)長壁極厚,微木化,孔溝不明顯。②導(dǎo)管:主為具緣紋孔導(dǎo)管較大,多破碎。③草酸鈣方晶:呈類雙錐形、長方形或類方形;④木栓細(xì)胞:棕紅色。表面觀呈多角形,壁薄、微木化⑤淀粉粒:多單粒,橢圓形,卵形或類球形,臍點點狀或短縫狀;復(fù)粒稀少,此外,有射線細(xì)胞及少數(shù)黃棕色色素塊。
3.黃柏:自外向內(nèi)注意觀察下列組織特征。
木栓層:殘存木栓細(xì)胞。
皮層:由薄壁細(xì)胞組成,石細(xì)胞與纖維成群或散在。石細(xì)胞形狀多樣,常呈分枝狀或不規(guī)則狀,孔溝明顯。
韌皮部:射線細(xì)胞l至數(shù)列,細(xì)胞徑向延長,纖維群成層,徑向排列,木化。
皮層與韌皮部內(nèi)均有粘液細(xì)胞,并有眾多草酸鈣方晶。
取黃柏粉末做成臨時裝片,鏡檢可見:
纖維:鮮黃色,常成束,多碎斷,邊緣微波狀,周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶,形成晶纖維,含晶細(xì)胞壁木化增厚。
石細(xì)胞:鮮黃色,分枝狀,類圓形或紡錘形,分枝狀者形大,壁厚,層紋明顯。
草酸鈣方晶較多,有的呈雙錐形。
淀粉粒:很小,單粒,球形。
(三)理化鑒定
槐米:
鹽酸鎂粉反應(yīng):取槐米甲醇提取液lml;置試管中,加鹽酸2~3滴,再加少許鎂粉,提取液顯櫻紅色。為什么?
四、實驗報告
(一)繪甘草粉末特征圖。
(二)繪黃柏橫切面簡圖。
(三)記述槐米理化鑒定結(jié)果。
五、思考題
(一)什么是晶鞘纖維?
(二)黃柏粉末中有哪些鑒別特征?
(三)黃芪、甘草在性狀方面如何區(qū)別?
(四)槐米中含有哪類化學(xué)成分,用何種方法鑒別?
實驗八 人參、三七、沉香、丁香等生藥鑒別
一、目的要求
(一) 掌握人參的四大鑒別特征,了解人參有關(guān)商品規(guī)格及常見偽品。
(二) 掌握沉香、丁香、三七的性狀顯微特征。
(三) 掌握人參、丁香的理化鑒別。
二、實驗用品、試劑、材料
試管、燒杯、濾紙、漏斗、酒精燈、三角架、石棉網(wǎng)、小勺、蒸發(fā)皿、95%乙醇、冰醋酸、濃硫酸、氯仿、3%NaOH的氯化鈉飽和液、三氯化銻氯仿飽合溶液。人參臘葉標(biāo)本及浸制標(biāo)本,野山參、生曬參、紅參、糖參、高麗參、西洋參、人參常見偽品;國產(chǎn)沉香、進(jìn)口沉香、丁香、三七及其偽品、五加皮。人參、三七、沉香、丁香橫切片。人參、丁香粉末。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)原植物鑒定
觀察人參Panax ginseng C.A.Mey臘葉標(biāo)本,注意根莖特征。莖直立,單一。掌狀復(fù)葉輪生莖頂,注意小葉形態(tài)特征,葉片數(shù)目。植令幾年?何種花序?
(二)性狀鑒定:
1、人參Radix Ginseng:觀察野山參的外部形態(tài)特征,搞清什么是“雁脖蘆”棗核寧”,“橫短體”、“鐵線紋”、“珍珠點”。觀察園參浸制標(biāo)本,注意蘆頭、蘆碗及主根、支根、須根各部特征。觀察并比較生曬參、紅參、糖參、高麗參性狀特征,注意生曬參斷面,形成層環(huán)紋棕黃色。皮部可見放射狀裂隙及黃棕色點狀樹脂道。氣特異,味甜,微苦。紅參側(cè)根多已除去,棕紅色,半透明,偶有暗褐色斑塊,質(zhì)硬脆,斷面平坦角質(zhì)中心部較淺。糖參表面淡黃白色,質(zhì)松泡,斷面白,有菊花紋,味甜。注意偽品人參與正品的區(qū)別。
2、三七Radix Notoginseng:根呈紡錘形或類圓錐形,表面灰黃或灰褐色,有蠟樣光澤,有斷續(xù)的縱皺紋及少數(shù)橫長皮孔,頂端有莖痕,周圍有瘤狀突起,下部有支根斷痕,質(zhì)堅實。擊碎后皮部與木部分離,皮部可見棕色細(xì)小樹脂道斑點。氣微味苦后微甜。注意偽品三七與正品的區(qū)別。
3、沉香Lignum Aquilariae Resinatum藥材呈不規(guī)則塊狀或小片狀,表面有刀削痕及不規(guī)則凹凸,并有黑褐色及黃白色相間的斑紋。質(zhì)堅硬折斷面刺狀,具特異香氣,味苦。燃燒時可產(chǎn)生濃煙,伴有濃烈香氣和黑色油狀滲出物。進(jìn)口沉香表面密布棕黑色樹脂斑痕或細(xì)縱紋,能沉或半沉于水,氣味較濃烈。
4、丁香Flos Caryophylli藥材略呈研棒狀,花冠圓球形,花瓣4,覆瓦狀抱合,棕褐色,花瓣內(nèi)為雄蕊和花柱。萼筒圓柱狀,棕褐色上部有4枚三角狀萼片,十字狀分開。質(zhì)堅富油性、氣芳香濃烈,味辛辣,有麻舌感。
對照講義觀察五加皮的性狀特征。
(三) 顯微鑒定
1.人參在顯微鏡下可見
木栓層:數(shù)列扁平的木栓細(xì)胞。
皮層:狹窄。
韌皮部:外側(cè)常有大形裂隙和頹廢的篩管組織,內(nèi)側(cè)細(xì)胞較小,排列緊密;每個韌皮部束常有2—3個樹脂道徑向散列,近形成層處較多,樹脂道呈園形或長園形,由多個扁小腎形分泌細(xì)胞組成。
形成層:為三至數(shù)層扁平細(xì)胞組成完整的環(huán)層。
木質(zhì)部:射線寬廣,導(dǎo)管單個或數(shù)個相聚,徑向斷續(xù)排列,薄壁細(xì)胞中含多數(shù)淀粉粒及草酸鈣簇晶。
2.三七:橫切面鏡下可見
木栓層為數(shù)列細(xì)胞。韌皮部散布樹脂道。形成層成環(huán)。木射線寬廣,無裂隙,木質(zhì)部導(dǎo)管近形成層處稍多,薄壁細(xì)胞中含有淀粉粒,并有少數(shù)草酸鈣簇晶,棱角鈍,射線細(xì)胞中淀粉粒較多。
3.白木香橫切面:
木射線寬l一2列細(xì)胞,含棕色樹脂。導(dǎo)管圓形,多角形,有的含棕色樹脂,木纖維多角形,壁厚木化。木間韌皮部呈扁長橢圓狀,常與射線相交,細(xì)胞內(nèi)含樹脂。
薄壁細(xì)胞中含草酸鈣柱晶。
參照講義,觀察沉香不同切面的顯微特征。
4.丁香 花托中部橫切片
(1)表皮細(xì)胞l例,外被厚的角質(zhì)層和氣孔。
(2)皮層外側(cè)有2~3層徑向排列的橢圓形油室,其周圍薄壁細(xì)胞的壁較厚。
(3)維管束雙韌型,環(huán)狀排列,維管束外圍有木化的厚壁纖維,周圍薄壁細(xì)胞中含有小簇晶。
(4)通氣組織 由薄壁細(xì)胞組成,排列疏松,細(xì)胞間隙較大形成大氣室。
(5)中心軸部為薄壁細(xì)胞,其間散列多數(shù)細(xì)小維管束。
粉末:紅棕色,香氣濃烈。
(1)油室:橢圓形,多破碎、有的含黃色油狀物。
(2)纖維:單個散在梭形、壁厚、微木化
(3)花粉粒眾多,極面觀三角形、淡黃色,具三孔溝
(4)草酸鈣簇晶眾多較小,存在于薄壁細(xì)胞中
(5)花托表皮細(xì)胞多角形,有不定式氣孔,副衛(wèi)細(xì)胞5—7個。
(四)理化鑒定:
1.醋酐濃硫酸反應(yīng):取人參粉末0.2g,加冰醋酸4ml,水浴加熱2分鐘,過濾。取濾液置干燥試管中,傾斜試管,小心沿管壁加濃硫酸0.5m1,成二液層,二液交界面呈紅棕色。
2.取人參粉末0.5g加乙醇5ml,振搖、過濾,濾液蒸干滴加三氯化銻氯仿飽和溶液,顯紫色。
3.取丁香粉末少許于載玻片上,滴加氯仿混勻,加3%氫氧化鈉的氯化鈉飽和液l滴,加蓋玻片鏡檢,有針狀丁香酚鈉結(jié)晶析出。
四、實驗報告
(一)繪人參根橫切l(wèi)/4簡圖、繪丁香粉末特征圖。
(二)記錄人參、丁香的理化反應(yīng)結(jié)果。
五、思考題
(一)人參的商品規(guī)格主要有哪些?其主要鑒別特征是什么?
(二)人參和三七橫切面有什么不同。
(三)國產(chǎn)沉香與進(jìn)口沉香如何區(qū)別。
(四)人參、丁香的主要成分是什么?用何種方法進(jìn)行鑒別?
(五)三七的性狀特征習(xí)慣上如何描述。
實驗九 當(dāng)歸、川芎、柴胡、白芷、小茴香、馬錢子等鑒別
一、目的要求
(一) 掌握當(dāng)歸、川芎、柴胡、小茴香、馬錢子的性狀顯微特征。
(二) 掌握白芷、連翹的主要性狀特征。
二、儀器用品、藥品:
酒精燈、三角架、試管、濾紙、甲醇、二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1:30)、磷酸、l%釩酸銨硫酸溶液、濃硝酸。當(dāng)歸、柴胡、川芎、白芷、小茴香、秦皮、連翹、防風(fēng)、馬錢子的藥材及飲片。當(dāng)歸、川芎、柴胡、小茴香、馬錢子的橫切片。當(dāng)歸、柴胡的粉末。
三、實驗內(nèi)容與方法:
(一) 性狀鑒定:
1、當(dāng)歸Radix Angelicae Sinnesis:根頭及主根粗短,略呈圓柱形,支根扭曲,表面黃棕色,有橫向橢圓形皮孔。頂端有殘留的葉鞘及莖基,質(zhì)柔軟,斷面黃白色或黃棕色,皮部厚,有棕色油點,形成層環(huán)棕色,木部色較淡。有濃郁香氣,味甘辛微苦。
2、柴胡Radix Bupleuri:根呈圓柱形或圓錐形,常有分枝,表面淡棕色或棕色,近根頭部有橫皺紋,下部有不規(guī)則縱皺紋并有細(xì)小支根痕及皮孔,根頭部多有殘留莖基。質(zhì)堅韌。斷面片狀纖維性、皮部淡棕色木質(zhì)部淡黃白色。氣微芳香,味微苦。
3、川芎Rhizoma Chuanxiong:結(jié)節(jié)狀團(tuán)塊,注意隆起的輪節(jié),瘤狀根痕,斷面顏色和特征,氣濃香而特異,味苦辛。
4、小茴香Fructus Foeniculi:藥材呈長橢圓形,似稻谷狀。表面黃綠至淡黃色,分清柱基和果柄。再取浸泡材料,輕輕將二分果分開,可見各由一細(xì)小的分果柄連在果柄上。分果長橢園形,背面具5條縱棱,腹面稍平,用刀將分果橫切,可見斷面邊緣波狀,中心為灰白色的胚乳和胚。中果皮內(nèi)二棱脊間可見棕色油管斷面,腹面有2個。氣特異,味微甜辛。
5、馬錢子Semen strychni:扁園形、扭扣狀;表面密生匍匐的銀灰色絲狀毛茸,自中心向四周放射;底面中心有一稍突起的圓點狀種臍,種臍與邊緣小突起狀種孔間常有一條棱線?v剖面可見淡黃白色角質(zhì)肥厚的胚乳。近種孔處子葉兩枚,心形,掌狀脈5~7條。味極苦,有毒。注意云南馬錢與馬錢子有何不同。
6、對照講義觀察白芷、秦皮、連翹、防風(fēng)的性狀特征。
(二) 顯微鑒別:
1、當(dāng)歸:
取當(dāng)歸橫切片,鏡下觀察:①木栓層4~7列木栓細(xì)胞。②皮層:狹窄,細(xì)胞切向延長,有時可見多數(shù)小型分泌腔。③韌皮部:寬廣,多裂隙,有油室散在,外側(cè)較大,向內(nèi)漸小多為圓形,高倍鏡下可見周圍分泌細(xì)胞。④形成層:明顯成環(huán)。⑤木質(zhì)部:導(dǎo)管單個散在或數(shù)個相聚,木射線寬。⑥薄壁細(xì)胞中含淀粉粒。
粉末 淡黃棕色。(1)紡錘形韌皮薄壁細(xì)胞,壁稍厚,表面有斜向交錯紋理。有的具菲薄橫膈。(2)油室。(3)具緣紋孔導(dǎo)管,螺紋導(dǎo)管。(4)淀粉粒
2、柴胡:取柴胡橫切片鏡下觀察:
木栓層:為7~8列木栓細(xì)胞。
皮層:狹窄,可見類圓形油室,油室周圍分泌細(xì)胞6—8個。
韌皮部:油室較小。
形成層:多成環(huán)。
木質(zhì)部占大部分,具大型導(dǎo)管,老根木纖維聚積成群,排成環(huán)狀。
3、川芎:川芎根莖橫切片置顯微鏡下,從外到內(nèi)可見:
木栓層:木栓細(xì)胞數(shù)列。
皮層:較窄,細(xì)胞呈切向延長,散有根跡維管束和類園形油室。
韌皮部:寬廣,篩管群散列。
形成層:呈波狀或不規(guī)則環(huán)狀。
木質(zhì)層:導(dǎo)管多角形或類圓形,單列或排成“V”字形,偶具木纖維束。
髓:較大,薄壁組織中散有多數(shù)油室。
4、小茴香:取小茴香橫切片,鏡下觀察。
外果皮:一列,為切向延長的扁小細(xì)胞。
中果皮:主要為薄壁細(xì)胞,注意棱脊處的維管束柱,由兩個外韌維管束通過木化的纖維連接而成,韌皮部位于維管束柱兩側(cè),由小型細(xì)胞組成,木質(zhì)部導(dǎo)管,纖維均木化,不易區(qū)分。維管束柱周圍(內(nèi)、外側(cè)多見)有大型木化的網(wǎng)紋細(xì)胞。棱脊間和腹面可見橢園形油管橫切面,共幾個?換高倍鏡觀察油管由20扁平的分泌細(xì)胞組成。
內(nèi)果皮:一列,由長短不一的扁平細(xì)胞組成,有的切片僅在腹面明顯。
種皮:為一列扁長細(xì)胞,結(jié)合面中央可見種脊維管束,由細(xì)小導(dǎo)管組成。
內(nèi)胚乳:細(xì)胞呈多角形,內(nèi)含眾多細(xì)小糊粉粒,其中有草酸鈣小簇晶。
有的切片中央可見胚。
5、馬錢子:取馬錢子橫切片、置顯微鏡下觀察:
①種皮:每一個表皮細(xì)胞均向外延長,形成單細(xì)胞非腺毛,并向一方傾斜,壁極厚,強(qiáng)木化,有縱肋約10條,基部稍膨大,形似石細(xì)胞。種皮內(nèi)層為數(shù)列棕色頹廢的薄壁細(xì)胞。
②胚乳:細(xì)胞呈多角形,壁厚,細(xì)胞中含有脂肪油滴和少量糊粉粒。
(三) 理化鑒定:
1、馬錢子:
取干燥馬錢子做徑向切片,分別做下列試驗。
(1)厚切片加1%硫礬酸試劑l滴,顯藍(lán)紫色,胚乳內(nèi)層明顯,(檢查番木鱉鹼,以胚乳內(nèi)層含量較高)
(2)厚切片加濃硝酸l滴,顯橙紅色。胚乳外層較明顯(檢查馬錢子堿,胚乳外層含量較高)。
2、柴胡
取粉末0.5g加乙醇10ml,用力振搖放置30分鐘,濾過,取濾液0.5ml加二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1:30)0.5ml及磷酸2ml,混勻,水浴加熱,溶液顯淡紅色至淡紅紫色。(柴胡皂甙)
四、實驗報告
(一)繪小茴香橫切面簡圖。
(二)繪北柴胡根橫切面1/4簡圖。
(三)記錄馬錢子、柴胡理化鑒別結(jié)果。
五、思考題
(一)當(dāng)歸含有的主要化學(xué)成分是什么,有何性狀顯微特征?
(二)南柴胡與北柴胡在性狀特征方面有可區(qū)別?
(三)進(jìn)口馬錢子與國產(chǎn)馬錢子在性狀顯微方面如何區(qū)別?
(四)秦皮中含有哪幾種化學(xué)成分屬于哪類,用什么方法進(jìn)行鑒別?偽品秦皮是什么?如何區(qū)別?
實驗十 龍膽、薄荷、丹參、黃芩等生藥鑒別
一、目的要求
(一)掌握龍膽、薄荷、丹參、黃芩實驗觀察的各項內(nèi)容。
二、儀器用品、藥品。
臨時裝片用品、水合氯醛試劑、蒸餾水、鎂粉、鹽酸、醋酸鉛試液、試管、酒精燈、小勺、漏斗、濾紙;薄荷、丹參、黃芩、關(guān)龍膽、堅龍膽、香加皮、益母草、夏枯草藥材;薄荷莖、葉橫切,龍膽、堅龍膽橫切,丹參、黃芩根橫切片;黃芩粉末。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)性狀鑒別
1、龍膽Radix Gentianae:關(guān)龍膽 根莖不規(guī)則塊狀,根細(xì)長叢生,上部細(xì)密橫紋理,斷面木部色淺;堅龍膽根外皮膜質(zhì)、易脫落,木部與皮易分離。
2、薄荷:Herba Menthe,莖方柱形,有的對生分枝,表面黃棕色或帶紫色、質(zhì)脆、斷面白色、中空、葉多卷曲舒縮,長圓形或卵形,被柔毛,有凹點狀腺鱗,莖上部腋生輪傘花序,花冠帶紫色,葉搓揉時有特異清涼香氣,味辛涼。
3、丹參Radix Salviae Miltiorrhizae:根呈圓柱形或圓錐形,栓皮易剝落、注意外皮顏色,維管束的顏色與排列。
4、黃芩Radix Scutellariae:多為長圓錐形,扭曲不直,外表棕黃色,具明顯縱皺及網(wǎng)紋?梢姎埱o痕或側(cè)根痕。質(zhì)硬脆,斷面黃色。“子芩”內(nèi)部充實;老根內(nèi)部暗棕或枯朽稱“枯芩”。味極苦。
(二) 顯微鑒別
1、龍膽:取龍膽橫切片、鏡下觀察
表皮:1列,有時殘存。
皮層:外層細(xì)胞壁稍厚,中皮層多裂隙,內(nèi)皮層細(xì)胞切向延長,并由縱向壁分隔成數(shù)個小細(xì)胞。
韌皮部:寬闊、多裂隙
木質(zhì)部:導(dǎo)管成束或成“V”字形排列
髓:明顯
注意:堅龍膽的鑒別。
2、丹參:取丹參橫切片,鏡下觀察
木栓層:4~6列,可見落皮層。
皮層:寬廣。
韌皮部:半月形.,束間形成層不甚明顯。
木質(zhì)部束8~10,放射狀,導(dǎo)管近形成層處較多,呈切向排列,漸至中央導(dǎo)管呈單列。中央有否纖維束?
3、黃芩:取黃芩橫切片,鏡下觀察
木栓層:木栓細(xì)胞中有石細(xì)胞散在,有時木栓層中間夾有皮層死細(xì)胞。
皮層:散有多數(shù)石細(xì)胞和纖維,石細(xì)胞多分布于外側(cè),纖維多分布于內(nèi)側(cè)。
韌皮部:與皮層界限不明顯,由篩管、薄壁細(xì)胞組成。
形成層:細(xì)胞多皺縮。
木質(zhì)部:由導(dǎo)管、木纖維及木薄壁細(xì)胞組成,導(dǎo)管數(shù)個,切向排列。老根中央可見栓化細(xì)胞環(huán),單環(huán)或數(shù)個同心環(huán)。無明顯的射線。
4、黃芩粉末:先以蒸餾水裝片,再以水合氯醛試液透化后裝片、鏡檢下列主要顯微特征:
(1)淀粉粒:細(xì)小、單粒類球形,復(fù)粒少見,由2—3分粒組成。
(2)韌皮纖維:單個或成束、梭形,壁厚、木化、孔溝明顯。
(3)石細(xì)胞:壁甚厚、孔溝有時分叉、形狀?
(4)韌皮薄壁細(xì)胞:紡錘形或長園形、壁連珠狀增厚。
(5)導(dǎo)管碎片:多為網(wǎng)紋導(dǎo)管,具緣紋孔及環(huán)紋導(dǎo)管少見。
(6)紡錘形木薄壁細(xì)胞常與導(dǎo)管相伴存在,壁稍厚、有橫隔。
5、薄荷:
①葉橫切片:上表皮細(xì)胞長方形,下表皮細(xì)胞較小,具氣孔,上下表皮有凹陷,內(nèi)有大型特異的扁球形腺鱗,可見腺毛和非腺毛,葉異面型,柵欄組織為1—2列細(xì)胞,海綿組織4—5列細(xì)胞。葉肉細(xì)胞中含針簇狀結(jié)晶。
主脈維管束外韌型、木質(zhì)部導(dǎo)管常2~6個排列成行,韌皮部外側(cè)與木質(zhì)部外側(cè)均有厚角組織。
②莖橫切片:呈四方形
表皮:為1列長方形細(xì)胞,外被角質(zhì)層,有腺鱗、腺毛、非腺毛
皮層:薄壁細(xì)胞數(shù)列、四棱角處由厚角細(xì)胞組成。
內(nèi)皮層:明顯
韌皮部:狹窄
形成層:成環(huán)
木質(zhì)部:四棱處發(fā)達(dá),導(dǎo)管類多角型。
髓薄壁細(xì)胞大,中心?斩。
(三)理化鑒定:
1、取黃芩粉末2g,加乙醇20ml,回流加熱15分鐘,濾過,取濾液lml,加醋酸鉛試液2—3滴,即生成桔黃色沉淀。
2、取黃芩濾液lml,加鎂粉少許及鹽酸3~4滴,顯紅色。
四、實驗報告
(一) 繪黃芩橫切面簡圖、粉末中韌皮纖維、韌皮薄壁細(xì)胞、石細(xì)胞圖。
(二) 記錄黃芩理化鑒定結(jié)果。說明反應(yīng)原理。
實驗十一 洋金花、地黃、金銀花、天花粉等生藥鑒別
一、目的要求
(一) 掌握洋金花、地黃、金銀花、天花粉性狀,顯微及理化特征
二、儀器用品藥品
臨時裝片用具,酒精燈、小勺、分液漏斗、蒸餾水、水合氧醛試液、金銀花甲醇冷浸液、氯原酸甲醇(1mg/m1)溶液、乙酸丁酯、甲酸、硅膠H預(yù)制板、紫外燈(365nm)、南洋金花、北洋金花、生地黃、熟地黃、金銀花、天花粉、玄參、鉤藤、巴戟天、梔子藥材,洋金花、金銀花、天花粉粉末,金銀花透化材料。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一)性狀鑒定
1、金銀花Flos Lonicerae:花蕾呈細(xì)棒狀,表面淡黃至黃棕色,密被短柔毛及腺毛;下部有細(xì)小的花萼;ü诙叫位蛏蚤_裂。雄蕊5枚。氣清香。味甘微苦。
2、地黃Radix Rehmanniae:多呈不規(guī)則的團(tuán)塊或長園形,中間膨大,兩端稍細(xì),表面棕黑或棕灰色,極皺縮。質(zhì)較軟而韌,斷面棕黑色或烏黑色,有光澤,具粘性。味微甜。
3、洋金花Flos Daturae:取兩種洋金花,觀察其性狀。南洋金花多皺縮成條狀,長9~15cm,花萼筒狀,長為花冠的2/5,表面微有毛茸,通常已除去。花冠喇叭狀,淡黃色,先端5淺裂,裂片有短尖,短尖下有3條明顯的縱脈紋。雄蕊5枚,花絲貼生于花冠筒內(nèi),雌蕊l枚,柱頭棒狀。
北洋金花多具花萼,外表灰黃色,有短柔毛,花冠裂片間有三角形突起,氣味同南洋金花。
4、天花粉Radix Trichosanthis:紡錘形或塊瓣狀。去栓皮、斷面粉性、黃色小孔放射狀排列,縱切面為黃色條紋。
(二)顯微鑒定:
1、金銀花:先取一朵透化的標(biāo)本,分別作花冠、雄蕊和雌蕊的整裝片,觀察其特征:
花冠:外表面密被腺毛和非腺毛。腺毛頭部倒圓錐形,頂端平、內(nèi)含黃棕色分泌物,腺柄為多細(xì)胞。偶見頭部呈類圓形者。非腺毛執(zhí)業(yè)藥師多為單細(xì)胞,壁厚、腔小,壁上具小疣狀突起,有的具角質(zhì)螺紋。花冠內(nèi)表面腺毛較少。基部非腺毛較長,彎曲,壁疣明顯。薄壁細(xì)胞內(nèi)含草酸鈣小簇晶。
雄蕊:花粉粒類球形,黃色、外壁具短刺及顆粒狀雕紋,有的可見到萌發(fā)孔。壓開的花藥可看到花粉囊內(nèi)層細(xì)胞壁上增厚的條狀,觀察花藥邊緣可見花粉囊壁外層細(xì)胞向外突出呈乳頭狀,花絲基部有非腺毛。
雌蕊:柱頭頂端表皮細(xì)胞呈乳頭狀或絨毛狀突起,其下方薄壁細(xì)胞內(nèi)含小簇晶。
挑取金銀花末少許,置載玻片上,透化后鏡檢,并注意與整體裝片的異同:
花粉粒:多見。
腺毛:散在,多不完整。
非腺毛:多為單細(xì)胞,一種壁厚,略具壁疣或光滑;另一種壁薄,長而彎曲,壁疣明顯,多斷裂。
花冠外表皮細(xì)胞,垂周壁呈不規(guī)則彎曲,其間嵌有不定式氣孔,付衛(wèi)細(xì)胞5~9個;ǖ母鞑克槠梢姷,但一般不做鑒別依據(jù)。
2、洋金花:取粉末少量于載玻片上,水合氯醛裝片觀察:
花粉粒:類球形或長園形、表面條狀雕紋
花萼:非腺毛1~3細(xì)胞、壁具疣狀突起,腺毛頭部l~5細(xì)胞,柄1~5細(xì)胞 花冠:邊緣非腺毛l~10細(xì)胞,壁微具疣狀突起
花絲:基部非腺毛粗大、頂端圓鈍。
花萼花冠薄壁細(xì)胞中有草酸鈣砂晶、方晶、簇晶。
3、天花粉:
淀粉粒:粉末的主體,單粒較少、臍點點狀、星狀、人字形,大粒層紋明顯;復(fù)粒由2~14(~18)分粒組成。常有一個大的盔帽形分粒,下端與10多個小分粒復(fù)合。
石細(xì)胞:單個或數(shù)個相接,黃綠色,呈長方形,橢園形,類三角形,有的一端或各邊略凸起,少數(shù)具短分枝,有一側(cè)較薄。層紋多不明顯,孔溝細(xì)密,偶有石細(xì)胞延長纖維狀,有的石細(xì)胞與韌皮纖維毗連。
導(dǎo)管:主為具緣紋孔導(dǎo)管,多破碎,偶見網(wǎng)紋導(dǎo)管。
木纖維:多為纖維管胞,較粗,具緣紋孔較稀疏,紋孔口斜裂縫狀,少數(shù)呈十字形。
韌皮纖維:較細(xì)長,紋孔稀少,斜裂縫狀,胞腔具橫隔。
(三) 理化鑒定
薄層色譜 供試品溶液:金銀花粉末0.lg,甲醇1ml,冷浸12h濾過供試。
對照品溶液:綠原酸甲醇液lmg/m1
層析板 羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠H薄板。
展開劑 醋酸丁酯:甲酸:水:(7:2.5:2.5),取上層,上行展開8cm
顯色:紫外光(365nm)
供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色熒光斑點。
四、實驗報告
(一) 繪金銀花粉末特征圖
(二) 繪洋金花粉末特征圖
(三) 金銀花薄層色譜圖,并計算氯原酸的Rf值
五、思考題
(一) 金銀花與洋金花的粉末特征有哪些異同點:
(二) 忍冬屬植物資源豐富,在考慮其是否可以入藥時,可以用什么指標(biāo)進(jìn)行判斷?
(三) 地黃可作幾種生藥,炮制的目的是什么?
實驗十二桔梗、茵陳、紅花、蒼術(shù)、木香等生藥鑒別
一、目的要求
(一) 掌握桔梗、木香、茵陳、紅花、蒼術(shù)、實驗觀察的各項內(nèi)容
二、儀器用品、藥品:
試管、蒸發(fā)皿、酒精燈、三角架、石棉網(wǎng)、濾紙、漏斗;a-萘酚—濃硫酸、燒杯、醋酐、濃硫酸、稀甘油、水合氯醛試劑、無水乙醇。
桔梗、茵陳、紅花、藏紅花、蒼術(shù)、白術(shù)、木香、黨參、南沙參藥材。
桔梗、木香、蒼術(shù)切片。
桔梗、紅花粉末。
三、實驗內(nèi)容和方法
(一) 性狀鑒定:
1、桔梗Radix Platycodi:注意桔梗形狀。表面白色或淡黃白色。有短根莖(蘆頭),根莖上有數(shù)個半月形莖痕(蘆碗)。全體具扭曲縱溝。斷面有菊花心,具淺棕色環(huán)紋(形成層)。質(zhì)脆,木部較緊密。味微甜后苦。
2、木香Padix Aucklandiae.圓柱形或半圓柱形。表面黃棕至灰棕色,栓皮多除去,具側(cè)根痕。質(zhì)堅硬,斷面有深褐色油室小點散在,具放射狀紋理。老根中心多枯朽。具濃郁特異的香氣。
3、綿茵陳Herba Artemsiae Scopariae:全株密被毛茸,灰綠色,基生葉為幾回羽裂?終裂片形狀?
4、紅花Flos Carthami:為不帶子房的管狀花、外色紅黃或紅色;ü谕布(xì)長,先端5裂、裂片呈狹條形,雄蕊5,花藥聚合成筒狀,黃白色,柱頭長園柱形,頂端微分叉。
注意觀察番紅花入藥部位,性狀的差別。
5、蒼術(shù)Rhizoma Atractylodis:北蒼術(shù),不規(guī)則塊狀,多分枝,表面黑棕色,斷面纖維性,質(zhì)較疏松,有黃棕色油點散在。觀察茅蒼術(shù),白術(shù)的藥材,比較三者的主要區(qū)分點。
6、觀察黨參、南沙參的性狀特征
(二) 顯微鑒定:
1、木香橫切片,置顯微鏡下觀察:
木栓層:2~6列,其外側(cè)時有殘存落皮層。
韌皮部:寬厚、篩管群明顯。有較大油室散在
形成層:斷續(xù)成環(huán)。
木質(zhì)部:導(dǎo)管單個散在或數(shù)個相連,木纖維少,近中心處纖維較多。
薄壁細(xì)胞中有否菊糖。
2、桔梗:橫切片置顯微鏡下觀察:
木栓層:多列、黃棕、偶含草酸鈣棱晶。去栓皮者或有殘存。
皮層:狹窄,有裂隙,散有乳汁管群。
韌皮部:寬廣,乳汁管散在。
形成層:成環(huán)。
木質(zhì)層:導(dǎo)管單個散在或數(shù)個相聚,徑向排列
注意薄壁細(xì)胞中有否菊糖。
取桔梗粉末:
菊糖:眾多,呈扇形,多在薄壁細(xì)胞中,久置消失,用乙醇裝片,菊糖呈不規(guī)則團(tuán)塊,久置不消失。
乳汁管:聯(lián)結(jié)呈網(wǎng)狀。
導(dǎo)管:梯紋、網(wǎng)紋及具緣紋孔狀。
木薄壁細(xì)胞:長方形,末端壁微波狀彎曲。
3、紅花:取紅花粉末,水合氯醛試液裝片鏡檢,可見下列特征:
花粉粒:深黃色,圓球形或長球形,外壁有短刺及疣狀雕紋。具三個萌發(fā)孔。
分泌管:由分泌細(xì)胞單列縱向連接而成,細(xì)胞內(nèi)充滿黃色至紅棕色分泌物。
花冠頂端細(xì)胞:分化成乳頭狀毛。
柱頭表皮細(xì)胞:分化成圓錐形單細(xì)胞毛,末端較尖。
花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞:細(xì)胞壁條狀增厚。
草酸鈣結(jié)晶:方形或長方柱形。
4、取蒼術(shù)橫切片置顯微鏡下觀察:
木栓層:多層細(xì)胞,夾有石細(xì)胞環(huán)帶,環(huán)帶由2~3層石細(xì)胞集成。
皮層:散有大型油室。
韌皮部:較窄
形成層:成環(huán)
木質(zhì)部:纖維群和導(dǎo)管群相間排列
射線、髓部:均有油室散在。薄壁細(xì)胞可見細(xì)小草紋鈣針晶。
北蒼術(shù)橫切面:皮層有纖維束。木質(zhì)部纖維束較大。
(三) 理化鑒別:
1、桔梗粉末少量置載玻片上,加a—萘酚—濃硫酸試液2滴,顯紫堇色
2、取桔梗粉末約0.2g,加醋酐2m1,水浴加熱2分鐘,過濾。;濾液1ml置干燥試管中,沿壁加入濃硫酸lml,接觸面呈紅棕色環(huán),上層呈藍(lán)色至綠色。
四、實驗報告
(一) 繪木香橫切面簡圖,繪桔梗粉末特征圖。
(二) 記錄桔梗、理化鑒定結(jié)果。
五、思考題:
(一) 木香橫切面有哪些鑒別特征?
(二) 哪些生藥薄壁細(xì)胞中含有菊糖?
(三) 蒼術(shù)、白術(shù)橫切面特征。
(四) 桔梗和南沙參外形相似如何性狀上加以區(qū)別。
實驗十三 麥冬、知母、砂仁、半夏、天麻等生藥的鑒別
一、目的要求:
(一) 掌握知母、半夏、天麻、麥冬、砂仁的性狀,顯微特征和半夏的理化定性反應(yīng)。
(二) 掌握川貝、浙貝、天南星、莪術(shù)的商品規(guī)格和性狀鑒別特征。
(三) 了解知母的定性反應(yīng)。
二、儀器用品、藥品:
具塞試管、三角架、酒精燈、蒸發(fā)皿、試管、燒杯、吸管、吸水紙、小勺、5%HCI、5%NaOH、95%乙醇、蒸溜水、50%乙醇、0.2%茚三酮試劑。
知母生理鹽水提取液,兔紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液。
知母、天南星、松貝、爐貝、青貝、浙貝、莪術(shù)、天麻及偽品、半夏、水半夏、砂仁、麥冬。
知母粗粉、半夏粉末、粉末。
橫切片:知母、半夏、天麻、麥冬、砂仁、山麥冬。
三、實驗內(nèi)容與方法:
(一) 性狀鑒定:
1、知母Rhizonm Anemarrhenae:毛知母長條狀,頂端有何特征?上面有何特征?環(huán)節(jié)排列緊密,殘留黃棕色葉基,下面有何特征?斷面何色?中部是否散布淺黃色小點?光知母與毛知母有何不同?
2、半夏Rhizoma Pinellie:塊莖呈類球形或稍偏斜。表現(xiàn)黃白色。頂端稍平,中心有凹窩,中間有芽痕和葉痕;周圍密布棕色凹點(須根痕),下端鈍圓,較光滑。質(zhì)堅,斷面粉性。味辛辣而麻舌,有毒,法半夏、姜半夏與生半夏比較有何不同?水半夏與半夏有何區(qū)別?
3、天麻Rhzoma Gastrodiae:天麻塊莖呈扁園形,冬麻一端有紅棕色干枯芽胞(習(xí)稱鸚哥嘴或紅小辮),春麻有殘留莖基。表面可見多輪點狀環(huán)紋,另一端有自母麻脫落留下的園形疤痕。斷面平坦,角質(zhì)樣。冬麻實滿為優(yōu),春麻中空為次。
常見偽品:
紫茉莉根:紫茉莉科植物紫茉莉Mirabilis jalapa的干燥根。長園錐形,無環(huán)節(jié),有縱皺紋和凹陷的細(xì)根痕,斷面有數(shù)個黃白色同心性環(huán)紋,嚼之有刺喉感。
芭蕉芋:美人蕉科植物芭蕉芋Canna odulis的干燥根莖,卵園形或長橢園形,外表常見白色粉霜,頂端殘留莖基,除去外皮者,露出纖維,斷面角質(zhì)樣,可見點狀維管束散在,嚼之粘牙。
大理菊根:菊科植物大理菊Dahliapinnata的干燥塊根,紡錘形。有寬縱溝。體輕、斷面纖維性,有木心或中空。
羊角天麻菊科植物羽裂解甲草Cacaliatangutica的干燥根莖。紡錘形,兩端尖,有明顯的環(huán)節(jié)(習(xí)稱玉帶纏腰),散有點狀凸起的須根痕。斷面多中空。
4、川貝母:Bulbus Fritillariae Cirrhosae
松貝:形狀和顏色如何?二鱗片大小懸殊,相互抱合,稱懷中抱月。頂部閉合。底部平,微凹。
青貝:二鱗片大小相近,頂端多開口,中心包著心芽和小鱗葉。
爐貝:和青貝比較有何異同?突出特征是什么?
浙貝母:分為幾種規(guī)格,注意其特征。
5、麥冬Radix Ophiopogois:塊根多呈紡錘形。黃白色或淺黃色。半透明,質(zhì)柔韌,干后硬脆。斷面角質(zhì),中央有細(xì)小中柱。味微甘,嚼之發(fā)粘。
6、天南星:Rhizoma Arisaematis:塊莖扁球形,頂面較平坦,中心淺凹,周圍有麻點狀須根痕、粉性、刺喉麻舌。
7、莪術(shù):Rhizoma Curcumae:注意根莖形狀、表面有無環(huán)節(jié)和點狀根痕,質(zhì)硬、皮部木部易分離,用放大鏡觀察散在的維管束和棕色油點。
8、砂仁Fructus Amormi:陽春砂果實橢圓形或卵圓形(殼砂)。具不明顯的三鈍棱。紅棕色或棕褐色,密生柔軟短刺狀突起,果皮薄,易縱裂。剝開果皮可見園形或長園形種子團(tuán)(砂仁),三瓣,每瓣有種子6~15粒,排列緊密。種子呈不規(guī)則多面體,外被膜質(zhì)的假種皮。外露面平坦,有細(xì)皺紋。小心剝下一粒種子,用放大鏡觀察,內(nèi)側(cè)較小端可見凹陷的種臍,側(cè)面種脊成一縱溝,合點在較大的一端。氣芳香,味辛涼,微苦。
附:縮砂:為縮砂ArranonumXanthioides Wall的干燥果實及種子團(tuán);又名西砂仁。果皮表面密具片刺狀突起。種子團(tuán)較園,外被一層白粉霜。氣味稍淡。
砂仁的混淆品及偽品:
艷山姜Alpinia zerumbot的果實:卵園形、色黃或棕,皮厚無刺縱棱線突起,種子團(tuán)易松散,種子外被白膜質(zhì)假種皮。
山姜Alpimia japonica的果實,又稱福建土砂仁、果皮橙黃色,被短柔毛,種子團(tuán)瘦小,卵園形,三棱不明顯,每瓣有種子3~8枚,質(zhì)硬。
華山姜:Alpinia chinensis的果實,類球形,黃色或紅棕色,光滑,種子團(tuán)類球形,每瓣有種子1—3粒,排成一列,種子具細(xì)皺紋,但不成網(wǎng)狀。
光葉云南草蔻:Alpinia blephayxk Schum varglabrior干燥果實。果實類球形,無刺,有三條稍突起的縱棱線,薄而脆。種子團(tuán)類球形,由白色隔膜分戒三瓣,種子呈錐狀四面體,粘結(jié)緊密,背面稍隆起,合點約在中央,種臍為一凹點,在背側(cè)面種脊為一縱溝,經(jīng)腹面而至合點。質(zhì)硬。氣香。
(二) 顯微鑒別:
1、知母
栓化皮層:由20~30余層不規(guī)則的和扁平的栓化細(xì)胞組成,其間散有少數(shù)葉跡維管束。
皮層:多為圓形或橢園形的薄壁細(xì)胞。內(nèi)皮層不明顯。偶見葉跡維管束。
中柱:中柱鞘處常有橫走的根跡維管束,中間散在多數(shù)外韌型維管束,其外周細(xì)胞壁稍厚,微木化,形成維管束鞘。薄壁細(xì)胞間有多數(shù)大型的粘液細(xì)胞,內(nèi)含草酸鈣針晶束,在維管束周圍的薄壁細(xì)胞中常含草酸鈣柱狀結(jié)晶,多碎斷。
2、半夏橫切面:外側(cè)細(xì)胞不規(guī)則多破裂,含淀粉粒極少,向內(nèi)細(xì)胞完整,淀粉粒漸增多,細(xì)胞間散在較大類圓形的粘液細(xì)胞,內(nèi)含草酸鈣針晶束。維管束,為外韌型或周木型,縱橫散布。
3、天麻橫切片:
表皮:有時殘存,成為外皮層組織,淡棕色。
下皮層:2~3列,略呈切向延長,細(xì)胞壁增厚栓化,可見稍疏的壁孔
皮層:數(shù)列多角形細(xì)胞,有的可見針晶束。
中柱:周韌型或外韌型維管束散在,粘液細(xì)胞含針晶束,薄壁細(xì)胞或見團(tuán)塊狀物(多糖類物質(zhì))。
4、麥冬:取麥冬塊根橫切片,置顯微鏡下觀察,自外向內(nèi)可見:
表皮:一列薄壁細(xì)胞(多萎縮、脫落)。
根被:3~5列木化細(xì)胞,有的可見壁孔。
皮層:為多層大型薄壁細(xì)胞,含有針晶束的粘液細(xì)胞多見。內(nèi)皮層細(xì)胞壁均勻加厚,通道細(xì)胞對著木質(zhì)部束。內(nèi)皮層外為1列石細(xì)胞,其內(nèi)壁和側(cè)壁增厚。
中柱鞘:緊接內(nèi)皮層,為1~2列薄壁細(xì)胞。
維管束:輻射型維管束,韌皮部束16~22個,各位于木質(zhì)部束的弧角處,木質(zhì)部由木化組織連結(jié)成環(huán)。
髓:由類園形薄壁細(xì)胞組成。
附:山麥冬(土麥冬)Liripe spicata的塊根,藥材似麥冬,但表面粗糙,色澤差,斷面中柱甚細(xì)、纖維性較強(qiáng)。
橫切片:內(nèi)皮層外側(cè)石細(xì)胞少數(shù)散在,各木質(zhì)部束之間為非木化的薄壁組織。
5、砂仁:取陽春砂種子橫切片置鏡下觀察
假種皮:長方形薄壁細(xì)胞,壁不甚清楚。
種皮:表皮細(xì)胞一列,徑向延長,壁較厚,排列整齊,外被厚的角質(zhì)層。下皮細(xì)胞一列,細(xì)胞切向延長,充滿棕色物。油細(xì)胞一列,切向延長,壁薄。色素細(xì)胞層為2~3列多邊形含色素的薄壁細(xì)胞。內(nèi)種皮為一列徑向延長的石細(xì)胞。內(nèi)側(cè)壁極厚,胞腔內(nèi)含硅質(zhì)塊。
外胚乳:細(xì)胞略呈園柱形。輻射狀排列,含淀粉粒。
內(nèi)胚乳:細(xì)胞多角形、不規(guī)則。
胚:居于內(nèi)胚乳的中央,由小多角形細(xì)胞組成,內(nèi)含糊粉粒及油狀物。
(三)理化鑒定:知母根莖中主要含甾體皂甙,其主要鑒別方法如下:
溶血試驗:取兔紅細(xì)胞懸浮液l~2滴于載玻片上,做成臨時裝片,置顯微鏡下觀察,可見許多淡黃色,圓形或橢圓形的細(xì)胞,找到后從蓋玻片一側(cè)邊緣滴加1~2滴知母皂苷生理鹽水提取液,可在另一側(cè)用吸水紙接觸液體,迅速觀察視野中紅細(xì)胞的溶解情況。
泡沫試驗:取知母粉末2g加95%乙醇8m1,約20分鐘后取上清液4ml,置蒸發(fā)皿中蒸干。殘渣加水4ml溶解,分置二試管中,一試管加5%NaOH 2m1,另一試管加5%HCl 2m1,用力振搖一分鐘后,放置片刻觀察,加堿試管泡沫的高度應(yīng)為加酸試管的數(shù)倍。
半夏定性反應(yīng):取粉末lg,以50%乙醇10m1浸半小時,濾過,濾液濃縮至2ml,加0.2%茚三酮試劑、煮沸數(shù)分鐘,顯藍(lán)紫色。
四、實驗報告:
(一) 繪天麻根莖橫切面簡圖。
(二) 記述知母理化反應(yīng)結(jié)果。
(三) 繪麥冬橫切面簡圖。
五、思考題:
(一) 如何用理化方法鑒別含皂苷的中藥?
(二) 半夏的商品幾種?主要性狀及應(yīng)用時有何區(qū)別?如何與水半夏區(qū)別?
(三) 天麻的主要性狀特征是什么?常見哪幾種偽品?
(四) 傳統(tǒng)使用的川貝母有幾種商品規(guī)格?注意其特征。
(五) 麥冬與山麥冬顯微鑒別要點是什么?
實驗十四 動物礦物類生藥
一、目的要求:
二、儀器、用品、藥品
酒精燈、金屬環(huán)、石棉網(wǎng)、三角架、試管夾、吸管、試管、水合氯醛、蒸餾水、石油醚、硫酸(比重1.77)、對二甲氨基苯甲醛硫酸液。
斑蝥、麝香、朱砂、蟾酥、全蝎、龜甲、蛤蚧、鹿茸、羚羊角、牛黃、生石膏、朱砂、雄黃、芒硝等藥材和飲片。
斑蝥粗粉、石膏粗粉、麝香粉末。
三、實驗內(nèi)容與方法
(一) 性狀鑒定:
1、斑蝥Mylabris:南方大斑蝥,成蟲體較大,頭略呈三角形,黑色。復(fù)眼大。觸角鞭狀(多脫落),末端數(shù)節(jié)膨大,末節(jié)基部較前節(jié)細(xì)。背部有革質(zhì)鞘翅一對,可見三條明顯的淡棕色橫紋。鞘翅下有兩片棕褐色膜質(zhì)的后翅。胸腹部黑色。胸部有足三對,腹部呈環(huán)節(jié)狀。有特殊的臭氣,刺激性強(qiáng),不可口嘗。黃黑小斑蝥形體小。觸角末節(jié)基部與第十節(jié)等寬。鞘翅黃色斑紋上具黃色短毛。
2、麝香Moschus:
毛殼麝香:扁園形或橢園形囊狀體,殘存密或稀疏的短毛、白色或灰棕色,從周圍向囊口伏生,中央有一小孔(囊孔)皮膜棕褐色,剖開后,內(nèi)含顆粒狀、粉末狀的香仁和少量細(xì)毛及脫落的內(nèi)皮層膜(習(xí)稱銀皮)。
麝香仁:野生者質(zhì)柔,油潤、疏松。其中顆粒狀者習(xí)稱“當(dāng)門子”,表面紫黑色,油潤光亮,斷面深棕色,粉末狀者棕褐色或黃棕色,有少量脫落的內(nèi)層皮膜和細(xì)毛。飼養(yǎng)者,呈顆粒狀,短條形或不規(guī)則團(tuán)塊,紫黑色或深棕色,并有少量毛和脫落的內(nèi)層皮膜。香氣濃烈而特異。偽品麝香與正品的性狀有何不同?
3、朱砂Onnabaris:
呈大小不一的塊片狀、顆粒狀或粉末狀。鮮紅色,具金剛光澤,半透明。質(zhì)重而脆。
朱寶砂:呈細(xì)小顆粒狀或粉末狀,色紅鮮亮,觸之不染手。
鏡面砂:呈不規(guī)則板片狀,斜方面或長方形,大小厚薄不一。邊緣一整齊,色紅而鮮艷,光亮如鏡面而半透明,質(zhì)較松脆。
豆瓣砂:塊較大,方圓形或多角形,顏色發(fā)暗或呈灰褐色,質(zhì)重而堅。
4、石膏Gyposum Fibrosum:長塊狀,板塊狀或不規(guī)則塊狀,類白色,常附有青灰色或灰黃色片狀雜質(zhì)。有的半透明體重、質(zhì)松軟,手捻能碎,易縱向斷裂,縱斷面具有纖維樣紋理和絲樣光澤。橫斷面平滑,味淡。
5、蟾酥Venenum Bufonis團(tuán)蟾酥多呈扁園形,黑褐色,不透明,角質(zhì),較脆,無臭,舌尖嘗之有麻舌刺激感;片蟾酥的形態(tài)、顏色、外部特征同團(tuán)蟾酥有何不同。
6、羚羊角Cornu Saigae Tataricae長園柱狀、弓形彎曲;嫩者光潤如玉,有血絲,老枝有細(xì)縱裂紋;下部有10—20個手握合適的隆起環(huán)脊;注意橫斷面骨塞的邊緣,上部無骨塞部分對光觀察有“通天眼”直達(dá)尖端;質(zhì)硬、鎊片白色透明,具絲狀波曲的細(xì)紋。
7、鹿茸Cornu Cervi Pantotrichum“二杠茸”外皮紅棕色,表面密生紅黃色細(xì)茸毛,鋸口黃白色,外圍無骨質(zhì),中部密布細(xì)孔!叭砣住毕虏慷嘤锌v棱線及瘤狀突起,茸毛較稀。
8、參照講義觀察全蝎、蛤蚧、龜甲、鱉甲、牛黃、芒硝、赭石、雄黃等藥材。
(二) 顯微鑒定
取麝香粉末用水合氯醛裝片觀察
分泌物團(tuán)塊:由多數(shù)顆粒狀物聚集而成,黃色、淡黃棕色或棕色,包埋或有方形八面體或簇狀的半透明結(jié)晶。
油滴:類圓形,散在或存在于團(tuán)塊中。
表面組織碎塊,無色或淡黃色,半透明有多條縱紋。
(三) 理化鑒定
1.、斑蝥:
取斑蝥粗粉少許,進(jìn)行微量升華,鏡下觀察升華物,可見無色透明的柱形或棱形斑蝥素結(jié)晶。并作下述試驗。
將升華物用石油醚洗2~3次,加硫酸2~3滴,微熱,轉(zhuǎn)入試管內(nèi),小火加熱至發(fā)生氣泡,稍冷,加二甲氨基甲醛硫酸溶液l滴,顯櫻紅色或紫紅色。
2、生石膏:取生石膏粗粉約2g,放入干燥試管中,用塞子塞住管口,于酒精燈上灼燒,管壁上有水珠凝結(jié),同時石膏變的不透明。為什么?
四、實驗報告
(一) 繪麝香顯微特征圖
(二) 記述斑蝥理化鑒定反應(yīng)。
五、思考題
(一) 麝香的商品規(guī)格和性狀鑒別特征是什么?
(二) 什么是二杠茸、三岔茸、單門、蓮花?
(三) 羚羊角的性狀鑒別特征有哪些?
(四) 朱砂、石膏、麝香、斑蝥的化學(xué)成分是什么?
實驗十五 中成藥的顯微鑒定
我國目前所用的中成藥、大部分由生藥的粉末制成。由于品種多、故鑒定其中組成時如采用理化鑒定方法,可因各類成份的交叉而專屬性不強(qiáng)而難以達(dá)到鑒定目的。但其顯微特征則各生藥均不相同,因此,用粉末顯微特征作為依據(jù),加以鑒定,是一種簡便可行的定性方法。
在鑒定時,取樣方法因劑型而異:
1、散劑:挑取少量粉末裝片。
2、水丸或片、錠、切開后在剖面中部和刮取粉末或用研體將丸、片等研碎、挑取少量裝片,如有朱砂包衣、也可將丸衣及丸心分別制片。
裝片的方法同生藥粉末,以蒸餾水裝片觀察淀粉粒,用水合氯醛試液不加熱裝片觀察菊糖,透化裝片觀察其它組織。
一、目的要求:
掌握中藥成藥顯微鑒定的方法。
二、儀器用品、藥品
水合氯醛液,蒸餾水、臨時裝片用具,鑷子,酒精燈,黨參、白術(shù)、茯苓、甘草、豬苓、澤瀉、肉桂細(xì)粉;
四君子丸:黨參、白術(shù)、茯苓、甘草(2:2 :2:1)水丸。
五苓散:茯苓、豬苓、白術(shù)、澤瀉、肉桂(3:3;3:5:2)粉劑。
三、實驗內(nèi)容與方法:
(一)取各單味藥材粉末制成臨時裝片,鏡檢后,制定該藥的顯微鑒定標(biāo)準(zhǔn)。
(二)取四君子丸按上述方法裝片,鏡檢、觀察下列特征:
1.菌絲無色或棕色;不規(guī)則分枝狀菌絲團(tuán)塊(茯苓)。
2.纖維束周圍薄壁細(xì)胞中含草酸鈣方晶,形成晶鞘纖維(甘草)。
3.草酸鈣針晶細(xì)小,不規(guī)則地充塞于薄壁細(xì)胞中(白術(shù))。
4.乳管碎片,或含顆粒狀物(黨參)。
(三)取五苓散少量,裝片鏡檢,觀察下列特征:
1.菌絲無色或淡棕色,菌絲團(tuán)不規(guī)則分枝狀。(茯苓)。
2.草酸鈣方晶,正八面體形,菌絲粘成團(tuán)。(豬苓)。
3.石細(xì)胞類園形成類方形,壁一面菲薄(肉桂)。
4.草酸鈣針晶細(xì)小,不規(guī)則地充塞于薄壁細(xì)胞中(白術(shù))。
5.薄壁細(xì)胞類園形,有橢園形紋孔,集成紋孔域(澤瀉)。
四、實驗報告:
繪圖示明顯中成藥鏡檢所見特征。
五、思考題
(一)二妙丸由蒼術(shù)、黃柏(1 : 1)組成,你能寫出其中各味藥的鑒定特征嗎?
(二)逍遙丸由柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)、白芍、茯苓、甘草、薄荷(1:l:1:l:l:0.8:0.2)組成,你能寫出其中各味藥的鑒定特征嗎?
實驗十六 生藥的綜合鑒定
一、目的要求
初步了解生藥鑒定的程序和方法,練習(xí)書寫中藥鑒定報告。
二、實驗報告
寫出所給藥材的綜合鑒定報告書。
附錄一
顯微繪圖法
在顯微鑒定和研究工作中,對于觀察到的物象除了應(yīng)作文字記錄外,也應(yīng)描繪其圖形,以供日后查詢和核對之用。因為圖形能更好地表示實物的形態(tài)特征,有助于文字?jǐn)⑹龅牟蛔恪?/p>
顯微繪圖的方法主要有徒手繪圖簡法、網(wǎng)格繪圖法、利用顯微描繪器的繪圖法和投映繪圖法等四種,F(xiàn)在常用的徒手繪圖法及描繪器的繪圖法簡介如下。
一、徒手繪圖簡法:
欲將所觀察的物象記錄下來,可采用最簡單的按比例繪制的繪圖法。將圖紙放在顯微鏡的右側(cè),用左眼觀察內(nèi)物象,右眼注視圖紙,用繪圖鉛筆(2H或3H)輕輕描繪物象的輪廓和內(nèi)部結(jié)構(gòu)注意按比例畫,以免失真。審查圖稿,詳加修改,最后用削尖的繪圖鉛筆(2H或3H)描繪,要求線條均勻、清晰.切勿涂抹。
畫在繪圖紙上的布局,亦應(yīng)適當(dāng)安排,如圖的內(nèi)容復(fù)雜,圖形要求畫得大一些,一張繪圖紙上就只畫一圖,可將圖安排在繪圖紙的中央,略偏左側(cè),右側(cè)以便注字;如圖的內(nèi)容較為簡單,一張繪圖紙上可以安排兩個畫,圖形可略畫小些。
注字要求平行畫橫線向右側(cè)引出,所注名稱應(yīng)上下列齊,不要斜線交叉,要求畫圖均勻整齊。每個圖的下面,應(yīng)注明圖的名稱和放大倍數(shù)。
二、利用顯微描繪器的繪圖法:
顯微描繪器是利用兩組光學(xué)系統(tǒng)配合,將顯徽鏡中的物象和圖畫的象迭合,同時送到觀察者眼中,以利準(zhǔn)確描繪的裝置。
顯微描繪器的式樣很多,著重對阿培式描繪器加以說明。
(一)阿培式描繪器的結(jié)構(gòu)和使用
阿培描繪器由棱座桿和套環(huán)以及帶長柄的平面鏡組成。
使用方法:
1.將目鏡從鏡筒中取出,裝上描繪器,用左面的螺絲輕輕夾緊,將棱鏡座桿翻到后面,再將目鏡插入鏡筒。
2.將反光鏡桿從右側(cè)插入描繪器的孔中,注意將孔中的銷子和桿上的口對準(zhǔn),推到底。
3.轉(zhuǎn)動反光鏡,使鏡軸上的刻線和連接塊上的刻線對齊。
4.調(diào)節(jié)顯微鏡使成象清晰。
5.將棱鏡桿翻至前面,調(diào)節(jié)燕尾使其盡可能靠近目鏡,此時即可同時看到物體和旁邊的紙張。
注意事項:
1.調(diào)節(jié)物體視野與繪圖紙上的亮度相等是極其重要的。
2.當(dāng)物體視野較亮?xí)r,可縮小聚光鏡光欄,或轉(zhuǎn)動顯微鏡底部的反光鏡,以減少反射光強(qiáng)或用臺燈來增加紙上的照明。
3.當(dāng)物體視野較暗,并且無法再增加物體的照明時可選取適當(dāng)?shù)臑V色片裝上。以減少紙上反射而透過棱鏡的光強(qiáng)。
裝在目鏡上方的棱鏡是一塊立方形玻璃斜向切割成兩塊直角棱鏡合成,棱鏡ABC的接合 面AB上鍍銀,僅中央留有一個圓形小孔,顯微鏡中的物象通過這個小孔進(jìn)入觀察者的眼中,而畫面的象則經(jīng)面鏡反射到棱鏡ABC的鍍銀面AB上,再經(jīng)反射而進(jìn)入觀察者眼中。因此,觀察者可同時看到顯微鏡中的物象和圖面的象互相疊合在一起。
(二)圖形放大倍數(shù)的計算和調(diào)整;
如上安裝好描繪器后,把臺微尺的刻度線畫在紙上(一般畫大格線,倍數(shù)很高時畫小格
線),用直尺測量刻度線的間距,除以臺微尺刻度線間的實際距離,即得圖形的放大倍數(shù)。如紙面大格線間距=10mm,則放大倍數(shù)=10÷0.1=100,余類推,有人把顯微鏡的放大倍數(shù)當(dāng)作圖形的放大倍數(shù),這是錯誤的。放大倍數(shù)以用整齊的數(shù)字為宜,如500、400等.如計算出來的放大倍數(shù)不為整齊數(shù)字,如235,則可伸縮鏡筒或調(diào)節(jié)繪圖紙面的高低,使放大倍數(shù)變?yōu)檎R數(shù)字。
阿培式描繪器的光學(xué)系統(tǒng)如圖:
(三)描繪方法:
先把目的物(如細(xì)胞、淀粉粒)的輪廓描出來,再把較明顯的特征如放大的紋孔或較粗的層 紋等描出。當(dāng)描繪一個視野容納不下的大形或長形物象時,可以先描繪完一個視野,然后微微移動標(biāo)本片,再描繪連續(xù)的邵分。需要注意的是,移動前要確定2~3個明顯的標(biāo)志,以免在移動后物象與圖象不能銜接;移動時標(biāo)片和圖紙要平行移動,每次移動距離不宜超過2/3個視野。
(四)草圖的加工:
利用顯微描繪器描好的草圖中,有些張條可能不夠完整圓滑或精確銜接,有些細(xì)節(jié)由于在 描繪器中看不清楚而未能描出,所以在草圖描好后,還要卸豫描繪器,仔細(xì)觀察顯傲鏡中的物
象并和圖形核對,作進(jìn)一步的加工,補(bǔ)充必要的細(xì)節(jié),如細(xì)胞壁上的紋孔和層紋等,特別要注意細(xì)胞壁的厚度是否準(zhǔn)確。在進(jìn)行圖形的加工補(bǔ)充時,可用削尖的鉛筆用重筆勾劃,但不必擦掉原來畫的線條。
附錄2
顯微測量法
鑒定藥材時,經(jīng)常要測量某些物體的大小、如細(xì)胞,毛茸、淀粉粒、結(jié)晶等的長度和寬度。這就需要采用顯微長度測量的方法。顯徼長度測量需要用兩種標(biāo)尺,鏡臺測微尺和目鏡測微尺。
一、鏡臺測微尺(載臺測微尺):簡稱臺微尺,它的外形和載玻片相似,中央部分印有一條微細(xì)的標(biāo)尺,標(biāo)尺全長1mm分10大格,每一大格又分成10小格,因此每小格的長度是0.01mm即10μ。標(biāo)尺的外圍有一黑色的小圓環(huán),以便在顯微鏡下尋找標(biāo)尺的位置。標(biāo)尺上面往往附有一個圓形的蓋玻片以資保護(hù)。也有的標(biāo)尺10大格中僅第一大格分成10小格的。還有的標(biāo)尺全長2mm分成20大格,其中僅第一大格分成10小格的。(圖一)。
鏡臺測微尺是顯微長度測量的標(biāo)準(zhǔn),它并不直接用來測量物體的長度,而是用來校正目鏡測微尺和其它有關(guān)的測量工具的,它的質(zhì)量好壞對各種顯微測量以及顯微繪畫放大倍率的計算等都有很大的關(guān)系。因此,應(yīng)選擇刻度線條纖細(xì)、均勻而清晰的,長度準(zhǔn)確性可靠的進(jìn)行核對。
二、目鏡測微尺:簡稱目微尺,它是放在目鏡內(nèi)的標(biāo)尺,是一個圓形的小玻片,形狀和圓形的蓋玻片相似而較厚,一面印有標(biāo)尺,標(biāo)尺的長度通常是1cm,分為100小格;也有全長5mm分為50小格的。使用時,擰開目鏡的上透鏡,把目微尺輕輕地放在目鏡中部的環(huán)形光闌上,須注意使用時刻度的一面朝下,這樣在觀察時標(biāo)尺的數(shù)字才不會是反的。(圖二)。
三、校正:目鏡測微尺是用來直接測量物體的長度的,但是它的刻度所代表的長度,是依顯微鏡的放大倍數(shù)而改變的。因此,在使用前必須用臺微尺來校正,以確定在使用此顯微鏡及特定的止鏡物鏡和鏡筒長度時,目微尺上每一小格所代表的實際長度。校正的方法是將目微尺放入目鏡內(nèi),插入境筒,必要時轉(zhuǎn)動目鏡上透鏡,至能清楚地看到標(biāo)尺為止,再將臺微尺放在鏡臺上,用低倍鏡找到臺微尺的刻度并適當(dāng)調(diào)焦到能同時看清目微尺和臺微尺的刻度。轉(zhuǎn)動目鏡使兩種標(biāo)尺相互平行。再移動臺微尺,使位于目微尺的稍下方,并使兩種標(biāo)尺的一端刻線互相對齊并重疊,然后觀察并記錄臺微尺的另一端與目微尺另一端那一根刻度對其并重疊,數(shù)一數(shù)兩者對其后各自的個數(shù)并計算。圖三例如:
假設(shè)在用6×目鏡和10×物鏡,鏡筒不伸長時,目微尺和臺微尺對齊后,看到臺微尺100小格=目微尺60小格,又知臺微尺100小格=1000μ,側(cè)目微尺一小格所代表的長度(校正值)=1000÷60=16.7μ。
如使用40×物鏡,其余不變,此時由于放大倍數(shù)的增加,視野縮小,只能看到臺微尺的一部分。對齊后看到目微尺100小格=臺微尺38小格即380μ,此種情況下目微尺一小格所代表的長度(校正值)=380μ÷100=3.8μ。
進(jìn)行校正時,如果一根標(biāo)尺的末端刻線與另一根標(biāo)尺的刻線不對齊重疊,可改變鏡筒長度 使之對齊重疊。如筒長不能改變,則可在標(biāo)尺末端刻線附近尋找另一對互相重疊的刻線,如前記錄并計算。
四、實物長度的測量:將準(zhǔn)備測量的標(biāo)本放在鏡臺上,用校正時所用的目鏡和物鏡來觀察,然后轉(zhuǎn)動目鏡使其中測微尺的刻度疊在目的物上,觀察該物共長若干格乘校正值即得目的物的實際長度。例如:采用前述的6×目鏡,40×物鏡,鏡筒不伸長時,目微尺每一小格的校正值是3.8μ。測量目的物長26小格,測目的物長度=3.8μ×26=98.8μ。小數(shù)點以后四舍五入得個整數(shù)即可。
測定實物時,應(yīng)盡量使用高倍目鏡及物鏡,此時目微尺每一小時格所代表的長度值較小,測量誤差亦較小。只有在測量高倍物鏡視野中容納不下的物體時,才使用低倍鏡。
附錄三
組織透化法
中草藥的組織構(gòu)造,常因細(xì)胞內(nèi)含有多量的內(nèi)含物、色素或因細(xì)胞皺縮而看不清楚,須用適當(dāng)?shù)脑噭┨幚。以溶解、除去或使?xì)胞內(nèi)含物變?yōu)橥该,或使色素氧化退色,以及使?xì)胞膨脹而透明以利觀察。這種試劑稱組織透化劑,常用透化劑主要有兩類:
(一)稀甘油:能浸潤滲入細(xì)胞壁或其內(nèi)含物中,由于它們的折射率比水高,因而起到使組織透化的作用。
(二)水合氯醛溶液:為最常用的透化劑,能迅速滲入組織,使干燥而收縮的細(xì)胞重新膨脹,并能溶解多數(shù)細(xì)胞內(nèi)含物如淀粉、蛋白質(zhì)、葉綠素、揮發(fā)油、樹脂等,而使細(xì)胞組織變得通明、清晰。
水合氯醛溶液制透化標(biāo)本片:
方法l:將需透化觀察的材料放在載玻片上,加水合氯醛溶液l~2滴,加蓋玻片,在小火焰上緩緩加熱,火焰高度1cm為宜,不超過2cm,加熱時用手拿住載玻片一端的兩側(cè),保持載玻片的水平狀態(tài),在火焰上緩緩地左右移動,保持透化液微沸騰狀態(tài)并隨著透化液蒸發(fā)隨時由蓋玻片一側(cè)補(bǔ)充液體(此時應(yīng)注意勿使火力過猛,以免液體突然汽化而使蓋玻片崩落、破碎)。加熱約1分鐘左右可放置待涼后在顯微鏡下檢查,若透化不完全,可再反復(fù)加熱,直至材料透明。
方法2:為避免蓋玻片崩落。透化時也可不加蓋玻片。于材料上滴加水合氯醛溶液后,同上法用手拿住載玻片在小火焰上緩緩加熱,此時因水合氯醛蒸發(fā)快,必須隨時補(bǔ)加液體或蒸餾水,以免析出結(jié)晶,直至材料透明,放冷,蓋上蓋玻片,再行觀察。
若材料較大,且厚,如葉片、萼片、花瓣等用上法不能使材料完全透明時,可剪取所需材料8mm見方小塊放在試管中,加透化液2~3ml,在沸騰的水浴中加熱約15~20分鐘,至材料呈現(xiàn)透明時,將材料小心取出放載玻片上,切成小塊,加透化液蓋上蓋玻片即可觀察。
附錄四
常用試劑及配置方法
(一)化學(xué)成分定性反應(yīng)試劑
1、5%α-萘酚試劑
α-萘酚5g,加乙醇100ml溶解,如不澄清,可過濾,裝棕色瓶備用;
2、費林(Fehling)試劑
甲液:6.92g硫酸銅結(jié)晶、溶于100ml水中。
乙液:34.6g酒石酸鉀鈉的結(jié)晶、10g氫氧化鈉共溶于100ml水中,貯藏于帶橡皮塞的試劑瓶中。
使用時取甲、乙二液等量混合。
3、10%鹽酸 鹽酸27ml,加蒸餾水使成100ml。
4、10%氧氧化鈉 氫氧化鈉10g,加蒸餾水使成100ml。
5、苦味酸鈉試紙 取濾紙條浸入苦味酸飽和水溶液中,浸透后取出晾干,再浸入10%碳酸鈉水溶液中,迅速取出,晾干即得。
6、普魯土藍(lán)試劑
(1)10%氫氧化鉀試液 氫氧化鉀6.5g,加蒸餾水使成100ml。
(2)10%硫酸亞鐵水溶液 取硫酸亞鐵結(jié)晶8g。加新沸過的冷蒸餾水使成250ml。應(yīng)臨用時新鮮配制。
(3)10%鹽酸溶液。
(4)5%三氯化鐵溶液 三氯化鐵5g,加適量的蒸餾水使溶解成100ml。
7、1%三氯化鐵試劑 三氯化鐵1g,加蒸餾水使溶解成100ml。
8、1%氫氧化鈉試液 氫氧化鈉1g,加蒸餾水使成100ml。
9、1%醋酸鎂甲醇液 醋酸鎂1g,加甲醇100ml。
10、1%三氯化鋁乙醇液 三氯化鋁1g,溶解于100ml乙醇中。
11、0.9%氯化鈉溶液 氯化鈉0.09g,加水100ml。
12、1.8%氯化鈉溶液 氯化鈉1.8g,加水100ml。
13、2%紅細(xì)胞生理鹽水混懸液 兔血10ml,放在盛有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖10分鐘,除去纖維蛋白,把脫纖維血倒在離心管中,加生理鹽水混勻后,離心,使血細(xì)胞下沉,反復(fù)2~3次,至生理鹽水不再顯紅色,取以上紅細(xì)胞2ml,加生理鹽水100ml,稀釋成2%的紅細(xì)胞混懸液(本液須置冰相保存,存期2~3天)。
14、0.15%三氯化鐵-冰醋酸溶液 1%三氯化鐵溶液0.5ml,加冰醋酸100ml。
15、醋酸鉛試液 取醋酸鉛9.5g,加新煮沸過的冷蒸餾水使成100ml。
16、堿式醋酸鉛試液 取一氧化鉛14g,加水100ml研成糊狀,用水10ml洗入玻璃瓶中加醋酸鉛溶液(醋酸鉛22g,加蒸餾水70ml制成)70ml,用力振搖5分鐘后,時時振搖,放置7天,濾過,加新沸過的冷蒸餾水,使成100ml。
17、稀醋酸 冰醋酸18ml加水稀釋至300ml。
18、2%3,5-二硝基苯甲酸試液(Kedde,試劑)。1ml2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液,3ml 4%氫氧化鈉(鉀)乙醇液及7ml蒸餾水混勻。臨用時配制。
19、1mol/L鹽酸羥胺甲醇液 鹽酸羥胺6.95g,加甲醇100ml。(新鮮配制)
20、1.1mol/L氫氧化鉀甲醇試液 取6.2g氫氧化鉀溶于l00ml甲醇中即得。
21、1%三氯化鐵乙醇液 三氯化鐵lg,加乙醇使溶解成100ml。
22、1%鹽酸溶液 鹽酸2.7ml,加蒸餾水使成100ml。
23、碘化鉍鉀試劑(Drogondorff試劑)
甲液:次硝酸鉍0.85g,溶解于蒸餾水40ml、冰醋酸l0ml的混合液中。
乙液:碘化鉀8g,溶解于20ml水中(分別貯于棕色瓶內(nèi))。
作沉淀試劑:使用前將甲、a,l~i液等量混合。
作噴霧試劑:甲、乙液各5ml與醋酸20ml及水100ml混合。
24、碘化汞鉀試劑(Magner試劑) 二氯化汞3.4g,溶解于150ml水中;碘化鉀12.5g,溶解于25ml水中,然后將兩液混和搖勻,再加水稀釋至250ml。
25、碘化鉀碘試劑(Wagner試劑) 碘化鉀1.5g,碘0.5g,溶解于25ml水中。
26、硅鎢酸試劑(Bertrad試劑) 硅鎢酸鈉5g,溶于l00ml水中,加鹽酸少量至pH2左右。
27、磷鉬酸試劑(Sonnenschein試劑) 磷鉬酸鈉10g溶于l00ml乙醇中。
28、氯化鈉-明膠溶液 氯化鈉10g,明膠1g加水使溶解成100ml。
29、飽和溴水試劑 溴水2~3ml,置于用凡土林涂塞的棕色玻璃瓶中,加水100ml使成飽和溶液。置暗處保存。
30、飽和石灰水 取生石灰,加水振搖使成飽和溶液,放置,取上清液。
31、0.2%茚三酮試劑 茚三酮0.2g,加乙醇溶解成100ml。
32、0.5%硫酸銅試液 硫酸銅0.5g,加水使溶解成100ml。
33、1%氫氧化胺試液 氫氧化胺2ml,加水200ml。
34、1%香莢藍(lán)醛試液 香莢藍(lán)醛lg,加濃硫酸100ml。
35、亞硝酸汞試液 取汞lml(重13.6g),小心溶于9ml濃硝酸(比重1.5g)中,全部溶解后加水10ml。
36、氨制氧化銅試液 硫酸銅10g,加水100ml,溶解后加NaOH溶液適量使有氫氧化銅沉淀產(chǎn)生,過濾后沉淀用冷水洗凈,再滴加數(shù)滴至洗液不再顯硫酸鹽反應(yīng),將沉淀用少量氨試液溶解即得。
37、1%羧甲基纖維素鈉溶液 取lg羧甲基纖維素鈉,加蒸餾水100ml,溫?zé)崾怪芙,放置,取上清液備用?/p>
(二)顯微制片及顯微化學(xué)反應(yīng)試劑
1、水合氯醛試劑 水合氯醛50g,加蒸餾水15ml、甘油10ml使溶解。
2、稀甘油 取甘油33ml,加蒸餾水100ml,再加樟腦少許或液化苯酚l滴,即得。
3、甘油酒精液 甘油與50%乙醇等量混合。
4、斯氏液(甘油-醋酸液) 水、甘油及36%醋酸等量混合。
5、間苯三酚試液 間苯三酚1g,加95%乙醇100ml。(本液應(yīng)置玻璃塞瓶內(nèi),暗處保存)
6、蘇丹Ⅲ溶液 蘇丹Ⅲ 0.1g,加95%乙醇50ml。
7、稀碘液 0.5g碘化鉀溶于少量水中,加入1g碘,溶解后加水至100ml。
8、FAA固定液(福爾馬林-醋酸-酒精混合液)取50%~70%乙醇90ml,福爾馬林(36%~40%)5ml,冰醋酸5ml,混合即得。
9、番紅染色液 取番紅1g,溶于100ml50%乙醇中,即得。
10、固綠染色液 取固綠0.5g,溶于100ml95%乙醇,即得。
附錄五
石蠟切片法
一、取材與固定:將新鮮材料切成適當(dāng)大小,一般以不超過0.5~1mm3為宜。材料切好后,立即投入固定液中,固定的目的是使植物組織很快被殺死,以保持其生科學(xué)研究時狀態(tài)。
固定的時間須視材料而定,常用的固定液為F.A.A固定液。干燥材料不需要固定,可用水或甘油浸軟后,切成小塊即行脫水。
二、沖洗:材料經(jīng)固定后,必須充分除去固定液,可以流動沖洗或以清水換洗數(shù)次,使固定液全部除凈。
三、脫水:一般用乙醇脫水,每次調(diào)換乙醇濃度的時間視材料而定,材料堅硬者,每隔3小時為宜。乙醇濃度通常為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%(二次)。
四、透明:二甲苯為透明劑。一般將二甲苯用無水乙醇配成25%、50%、75%的濃度至純二甲苯,2~3小時更換一次,至材料透明為止。
五、浸蠟:材料脫水至二甲苯時,可加少量石蠟;以后再逐漸增加熔融石蠟至全部為石蠟浸透止,此操作須在熔蠟爐或恒溫箱中進(jìn)行,一般溫度以較石蠟溶點高2~4℃為宜,約3小時調(diào)蠟一次。
六、包埋:將燒融石蠟倒在小紙盒(或氣埋模子)內(nèi),立即將已浸透石蠟的材料放在紙盒中央排列好位置,待石蠟漸泠凝成塊狀,或石蠟表面冷凝時,即抽入水中,使其迅速冷卻成硬塊。
七、切片:將包埋的石蠟塊切成四方形或略長方形,材料在中央,其四周邊距離相等而平整,將下端用蠟粘于金屬固定器或木塊上使之牢固。夾木塊于旋轉(zhuǎn)切片機(jī)上,另將刀裝妥,并夾緊,然后刀口與蠟塊接近,再調(diào)節(jié)厚度(一般為10~5μm),切片,將切下的蠟片,置于切片盤中。
八、貼片:取蛋白粘貼劑少許,置于潔凈的玻片上,均勻涂沫后,加蒸餾水一滴,將蠟片的光滑面置于玻片上,移至烘片臺上,待蠟片伸展平直后,倒去多余的水,烘干。
九、溶蠟:將烘干的玻片置于二甲苯中,溶去石蠟,數(shù)分鐘后,移入二甲苯與無水乙醇的等量混合液中,再移入無水醇中,各需數(shù)分鐘。
十、染色:材料復(fù)水至與染色液濃度相等時可染色,常用番紅——亮綠染色,染色時間須視染色液和材料而定,染色過程在染色缸中進(jìn)行。
十一、脫水與封藏:依次加乙醇、無水乙醇、二甲苯脫水至切片透明清晰為止。然后加加拿大樹膠1~2滴于切片上,小心蓋上蓋玻片。在載玻片左方貼上標(biāo)簽,注明切片名稱,切面和日期即可。
附1:F.A.A固定液的配置
50%或70%乙醇 90ml
冰醋酸 5ml
40%甲醛5ml
附2:蛋白粘劑的配制
新鮮雞蛋白 25ml
甘油 25ml
水楊酸鈉0.5g