中國幽門螺桿菌研究:抑制幽門螺桿菌中藥的篩選

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp)于1983年由Warren和Marsgydjdsj.org.cn/shouyi/hal首次從胃粘膜活檢標(biāo)本中分離并命名。越來越多的證據(jù)支持Hp是胃炎的致病菌，Hp感染與消化性潰瘍的發(fā)病也密切相關(guān)。中醫(yī)藥治療慢性胃炎及消化性潰瘍?nèi)〉昧肆己眯Ч�，為進(jìn)一步提高療效，探討其機(jī)理，我們從不同性味，不同作用的200種中藥中作初步篩選，發(fā)現(xiàn)其中38種中藥對Hp有抑菌作用�，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料和方法

1.gydjdsj.org.cn/yishi/1　Hp培養(yǎng)鑒定

患者因上消化道癥狀行胃鏡檢查226例，并診斷為慢性胃炎或消化性潰瘍。其中男175例，女51例，年齡16歲～70歲，平均39.1歲，病程3月～2a。本組病例排除了肝、腎和血液系統(tǒng)疾病。胃鏡檢查前1周，患者未用抗生素，鉍劑和影響胃酸分泌的藥物。Olympus胃鏡及活檢鉗均用2％戊二醛浸泡消毒15min，使用前用清水沖洗。選慢性胃炎和消化性潰瘍患者，用19K活檢鉗在胃竇部距幽門5cm范圍內(nèi)取胃粘膜標(biāo)本2塊，以無菌手續(xù)接種在改良Skirrow培養(yǎng)基（含萬古霉素10mg/L、多粘素B2500IU/L、TMP5mg/L)。培養(yǎng)基放在10％CO₂、5％O₂和85％N₂條件下，37℃培養(yǎng)72h。226例均作了Hp培養(yǎng)。Hp菌落為半透明、灰色、濕潤、稍隆起圓形。菌體革蘭染色陰性，呈彎曲，“S”形或“海鷗”形。生化鑒定：尿素酶陽性，氧化酶陽性，在三糖鐵培養(yǎng)基上不發(fā)酵。不產(chǎn)H₂S，醋酸鉛試紙法H₂S（＋)，對1％甘氨酸部分耐受，不還原硝酸鹽，不水解馬尿酸。

1.2　山藥抑菌試驗(yàn)

中藥煎液制備　將單味中藥分別浸泡，于燒杯中60min，在100℃條件下煎煮30min，取1：1（1g中藥煎出1ml藥液)煎液存放于無菌試管備用。

抑菌試驗(yàn)材料　改良Skirrow培養(yǎng)基，Hp懸液（10⁸/ml)，無菌海綿塊（圓形，厚2.5mm，直徑6.5mm，吸液量30μl/塊)，中藥煎液，5％NaCl。方法：將Hp懸液均勻接種在改良Skirrow培養(yǎng)基上，用海綿塊吸取中藥液分別放置于上述培養(yǎng)基，5％NaCL未出現(xiàn)抑菌環(huán)，無抑制Hp作用。其抑菌環(huán)的大小，顯示出不同中藥對Hp的不同抑菌程度，結(jié)果見表1。

表1　中藥對Hp抑菌結(jié)果

2　討論

Hp感染與慢性胃炎及消化性潰瘍的關(guān)系越來越受到重視。本組226例中60.2％檢出Hp，與文獻(xiàn)報(bào)道接近。多年來國內(nèi)用中醫(yī)藥辨證治療胃炎和消化性潰瘍?nèi)〉昧肆己眯Ч�，為探討Hp這一致病因素與中藥治療胃胃及消化性潰瘍間的作用，我們做了常用中藥對Hp的抑菌實(shí)驗(yàn)，中藥均選自不同性味、不同作用的單味藥。在200種藥中篩選出38種有不同大小的抑菌環(huán)出現(xiàn)，說明有抑菌作用。5％NaCl作為高滲透壓作用的對照表明，未見抑菌環(huán)出現(xiàn)，無抑菌作用，故可排除中藥煎劑可能產(chǎn)生的高滲透壓作用而出現(xiàn)假性抑制Hp生長作用。

經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)初步篩選的38種中藥對Hp有抑菌作用，其中以黃芩、大黃、黃柏、桂枝、地丁、玫瑰花、土茯苓、高良姜、烏梅、山楂等抑菌作用最明顯，最大抑菌環(huán)為25mm。張琳等曾用牛津杯法其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見黃連抑菌作用明顯，我們所作結(jié)果與之相符。但其所見黃連抑菌環(huán)達(dá)41mm,可能與實(shí)驗(yàn)條件、方法等不同有關(guān)。我們所見黨參、枸杞子對Hp無明顯抑菌作用，與之報(bào)道不符；我們所見土茯芩、玫瑰花、高良姜等抑蓖作用明顯，但尚未見報(bào)道。

臨床實(shí)踐中，我們體會到選用對Hp有良好抑菌作用的中藥綜合辨證論治組方，對于患者臨床癥狀的減輕和消除，病理組織學(xué)的改善均有良好的促進(jìn)作用。梁方信等報(bào)道Hp陽性的胃病51例后，66.7％Hp仍為陽性，而94.1％患者可達(dá)到組織學(xué)康復(fù)或好轉(zhuǎn)。我們在臨床中亦發(fā)現(xiàn)有相同的一些病例，但對這部分Hp陽性，無臨床癥狀，胃鏡下所見及病理組織學(xué)查檢已見有明顯好轉(zhuǎn)的患者繼續(xù)治療，則發(fā)現(xiàn)Hp仍可轉(zhuǎn)為陰性。因此，我們考慮Hp感染只不過為胃炎、消化性潰瘍的致病因素之一。中醫(yī)藥治療疾病確有其獨(dú)到之處，在注重局部病變的同時(shí)，更注重整體的調(diào)節(jié)。所以，對于慢性胃炎和消化性潰瘍的治療，Hp應(yīng)受到重視，但更應(yīng)切記辨證論治原則。

本結(jié)果為陽性胃炎和消化性潰瘍的治療提供了針對Hp感染的用藥依據(jù)，而復(fù)方制劑與不同劑型的中藥對Hp的清除作用，目前仍在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究中。