南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗教學(xué)教案
課程名稱病理學(xué) 授課章節(jié) 免疫組織化學(xué)
授課對象本 科 授課學(xué)時 4學(xué)時
授課方式實驗課 教材或講義 病理學(xué)（第七版)
一、實驗?zāi)康呐c要求
1、掌握免疫組化的技術(shù)方法。
2、掌握免疫組化檢測的意義。
二、實驗內(nèi)容
1、HBsAg
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
細胞定位：胞漿
鏡下觀察：在部分肝細胞胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，HBsAg陽性，說明肝細胞內(nèi)有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBsAg) 20× 病毒性肝炎(HBsAg) 40×
2、HBcAg
乙型肝炎核心抗原(HBcAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
細胞定位：核為主/核周胞漿
鏡下觀察：在部分肝細胞核和核周胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，HBcAg陽性，說明肝細胞內(nèi)有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBcAg) 20× 病毒性肝炎(HBcAg) 40×
3、細胞角蛋白Cytokeratin CK
CK主要標(biāo)記角化上皮、復(fù)層鱗狀上皮、復(fù)層上皮、增生的角化細胞和單層上皮，用于鱗癌，各種腺癌，移行細胞癌陽性標(biāo)記。在鑒別診斷中可聯(lián)合EMA和CEA等指標(biāo)進行上皮性腫瘤與非上皮性腫瘤的鑒別診斷，也可以用于各種癌的研究。
細胞定位：胞漿
鏡下觀察：在鱗癌癌細胞胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，CK陽性。
鱗狀細胞癌(CK) 20×鱗狀細胞癌(CK) 40×
4、上皮膜抗原Epithelial Membrane Antigen (EMA)
EMA是一組糖蛋白，廣泛分布在各種正常上皮細胞膜上及其上皮源性腫瘤細胞中，分布范圍與細胞角蛋白相似，但對內(nèi)臟腺上皮的表達優(yōu)于細胞角蛋白。因此對上皮源性腫瘤，尤其是低分化腺癌，最好與細胞角蛋白聯(lián)合應(yīng)用，可提高陽性率。
細胞定位：胞漿
鏡下觀察：在鱗癌癌細胞胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，EMA陽性。
鱗狀細胞癌(EMA) 20×鱗狀細胞癌(EMA) 40×
5、白細胞共同抗原（LCA、CD45)
LCA是造血細胞的特異性標(biāo)記，主要分布在T、B細胞、單核細胞、粒細胞和前體細胞表面，一般不存在于非造血組織中。因此是區(qū)別淋巴瘤，白血病和非造血組織腫瘤的一個良好標(biāo)記物。
細胞定位：胞漿。
鏡下觀察：可見淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在淋巴細胞（包括T、B細胞)、單核細胞胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，LCwww.med126.comA陽性。
正常淋巴結(jié)(LCA、CD45) 20× 正常淋巴結(jié)(LCA、CD45) 40×
6、CD20 B細胞
CD醫(yī).學(xué)全在線20主要分布在B細胞、前B細胞后期和漿細胞之前的B細胞，一般不與T細胞呈交叉反應(yīng)。對B細胞淋巴瘤和急慢性淋巴細胞白血病等有較好的細胞特異性，因此在惡性淋巴瘤尤其是T或B細胞淋巴瘤的分類上，CD20是最常用的B細胞標(biāo)記。
細胞定位：胞膜
鏡下觀察：可見淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在淋巴濾泡生發(fā)中心，B細胞胞膜呈棕黃色，CD20陽性。
正常淋巴結(jié)(CD20 B細胞) 20× 正常淋巴結(jié)(CD20B細胞)40×
7、CD3 T細胞
CD3對早期T細胞有較高的特異性，對B細胞不表達，主要用于T細胞淋巴瘤的診斷。其特異性較高但敏感性偏低，因此在臨床應(yīng)用上與CD45RO聯(lián)合檢測，以提高其診斷準確率。
細胞定位：胞膜
鏡下觀察：可見淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)，在副皮質(zhì)區(qū)，T細胞胞膜呈棕黃色，CD3陽性。
正常淋巴結(jié)(CD3T細胞) 20× 正常淋巴結(jié)(CD3 T細胞) 40×
8、肌動蛋白Actin
肌動蛋白是一種具有收縮能力的微絲蛋白，廣泛分布于幾乎所有的肌型細胞中。主要用于檢測骨骼肌、平滑肌、血管平滑肌、心肌和肌源性腫瘤包括平滑肌瘤，平滑肌肉瘤和橫紋肌肉瘤以及肌上皮細胞和肌上皮瘤等。
細胞定位：胞漿
鏡下觀察：在闌尾壁肌層及血管壁平滑肌細胞胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒，Actin陽性。
闌尾炎(Actin) 20×闌尾炎(Actin) 40×
9、乳頭狀瘤病毒PapillomaVirus (PV)
該抗體是與乳頭狀瘤病毒衣殼蛋白L1蛋白反應(yīng)獲得的蛋白，在正常組織上皮或腫瘤性上皮乳頭狀瘤病毒感染的組織與細胞中有反應(yīng)，主要用于人類生殖系統(tǒng)傳染性疾病及其腫瘤如宮頸癌的研究，亦可用于食管癌、乳腺癌等惡性腫瘤的研究。
細胞定位：胞核/核周
鏡下觀察：在部分鱗狀上皮細胞胞核/核周見棕黃色顆粒，PV陽性。
三、時間安排（課時4×45’＝180’’)
1、免疫組織化學(xué)檢測原理、方法介紹 30分鐘
2、免疫組織化學(xué)檢測具體操作 140分鐘
3、小結(jié)提問 10分鐘
四、重點
免疫組織化學(xué)檢測具體操作過程
五、難點
掌握好每一步的時間及試劑的用量等。
六、主要儀器設(shè)備
配套的免疫組織化學(xué)檢測試劑、工具等
七、復(fù)習(xí)思考題
本實驗中各種蛋白檢測的意義。
