二、免疫原的制備
用為免疫動物產(chǎn)生抗體的抗原物質(zhì)如果是人工合成的。質(zhì)地比較純，免疫動物后可獲得質(zhì)量好的抗血清。如果以從組織中提取的物質(zhì)作為抗原，必須經(jīng)過純化，保證提取物的純凈，才能獲得質(zhì)量好的抗血清。某些物質(zhì)的分子量比較小，抗原性弱，屬于半抗原，不易使動物產(chǎn)生抗體，必須把這些半抗原連接到大分子物質(zhì)（載體)上，形成較為理想的免疫原，既能減少免疫注射的次數(shù)，又可節(jié)約抗原，產(chǎn)生良好的免疫效應，獲得高質(zhì)量的抗體。
�。ㄒ�)載體
用為作為載體的物質(zhì)較多，下列幾類可供選擇。
蛋白質(zhì)類載體：人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA)、兔血清白蛋白（RSA)、牛甲狀腺球蛋白（TG)、血藍蛋白（Hemocyanin)以及人、牛和雞γ-球蛋白等均可作為載體。這些載體免疫活性較強，有商品供應，容易獲得，即使自選提取，操作也較方便。常用 的有TG、BSA、HAS等，以TG為好。
多肽聚合物，人工合成的多聚賴氨酸 、多聚谷氨酸、多聚混合氨基酸等，可與半抗原結(jié)合，所形成的免疫原可獲高滴度、高親合度的抗血清。
大分子有機化合物和某些粉末，如聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素、聚甲基丙酸酯微粒、乳膠和炭末等，可吸附半抗原，也可用來作為載體，但用這類載體合成的免疫原免疫動物，所獲抗血清的質(zhì)量不穩(wěn)定。
載體，尤其是大分子物質(zhì)本身就是一種抗原，它們進行體內(nèi)，可發(fā)揮致敏作用，激活免疫系統(tǒng)，從而使半抗原也可以使機體產(chǎn)生優(yōu)質(zhì)的抗體。因此，如果把半抗原與無免疫原性的載體結(jié)合，就不能使機體產(chǎn)生抗體。另外，半抗原與載體結(jié)合后，可適當延遲其降解和排出體外，從而可以發(fā)揮更久的作用。
（二)偶聯(lián)劑
半抗原和載體聯(lián)接，操作比較簡單，在一般實驗室中都可進行。但對反應條件有一定的要求：在反應過程中半抗原的免疫活性不發(fā)生改變，也不應引起載體變性到不溶解的程度。常用的方法是利用偶聯(lián)劑把半抗原和載體聯(lián)接起來。用作偶聯(lián)劑的有碳化二亞胺類、戊二醛、二異氰酸化合物和二鹵化二硝基苯等。這些偶聯(lián)劑使半抗原與載體在-COOH、-NH2或-SH等基團部位發(fā)生結(jié)合。
碳化二亞胺偶聯(lián)過程示意如下：
由反應過程可見，碳化二亞胺的偶聯(lián)作用即可以在NH2部位發(fā)生，也可發(fā)生在羧基部位。
戊二醛所起的偶合作用與碳化二亞胺有所不同，戊二醛的兩個醛基分別與載體和半抗原的-NH2結(jié)合。它起一種“橋梁”作用，而把載體與半抗原聯(lián)接在一起，其反應過程為：
在免疫原的制備中，應根據(jù)不同的半抗原選用偶聯(lián)劑。
（三)制備過程
以制備催產(chǎn)素（OT)免疫原為例：
�。�1)1mgOT，溶解于1ml 雙蒸餾水或0.25%醋酸溶液中。10mgTG溶解于1ml 0.1mol/LPBS(pH7.5)或蒸餾水內(nèi)。
�。�2)把OT溶液與TG溶液振蕩混勻。
�。�3)邊攪拌邊滴加入0.25%戊二醛1ml。加畢后再攪拌5～10min，在室溫下繼續(xù)反應2～3h，就可供免疫動物用。
免疫原以新制備的為好，如果一次制備了較多的免疫原，也可保存在-40℃的低溫冰箱內(nèi)備用。
