一、T淋巴細(xì)胞分布及其特點(diǎn)
胃腸道T淋巴細(xì)胞分布在上皮層、固有層、粘膜集合和散在淋巴濾泡及腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)。隨著免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用和各類T細(xì)胞亞群?jiǎn)慰寺】贵w的制備成功，為進(jìn)一步研究不同部位T淋巴細(xì)胞的分類和功能起極其重要的作用。
1．上皮內(nèi)T淋巴細(xì)胞上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞（intraepithelial lymphocyte, IEL)是指位于上皮層基底部的T淋巴細(xì)胞。近年來(lái)，對(duì)IEL對(duì)鄰近上皮細(xì)胞有壓跡，位于兩個(gè)上皮細(xì)胞交界處，并未進(jìn)入上皮細(xì)胞內(nèi)。近年來(lái)，對(duì)IEL研究非常深入。已經(jīng)證實(shí)75%以上成人小腸IEL是TCRγαβ陽(yáng)性細(xì)胞，說(shuō)明它們來(lái)源于胸腺，接受過(guò)抗原刺激。其中大部分為誘導(dǎo)、殺傷性T淋巴細(xì)胞（CD8或OKT8陽(yáng)性)，10%左右為CD7陽(yáng)性和CD3陰性的IEL，類似NK細(xì)胞，有細(xì)胞毒作用，但無(wú)NK細(xì)胞標(biāo)記，對(duì)NK的靶細(xì)胞無(wú)破壞作用。10%～20%左右為TCRδ陽(yáng)性IEL，不受胸腺的影響，其中70%CD4和CD8均陰性，為T淋巴細(xì)胞前體。說(shuō)明人的部分IEL通過(guò)胸腺外途徑進(jìn)行分化。內(nèi)毒素等腔內(nèi)抗原與腸上皮細(xì)胞微絨毛、腸腺隱窩細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞膜上的組織相關(guān)性抗原分子（鼠為MHL-II，人為HLA-DR、HLA-DP和HAL-DR)相結(jié)合后，將抗原分子傳遞到CD3陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞受體（t lymphocyte receptor, TCR)中的α和β亞單位可變區(qū)進(jìn)行結(jié)合，在CD8分子作用下導(dǎo)致IEL增殖和分泌大量γ-干擾素（γ-INF)，α-腫瘤壞死因子（α-TNF)，和少量的白介素-2（IL-2)，發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，調(diào)節(jié) 上皮細(xì)胞再生和增強(qiáng)對(duì)食物抗原的耐受。
2．固有層T淋巴細(xì)胞固有層T淋巴細(xì)胞（lamina propria lyphocyte, LPL)分散在固有層，約占固有層免疫細(xì)胞總數(shù)10%左右。其中CD4陽(yáng)性細(xì)胞（CD4LPL)顯著多于CD8陽(yáng)性細(xì)胞（CD8LPL)。40%CD4LPL表達(dá)CD45RO抗原，能產(chǎn)生大量IL-2、IL-4和γ-INF，為記憶性T淋巴細(xì)胞，能輔助B細(xì)胞轉(zhuǎn)化成抗體產(chǎn)生細(xì)胞并促其分泌抗體。60%CD4LPL表達(dá)CD45RA和CD8抗原，能直接抑制抗體產(chǎn)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化和分泌。這兩種細(xì)胞的比例在調(diào)節(jié) 抗體分泌中起著重要作用。CD8LPL也可以分兩種：一種表達(dá)CD28抗原的LPL，能通過(guò)ADCC或直接溶解靶細(xì)胞。另一種表達(dá)CD16抗原，具有自然殺傷功能。LPL能被IL-2激活，激活的LPL能釋放大量IL-2、IL-4、γ-INF和IL-5、IL-2又能激活LPL，起著自身分泌作用。IL-5能促進(jìn)抗體產(chǎn)生細(xì)胞分泌抗體。
3．胃腸道相關(guān)淋巴組織T淋巴細(xì)胞胃腸道相關(guān)淋巴樣組織（gut – associated lymphoid tissue, GALT)主要包括腸系膜淋巴結(jié)和粘膜中集合和散在淋巴濾泡。GALTT淋巴細(xì)胞多們于生發(fā)中心的外周部位，約占40%。其中CD8和CD4陽(yáng)細(xì)胞比例與周圍血相似。動(dòng)物研究證明，腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)的CD4陽(yáng)民生細(xì)胞多于固有層。分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)GALTT淋巴細(xì)胞含有IL-4和IL-5基因，激活后產(chǎn)生大量IL-4和IL-5，能特異性增加B和T淋巴細(xì)胞增殖。抑制B淋巴細(xì)胞分化。其表面糖蛋白主要為CD45RA和leu8(CD8)，證明是幼稚T淋巴細(xì)胞。它們對(duì)抗原刺激的增殖反應(yīng)低，對(duì)刀豆素A等有絲分裂促進(jìn)劑的增殖反應(yīng)高，產(chǎn)生IL-2和γ-INF低，輔助作用弱。GALTT淋巴細(xì)胞如何調(diào)節(jié) B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成IgA產(chǎn)生細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞的增殖及功能，并不十分清楚。有待進(jìn)一步研究。
近年研究發(fā)現(xiàn)，除M細(xì)胞和巨噬細(xì)胞外，胃腸上皮細(xì)胞在接受和傳遞抗原中也起重要作用。免疫細(xì)胞化學(xué)發(fā)現(xiàn)正常小腸上皮細(xì)胞微絨毛和側(cè)膜有斑片狀MHc II類抗原，人小腸為HLA-DR糖蛋白，能識(shí)別、加工和傳遞抗原使粘膜內(nèi)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)。HLA-DR表達(dá)受γ-IFN誘導(dǎo)。因此免疫反應(yīng)中組織相關(guān)性抗原與IEL和LPL淋巴細(xì)胞互相進(jìn)行調(diào)節(jié) 。醫(yī)學(xué)全在.線gydjdsj.org.cn
二、研究方法
1．組織切片中T淋巴細(xì)胞80年代以前多用玫瑰花瓣試驗(yàn)和酸性酯酶方法進(jìn)行組織切片中T淋巴細(xì)胞研究，特異性較差。近年來(lái)多用OKT，Leu或CD等系列T淋巴細(xì)胞單克隆抗體進(jìn)行研究，特異性高，可以分類出各種亞群。免疫組化染色中應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：
�。�1)抗體的選擇：根據(jù)不同目的選擇相應(yīng)的抗體，如要對(duì)人胃腸道組織進(jìn)行研究，可選用OKT系統(tǒng)單抗；對(duì)鼠類等進(jìn)行研究可選用Leu 或Thy系列。如要研究輔助性T淋巴細(xì)胞可用OKT4或CD4；研究抑制性T淋巴細(xì)胞可用OKT8或CD8等單克隆抗體。
�。�2)組織加工方法選擇：目前所研究的特異性T淋巴細(xì)胞抗原決定簇多位于細(xì)胞膜上，用陳舊或普通組織固定和加工方法可能使抗原破壞，應(yīng)采用新鮮組織和低溫處理。具體方法是：手術(shù)或活檢獲得的組織立即用液氮冷凍，或用OCT復(fù)合物包埋后再放入液氮中，便于切片，Cryostat冰凍切片后室溫下風(fēng)干，用4℃純乙醇或丙酮固定10min，PBS沖洗后即可進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。
�。�3)染色方法的選擇：因抗原較微量，而且位于細(xì)胞膜，應(yīng)采取敏感性強(qiáng)、特異性高、非特異性著色少的方法。雖然有報(bào)道采用間接熒光或間接酶標(biāo)技術(shù)也能顯示特異性T淋巴細(xì)胞，我們推薦最好采用PAP或ABC染色技術(shù)。具體方法參閱第三，四章 。
2．粘膜分離液中T淋巴細(xì)胞一定重量粘膜組織中分離出來(lái)的T淋巴細(xì)胞也可以用免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行定量和定性研究。下面介紹用間接免疫熒光技術(shù)研究IEL的大致過(guò)程：
�。�1)將手術(shù)取得的腸管縱形剪開(kāi)，將上皮層與固有層分離。
�。�2)上皮層放在無(wú)鎂離子、含100U青霉素和鏈霉素及0.2%疊氮納的PB中清洗，無(wú)血液和其它雜質(zhì)后用解剖剪將組織剪碎，用勻漿器磨碎或用超聲粉碎或用膠原酶溶解上皮細(xì)胞。
�。�3)勻漿液通過(guò)脫脂棉、尼龍篩（只允許淋巴細(xì)胞濾過(guò)，除去粘液、碎屑和上皮細(xì)胞凝集塊)或金屬網(wǎng)（200目)獲得淋巴細(xì)胞懸液。
