中國幽門螺桿菌研究:幽門螺桿菌與胃十二指腸疾病的關(guān)系

自1983年Warren和Mashall首次從胃粘膜標(biāo)本中分離培養(yǎng)出幽門彎曲菌（CampylobacterPylori)，并提出它可能與慢性胃炎（CG)和潰瘍�。≒U)病密切相關(guān)后，引起了全球關(guān)注，也為CGG、GU的病因?qū)W研究開創(chuàng)了一條新途征。1990年9月國際微生物聯(lián)合會鑒定為“幽門螺桿菌”（Helicobacter Pylori, Hp)。我國是慢性胃病多發(fā)國家，自1985年張振華首次報告從胃粘膜中檢出此菌后，已有不少單位對此進(jìn)行研究，我院自1988年5月以來開展了此項研究，對325例因上消化道癥狀行內(nèi)鏡檢查者進(jìn)行研究，旨在從臨床分析探討Hp與慢性胃炎、消化潰瘍和胃癌的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 對象

具有上消化道癥狀的325例，男248例，女77例；年齡17歲～75歲，平均年齡43.9歲。根據(jù)內(nèi)鏡及組織學(xué)診斷，慢性淺表性胃炎（CSG)72例，慢性萎縮性胃炎（CAG)34例，胃潰瘍（GU)54例，球部潰瘍（DU)108例，胃癌（GC)13例，正常（N)14例。按胃粘膜中是否有中性粒細(xì)胞浸潤將胃炎分活動性和非活動性胃炎。

1.2 方法

用OlymPus GIF XQ10內(nèi)鏡進(jìn)行檢查,CG,DU,N組取距幽門5cm內(nèi)的胃竇粘膜，GU取潰瘍邊緣粘膜，GC取癌組織，各取4～5塊，分別作細(xì)菌培養(yǎng)、直接涂片、組織切片、HE染色及改良Warthin-Starry染色，部分作掃描電鏡觀察。將活檢標(biāo)本接種于肉浸液加8%～10%羊血瓊脂平板中，于改良厭氧灌（5%O2，7%CO2，80%N2，8%H2，濕度98%)內(nèi)，37°C，培養(yǎng)3d～5d，見1mm～2mm大小的露滴樣、光滑、灰白色、輕度溶血的菌落，菌落涂片鏡檢，生化鑒定（尿素酶、氧化酶、觸酶、馬尿酸分解試驗等)。7d不見菌落者陰性。Hp陽性標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)陽性或尿素酶陽性加直接涂片、改良W-S染色陽性中任一項陽性者。活檢標(biāo)本用10%福樂馬林固定、切片厚5μm，常規(guī)HE染色，作組織病理學(xué)診斷。改良W-S染色，在10×100倍光鏡下尋找Hp。供掃描電鏡（SEM)觀察的標(biāo)本先用生理鹽水輕輕沖洗粘膜面，用2.5%戊二醛固定及1%鋨酸固定后，經(jīng)脫水，臨界點干燥、噴金后，在日立S—570型電鏡下觀察。所有資料按四格表行X2檢驗，若例數(shù)小于40或理論值小于1，則采用確切概率法計算。

2 結(jié)果

2.1 各種胃病Hp的檢出率

胃粘膜標(biāo)本分別用4種方法檢測，Hp的檢出率分別為尿素酶試驗69.9%，直接涂片52%，改良W-S75.1%，培養(yǎng)63.1%；以改良W-S法檢出率最高，直接涂片法檢出率最低；其中直接涂片法與其它三種方法比較，差異有非常顯著性（P<0.05)；培養(yǎng)法與改良W-S比較，差異有顯著性（表1，P＜0.05)。

Hp的總檢出率為70.2%，CSG，CAG，GU，DU的Hp檢出率高于N組，差異有非常顯著性（P<0.01)；（均P<0.01)；DU檢出率高于CAG，CSG，GU組（均P<0.01)；CSG，CAG，GU組間兩兩比較，Hp檢出率無顯著差異（表2，P<0.05)。

表1 胃十二指疾病Hp檢出率

*表示均伴有慢性胃炎

表2 胃十二指腸疾患Hp檢出率

2.2 組織病理學(xué)檢查

改良W-S染色中Hp存在于胃粘膜表面上皮細(xì)胞粘液層間、胃小凹中，菌量多時可在gydjdsj.org.cn/yaoshi/淺層腺體的腔中見到。在淺黃色背景上呈棕色或棕褐色彎曲狀、弧形菌。在慢性胃炎中，Hp的存在與炎癥的活動性密切相關(guān)（表3，表4)。在CSG組57例活動性胃炎，Hp陽性55例；45例非活動性胃炎，17例Hp陽性；二者比較差異有非常顯著性（P<0.05)；在CAG組，20例活動性胃炎，19例為Hp陽性，14例非活動性胃炎，5例Hp陽性，二者比較差異顯著性（P<0.05)。

表3 慢性淺表胃炎活動性與Hp檢出率

表4 慢性萎縮性胃炎活動性與Hp檢出率

2.3 SEM觀察

對4例慢性胃炎標(biāo)本進(jìn)行SEM觀察，這4例用上述4種方法均檢出Hp。電鏡下見Hp呈弧形或“S”形，少數(shù)量橢圓形或腎形。約0.5μm×2.5μm大小，菌體光滑，中央部分電子密度低，兩端鈍圓，有1～5根單極鞭性鞭毛。Hp緊貼胃粘膜上皮細(xì)胞。

3 討論

作者對幾種常用方法Hp檢出率進(jìn)行比較，以改良W-S檢出率最高，直接涂片法檢出率最低，且直接涂片與其它3種方法比較差異顯著。細(xì)菌培養(yǎng)是鑒定Hp陽性最可靠的方法，但培養(yǎng)需一定條件和技術(shù)，影響因素多，陽性率較低，一般單位難以開展。直接涂片可見革蘭氏陰性彎曲菌，但受涂片技巧和鏡檢經(jīng)驗限制，陽性率較低。改良W-S染色是一種檢出率高的經(jīng)典方法，但其操作復(fù)雜，耗時耗資。尿素酶試驗具有快速、簡便、經(jīng)濟、敏感性、特異性較高等優(yōu)點，易普及推廣，但仍有一定假陰性和假陽性。本組Hp總檢出率70.2%，以DU的陽性率最高80.7%，GCa和“正常”組檢出率低，分別為23.1%、7.1%。GCa組和“正常”組與CSG，CAG，GU，DU組比較，Hp檢出率差異有異常顯著意義GCa組與正常組比較，差異無顯著性；CGS，CAG，GU間兩兩比較差異無顯著性；而DU高于任何一組（P<0.01)。

我們的結(jié)果表明，胃粘膜中Hp存在與慢性胃炎和消化性潰瘍的發(fā)病有關(guān)，這與前人報告結(jié)果一致。組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)活動性胃炎中的Hp檢出率顯著高于非活動性胃炎，雖也有報告未見此種關(guān)聯(lián)。Shousha等用透射電鏡觀察到，胃粘膜上皮間有中粒細(xì)胞浸潤，且與Hp混合在一起，一些中性粒細(xì)胞可吞噬Hp，提示Hp可能引起炎癥。我們用抗Hp藥物De-Nol治療71例慢性胃炎，Hp的清除率87.8%，且隨Hp的清除，組織學(xué)檢查胃炎明顯減輕。血清學(xué)檢查表明抗Hp抗體與慢性胃炎呈正相關(guān)。這些都提示Hp可能是慢性胃炎的病因。據(jù)報道用雷尼替丁治療伴Hp感染的球部潰瘍，4周后潰瘍愈合，但Hp仍存在。用雷尼替丁聯(lián)合抗生素或De-Nol治療潰瘍，難治性潰瘍可治愈，潰瘍復(fù)發(fā)率明顯降低。這提示Hp即使對潰瘍病無直接致病作用，亦可能與潰瘍病頑固不愈及其復(fù)發(fā)密切相關(guān)，可能雖潰瘍發(fā)生的重要危險因素。

在胃癌組織Hp檢出率與正常組織比較差異無顯著性，提示此菌與胃癌可能無直接關(guān)系，其他作者也有類似報告。Hp作為慢性胃炎和潰瘍病的病因，其真正致病機理仍未完全闡明，只是間接證據(jù)證明Hp存在于大部分胃炎和潰瘍病中，經(jīng)抗Hp治療隨Hp清除，炎癥改善，潰瘍復(fù)發(fā)率降低。但還有部分胃炎、潰瘍中并未檢出Hp，其他抗?jié)�瘍藥治療后雖Hp仍存在，但潰瘍可以愈合。因此，還需要進(jìn)一步建立成功的動物模型來促進(jìn)研究Hp在慢性胃炎和潰瘍病中的確切作用。