第二章 血液一般檢驗
第三章 血栓與止血一般檢驗
第四章 尿液檢驗
葡萄糖定性檢查"style="color:#FF0000" >實驗五 尿葡萄糖定性檢查
第四章 腦脊液檢驗
第六章 生殖系統(tǒng)分泌物檢驗
一、毛細(xì)血管采血法
[目的]掌握毛細(xì)胞血管采血法,了解不同部位采血對檢驗結(jié)果的影響。
[原理]采血針刺破毛細(xì)血管后血液自然流出,用微量吸管吸取一定量的血液。
[器材]一次性消毒采血針、20ul吸管、75%乙醇棉球、無菌干棉球。
[試劑]洗滌液3管、生理鹽水。
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、準(zhǔn)備 取試管1支,加入2ml生理鹽水。取微量吸管和乳膠吸頭相連,檢查連接是否漏氣,或取一次性微量吸管備用。
2、按摩 輕輕按摩左手中指或無名指指尖內(nèi)側(cè),使局部組織自然充血。
3、消毒 用75%乙醇棉球擦拭采血部位皮膚,待干。
4、針刺 用左手拇指和示指固定采血部位使其皮膚和皮下組織繃緊,左手持一次性消毒采血針自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺入,深度2~3mm,立即出針。
5、拭血 待血液自然流出后,用無菌干棉球擦去第1滴血。
6、吸血 血液自然流出時,用一次性微量吸管吸血到10ul刻度,然后用無菌干棉球壓住傷口止血。如血流不暢,可以用左手自采血部位遠端向指尖稍施壓使血液流出。
7、稀釋 用無菌干棉球擦凈微量吸管外部后,將吸管伸入裝有生理鹽水的試管底部,慢慢排出吸管內(nèi)的血液,并用上清液沖洗管內(nèi)余血2~3次,最后將試管內(nèi)的液體混勻。
[注意事項]
1、所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完整,無燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥等。除特殊情況外,不要在耳垂采血。半歲以下嬰幼兒由于手指小,可自拇指、腳趾或足跟內(nèi)、外側(cè)緣采血;嚴(yán)重?zé)齻呖蛇x皮膚完整處采血。
2、本試驗具有創(chuàng)傷性,必須嚴(yán)格控?zé)o菌技術(shù)操作,防止采血部位感染;做到一人一針一管,避免交叉感染,最好用一次性采血管。
3、皮膚消毒后,應(yīng)待乙醇揮發(fā)后采血,否則流出的血液擴散而不成滴。
4、進出針?biāo)俣纫杆,且傷口要有足夠的深度?/p>
5、因第1滴血混有組織液,應(yīng)擦去。如血流不暢切勿用力擠壓,以免造成組織液混入,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
實驗一 紅細(xì)胞計數(shù)
[目的]掌握顯微鏡紅細(xì)胞計數(shù)的方法。
[原理]用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),充入計數(shù)池后,在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量,經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒。
[試劑]紅細(xì)胞稀釋液
[標(biāo)本]外周血或抗凝血(EDTA抗凝)。
[操作]
1、加稀釋液 取小試管1支,加紅細(xì)胞稀釋液2ml。
2、加血 用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血,輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部,再輕吸上清液清洗吸管2~3次,立即混勻。
3、充池 混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計數(shù)池,室溫下平放3~5min,待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。
4、計數(shù) 用高倍鏡依次計數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。
5、計算
25 N
紅細(xì)胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100 ×1012
N:表示5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)數(shù)。
25
× 5 :將五個中方格紅細(xì)胞數(shù)換算成1個大方格紅細(xì)胞數(shù)。
×10:將1個大方格紅細(xì)胞數(shù)換1ul血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。
×106:1L=106ul
200:為血液的稀釋倍數(shù)。
[注意事項]
1、采血時不能過分?jǐn)D壓采血部位,針刺激深度必須適當(dāng)。
2、采血應(yīng)順利、準(zhǔn)確,采血部位不得有水腫、發(fā)紺、凍瘡、炎癥等。紅細(xì)胞數(shù)量明顯增高時可適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)。
3、大小方格內(nèi)壓線細(xì)胞的計數(shù)遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則,避免多數(shù)或漏數(shù)。
4、將細(xì)胞懸液充入計數(shù)池時要一次完成,不能產(chǎn)生滿溢、氣泡或充池不足的現(xiàn)象。
實驗二 血紅蛋白測定
[目的]掌握氰化高鐵血紅蛋白測定方法。
[原理]在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中,除硫化血紅蛋白外,其余血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白,再與氰離子結(jié)合,生成穩(wěn)定的復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白。棕紅色的氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰,可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計進行直接定量測定,或用HiCN參考液進行比色法測定,根據(jù)標(biāo)本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。
[器材]一次消毒采血針,微量吸管,試管,5ml移液管,75%乙醇棉球,無菌干棉球,分光光度計
[試劑]HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液)
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、直接定量測定
(1)加轉(zhuǎn)化液:試管內(nèi)加5mlHiCN轉(zhuǎn)化液。
(2)采血與轉(zhuǎn)化:取全血20ul,加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部,用上清液反復(fù)沖洗吸管3次,充分混合,靜置5min。
(3)測定:以符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計,波長540nm處,光徑1.000cm,HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零,測定吸光度。
(4)計算:根據(jù)標(biāo)本的吸光度直接計算出血紅蛋白濃度(g/L)
64458
血紅蛋白(g/L)=A×44000×251=A×367.7
A:540nm處測定管吸光度
64458:目前國際公認(rèn)的血紅蛋白平均相對分子質(zhì)量。
44000:1965年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)公認(rèn)的血紅蛋白摩爾消化系數(shù)。
251:稀釋倍數(shù)。
2、HiCN標(biāo)準(zhǔn)液比色法測定
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計算。用HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋后(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在所用的分光光度計上分別測事實上各稀釋度的吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線索;蚯蟪鰮Q算常數(shù)K。
(2)標(biāo)本的血紅蛋白轉(zhuǎn)化和比色同直接定量測定,得到標(biāo)本的吸光度(A)
(3)通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度或用K值來計算血紅蛋白濃度,即Hb(g/L)=K×A。
[注意事項]
1、血紅蛋白測定方法很多。但無論采用何種方法,都必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期檢查,并與分光光度計相配。
2、標(biāo)準(zhǔn)微量吸管必須經(jīng)過水銀稱重法校正。加液量必須準(zhǔn)確,血液與轉(zhuǎn)化液充分混勻?捎醚t蛋白液代替抗凝血進行鑒定。
3、HiCN轉(zhuǎn)化液不能貯存在塑料瓶中,否則會使CN—丟失,測事實上結(jié)果偏低。HiCN轉(zhuǎn)化液應(yīng)貯存在棕色有塞玻璃瓶中,4℃冰箱保存一般可用數(shù)月,但不能在0℃以下保存,因為結(jié)冰可引起高鐵氰化鉀還原,使轉(zhuǎn)化液褪色失效。
[目的] 掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞手工計數(shù)的操作方法
[原理] 網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質(zhì),在活體染色時可被煌焦油藍染成藍色網(wǎng)狀或顆粒狀,可與完全成熟的紅細(xì)胞區(qū)別。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片
[試劑]10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液
[標(biāo)本]新鮮全血
[操作]
1、加染液 于小試管中加入10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液2滴,再加入新鮮全血2滴,立即混勻,置室溫下15~20min。
2、制備涂片 取1小滴制成薄血涂片,自然干燥。
3、觀察 在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位進行觀察。
4、計數(shù) 在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。
5、計算
計數(shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)
網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)= 1000
網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值(網(wǎng)織紅細(xì)胞/L)=紅細(xì)胞/L×網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)
[目的]掌握魏氏法紅細(xì)胞沉降率測定的原理及操作方法。
[原理]將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中,直立于特制血沉架上1h后讀取紅細(xì)胞下沉后血漿的高度。
[器材]Westergren血沉管、血沉架、吸管、試管。
[試劑]109mmol/L枸櫞酸鈉溶液
[標(biāo)本]新鮮全血
[操作]
1、加抗凝劑 吸取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉0.4ml于試管中。
2、采靜脈血 取靜脈血1.6ml,加入含抗凝劑的試管中,混勻。
3、裝血沉管 用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處,拭去管外殘留余血。
4、立血沉管 將血沉管直立于血沉架上。
[注意事項]
1、使用分析純枸櫞酸鈉抗凝劑,配制時濃度應(yīng)準(zhǔn)確,配成后液體不渾濁、無沉淀,保存期為2周。
2、嚴(yán)格控制采血量,使抗凝劑與血液比例為1︰4。
3、血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn),放置要垂直,不得傾斜。
[目的]掌握顯微鏡法白細(xì)胞計數(shù)的原理及方法。
[原理]用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù),同時破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血液注入血紅細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù),經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]白細(xì)胞稀釋液
[標(biāo)本]新鮮全血或末稍血
[操作]
1、加稀釋液 用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、吸取血液 用微量吸管吸取新鮮全血或末稍血20ul, 擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部,輕輕放出血液,并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2~3次。
3、混勻 將試管中血液與稀釋液混勻,待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?/p>
4、充池 再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴,充入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池中,室溫靜置2~3min,待白細(xì)胞完全下沉。
5、計數(shù) 在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。
6、計算
4個大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)(N) N
白細(xì)胞= 4 ×10×20×106=20×109/L
[注意事項]
1、稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細(xì)胞計數(shù)板均為計量工具,使用前需經(jīng)過嚴(yán)格的校正,否則將直接影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確。
2、使用標(biāo)本可為由靜脈搏穿刺采取的新鮮全血,也可為靜脈末梢血。采集末梢血時,應(yīng)注意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)紺、炎癥等,以免標(biāo)本失去代表性;同時也應(yīng)注意不能過度擠壓,以免組織液混入引起血液凝因或造成計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。
3、在充池時,如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液,或產(chǎn)生氣泡、充液后移動蓋玻片等,均會使細(xì)胞分布不均勻,造成計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。
4、計數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布應(yīng)均勻,一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不超過10%,若相差太大,應(yīng)重新充池。
5、計數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時,遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。
6、白細(xì)胞數(shù)量過多時,可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。
[目的]掌握顯微鏡外周血白細(xì)胞分類計數(shù)的方法及各種白細(xì)胞的正常形態(tài)。
[原理]將血液制成細(xì)胞分布均勻的血涂片,用瑞氏染液染色,根據(jù)各類細(xì)胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細(xì)胞進行分類并計數(shù)。通常分類100個白細(xì)胞,計算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。
[器材]顯微鏡、分類計數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標(biāo)本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色,沖洗干凈,自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡下觀察白細(xì)胞分布和染色情況。
3、油鏡觀察 選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域,按一定的方向順序?qū)λ姷拿?個白細(xì)胞進行分類,并用白細(xì)胞分類計數(shù)器作好記錄,共計數(shù)100個白細(xì)胞。
4、計算 求出各類細(xì)胞所占的百分率
[注意事項]
1、由于各種白細(xì)胞體積大小不等,體積較小的淋巴細(xì)胞在血涂片的頭、體部較多,而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞較多,因此分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。
2、分類時要有秩序地、沒一定方向連續(xù)地進行,既不重復(fù)亦不遺漏,避免主觀選擇視野。
3、分類計數(shù)結(jié)果的記錄也可采用手工畫“正”或“++++”的方法。
[目的]掌握各種白細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)改變。
[原理]用普通光學(xué)顯微鏡,直鏡觀察經(jīng)瑞氏染色后血涂片上的白細(xì)胞。從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面觀察細(xì)胞形態(tài)。
[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。
[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液
[標(biāo)本]制備良好的血涂片
[操作]
1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色,沖洗干凈,自然干燥后待用。
2、低倍鏡觀察 低倍鏡觀察細(xì)胞分布、數(shù)量、染色情況。
3、油鏡觀察 滴加香柏油1滴,在油鏡下對白細(xì)胞從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面做認(rèn)真仔細(xì)地觀察。
4、計算毒性指數(shù) 觀察100或200個中性粒細(xì)胞,記錄有病理變化的中性粒細(xì)胞數(shù)量,計數(shù)毒性指數(shù)。
有中毒顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)
毒性指數(shù)= 計數(shù)的中性粒細(xì)胞數(shù)
[注意事項]
1、含中毒顆粒的中性粒細(xì)胞應(yīng)與嗜堿性粒細(xì)胞相區(qū)別,其區(qū)別要點是嗜堿性粒細(xì)胞核較少分葉,染色較淺,嗜堿性顆粒著色更深,較大且不均勻,細(xì)胞邊緣常分布較多,也可覆蓋分布于細(xì)胞核上。
2、在血涂片染色偏堿或染色時間過長時,可將中性顆粒誤認(rèn)為中毒顆粒。應(yīng)注意全片各種細(xì)胞的染色情況。
[目的]掌握嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)的方法。
[原理]用嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),使大部分的紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞被破壞并使嗜酸性粒細(xì)胞著色。將稀釋的細(xì)胞懸液滴入血細(xì)胞計數(shù)板,計數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量,經(jīng)過換算得出每升血液中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。
[器材]顯微鏡、改良Neubauber計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。
[試劑]
1、伊紅丙酮稀釋液。
2、Hinkelman稀釋液。
3、乙醇-伊紅稀釋液。
4、皂素-甘油稀釋液。
5、溴甲酚紫稀釋液。
6、固綠稀釋液。
[標(biāo)本]新鮮全血或末梢血
[操作]
1、加稀釋液 吸取嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。
2、采血 用微量吸管采血20ul,擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管稀釋液的底部,輕輕放出血認(rèn),并吸取上層稀釋液清洗吸管2~3次。
3、混勻 將試管中的血液與稀釋液混勻,待細(xì)胞完全溶解。
4、充池 再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴,充入改良Neubauer計數(shù)板的2個計數(shù)池中,室溫下靜置3~5min。
5、計數(shù) 低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池共10個大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。
6、計算
10個大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞
嗜酸性粒細(xì)胞/L= 10×10×20×106
[注意事項]
1、凡能引起白細(xì)胞計數(shù)誤差的因素,嗜酸性業(yè)細(xì)胞計數(shù)時均勻應(yīng)注意。
2、計數(shù)應(yīng)在60min內(nèi)完成,因時間太長,嗜酸性粒細(xì)胞會被逐漸溶解,造成結(jié)果偏低。
3、血液加入稀釋液后應(yīng)立即混勻,否則易致血液凝固和細(xì)胞聚集。因嗜酸性粒細(xì)胞易于破碎,振蕩不宜太猛烈。若使用含甘油的稀釋液,因甘油造成液體粘稠度增加,可增加振蕩次數(shù)、延長振蕩混勻時間。
[目的]掌握血小板的顯微鏡目視計數(shù)方法。
[原理]血液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后,充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量,經(jīng)過換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。
[器材]顯微鏡,血細(xì)胞計數(shù)板,采血針,血紅蛋白吸管,試管。
[試劑]10g/L草酸銨稀釋液。
[標(biāo)本]外周血
[操作]
1、吸取稀釋液 準(zhǔn)確吸取10g/L 草酸銨稀釋液0.38ml,置于清潔小試管中。
2、采血 常規(guī)消毒無名指,穿刺后,讓血液自然流出,準(zhǔn)確采血20ul,置于含有草酸銨的稀釋液中,立即充分混勻。
3、稀釋靜置 待完全溶血后再混勻1min,置室溫10min。
4、充液靜置 取混勻的血小板懸液1滴充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi),靜置10~15min,使血小板充分下沉?諝飧稍锏募竟(jié)應(yīng)將血細(xì)胞計數(shù)板置濕盒內(nèi)。
5、計數(shù) 用高倍鏡計數(shù)血細(xì)胞計數(shù)板中央大方格內(nèi)的四角和中央共5個中方格內(nèi)血小板數(shù)量。
6、計算 每升血小板數(shù)=5個中方格內(nèi)血小板數(shù)×109/L
[注意事項]
1、草酸銨稀釋液要清潔,無細(xì)菌、塵埃等污染。存放時間較長后應(yīng)過濾后再使用。
2、毛細(xì)血管采血時,針刺應(yīng)達3mm深,使血液流暢。拭去第1滴血后立即采血,以防血小板聚集和破壞。如果同時做白細(xì)胞和血小板計數(shù)時,應(yīng)先采血做血小板計數(shù)。
3、血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻,但不可過度振蕩,以免導(dǎo)致血小板破壞和聚集。
4、血小板懸液充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)需要靜置10~15min,使血小板完全下沉后再計數(shù)。但應(yīng)注意保持濕度,避免水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結(jié)果。
5、計數(shù)時光線不可太強,注意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別,附著在血紅細(xì)胞旁的血小板也要注意,不要漏數(shù)。
6、應(yīng)在1h內(nèi)計數(shù)完畢,否則結(jié)果偏低。
7、所用計量器材必須標(biāo)準(zhǔn)化。
8、檢查前,患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物。
[目的]掌握尿量的測定方法及注意事項。
[原理]采用有刻度的容器測定24h尿量。
[器材]量杯或量筒、潔凈容器。
[標(biāo)本]24h尿液。
[操作]清晨將尿液排空后棄去,用潔凈容器留取隨后的24h尿液,混合后準(zhǔn)確測定尿量。
[注意事項]每次留取標(biāo)本必須www.med126.com排空膀胱,尿量測定精確至毫升。氣溫過高時注意防腐。
[參考值]①成年人:1000~2000ml/24h。②1~6歲:300~1000ml/24h。③7~12歲:500~1500ml/24h。
[目的]了解常用干化學(xué)試帶測定尿液酸堿度的方法、原理及注意事項。
[原理]干化學(xué)試帶的測試模塊區(qū)含有甲基紅和溴麝香草酚藍,兩種酸堿指示劑適量配合可測試尿液酸堿度。
[器材]潔凈試管或尿標(biāo)。
[試劑]尿多聯(lián)化試帶與標(biāo)準(zhǔn)色板。
[標(biāo)本]新鮮尿液。
[操作]將試帶用尿液浸濕后與標(biāo)準(zhǔn)色板比色,1min內(nèi)讀取pH。
[注意事項]
1、試帶應(yīng)在干燥、避光處保存,注意保質(zhì)期,定期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控液進行檢測。
2、按說明書操作,1min內(nèi)讀取結(jié)果。
3、標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)新鮮,否則細(xì)菌繁殖會使pH增高;蛞騿适]發(fā)性酸而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、尿液pH還可作為其他檢查項目的質(zhì)控指標(biāo),若pH<3或pH>9均會影響其他檢測結(jié)果。
[目的]掌握尿蛋白定性的磺基水楊酸法。
[原理]磺基水楊酸是一種生物堿,在酸性條件下,磺基水楊酸的磺酸根離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽離子結(jié)合,形成不溶性的蛋白鹽沉淀,沉淀生成的程度可反映蛋白質(zhì)含量。
[器材]小試管、滴管、吸管、黑色襯紙及pH廣泛試紙。
[試劑]200g/L磺基水楊酸溶液。
[標(biāo)本]新鮮尿液或人工蛋白尿標(biāo)本。
[操作]
1、加尿液 取小試管2支,各加清晰尿液1ml。
2、加試劑 于第1支試管內(nèi)滴加磺基水楊酸溶液2滴,輕輕混勻;另1支試管不加試劑作空白對照,1min內(nèi)觀察結(jié)果。
3、判斷結(jié)果 按表判斷陽性程度及蛋白質(zhì)的含量
結(jié)果 報告方式 相當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)含量(g/L)
清晰透明 — <0.05
在黑色背景上可見輕度渾濁 極微量 0.05~0.1
不需黑色背景即見輕度渾濁± 0.1~0.5
白色渾濁,但無顆粒出現(xiàn) + 0.5~1.0
渾濁并出現(xiàn)顆粒 ++ 1.0~2.0
明顯渾濁呈現(xiàn)絮狀 +++ 2.0~5.0
渾濁,有大凝塊++++ >5.0
[注意事項]
1、該法靈敏,極輕微反應(yīng)無意義。判斷結(jié)果應(yīng)及時,否則會使陽性增高。
2、尿內(nèi)含尿酸或尿酸鹽過多。可出現(xiàn)假陽性,但反應(yīng)較為緩慢,15s后出現(xiàn)渾濁,由弱漸強;或于加試劑1min后漸呈蛛絲狀渾濁,緩慢擴散,覆蓋于尿液的表面,加熱或加堿可消失。
3、含碘造影劑、大劑量青霉素等也可使反應(yīng)呈假陽性,但其反應(yīng)與蛋白尿不同。應(yīng)仔細(xì)觀察并結(jié)合用藥情況綜合分析。
[目的]了解尿液蛋白質(zhì)定量雙縮脲法的反應(yīng)原理、檢測方法。
[原理]鎢酸可沉淀尿中的蛋白質(zhì),后者復(fù)溶于雙縮脲試劑中,其堿性的Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵形成紫色復(fù)合物,呈色深淺與尿蛋白質(zhì)含量成正比。
[器材]試管、滴管、分光光度計、離心機等
[試劑]
1、200g/L磺基水楊酸溶液。
2、15g/L鎢酸鈉溶液。
3、0.075mol/L硫酸。
4、雙縮脲試劑。
5、蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。
6、生理鹽水。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、測定尿量 準(zhǔn)確測定患者24h尿量,反復(fù)混勻后取10ml離心沉淀留取上清液備用。
2、尿蛋白定性 采用磺基水楊酸法定性尿蛋白,陽性標(biāo)本進行下列測定。
3、加標(biāo)本處理
①加尿液:根據(jù)蛋白質(zhì)半定量的結(jié)果決定標(biāo)本的加入量。尿蛋白定性(+)~(++),于10ml離心管中加尿液5ml,如定性(++)~(+++),則取1ml尿液加4ml蒸餾水稀釋。
②加沉淀劑:向離心管加入0.075mol/L硫酸2.5ml,混勻后再加15g/L鎢酸鈉溶液2.5ml,充分混勻后靜置10min。
③離心:1500r/min離心5min后,傾盡上清液,將離心管倒置于干燥濾紙上吸干水分,保留沉淀待測。
④復(fù)溶:向沉淀中加生理鹽水至1ml刻度,振搖以使蛋白質(zhì)溶解,作為測定管。
4、雙縮脲反應(yīng) 按表測定,混勻后37℃水浴30min
尿蛋白定量雙縮脲法
試劑 測定管標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
生理鹽水 1.0 __
2.5g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 _ 1.0_
雙縮脲試劑4.0 4.0 4.0
5、比色和計算 波長540nm,空白管調(diào)零分別讀取A標(biāo)A測。
A測 24h尿量(ml)
24尿蛋白總量(g)= A標(biāo) ×2.5× 1000(ml)
[注意事項] 24h尿標(biāo)本最好不加防腐劑,冷藏保存,測定前充分混勻。
[目的]掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
[原理]葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中,能將班氏試劑的藍色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅,進而形成紅色氧化亞銅沉淀。
[器材]試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。
[試劑]
1、甲液 枸櫞酸鈉,無水碳酸鈉,蒸餾水加熱助溶。
2、乙液 硫酸銅,蒸餾水加熱助溶。冷卻后,將乙液緩慢加入甲液中,不斷混勻,冷卻至室溫后補充蒸餾水至1000ml。如溶液不透明則需要過濾,煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應(yīng)用。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、鑒定班氏試劑質(zhì)量 取中號試管1支,加入班氏試劑2.0ml,搖動試管徐徐加熱至沸騰,觀察試劑有無顏色及性狀變化,若試劑仍為透明藍色,可進行以下實驗。
2、加尿液 向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml,混勻。
3、加熱煮沸 繼續(xù)煮沸1~2min,或置沸水浴5min,自然冷卻。
4、判斷結(jié)果 判斷結(jié)果見表
糖定性試驗結(jié)果判斷
反應(yīng)現(xiàn)象 報告方式 葡萄糖含量(mmol/L)
藍色不變 — <5.6
藍色中略帶綠色,但無沉淀 ± 5.6~11.2
綠色,伴少許黃綠色沉淀 +<28
較多黃綠色沉淀,以黃為 ++ 28~56
土黃色渾濁,有大量沉淀+++ 57~112
大量棕紅色或磚紅色沉淀 ++++ >112
[注意事項]
1、試劑與尿液的比例為10︰1。
2、煮混時應(yīng)不時搖動試管以防爆沸噴出,出可在沸水浴中實驗。
3、檢驗糖尿病患者尿液中葡萄糖,應(yīng)空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本。
4、尿液中有大量尿酸鹽存在時,煮沸后也呈渾濁并帶綠色,但久置后并不變黃色而呈灰藍色,故必須于冷卻后觀察結(jié)果。尿中含大量銨鹽時可抑制氧化亞銅沉淀的生成,應(yīng)加堿煮沸除去。蛋白含量較高時也影響銅鹽的沉淀,可用加熱乙酸法除去。
5、一些非糖還原性物質(zhì),如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、鏈霉素、VitC、異煙肼等,當(dāng)基在尿中含量過高時亦呈陽性反應(yīng),應(yīng)停藥3d后再進行檢查。對靜脈輸注大劑量VitC者5d內(nèi)不宜做尿糖定性,或定性時先將尿液煮沸使之分解破壞。
[目的]掌握尿沉渣非染色法顯微鏡檢查的內(nèi)容和方法。
[原理]采用顯微鏡觀察的方法,根據(jù)尿液細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)特征,識別并記錄其在顯微鏡一定視野內(nèi)的數(shù)量。
[器材]載玻片、離心機、刻度離心管、蓋玻片、滴管、普通顯微鏡、定量尿沉渣分析板。
[標(biāo)本]新鮮尿液
[操作]
1、未離心直接涂片法
(1)混勻:充分混勻尿液。
(2)制備涂片:取混勻的尿液1滴于載玻上,加蓋玻片,注意避免產(chǎn)生氣泡。
(3)觀察計數(shù):①先用低倍觀察全片細(xì)胞、管型等成分的分布情況,然后用高倍鏡確認(rèn)。注意使用暗視野觀察尿液有形成分,特別是透明管型。②管型在低倍鏡下觀察,至少計數(shù)20個視野;細(xì)胞在高倍鏡下觀察至少計數(shù)10個視野,取其平均值報告;結(jié)晶按高倍鏡視野中分布范圍報告。計數(shù)時要注意細(xì)胞的完整性,還要注意有無其他異常巨大細(xì)胞、寄生蟲蟲卵、滴蟲、細(xì)菌、粘液絲等,男性尿液標(biāo)本還要注意有無精子及卵磷脂小體。
2、離心沉淀涂片法
(1)離心尿液:透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標(biāo)本,是尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化推行的方法。取尿液10ml離心5min,要求相對離心力為400g。
(2)提取尿沉渣:手持離心管傾斜45°~90°,用滴管吸去上層尿液,保留下層0.2ml尿沉渣。
(3)涂片:輕輕混勻尿沉渣后,取1滴置載玻片上,用18mm×18mm或22mm×22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。
(4)觀察計數(shù):與未離心尿直接涂片法相同。
3、定量尿沉渣分析法 定量尿沉渣分析板由1塊硬質(zhì)塑料板制成,每塊板內(nèi)分為10個統(tǒng)一深度的計數(shù)池,每1個計數(shù)池內(nèi)的計數(shù)區(qū)為1.0ul計數(shù)區(qū)分為10個大方格,每個大方格又分為9個小方格。
(1)未離心法:直接取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計數(shù)池內(nèi),在低倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)管型總數(shù),在高倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù),此即每微升尿液某種細(xì)胞或管型的數(shù)量。
(2)離心法:尿液標(biāo)本處理同離心尿沉淀涂片法,然后充池計數(shù),方法同上。
4、報告結(jié)果
(1)涂片法:細(xì)胞以最低數(shù)~最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)~最高數(shù)/低倍鏡視野報告。結(jié)晶以所占視野面報告,無結(jié)晶為(—);結(jié)晶占1/4視野(+);結(jié)晶占1/2視野為(++);結(jié)晶占3/4視野為(+++);結(jié)晶滿視野為(++++)。如果細(xì)胞、管理的數(shù)量過多難以計算,也可按結(jié)晶的報告方式報告結(jié)果。
(2)定量尿沉渣分析板法:以每微升某種細(xì)胞或管型數(shù)報告。
[目的]掌握腦脊液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液,冰乙酸,白細(xì)胞稀釋液,瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標(biāo)本]新鮮腦脊液。
[操作]
(1)充池:直接用微量吸管吸取混勻的腦脊液,充入血細(xì)胞計數(shù)板的上下2個計數(shù)池。
(2)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。
(3)計算:10個大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù),再換算成每升腦脊液細(xì)胞總數(shù)。
[注意事項]
1、直接白細(xì)胞計數(shù)時,也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出,僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸,再吸以少量混勻的腦脊液于吸管中,數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解,然后再充池計數(shù)。
2、細(xì)胞計數(shù)時,如發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞有皺縮或腫脹等異,F(xiàn)象,應(yīng)如實報告,以協(xié)助臨床醫(yī)學(xué)鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。
3、血性腦脊液中的白細(xì)胞必須校正后才有價值,校正方法是分別計數(shù)血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)和腦脊液細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞數(shù),扣除因出血而帶進腦脊液的白細(xì)胞數(shù)。
腦脊液紅細(xì)胞數(shù)×血液白細(xì)胞數(shù)
白細(xì)胞校正數(shù)腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)— 血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)
4、細(xì)胞涂片時,為了使細(xì)胞容易粘在玻片上,可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴,加血清1滴,混勻后涂片。
5、涂片染色分類時,如見內(nèi)皮細(xì)胞或異常細(xì)胞,則另行描述報告,必要時用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。
6、實驗結(jié)果后,血細(xì)胞計數(shù)板用0.75%乙醇浸泡消毒60min,忌用酚浸泡,以免損壞計數(shù)板。
[目的]掌握腦脊液蛋白質(zhì)定性試驗的方法。
[原理]腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合,形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。
[器材]小試管、刻度吸管、尖滴管。
[試劑]飽和苯酚溶解。
[標(biāo)本]新鮮腦脊液。
[操作]
1、加試劑 取試劑2ml于小試管中。
2、加標(biāo)本 用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本1~2滴。
3、觀察結(jié)果 在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。
4、判斷結(jié)果
(1)清晰透明,不呈現(xiàn)云霧狀為(—)。
(2)呈微白霧狀,對光不易看見,黑色背景下才能見到(±)。
(3)灰白色云霧狀為(+)。
(4)白色渾濁或白色薄云狀沉淀為(++)。
(5)白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為(+++)。
(6)立即形成白色凝塊為(++++)。
[注意事項]
1、當(dāng)室溫在10℃以下時,應(yīng)將試劑保存在37℃溫箱中,否則飽和度降低,可致假陽性。
2、試管內(nèi)徑以小為佳,一般為(13±1)mm,加入試劑后立即觀察結(jié)果。
3、標(biāo)本中如紅細(xì)胞過多,應(yīng)離心沉淀取上清液檢測。
[目的]掌握漿膜腔積液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。
[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、小試管。
[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液,冰乙酸,白細(xì)胞稀釋液,瑞氏染液或瑞-吉染液。
[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液。
[操作]
(一)有核細(xì)胞計數(shù)
1、直接計數(shù)法
(1)去除紅細(xì)胞:在小試管內(nèi)放入冰乙酸1~2滴,轉(zhuǎn)動試管,使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去,滴加混勻漿膜腔積液3~4滴,混勻,放置數(shù)分鐘,破壞紅細(xì)胞。
(2)充池:用微量吸管取混勻破壞紅細(xì)胞后的漿膜腔積液充入血細(xì)胞計數(shù)板的2個計數(shù)池內(nèi)。
(3)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四周和中央大方格共10個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。
(4)計算:10個大方格有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細(xì)胞總數(shù),再換算成每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。
2、稀釋計數(shù)法
(1)稀釋破壞紅細(xì)胞:根據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少,用白細(xì)胞稀釋液對標(biāo)本進行一定倍數(shù)稀釋,混勻,放置數(shù)分鐘,破壞紅細(xì)胞。
(2)充池:用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個計數(shù)池。
(3)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格共5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)。
(4)計算:根據(jù)5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù),計算每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。
(二)有核細(xì)胞分類
1、直接分類法 有核細(xì)胞計數(shù)后,將低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡,直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進行分類,共分類計數(shù)100個有核細(xì)胞,分別計數(shù)單個核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及間皮細(xì)胞)和多個核細(xì)胞(粒細(xì)胞)的百分率。
2、涂片染色分類法 在抽出穿刺液后,立即以1000r/min離心5min,取沉淀物制成均勻的薄片,置于室溫下或37℃恒溫箱內(nèi)盡快干燥,瑞氏或瑞-吉染色后油鏡分類計數(shù)100個有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見到淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。
[注意事項]
1、有核細(xì)胞計數(shù)應(yīng)包括間皮細(xì)胞。
2、必要時可采用細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞,以提高白細(xì)胞分類計數(shù)的準(zhǔn)確性。
3、有核細(xì)胞分類計數(shù)誤差大,尤其是陳舊性、細(xì)胞變形的標(biāo)本,故推薦采用涂片染色分類計數(shù)。
4、染色分類計數(shù)過程中,若發(fā)現(xiàn)間皮細(xì)胞和不能分類的異常細(xì)胞應(yīng)中外描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。
[目的]掌握漿膜腔液粘蛋白定性(李凡他試驗)的方法。
[原理]漿膜腔上皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋白,其等電點pH為3~5,因此,可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。
[器材]100ml量筒,滴管。
[試劑]冰乙酸、蒸餾水。
[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液
[操作]
1、加試劑 加2~3滴冰乙酸于100ml量筒中,再加大約100ml蒸餾水,混勻,此時溶液的pH為3~5,靜置數(shù)分鐘。
2、加標(biāo)本 垂直滴加待測標(biāo)本1滴于量筒中。
3、觀察結(jié)果gydjdsj.org.cn/shiti/ 立即在黑色背景下觀察有無白色云霧狀沉淀生成及其下降程度。
4、判斷結(jié)果
(1)陰性、陽性結(jié)果的判斷。
1)陰性:清晰,不顯霧狀或有輕微白色霧狀渾濁,但在下降過程中消失。
2)陽性:出現(xiàn)白色霧狀渾濁并逐漸下沉至量筒底部不消失。
(2)陽性程度的判斷
1)漸呈白霧狀為(±)
2)可見灰白色霧狀為(+)
3)白色薄云狀為(++)
4)白色濃云狀(++++)
[注意事項]
1、血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后,用上清液進行檢查。
2、量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。
3、加入標(biāo)本后立即在黑色背景下仔細(xì)觀察結(jié)果。如渾濁不明顯,下沉緩慢,中途消失者為陰性。
[目的]掌握精子活動率和活動力的檢查方法。
[原理]精液液化后,將精液滴于載玻片上,顯微鏡下觀察精子的活動情況,計算活動率和活動力。
[器材]顯微鏡,載玻片,蓋玻片。
[試劑]5g/L伊紅Y染液
[標(biāo)本]新鮮液化精液。
[操作]
1、計算精子活動率 取液化精液1滴于載玻片上,加蓋玻片,高倍鏡下觀察100個精子,計數(shù)有尾部活動精子數(shù),計算其百分率,即精子活動率。
2、觀察精子活動力 在觀察活動率的同時,觀察精子活動的強度,將精子活動分為a、b、c、d四個級別,即精子活動力。a級:精子呈前向快速運動;b級:緩慢或呆滯的前向運動;c級:非前向運動;d級:死精子。
3、染色 若不活動精子大于50%,可進行體外活體染色,以鑒別其死活。取新鮮液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上,混勻,1min后推成薄片,自然干燥后于顯微鏡(高倍鏡)下觀察。死精子呈紅色,活精子不著色。觀察100個精子,以不著色精子的百分率報告精子活率。
[注意事項]
1、排精后1h內(nèi)送檢,時間過長,精子活動率和活動力減低。
2、檢查時注意保溫,溫度過低,精子活動率、活動力下降。
[目的]掌握精子計數(shù)的方法
[原理]采用碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度,甲醛固定精子,然后充計數(shù)池,顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的精子數(shù),換算成每升精液中的精子數(shù)。
[器材]顯微鏡,血紅細(xì)胞計數(shù)板,小試管。
[試劑]精子稀釋液。
[標(biāo)本]新鮮精液化精液。
[操作]
1、取稀釋液 取精子稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。
2、加精液 加入混勻的液化精液20ul,充分混勻。
3、充池 取1滴精子懸液充入計數(shù)池內(nèi),靜置3~5min。
4、觀察 高倍鏡下計數(shù)中央大方格內(nèi)四角及中央5個中方格內(nèi)的精子數(shù)。
5、計算
精子計數(shù)=5個中方格內(nèi)精子數(shù)×109/L
精子總數(shù)=精子數(shù)/L×精液量(ml)×10-3
[注意事項]
1、精子數(shù)量變異較大,較準(zhǔn)確的計數(shù)應(yīng)在2~3個月內(nèi)分別取3份或更多的精液標(biāo)本檢查。出現(xiàn)1次異常結(jié)果,應(yīng)間隔7d后再復(fù)查,反復(fù)查2~3次后方能得出較準(zhǔn)確結(jié)果。
2、如常規(guī)檢查未發(fā)現(xiàn)精子,應(yīng)離心后取沉淀物檢查,若仍無精子才能確定為精子癥。
[目的]掌握精子正常形態(tài)及其檢查方法。
[原理]正常精子形似蝌蚪,分頭、體、尾三部分,長約50~60um。頭部呈橢圓形,尾長可彎曲,經(jīng)過瑞特染色后,顯微鏡下觀察100~200個精子,觀察形態(tài)正常和異常精子數(shù)及其所占的比例。
[器材]顯微鏡,載玻片,香柏油。
[試劑]Wright染液。
[標(biāo)本]新鮮液化精液。
[操作]
1、涂片并染色 取液化精液1滴于載玻片上,直接涂片,自然干燥后行Wright染色。
2、觀察結(jié)果 油鏡下計數(shù)200個精子,觀察有無異形精子,同時計數(shù)精子凝集情況。
3、結(jié)果判斷
(1)頭部異常:有大頭、小頭、尖頭、雙頭、梨形頭、無定形頭及頭部邊緣不齊等。
(2)體部異常:有分支、雙支、體部腫脹甚至消失。
(3)尾部異常:有雙尾、卷曲尾、斷尾、尾部消失等。
[注意事項]
1、觀察精子形態(tài)的同時也要注意有無紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等。
2、注意觀察有無未成熟的生殖細(xì)胞,如發(fā)現(xiàn)未成熟生殖細(xì)胞,應(yīng)計數(shù)200個生殖細(xì)胞(包括精子),計算其未成熟生殖細(xì)胞百分率。
3、如果精子數(shù)>10×109/L,可直接涂片檢查;如果<10×109/L,則應(yīng)將精液離心15~20min后,取沉淀物涂片檢查。
4、衰老的精子體部也可膨大并有被膜,不宜列入異形精子。
一、陰道分泌物理學(xué)檢查
[目的]掌握陰道分泌物的理學(xué)檢查的方法及內(nèi)容。
[原理]通過理學(xué)檢查方法對新鮮陰道分泌物進行檢查,以觀察其顏色和pH變化。
[器材]消毒棉拭子,pH試紙。
[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物。
[操作]
1、觀察外觀 肉眼仔細(xì)觀察陰道分泌物的顏色。
2、測定酸堿度 用pH試紙檢測其酸堿度。
二、陰道分泌物顯微鏡檢查
[目的]掌握陰道分泌物顯微鏡檢查的方法及內(nèi)容。
[原理]利用顯微鏡對陰道分泌物濕片和染色涂片檢查,觀察其清潔度和有無特殊細(xì)菌及細(xì)胞等。
[器材]顯微鏡,載玻片。
[試劑]
1、2.5mol/L KOH溶液。
2、生理鹽水。
3、革蘭染液。
[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物
[操作]
1、濕片檢查
(1)取陰道分泌物后滴加1滴生理鹽水,制成涂片。
(2)低倍鏡觀察后,再用高倍鏡檢查,根據(jù)上皮細(xì)胞、白細(xì)胞(或膿細(xì)胞)、桿菌、球菌的多少,判斷陰道清潔度。
(3)檢查清潔度的同時,高倍鏡觀察有無陰道毛滴蟲。
(4)于陰道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH,混勻后加蓋玻片,先用低倍鏡觀察言觀色,若發(fā)現(xiàn)有菌絲樣物,再換高倍鏡,檢查有無真菌。
2、染色涂片檢查
(1)取陰道分泌物涂片,自然干燥后,行革蘭染色。
(2)顯微鏡下檢查有無致病菌。
3、結(jié)果判斷 陰道分泌物清潔度結(jié)果判斷
[注意事項]
1、取材要準(zhǔn)確,并及時送檢。否則會導(dǎo)致陰道毛滴蟲死亡、淋病奈瑟菌自溶。
2、陰道清潔度檢查時,標(biāo)本必須新鮮,防止污染。
3、檢查陰道毛滴蟲時應(yīng)注意保溫。
4、濕片檢查陰性時,應(yīng)再用Wright染色或革蘭染色,一次陰性不能排除診斷。