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臨床檢驗基礎(chǔ)實驗指導(dǎo)-目錄:實驗二 尿液酸堿度測定

臨床檢驗基礎(chǔ)實驗指導(dǎo)目錄:實驗二 尿液酸堿度測定:第一章血液檢驗的一般檢驗技術(shù)實驗一血液標(biāo)本的采集第二章 血液一般檢驗實驗一 紅細(xì)胞計數(shù)實驗二 血紅蛋白測定實驗三 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)實驗四 紅細(xì)胞沉降率測定實驗五白細(xì)胞計數(shù)實驗六白細(xì)胞分類計數(shù)實驗七 白細(xì)胞形態(tài)檢查實驗八 嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)第三章 血栓與止血一般檢驗實驗一血小板計數(shù)第四章 尿液檢驗實驗一 尿量測定實驗二 尿液酸堿度測定實驗三 尿蛋白定性檢查實驗四 尿蛋白定量檢查實驗五 尿葡萄糖定性檢

第一章血液檢驗的一般檢驗技術(shù)

實驗一血液標(biāo)本的采集

第二章  血液一般檢驗

實驗一 紅細(xì)胞計數(shù)

實驗二 血紅蛋白測定

實驗三 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)

實驗四 紅細(xì)胞沉降率測定

實驗五白細(xì)胞計數(shù)

實驗六白細(xì)胞分類計數(shù)

實驗七 白細(xì)胞形態(tài)檢查

實驗八 嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)

第三章 血栓與止血一般檢驗

實驗一血小板計數(shù)

第四章 尿液檢驗

實驗一 尿量測定

實驗二 尿液酸堿度測定

實驗三 尿蛋白定性檢查

實驗四 尿蛋白定量檢查

葡萄糖定性檢查"style="color:#FF0000" >實驗五 尿葡萄糖定性檢查

實驗六 尿沉渣檢查

第四章 腦脊液檢驗

實驗一 腦脊液顯微鏡檢查

實驗二 腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查

第六章 生殖系統(tǒng)分泌物檢驗

實驗一 精子活動率和活動力檢查

實驗二 精子計數(shù)

實驗三 精子形態(tài)檢查

實驗四 陰道分泌物檢查

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

第一章血液檢驗的一般檢驗技術(shù)

實驗一血液標(biāo)本的采集

一、毛細(xì)血管采血法

[目的]掌握毛細(xì)胞血管采血法,了解不同部位采血對檢驗結(jié)果的影響。

[原理]采血針刺破毛細(xì)血管后血液自然流出,用微量吸管吸取一定量的血液。

[器材]一次性消毒采血針、20ul吸管、75%乙醇棉球、無菌干棉球。

[試劑]洗滌液3管、生理鹽水。

[標(biāo)本]外周血

[操作]

   1、準(zhǔn)備  取試管1支,加入2ml生理鹽水。取微量吸管和乳膠吸頭相連,檢查連接是否漏氣,或取一次性微量吸管備用。

   2、按摩  輕輕按摩左手中指或無名指指尖內(nèi)側(cè),使局部組織自然充血。

   3、消毒  用75%乙醇棉球擦拭采血部位皮膚,待干。

   4、針刺  用左手拇指和示指固定采血部位使其皮膚和皮下組織繃緊,左手持一次性消毒采血針自指尖腹內(nèi)側(cè)迅速刺入,深度2~3mm,立即出針。

   5、拭血  待血液自然流出后,用無菌干棉球擦去第1滴血。

   6、吸血  血液自然流出時,用一次性微量吸管吸血到10ul刻度,然后用無菌干棉球壓住傷口止血。如血流不暢,可以用左手自采血部位遠端向指尖稍施壓使血液流出。

   7、稀釋 用無菌干棉球擦凈微量吸管外部后,將吸管伸入裝有生理鹽水的試管底部,慢慢排出吸管內(nèi)的血液,并用上清液沖洗管內(nèi)余血2~3次,最后將試管內(nèi)的液體混勻。

[注意事項]

   1、所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完整,無燒傷、凍瘡、發(fā)紺、水腫或炎癥等。除特殊情況外,不要在耳垂采血。半歲以下嬰幼兒由于手指小,可自拇指、腳趾或足跟內(nèi)、外側(cè)緣采血;嚴(yán)重?zé)齻呖蛇x皮膚完整處采血。

2、本試驗具有創(chuàng)傷性,必須嚴(yán)格控?zé)o菌技術(shù)操作,防止采血部位感染;做到一人一針一管,避免交叉感染,最好用一次性采血管。

3、皮膚消毒后,應(yīng)待乙醇揮發(fā)后采血,否則流出的血液擴散而不成滴。

4、進出針?biāo)俣纫杆,且傷口要有足夠的深度?/p>

5、因第1滴血混有組織液,應(yīng)擦去。如血流不暢切勿用力擠壓,以免造成組織液混入,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

第二章  血液一般檢驗

實驗一 紅細(xì)胞計數(shù)

[目的]掌握顯微鏡紅細(xì)胞計數(shù)的方法。

[原理]用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),充入計數(shù)池后,在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量,經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。

[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、微量吸管、玻璃棒。

[試劑]紅細(xì)胞稀釋液

[標(biāo)本]外周血或抗凝血(EDTA抗凝)。

[操作]

1、加稀釋液  取小試管1支,加紅細(xì)胞稀釋液2ml。

2、加血  用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血,輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部,再輕吸上清液清洗吸管2~3次,立即混勻。

3、充池  混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計數(shù)池,室溫下平放3~5min,待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。

4、計數(shù)  用高倍鏡依次計數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。

5、計算

25  N

紅細(xì)胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100  ×1012

N:表示5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)數(shù)。

   25

× 5   :將五個中方格紅細(xì)胞數(shù)換算成1個大方格紅細(xì)胞數(shù)。

×10:將1個大方格紅細(xì)胞數(shù)換1ul血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。

×106:1L=106ul

200:為血液的稀釋倍數(shù)。

[注意事項]

1、采血時不能過分?jǐn)D壓采血部位,針刺激深度必須適當(dāng)。

2、采血應(yīng)順利、準(zhǔn)確,采血部位不得有水腫、發(fā)紺、凍瘡、炎癥等。紅細(xì)胞數(shù)量明顯增高時可適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)。

3、大小方格內(nèi)壓線細(xì)胞的計數(shù)遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則,避免多數(shù)或漏數(shù)。

4、將細(xì)胞懸液充入計數(shù)池時要一次完成,不能產(chǎn)生滿溢、氣泡或充池不足的現(xiàn)象。

實驗二 血紅蛋白測定

[目的]掌握氰化高鐵血紅蛋白測定方法。

[原理]在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中,除硫化血紅蛋白外,其余血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白,再與氰離子結(jié)合,生成穩(wěn)定的復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白。棕紅色的氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰,可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計進行直接定量測定,或用HiCN參考液進行比色法測定,根據(jù)標(biāo)本的吸光度即可求出血紅蛋白濃度。

[器材]一次消毒采血針,微量吸管,試管,5ml移液管,75%乙醇棉球,無菌干棉球,分光光度計

[試劑]HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液)

[標(biāo)本]外周血

[操作]

1、直接定量測定

  (1)加轉(zhuǎn)化液:試管內(nèi)加5mlHiCN轉(zhuǎn)化液。

  (2)采血與轉(zhuǎn)化:取全血20ul,加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部,用上清液反復(fù)沖洗吸管3次,充分混合,靜置5min。

  (3)測定:以符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計,波長540nm處,光徑1.000cm,HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零,測定吸光度。

  (4)計算:根據(jù)標(biāo)本的吸光度直接計算出血紅蛋白濃度(g/L)

   64458

  血紅蛋白(g/L)=A×44000×251=A×367.7

A:540nm處測定管吸光度

64458:目前國際公認(rèn)的血紅蛋白平均相對分子質(zhì)量。

44000:1965年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)公認(rèn)的血紅蛋白摩爾消化系數(shù)。

251:稀釋倍數(shù)。

   2、HiCN標(biāo)準(zhǔn)液比色法測定

  (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計算。用HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋后(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在所用的分光光度計上分別測事實上各稀釋度的吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線索;蚯蟪鰮Q算常數(shù)K。

  (2)標(biāo)本的血紅蛋白轉(zhuǎn)化和比色同直接定量測定,得到標(biāo)本的吸光度(A)

  (3)通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測樣本的血紅蛋白濃度或用K值來計算血紅蛋白濃度,即Hb(g/L)=K×A。

[注意事項]

1、血紅蛋白測定方法很多。但無論采用何種方法,都必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期檢查,并與分光光度計相配。

2、標(biāo)準(zhǔn)微量吸管必須經(jīng)過水銀稱重法校正。加液量必須準(zhǔn)確,血液與轉(zhuǎn)化液充分混勻?捎醚t蛋白液代替抗凝血進行鑒定。

3、HiCN轉(zhuǎn)化液不能貯存在塑料瓶中,否則會使CN丟失,測事實上結(jié)果偏低。HiCN轉(zhuǎn)化液應(yīng)貯存在棕色有塞玻璃瓶中,4℃冰箱保存一般可用數(shù)月,但不能在0℃以下保存,因為結(jié)冰可引起高鐵氰化鉀還原,使轉(zhuǎn)化液褪色失效。

實驗三 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)

[目的] 掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞手工計數(shù)的操作方法

[原理] 網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質(zhì),在活體染色時可被煌焦油藍染成藍色網(wǎng)狀或顆粒狀,可與完全成熟的紅細(xì)胞區(qū)別。

[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片

[試劑]10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液

[標(biāo)本]新鮮全血

[操作]

1、加染液  于小試管中加入10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液2滴,再加入新鮮全血2滴,立即混勻,置室溫下15~20min。

2、制備涂片  取1小滴制成薄血涂片,自然干燥。

3、觀察  在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位進行觀察。

4、計數(shù)  在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。

5、計算

  計數(shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)

    網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)=  1000

網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值(網(wǎng)織紅細(xì)胞/L)=紅細(xì)胞/L×網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)

實驗四 紅細(xì)胞沉降率測定

[目的]掌握魏氏法紅細(xì)胞沉降率測定的原理及操作方法。

[原理]將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中,直立于特制血沉架上1h后讀取紅細(xì)胞下沉后血漿的高度。

[器材]Westergren血沉管、血沉架、吸管、試管。

[試劑]109mmol/L枸櫞酸鈉溶液

[標(biāo)本]新鮮全血

[操作]

   1、加抗凝劑  吸取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉0.4ml于試管中。

   2、采靜脈血  取靜脈血1.6ml,加入含抗凝劑的試管中,混勻。

   3、裝血沉管  用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處,拭去管外殘留余血。

   4、立血沉管  將血沉管直立于血沉架上。

[注意事項]

   1、使用分析純枸櫞酸鈉抗凝劑,配制時濃度應(yīng)準(zhǔn)確,配成后液體不渾濁、無沉淀,保存期為2周。

   2、嚴(yán)格控制采血量,使抗凝劑與血液比例為1︰4。

   3、血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn),放置要垂直,不得傾斜。

實驗五白細(xì)胞計數(shù)

[目的]掌握顯微鏡法白細(xì)胞計數(shù)的原理及方法。

[原理]用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù),同時破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血液注入血紅細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù),經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。

[器材]顯微鏡、改良Neubauer計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。

[試劑]白細(xì)胞稀釋液

[標(biāo)本]新鮮全血或末稍血

[操作]

1、加稀釋液  用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。

2、吸取血液  用微量吸管吸取新鮮全血或末稍血20ul, 擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部,輕輕放出血液,并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2~3次。

3、混勻  將試管中血液與稀釋液混勻,待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?/p>

4、充池  再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴,充入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池中,室溫靜置2~3min,待白細(xì)胞完全下沉。

5、計數(shù)  在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。

6、計算

  4個大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)(N) N

 白細(xì)胞= 4  ×10×20×106=20×109/L

[注意事項]

1、稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細(xì)胞計數(shù)板均為計量工具,使用前需經(jīng)過嚴(yán)格的校正,否則將直接影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確。

2、使用標(biāo)本可為由靜脈搏穿刺采取的新鮮全血,也可為靜脈末梢血。采集末梢血時,應(yīng)注意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)紺、炎癥等,以免標(biāo)本失去代表性;同時也應(yīng)注意不能過度擠壓,以免組織液混入引起血液凝因或造成計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。

3、在充池時,如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液,或產(chǎn)生氣泡、充液后移動蓋玻片等,均會使細(xì)胞分布不均勻,造成計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。

4、計數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布應(yīng)均勻,一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不超過10%,若相差太大,應(yīng)重新充池。

5、計數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時,遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。

6、白細(xì)胞數(shù)量過多時,可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。

實驗六白細(xì)胞分類計數(shù)

[目的]掌握顯微鏡外周血白細(xì)胞分類計數(shù)的方法及各種白細(xì)胞的正常形態(tài)。

[原理]將血液制成細(xì)胞分布均勻的血涂片,用瑞氏染液染色,根據(jù)各類細(xì)胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細(xì)胞進行分類并計數(shù)。通常分類100個白細(xì)胞,計算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。

[器材]顯微鏡、分類計數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。

[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液

[標(biāo)本]制備良好的血涂片

[操作]

1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色,沖洗干凈,自然干燥后待用。

2、低倍鏡觀察  低倍鏡下觀察白細(xì)胞分布和染色情況。

3、油鏡觀察  選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域,按一定的方向順序?qū)λ姷拿?個白細(xì)胞進行分類,并用白細(xì)胞分類計數(shù)器作好記錄,共計數(shù)100個白細(xì)胞。

4、計算  求出各類細(xì)胞所占的百分率

[注意事項]

1、由于各種白細(xì)胞體積大小不等,體積較小的淋巴細(xì)胞在血涂片的頭、體部較多,而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞較多,因此分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。

2、分類時要有秩序地、沒一定方向連續(xù)地進行,既不重復(fù)亦不遺漏,避免主觀選擇視野。

3、分類計數(shù)結(jié)果的記錄也可采用手工畫“正”或“++++”的方法。

實驗七 白細(xì)胞形態(tài)檢查

[目的]掌握各種白細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)改變。

[原理]用普通光學(xué)顯微鏡,直鏡觀察經(jīng)瑞氏染色后血涂片上的白細(xì)胞。從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面觀察細(xì)胞形態(tài)。

[器材]顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。

[試劑]瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液

[標(biāo)本]制備良好的血涂片

[操作]

1、染色  將血涂片用瑞氏染液染色,沖洗干凈,自然干燥后待用。

2、低倍鏡觀察  低倍鏡觀察細(xì)胞分布、數(shù)量、染色情況。

3、油鏡觀察  滴加香柏油1滴,在油鏡下對白細(xì)胞從細(xì)胞大小、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等多方面做認(rèn)真仔細(xì)地觀察。

4、計算毒性指數(shù)  觀察100或200個中性粒細(xì)胞,記錄有病理變化的中性粒細(xì)胞數(shù)量,計數(shù)毒性指數(shù)。

   有中毒顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)

 毒性指數(shù)=  計數(shù)的中性粒細(xì)胞數(shù)

[注意事項]

1、含中毒顆粒的中性粒細(xì)胞應(yīng)與嗜堿性粒細(xì)胞相區(qū)別,其區(qū)別要點是嗜堿性粒細(xì)胞核較少分葉,染色較淺,嗜堿性顆粒著色更深,較大且不均勻,細(xì)胞邊緣常分布較多,也可覆蓋分布于細(xì)胞核上。

2、在血涂片染色偏堿或染色時間過長時,可將中性顆粒誤認(rèn)為中毒顆粒。應(yīng)注意全片各種細(xì)胞的染色情況。

實驗八 嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)

[目的]掌握嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)的方法。

[原理]用嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù),使大部分的紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞被破壞并使嗜酸性粒細(xì)胞著色。將稀釋的細(xì)胞懸液滴入血細(xì)胞計數(shù)板,計數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量,經(jīng)過換算得出每升血液中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。

[器材]顯微鏡、改良Neubauber計數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。

[試劑]

1、伊紅丙酮稀釋液。

2、Hinkelman稀釋液。

3、乙醇-伊紅稀釋液。

4、皂素-甘油稀釋液。

5、溴甲酚紫稀釋液。

6、固綠稀釋液。

[標(biāo)本]新鮮全血或末梢血

[操作]

1、加稀釋液  吸取嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。

2、采血  用微量吸管采血20ul,擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管稀釋液的底部,輕輕放出血認(rèn),并吸取上層稀釋液清洗吸管2~3次。

3、混勻  將試管中的血液與稀釋液混勻,待細(xì)胞完全溶解。

4、充池  再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴,充入改良Neubauer計數(shù)板的2個計數(shù)池中,室溫下靜置3~5min。

5、計數(shù)  低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池共10個大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。

6、計算

  10個大方格內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞

嗜酸性粒細(xì)胞/L= 10×10×20×106

[注意事項]

1、凡能引起白細(xì)胞計數(shù)誤差的因素,嗜酸性業(yè)細(xì)胞計數(shù)時均勻應(yīng)注意。

2、計數(shù)應(yīng)在60min內(nèi)完成,因時間太長,嗜酸性粒細(xì)胞會被逐漸溶解,造成結(jié)果偏低。

3、血液加入稀釋液后應(yīng)立即混勻,否則易致血液凝固和細(xì)胞聚集。因嗜酸性粒細(xì)胞易于破碎,振蕩不宜太猛烈。若使用含甘油的稀釋液,因甘油造成液體粘稠度增加,可增加振蕩次數(shù)、延長振蕩混勻時間。

第三章 血栓與止血一般檢驗

實驗一血小板計數(shù)

[目的]掌握血小板的顯微鏡目視計數(shù)方法。

[原理]血液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后,充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量,經(jīng)過換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。

[器材]顯微鏡,血細(xì)胞計數(shù)板,采血針,血紅蛋白吸管,試管。

[試劑]10g/L草酸銨稀釋液。

[標(biāo)本]外周血

[操作]

1、吸取稀釋液 準(zhǔn)確吸取10g/L  草酸銨稀釋液0.38ml,置于清潔小試管中。

2、采血  常規(guī)消毒無名指,穿刺后,讓血液自然流出,準(zhǔn)確采血20ul,置于含有草酸銨的稀釋液中,立即充分混勻。

3、稀釋靜置  待完全溶血后再混勻1min,置室溫10min。

4、充液靜置 取混勻的血小板懸液1滴充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi),靜置10~15min,使血小板充分下沉?諝飧稍锏募竟(jié)應(yīng)將血細(xì)胞計數(shù)板置濕盒內(nèi)。

5、計數(shù)  用高倍鏡計數(shù)血細(xì)胞計數(shù)板中央大方格內(nèi)的四角和中央共5個中方格內(nèi)血小板數(shù)量。

6、計算  每升血小板數(shù)=5個中方格內(nèi)血小板數(shù)×109/L

[注意事項]

1、草酸銨稀釋液要清潔,無細(xì)菌、塵埃等污染。存放時間較長后應(yīng)過濾后再使用。

2、毛細(xì)血管采血時,針刺應(yīng)達3mm深,使血液流暢。拭去第1滴血后立即采血,以防血小板聚集和破壞。如果同時做白細(xì)胞和血小板計數(shù)時,應(yīng)先采血做血小板計數(shù)。

3、血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻,但不可過度振蕩,以免導(dǎo)致血小板破壞和聚集。

4、血小板懸液充入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)需要靜置10~15min,使血小板完全下沉后再計數(shù)。但應(yīng)注意保持濕度,避免水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結(jié)果。

5、計數(shù)時光線不可太強,注意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別,附著在血紅細(xì)胞旁的血小板也要注意,不要漏數(shù)。

6、應(yīng)在1h內(nèi)計數(shù)完畢,否則結(jié)果偏低。

7、所用計量器材必須標(biāo)準(zhǔn)化。

8、檢查前,患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物。

 

第四章 尿液檢驗

實驗一 尿量測定

[目的]掌握尿量的測定方法及注意事項。

[原理]采用有刻度的容器測定24h尿量。

[器材]量杯或量筒、潔凈容器。

[標(biāo)本]24h尿液。

[操作]清晨將尿液排空后棄去,用潔凈容器留取隨后的24h尿液,混合后準(zhǔn)確測定尿量。

[注意事項]每次留取標(biāo)本必須www.med126.com排空膀胱,尿量測定精確至毫升。氣溫過高時注意防腐。

[參考值]①成年人:1000~2000ml/24h。②1~6歲:300~1000ml/24h。③7~12歲:500~1500ml/24h。

實驗二 尿液酸堿度測定

[目的]了解常用干化學(xué)試帶測定尿液酸堿度的方法、原理及注意事項。

[原理]干化學(xué)試帶的測試模塊區(qū)含有甲基紅和溴麝香草酚藍,兩種酸堿指示劑適量配合可測試尿液酸堿度。

[器材]潔凈試管或尿標(biāo)。

[試劑]尿多聯(lián)化試帶與標(biāo)準(zhǔn)色板。

[標(biāo)本]新鮮尿液。

[操作]將試帶用尿液浸濕后與標(biāo)準(zhǔn)色板比色,1min內(nèi)讀取pH。

[注意事項]

1、試帶應(yīng)在干燥、避光處保存,注意保質(zhì)期,定期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控液進行檢測。

2、按說明書操作,1min內(nèi)讀取結(jié)果。

3、標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)新鮮,否則細(xì)菌繁殖會使pH增高;蛞騿适]發(fā)性酸而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4、尿液pH還可作為其他檢查項目的質(zhì)控指標(biāo),若pH<3或pH>9均會影響其他檢測結(jié)果。

實驗三 尿蛋白定性檢查

[目的]掌握尿蛋白定性的磺基水楊酸法。

[原理]磺基水楊酸是一種生物堿,在酸性條件下,磺基水楊酸的磺酸根離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽離子結(jié)合,形成不溶性的蛋白鹽沉淀,沉淀生成的程度可反映蛋白質(zhì)含量。

[器材]小試管、滴管、吸管、黑色襯紙及pH廣泛試紙。

[試劑]200g/L磺基水楊酸溶液。

[標(biāo)本]新鮮尿液或人工蛋白尿標(biāo)本。

[操作]

1、加尿液  取小試管2支,各加清晰尿液1ml。

2、加試劑  于第1支試管內(nèi)滴加磺基水楊酸溶液2滴,輕輕混勻;另1支試管不加試劑作空白對照,1min內(nèi)觀察結(jié)果。

3、判斷結(jié)果  按表判斷陽性程度及蛋白質(zhì)的含量

   結(jié)果  報告方式 相當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)含量(g/L)

清晰透明 — <0.05

在黑色背景上可見輕度渾濁 極微量 0.05~0.1

不需黑色背景即見輕度渾濁± 0.1~0.5

白色渾濁,但無顆粒出現(xiàn)  +  0.5~1.0

渾濁并出現(xiàn)顆粒 ++ 1.0~2.0

明顯渾濁呈現(xiàn)絮狀 +++ 2.0~5.0

渾濁,有大凝塊++++ >5.0

[注意事項]

1、該法靈敏,極輕微反應(yīng)無意義。判斷結(jié)果應(yīng)及時,否則會使陽性增高。

2、尿內(nèi)含尿酸或尿酸鹽過多。可出現(xiàn)假陽性,但反應(yīng)較為緩慢,15s后出現(xiàn)渾濁,由弱漸強;或于加試劑1min后漸呈蛛絲狀渾濁,緩慢擴散,覆蓋于尿液的表面,加熱或加堿可消失。

3、含碘造影劑、大劑量青霉素等也可使反應(yīng)呈假陽性,但其反應(yīng)與蛋白尿不同。應(yīng)仔細(xì)觀察并結(jié)合用藥情況綜合分析。

實驗四 尿蛋白定量檢查

[目的]了解尿液蛋白質(zhì)定量雙縮脲法的反應(yīng)原理、檢測方法。

[原理]鎢酸可沉淀尿中的蛋白質(zhì),后者復(fù)溶于雙縮脲試劑中,其堿性的Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵形成紫色復(fù)合物,呈色深淺與尿蛋白質(zhì)含量成正比。

[器材]試管、滴管、分光光度計、離心機等

[試劑]

1、200g/L磺基水楊酸溶液。

2、15g/L鎢酸鈉溶液。

3、0.075mol/L硫酸。

4、雙縮脲試劑。

5、蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。

6、生理鹽水。

[標(biāo)本]新鮮尿液

[操作] 

1、測定尿量  準(zhǔn)確測定患者24h尿量,反復(fù)混勻后取10ml離心沉淀留取上清液備用。

2、尿蛋白定性  采用磺基水楊酸法定性尿蛋白,陽性標(biāo)本進行下列測定。

3、加標(biāo)本處理

①加尿液:根據(jù)蛋白質(zhì)半定量的結(jié)果決定標(biāo)本的加入量。尿蛋白定性(+)~(++),于10ml離心管中加尿液5ml,如定性(++)~(+++),則取1ml尿液加4ml蒸餾水稀釋。

②加沉淀劑:向離心管加入0.075mol/L硫酸2.5ml,混勻后再加15g/L鎢酸鈉溶液2.5ml,充分混勻后靜置10min。

③離心:1500r/min離心5min后,傾盡上清液,將離心管倒置于干燥濾紙上吸干水分,保留沉淀待測。

④復(fù)溶:向沉淀中加生理鹽水至1ml刻度,振搖以使蛋白質(zhì)溶解,作為測定管。

4、雙縮脲反應(yīng)   按表測定,混勻后37℃水浴30min

尿蛋白定量雙縮脲法

試劑  測定管標(biāo)準(zhǔn)管 空白管

生理鹽水  1.0 __

2.5g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液  _ 1.0_

雙縮脲試劑4.0 4.0  4.0

5、比色和計算   波長540nm,空白管調(diào)零分別讀取A標(biāo)A。

 A     24h尿量(ml)

24尿蛋白總量(g)= A標(biāo) ×2.5×   1000(ml) 

[注意事項] 24h尿標(biāo)本最好不加防腐劑,冷藏保存,測定前充分混勻。

實驗五 尿葡萄糖定性檢查

[目的]掌握尿葡萄糖定性的班氏法。

[原理]葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中,能將班氏試劑的藍色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅,進而形成紅色氧化亞銅沉淀。

[器材]試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。

[試劑]

1、甲液 枸櫞酸鈉,無水碳酸鈉,蒸餾水加熱助溶。

2、乙液  硫酸銅,蒸餾水加熱助溶。冷卻后,將乙液緩慢加入甲液中,不斷混勻,冷卻至室溫后補充蒸餾水至1000ml。如溶液不透明則需要過濾,煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應(yīng)用。

[標(biāo)本]新鮮尿液

[操作]

1、鑒定班氏試劑質(zhì)量  取中號試管1支,加入班氏試劑2.0ml,搖動試管徐徐加熱至沸騰,觀察試劑有無顏色及性狀變化,若試劑仍為透明藍色,可進行以下實驗。

2、加尿液  向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml,混勻。

3、加熱煮沸  繼續(xù)煮沸1~2min,或置沸水浴5min,自然冷卻。

4、判斷結(jié)果  判斷結(jié)果見表

糖定性試驗結(jié)果判斷

反應(yīng)現(xiàn)象 報告方式  葡萄糖含量(mmol/L)

藍色不變 —  <5.6

藍色中略帶綠色,但無沉淀  ± 5.6~11.2

綠色,伴少許黃綠色沉淀 +<28

較多黃綠色沉淀,以黃為 ++ 28~56

土黃色渾濁,有大量沉淀+++ 57~112

大量棕紅色或磚紅色沉淀 ++++ >112

[注意事項]

1、試劑與尿液的比例為10︰1。

2、煮混時應(yīng)不時搖動試管以防爆沸噴出,出可在沸水浴中實驗。

3、檢驗糖尿病患者尿液中葡萄糖,應(yīng)空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本。

4、尿液中有大量尿酸鹽存在時,煮沸后也呈渾濁并帶綠色,但久置后并不變黃色而呈灰藍色,故必須于冷卻后觀察結(jié)果。尿中含大量銨鹽時可抑制氧化亞銅沉淀的生成,應(yīng)加堿煮沸除去。蛋白含量較高時也影響銅鹽的沉淀,可用加熱乙酸法除去。

5、一些非糖還原性物質(zhì),如水合氯醛氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、鏈霉素、VitC、異煙肼等,當(dāng)基在尿中含量過高時亦呈陽性反應(yīng),應(yīng)停藥3d后再進行檢查。對靜脈輸注大劑量VitC者5d內(nèi)不宜做尿糖定性,或定性時先將尿液煮沸使之分解破壞。

實驗六 尿沉渣檢查

[目的]掌握尿沉渣非染色法顯微鏡檢查的內(nèi)容和方法。

[原理]采用顯微鏡觀察的方法,根據(jù)尿液細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)特征,識別并記錄其在顯微鏡一定視野內(nèi)的數(shù)量。

[器材]載玻片、離心機、刻度離心管、蓋玻片、滴管、普通顯微鏡、定量尿沉渣分析板。

[標(biāo)本]新鮮尿液

[操作]

1、未離心直接涂片法

(1)混勻:充分混勻尿液。

(2)制備涂片:取混勻的尿液1滴于載玻上,加蓋玻片,注意避免產(chǎn)生氣泡。

(3)觀察計數(shù):①先用低倍觀察全片細(xì)胞、管型等成分的分布情況,然后用高倍鏡確認(rèn)。注意使用暗視野觀察尿液有形成分,特別是透明管型。②管型在低倍鏡下觀察,至少計數(shù)20個視野;細(xì)胞在高倍鏡下觀察至少計數(shù)10個視野,取其平均值報告;結(jié)晶按高倍鏡視野中分布范圍報告。計數(shù)時要注意細(xì)胞的完整性,還要注意有無其他異常巨大細(xì)胞、寄生蟲蟲卵、滴蟲、細(xì)菌、粘液絲等,男性尿液標(biāo)本還要注意有無精子及卵磷脂小體。

2、離心沉淀涂片法

(1)離心尿液:透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標(biāo)本,是尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化推行的方法。取尿液10ml離心5min,要求相對離心力為400g。

(2)提取尿沉渣:手持離心管傾斜45°~90°,用滴管吸去上層尿液,保留下層0.2ml尿沉渣。

(3)涂片:輕輕混勻尿沉渣后,取1滴置載玻片上,用18mm×18mm或22mm×22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。

(4)觀察計數(shù):與未離心尿直接涂片法相同。

3、定量尿沉渣分析法  定量尿沉渣分析板由1塊硬質(zhì)塑料板制成,每塊板內(nèi)分為10個統(tǒng)一深度的計數(shù)池,每1個計數(shù)池內(nèi)的計數(shù)區(qū)為1.0ul計數(shù)區(qū)分為10個大方格,每個大方格又分為9個小方格。

(1)未離心法:直接取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計數(shù)池內(nèi),在低倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)管型總數(shù),在高倍鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù),此即每微升尿液某種細(xì)胞或管型的數(shù)量。

(2)離心法:尿液標(biāo)本處理同離心尿沉淀涂片法,然后充池計數(shù),方法同上。

4、報告結(jié)果

(1)涂片法:細(xì)胞以最低數(shù)~最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)~最高數(shù)/低倍鏡視野報告。結(jié)晶以所占視野面報告,無結(jié)晶為(—);結(jié)晶占1/4視野(+);結(jié)晶占1/2視野為(++);結(jié)晶占3/4視野為(+++);結(jié)晶滿視野為(++++)。如果細(xì)胞、管理的數(shù)量過多難以計算,也可按結(jié)晶的報告方式報告結(jié)果。

(2)定量尿沉渣分析板法:以每微升某種細(xì)胞或管型數(shù)報告。

第四章 腦脊液檢驗

實驗一 腦脊液顯微鏡檢查

[目的]掌握腦脊液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。

[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。

[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液,冰乙酸,白細(xì)胞稀釋液,瑞氏染液或瑞-吉染液。

[標(biāo)本]新鮮腦脊液。

[操作]

(1)充池:直接用微量吸管吸取混勻的腦脊液,充入血細(xì)胞計數(shù)板的上下2個計數(shù)池。

(2)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡下計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。

(3)計算:10個大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù),再換算成每升腦脊液細(xì)胞總數(shù)。

[注意事項]

1、直接白細(xì)胞計數(shù)時,也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出,僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸,再吸以少量混勻的腦脊液于吸管中,數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解,然后再充池計數(shù)。

2、細(xì)胞計數(shù)時,如發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞有皺縮或腫脹等異,F(xiàn)象,應(yīng)如實報告,以協(xié)助臨床醫(yī)學(xué)鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。

3、血性腦脊液中的白細(xì)胞必須校正后才有價值,校正方法是分別計數(shù)血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)和腦脊液細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞數(shù),扣除因出血而帶進腦脊液的白細(xì)胞數(shù)。

   腦脊液紅細(xì)胞數(shù)×血液白細(xì)胞數(shù)

白細(xì)胞校正數(shù)腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)—  血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)

4、細(xì)胞涂片時,為了使細(xì)胞容易粘在玻片上,可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴,加血清1滴,混勻后涂片。

5、涂片染色分類時,如見內(nèi)皮細(xì)胞或異常細(xì)胞,則另行描述報告,必要時用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。

6、實驗結(jié)果后,血細(xì)胞計數(shù)板用0.75%乙醇浸泡消毒60min,忌用酚浸泡,以免損壞計數(shù)板。

實驗二 腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查

[目的]掌握腦脊液蛋白質(zhì)定性試驗的方法。

[原理]腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合,形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。

[器材]小試管、刻度吸管、尖滴管。

[試劑]飽和苯酚溶解。

[標(biāo)本]新鮮腦脊液。

[操作]

1、加試劑  取試劑2ml于小試管中。

2、加標(biāo)本  用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本1~2滴。

3、觀察結(jié)果  在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。

4、判斷結(jié)果

(1)清晰透明,不呈現(xiàn)云霧狀為(—)。

(2)呈微白霧狀,對光不易看見,黑色背景下才能見到(±)。

(3)灰白色云霧狀為(+)。

(4)白色渾濁或白色薄云狀沉淀為(++)。

(5)白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為(+++)。

(6)立即形成白色凝塊為(++++)。

[注意事項]

1、當(dāng)室溫在10℃以下時,應(yīng)將試劑保存在37℃溫箱中,否則飽和度降低,可致假陽性。

2、試管內(nèi)徑以小為佳,一般為(13±1)mm,加入試劑后立即觀察結(jié)果。

3、標(biāo)本中如紅細(xì)胞過多,應(yīng)離心沉淀取上清液檢測。

第五章 漿膜腔積液檢驗

實驗一 漿膜腔積液顯微鏡檢查

[目的]掌握漿膜腔積液顯微鏡檢查的內(nèi)容、方法。

[器材]顯微鏡、改良牛鮑計數(shù)板、微量吸管、小試管。

[試劑]生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液,冰乙酸,白細(xì)胞稀釋液,瑞氏染液或瑞-吉染液。

[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液。

[操作]

(一)有核細(xì)胞計數(shù)

1、直接計數(shù)法

(1)去除紅細(xì)胞:在小試管內(nèi)放入冰乙酸1~2滴,轉(zhuǎn)動試管,使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去,滴加混勻漿膜腔積液3~4滴,混勻,放置數(shù)分鐘,破壞紅細(xì)胞。

(2)充池:用微量吸管取混勻破壞紅細(xì)胞后的漿膜腔積液充入血細(xì)胞計數(shù)板的2個計數(shù)池內(nèi)。

(3)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四周和中央大方格共10個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。

(4)計算:10個大方格有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細(xì)胞總數(shù),再換算成每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。

2、稀釋計數(shù)法

(1)稀釋破壞紅細(xì)胞:根據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少,用白細(xì)胞稀釋液對標(biāo)本進行一定倍數(shù)稀釋,混勻,放置數(shù)分鐘,破壞紅細(xì)胞。

(2)充池:用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個計數(shù)池。

(3)計數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格共5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)。

(4)計算:根據(jù)5個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù),計算每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。

(二)有核細(xì)胞分類

1、直接分類法 有核細(xì)胞計數(shù)后,將低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡,直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進行分類,共分類計數(shù)100個有核細(xì)胞,分別計數(shù)單個核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及間皮細(xì)胞)和多個核細(xì)胞(粒細(xì)胞)的百分率。

2、涂片染色分類法  在抽出穿刺液后,立即以1000r/min離心5min,取沉淀物制成均勻的薄片,置于室溫下或37℃恒溫箱內(nèi)盡快干燥,瑞氏或瑞-吉染色后油鏡分類計數(shù)100個有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見到淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。

[注意事項]

1、有核細(xì)胞計數(shù)應(yīng)包括間皮細(xì)胞。

2、必要時可采用細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞,以提高白細(xì)胞分類計數(shù)的準(zhǔn)確性。

3、有核細(xì)胞分類計數(shù)誤差大,尤其是陳舊性、細(xì)胞變形的標(biāo)本,故推薦采用涂片染色分類計數(shù)。

4、染色分類計數(shù)過程中,若發(fā)現(xiàn)間皮細(xì)胞和不能分類的異常細(xì)胞應(yīng)中外描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。

實驗二 漿膜腔積液粘蛋白定性試驗

[目的]掌握漿膜腔液粘蛋白定性(李凡他試驗)的方法。

[原理]漿膜腔上皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋白,其等電點pH為3~5,因此,可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。

[器材]100ml量筒,滴管。

[試劑]冰乙酸、蒸餾水。

[標(biāo)本]漿膜腔穿刺液

[操作]

1、加試劑  加2~3滴冰乙酸于100ml量筒中,再加大約100ml蒸餾水,混勻,此時溶液的pH為3~5,靜置數(shù)分鐘。

2、加標(biāo)本  垂直滴加待測標(biāo)本1滴于量筒中。

3、觀察結(jié)果gydjdsj.org.cn/shiti/  立即在黑色背景下觀察有無白色云霧狀沉淀生成及其下降程度。

4、判斷結(jié)果

(1)陰性、陽性結(jié)果的判斷。

1)陰性:清晰,不顯霧狀或有輕微白色霧狀渾濁,但在下降過程中消失。

2)陽性:出現(xiàn)白色霧狀渾濁并逐漸下沉至量筒底部不消失。

(2)陽性程度的判斷

1)漸呈白霧狀為(±)

2)可見灰白色霧狀為(+)

3)白色薄云狀為(++)

4)白色濃云狀(++++)

[注意事項]

1、血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后,用上清液進行檢查。

2、量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。

3、加入標(biāo)本后立即在黑色背景下仔細(xì)觀察結(jié)果。如渾濁不明顯,下沉緩慢,中途消失者為陰性。

第六章 生殖系統(tǒng)分泌物檢驗

實驗一 精子活動率和活動力檢查

[目的]掌握精子活動率和活動力的檢查方法。

[原理]精液液化后,將精液滴于載玻片上,顯微鏡下觀察精子的活動情況,計算活動率和活動力。

[器材]顯微鏡,載玻片,蓋玻片。

[試劑]5g/L伊紅Y染液

[標(biāo)本]新鮮液化精液。

[操作]

1、計算精子活動率 取液化精液1滴于載玻片上,加蓋玻片,高倍鏡下觀察100個精子,計數(shù)有尾部活動精子數(shù),計算其百分率,即精子活動率。

2、觀察精子活動力  在觀察活動率的同時,觀察精子活動的強度,將精子活動分為a、b、c、d四個級別,即精子活動力。a級:精子呈前向快速運動;b級:緩慢或呆滯的前向運動;c級:非前向運動;d級:死精子。

3、染色  若不活動精子大于50%,可進行體外活體染色,以鑒別其死活。取新鮮液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上,混勻,1min后推成薄片,自然干燥后于顯微鏡(高倍鏡)下觀察。死精子呈紅色,活精子不著色。觀察100個精子,以不著色精子的百分率報告精子活率。

[注意事項]

1、排精后1h內(nèi)送檢,時間過長,精子活動率和活動力減低。

2、檢查時注意保溫,溫度過低,精子活動率、活動力下降。

實驗二 精子計數(shù)

[目的]掌握精子計數(shù)的方法

[原理]采用碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度,甲醛固定精子,然后充計數(shù)池,顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的精子數(shù),換算成每升精液中的精子數(shù)。

[器材]顯微鏡,血紅細(xì)胞計數(shù)板,小試管。

[試劑]精子稀釋液。

[標(biāo)本]新鮮精液化精液。

[操作]

1、取稀釋液  取精子稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。

2、加精液 加入混勻的液化精液20ul,充分混勻。

3、充池  取1滴精子懸液充入計數(shù)池內(nèi),靜置3~5min。

4、觀察  高倍鏡下計數(shù)中央大方格內(nèi)四角及中央5個中方格內(nèi)的精子數(shù)。

5、計算

精子計數(shù)=5個中方格內(nèi)精子數(shù)×109/L

精子總數(shù)=精子數(shù)/L×精液量(ml)×10-3

[注意事項]

1、精子數(shù)量變異較大,較準(zhǔn)確的計數(shù)應(yīng)在2~3個月內(nèi)分別取3份或更多的精液標(biāo)本檢查。出現(xiàn)1次異常結(jié)果,應(yīng)間隔7d后再復(fù)查,反復(fù)查2~3次后方能得出較準(zhǔn)確結(jié)果。

2、如常規(guī)檢查未發(fā)現(xiàn)精子,應(yīng)離心后取沉淀物檢查,若仍無精子才能確定為精子癥。

實驗三 精子形態(tài)檢查

[目的]掌握精子正常形態(tài)及其檢查方法。

[原理]正常精子形似蝌蚪,分頭、體、尾三部分,長約50~60um。頭部呈橢圓形,尾長可彎曲,經(jīng)過瑞特染色后,顯微鏡下觀察100~200個精子,觀察形態(tài)正常和異常精子數(shù)及其所占的比例。

[器材]顯微鏡,載玻片,香柏油。

[試劑]Wright染液。

[標(biāo)本]新鮮液化精液。

[操作]

1、涂片并染色  取液化精液1滴于載玻片上,直接涂片,自然干燥后行Wright染色。

2、觀察結(jié)果  油鏡下計數(shù)200個精子,觀察有無異形精子,同時計數(shù)精子凝集情況。

3、結(jié)果判斷 

(1)頭部異常:有大頭、小頭、尖頭、雙頭、梨形頭、無定形頭及頭部邊緣不齊等。

(2)體部異常:有分支、雙支、體部腫脹甚至消失。

(3)尾部異常:有雙尾、卷曲尾、斷尾、尾部消失等。

[注意事項]

1、觀察精子形態(tài)的同時也要注意有無紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等。

2、注意觀察有無未成熟的生殖細(xì)胞,如發(fā)現(xiàn)未成熟生殖細(xì)胞,應(yīng)計數(shù)200個生殖細(xì)胞(包括精子),計算其未成熟生殖細(xì)胞百分率。

3、如果精子數(shù)>10×109/L,可直接涂片檢查;如果<10×109/L,則應(yīng)將精液離心15~20min后,取沉淀物涂片檢查。

4、衰老的精子體部也可膨大并有被膜,不宜列入異形精子。

實驗四 陰道分泌物檢查

一、陰道分泌物理學(xué)檢查

[目的]掌握陰道分泌物的理學(xué)檢查的方法及內(nèi)容。

[原理]通過理學(xué)檢查方法對新鮮陰道分泌物進行檢查,以觀察其顏色和pH變化。

[器材]消毒棉拭子,pH試紙。

[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物。

[操作]

1、觀察外觀  肉眼仔細(xì)觀察陰道分泌物的顏色。

2、測定酸堿度  用pH試紙檢測其酸堿度。

二、陰道分泌物顯微鏡檢查

[目的]掌握陰道分泌物顯微鏡檢查的方法及內(nèi)容。

[原理]利用顯微鏡對陰道分泌物濕片和染色涂片檢查,觀察其清潔度和有無特殊細(xì)菌及細(xì)胞等。

[器材]顯微鏡,載玻片。

[試劑]

1、2.5mol/L KOH溶液。

2、生理鹽水。

3、革蘭染液。

[標(biāo)本]新鮮陰道分泌物

[操作]

1、濕片檢查

(1)取陰道分泌物后滴加1滴生理鹽水,制成涂片。

(2)低倍鏡觀察后,再用高倍鏡檢查,根據(jù)上皮細(xì)胞、白細(xì)胞(或膿細(xì)胞)、桿菌、球菌的多少,判斷陰道清潔度。

(3)檢查清潔度的同時,高倍鏡觀察有無陰道毛滴蟲。

(4)于陰道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH,混勻后加蓋玻片,先用低倍鏡觀察言觀色,若發(fā)現(xiàn)有菌絲樣物,再換高倍鏡,檢查有無真菌。

2、染色涂片檢查

(1)取陰道分泌物涂片,自然干燥后,行革蘭染色。

(2)顯微鏡下檢查有無致病菌。

3、結(jié)果判斷  陰道分泌物清潔度結(jié)果判斷

[注意事項]

1、取材要準(zhǔn)確,并及時送檢。否則會導(dǎo)致陰道毛滴蟲死亡、淋病奈瑟菌自溶。

2、陰道清潔度檢查時,標(biāo)本必須新鮮,防止污染。

3、檢查陰道毛滴蟲時應(yīng)注意保溫。

4、濕片檢查陰性時,應(yīng)再用Wright染色或革蘭染色,一次陰性不能排除診斷。

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