精液主要由精漿組成。睪丸曲細(xì)精管內(nèi)的生精細(xì)胞在垂體前葉促性腺激素的作用下,經(jīng)精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞及精子細(xì)胞幾個階段的分化演變,最后發(fā)育為成熟的精子,此過程約需70天,70%的精子貯存于附睪內(nèi),2%于輸精管內(nèi),其余儲契于輸精管的壺腹腔部,精囊僅存少量。射精時,精子隨精漿一起經(jīng)輸精管、射精管和尿道排出體外。精漿由精囊液、前列腺液以及睪丸、附睪、輸精管、尿道旁腺、尿道球腺分泌的少量液體混合而成。
清液中水約占90%,固體成分約占10%,有形成分除精子外,尚含少量白細(xì)胞和生殖道脫落的上皮細(xì)胞等。精漿的化學(xué)成分十分復(fù)雜,除前面提到的成分外,還有各種精漿蛋白(白蛋白、免疫球蛋白、纖維蛋白原、α2巨球蛋白、纖維蛋白等,總濃度為55/75g/L)、酶類(酸性磷酸酯酶、乳酸脫氫酶-X、溶菌酶等)、激素、微量金屬無素等。
精液檢查包括精子的形態(tài)、當(dāng)選量和功能;以及精漿的生物百分比學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)及精子功能等。
精液檢查的主要的目的有:①評價男性生育功能,為不育癥的診斷和療效觀察提供了依據(jù);②輔助男性生殖系統(tǒng)疾病的的診斷;③輸精管結(jié)扎術(shù)后的療效觀察;④計劃生育和科研;⑤為人工授精和精子庫的篩選優(yōu)質(zhì)精子;⑥法醫(yī)學(xué)鑒定。
一、標(biāo)本采集
1.準(zhǔn)備工作①向受檢者解精液檢查的意義,標(biāo)本采集方法和注意事項。②標(biāo)本采集室最好在實驗室附近,室溫應(yīng)控制在20-35攝氏度。室內(nèi)必須清潔、肅靜、無人為干擾;③采集標(biāo)本前禁欲3-7天。④采集精液前排凈尿液。
2.采集方法:可用手yin法或其它方法。將一次射出和全部精液直接排入潔凈、干燥的容器內(nèi)(為能用乳膠避孕套)。開始射出的精液精子濃度最高。終末部分精子濃度最低。采集微生物培養(yǎng)標(biāo)本須無菌操作。
3.標(biāo)本運送:精液采集后應(yīng)立即送檢。溫度低于20攝氏度或高于40攝氏度將影響精子活動故冬季應(yīng)注意保溫,可將標(biāo)本瓶裝入內(nèi)衣袋貼身運送。
4.標(biāo)本采集次數(shù):因精子生成日間變動較大,不能僅憑一次檢查結(jié)果做診斷。一般應(yīng)間隔1-2周檢查一次。連續(xù)檢查2-3次。
二、一般性狀檢查
(一)量
精液完全液化后測定其排出量。有生育力的正常男性一次射精最為2-6毫升,平均3.5ml。一次射精量與射精頻度呈負(fù)相關(guān)。若禁欲5-7天射精量仍少于2毫升,視為精液減少;若不射精,稱為無精液癥(aspermia)。精漿是精子活動的介質(zhì),并可中和陰道的酸性分泌物,以免影響精子活力。精液量減少(精漿不足)不利于精通過陰道進(jìn)入子宮和輸狼管,影響受精。若一次射精量超過8毫升,精子被稀釋,也不利于生育。此可因垂體前葉促性腺素的分泌功能亢進(jìn),使雄激素的水平升高所致亦可見于禁欲時間過長者。
(二)外觀
1.顏色和透明度:正常精液呈灰白色,自行液化后為半透明的乳白色,久未射精者可略顯淺黃色。凡精液呈鮮紅、淡紅、暗紅或醬油色并含有大量紅細(xì)胞者稱為血精,可能由于前列腺和精非特異性炎癥、生殖系結(jié)核、腫瘤或結(jié)石所致黃色或棕色膿性精液見于前列腺炎和精囊炎。
2.粘稠度:正常情況下新排出的精液迅速凝成膠胨狀,然后逐漸變化。若新排出的精液呈米湯樣,可能為先天性精囊或精囊液流出管道阻塞所致精液稀薄,粘稠度下降,也要見于精子濃度太低或無精子癥時。
(三)氣味
正常精液具有栗花和石楠花的特殊氣味,由于前列腺液產(chǎn)生。
(四)液化時間
精液液化時間是指新排出的精液人膠胨轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂闪鲃訝顟B(tài)所需的時間。有關(guān)精液凝固與液化的過程極其復(fù)雜,有相當(dāng)多的物質(zhì)參與,例如前列腺與精囊分泌物等都可能影響其時間長短,此外也受溫度影響。在室溫下,正常精液排出后60分鐘內(nèi)液化。前裂腺炎時,由于其功能影響,導(dǎo)致液化時間延長,甚至不液化,不液化可抑制精子活動力,而影響生育能力。
三、化學(xué)檢查
精漿中的一些生化標(biāo)志物可反映副性腺性功能。例如檸檬酸、鋅、谷氨酰胺轉(zhuǎn)酞酶和酸性磷酸酶反映前列腺功能;果糖和前列腺素反映精囊功能;游離左旋肉毒堿、甘油磷酸膽堿和α葡萄苷酶反映附睪功能。這些特異性標(biāo)志物總排出量降低反映分泌功能低下,可用以評價男性副性腺的分泌功能。
(一)PH
精液PH測定應(yīng)在射精后1小時內(nèi)完成,放置時間延長,PH下降。正常精液PH為7.2-8.0。如PH<7并伴少精癥,可能是由于輸精管、精囊或附睪發(fā)育不全。
弱堿性的精液射入陰道后可中和陰道分泌物中的有機(jī)酸,利于精子游動。當(dāng)PH<7或>8時均影響精子活動。
(二)果糖
精漿中的果糖來自精囊液,由精囊所分泌。它是精子活動的能源。精子軸絲收縮依賴STP供給能量,而ATP可由果糖分解產(chǎn)代謝產(chǎn)生,故精漿果糖濃度減低將使精子活動力減弱,影響受精率。在先天性精囊缺如時無果糖,精囊疾病如精囊炎時果糖下降。
[參考值] ≥13μmol/一次射精
(三)酶類
1.酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)精漿中的酸性磷酸酶幾乎全部來自前列腺,屬前列腺酸性磷酸酶。因此測定精漿中ACP有助于了解前裂腺功能和對前列腺疾病的診斷。前列腺炎時PAP活性減低;前列腺癌和前列腺肥大時,PAP活性可增高。PAP有促進(jìn)精子活動的作用。精漿中PAP減低,精子活動減弱,可使受精率下降。
[參考值] >200U/一次射精(β-硝基酚法)
2.乳酸脫氫酶-X(LD-X)精液中有6種乳酸脫氫酶同工酶,其中LD-X活性最強(qiáng),約相當(dāng)于LD總活性的1/3。LD-X在是存在于精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子線粒體中特異酶,具有組織特異性,對精子生成、代謝、獲能、活動能力和受精過程均有重要作用。
LD-X測定常用電泳法,
但較繁瑣。1988年國內(nèi)建立了直接比色法,方法方便,易于普及。
[參考值]LD-X/LD>40%
[臨床意義] LD-x 活性和相對活性與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關(guān),活性減低可致生育力下降。LD-X活性可作為評價男性生育功能的指標(biāo)。睪丸萎縮患者,LD-X活性降低或消失。長期服用棉酚可致精子生成障礙,甚至無精子生成,精液LD-X活性也降低或甚至消失。這說明 LD-X活性與睪丸生精功能有關(guān),是病人睪丸生精功能的良好指標(biāo)。
3.精子頂體酶(acrosin)存在于精子項體內(nèi),是一種蛋白水解酶,在受精過程中起重要作用,可用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯-醇脫氫酶(N-benzoy –L-arginine sthyl esteralcohol dehydrogenase,BAEE-ADH)法測定。
[參考值 ] BAWW-ADH法(X±s)36.72±21.43U/L
[臨床意義]在項體反應(yīng)中項體酶和其它的水解酶一起釋放,使卵細(xì)胞透明帶水解,釧使精子進(jìn)入卵細(xì)胞,完成受精過程,項體酶還能促進(jìn)生殖系統(tǒng)中的激肽釋放,增強(qiáng)精子活力,促進(jìn)精子運動,有利于受精。精子項體酶活性減低將致生育力下降。據(jù)報道不育組項體酶活性顯著低于生育組。因此可將精子項體酶活性作為病人精子受精能力和診斷男性不育癥的參考指標(biāo)。
(四)精漿鋅
精漿中含多種微量元素,其中以對鋅的研究較多,精漿鋅比血義鋅濃度高,能促進(jìn)生殖器官發(fā)育,維持正常生精功能,提高精子濃度和活力。精漿鋅減低可致生殖器官發(fā)育不良、精子生成減少、死精癥等。嚴(yán)重缺陷鋅可致不育癥。精漿鋅測定可作為評價男性生育功能和診治不育癥的參考指標(biāo)之一。
[參考值]Zn(X±s)2.4μmol/一次射精
四、顯微鏡檢查
(一)涂片檢查
精液化后充分混勻制成壓滴片,篩檢有無精子及精子能否運動。若未查到精子,尚須制備濃縮標(biāo)本離心法復(fù)檢。如仍查不到精子,則可判定為無精子癥;若僅見少量精子,則稱為精子缺乏;若查到的精子全部不運動,則可能為死精子癥,但須經(jīng)體外活體染色檢查方能確定。
涂片檢查也是檢查輸精管結(jié)扎效果的常規(guī)方法。一般于術(shù)后經(jīng)5-6次射精,原貯于附睪和精囊內(nèi)的精子已排凈。通常于術(shù)后第六周開始檢查。每周1-2次。若連續(xù)三次查不到精子則可認(rèn)為手術(shù)成功。否則說明手術(shù)失敗。
(二)精子活動力和存活率
1.活動力:精子活動力(spermmotility)是指精子向前運動的能力。WHO將其分為四級:a級:精呈前向運動;b級:慢或呆滯的前向運動;c級:非向前運動;d級:不動。
精子活動力受溫度和保存時間的影響。精液射出后于37攝氏度條件下放置8小時,全部精子將失動活動力。因此必須使用液化后的新鮮標(biāo)本檢查。
活動力正常值:射精后60分鐘內(nèi),精子50%或更多具有前向運動,25%或更多具有快速前向運動。精子活動力減弱或死精子過多是導(dǎo)致不育的主要原因。
2.精子存活率以“活”粗子比率表示,若不活動的精子較多,應(yīng)時持體外活體染色檢查,以鑒別其死活。活精子的細(xì)胞膜能阻止伊紅Y、臺盼藍(lán)等染色劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),故不被染色;死精子細(xì)胞膜完整性受損。失去屏障功能,可被染色成橘紅或藍(lán)色。有生育力男性伊紅染色法的活精子率≥75%。
[臨床意義]精子活動力與受精的關(guān)系十分密切。精子活動力低下,難以抵達(dá)輸卵管或無力與卵子結(jié)合而不能完成受精過程。A綿活動力的精子量不足也會影響受精率。若連續(xù)檢查,精子存活率不足40%,且以c級活動力精子為主,則可能成為男性不育的原因之一。精子活動力下降,見于:①精索靜脈曲張,由于靜脈血回泫不暢,導(dǎo)致陰囊內(nèi)溫度升高及睪丸組織缺氧,使精子活動力下降;②生殖系非特異性感染以及使用某些抗代謝藥、抗瘧藥、雌激素、氧化氮芥等時。
(三)精子數(shù)量
通過精子計數(shù)可求得精子濃度,乘以精液量還可求得一次射精排出的精子總數(shù)。正常成年男性,精子數(shù)量個體間的差異較大,精子濃度為(50-100)×109/L。<20×109/L為少精子癥;正常人一次射精排精子總數(shù)為≥40×106。精子數(shù)量減低可見于:①精索靜脈曲張;②有害金屬和放射性損害;③先天性和后天性睪丸疾。ㄈ睪丸畸形、萎縮、結(jié)核、淋病、炎癥等);④輸精管、精囊缺陷;⑤老年人在50歲以上者精子生成減少。
(四)精子形態(tài)(見圖11-1)
通常用于精子形態(tài)學(xué)檢查的方法的有兩種,一種是制成新鮮濕處副縣長相差顯微鏡觀察;加一種是將精子固定、染色后用亮視野光學(xué)顯微鏡觀察。兩處方法檢查的精子形態(tài)無明顯差別,染色后精子頭可能稍有縮小。
1.正常精子形態(tài)檢測政黨精子形態(tài)的應(yīng)遵循嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn):①正常精子頭部呈橢圓形,其正常標(biāo)準(zhǔn)為頭部長度為4.0-5.5μm,寬為2.5-3.0μm,長與寬的比值為1.5-1.75項體區(qū)占頭部的40-70%;②必須不存在頸、中段或尾部的缺陷;③細(xì)胞質(zhì)微粒不大于正常頭部的1/3;④將所的處于邊沿異常狀態(tài)的清子均列為不正常。
2.有缺陷精子:用這種形態(tài)學(xué)分析方法考慮的精子細(xì)胞功能部位,因此認(rèn)為沒有必要常規(guī)的去區(qū)分所有頭部大小和形態(tài)之間可劃或尾部缺陷之間的變異如果大多數(shù)精子細(xì)胞中出現(xiàn)某一種部位的異常,則應(yīng)對這一普通的缺陷給予注釋。需記錄的缺陷有:
(1)頭部形狀、大小缺陷:包括大頭、小頭、錐形頭、梨頭、無定形頭、空泡樣頭(頭部大于20%區(qū)域出現(xiàn)不著色的空泡區(qū)、)雙頭或以上缺陷的聯(lián)合體。
(2)頸、中段缺陷:包括缺尾可見到游離或脫落的頭部,未附著或彎曲尾尾與頭部長軸結(jié)呈90度角,腫脹、不規(guī)則、彎曲的中段,異常薄的中段無線粒體鞘或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。
(3)尾部異常:包括短尾、多尾、發(fā)夾狀尾、斷尾、寬度不規(guī)則或卷尾、或尾部伴有末端微滴,或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。
(4)細(xì)胞質(zhì)微粒:大于正常頭部的面積的1/3。細(xì)胞質(zhì)微粒一般位于頸可中段部分,也有未成熟精子微粒沿尾部分而布在不同部位。
許多形態(tài)學(xué)的異常的精子有多種缺陷。當(dāng)多種缺陷同時存在時,只記錄一種,但應(yīng)優(yōu)先記錄頭部缺陷,其次為中段缺陷,最后為尾部缺陷。每種精子缺陷的平均數(shù)目稱為畸形精子指數(shù),是預(yù)測精子在體內(nèi)、體外功能有意義的指標(biāo),因此形態(tài)學(xué)分析應(yīng)該是多參數(shù)原,應(yīng)分別記錄每種缺陷。異常形態(tài)見圖11-1。
圖11-1 精子形態(tài)
[臨床意義] 正常精液中正常形態(tài)的精子應(yīng)≥30%,精液中正常形態(tài)的精子減少稱畸形精子癥,與睪丸、附睪的功能異常密切相關(guān)?梢娪谏诚蹈腥。精南疆靜脈曲張、雄性激素水平異常時;某些化學(xué)藥物(如硝基唪喃妥英)、遺傳因素也可影響睪丸生精功能,導(dǎo)致畸形精子增多。
(五)未成熟的生殖細(xì)胞(見圖11-2)
未成熟的男性生殖細(xì)胞即生精細(xì)胞,包括精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母的細(xì)胞和以育不完全的精子細(xì)胞。這神經(jīng)過敏細(xì)胞胞體較大,常有1-2個核,有時易與中性粒細(xì)胞相混淆,尤其是用未染色精液鏡檢時不易識別,需在時可用過氧化物酶染色鑒別,前者為陰性,后者為陽性,正常人未成熟精細(xì)胞<1%。當(dāng)曲細(xì)精管受到藥物或其它因素的影響或損害時,精液壓中可見較多的病理型生精細(xì)胞。(見圖11-3)。
圖 圖11-2 正常生精細(xì)胞
圖11-3 異常生精細(xì)胞
五、免疫學(xué)檢查
據(jù) WHO估測,在育齡夫婦原因不明的不育癥中,免疫性不育占約10-20%,近年來對免疫性不育機(jī)制的研究發(fā)展很快,了解到抗精子抗體是引起免疫性不育的重要原因之一。
(一)抗精子抗體
精子的抗原性很強(qiáng),不僅可引起的異種免疫和同種異體免疫,其器官特異性抗原尚可引起自身抗精子抗體的產(chǎn)生,精管阻塞、睪丸損傷、炎癥、附睪等副性腺感染均可使精子抗原進(jìn)入血循環(huán)或淋巴系統(tǒng),激活免疫系統(tǒng)引起免疫應(yīng)答,產(chǎn)生身身抗精子抗體。精子出現(xiàn)包被抗體是免疫性不孕典型特征,精液中精子抗體幾乎全部為IGA、IGG、IGA的臨床意義可能更為重要,IGM在精液中極為罕見。ASAB與精子結(jié)合后可引起精子凝集、制動;抑制精子的項體活性,使之難以穿透包圍卵細(xì)胞的放射冠和透明帶,阻礙精了與卵細(xì)胞結(jié)合,即使完成受精過程亦可導(dǎo)致死胎或流產(chǎn)。檢測抗精子抗體的試驗有:
1.精子凝集試驗(spermagglutination test,SAT)血清、生殖道分泌物中存在的ASAB與精子膜固有抗原結(jié)合,使精子出出頭-頭、頭-尾、尾-尾的凝集現(xiàn)象。用試管玻璃片凝集法可或淺盤凝集法無凝集,或觀察10個高倍視野6個以上視野無凝集者表示生育力正常。
2.精子制動試驗(spermimmobilization test,SIT)ASAB與精子表面抗原相互作用激活補(bǔ)體系統(tǒng),使精子項體破壞,膜通透性及完整受損,導(dǎo)致精子失去活力,正常時精子制動值<2。
3.免疫珠試驗:免疫珠是用兔抗人免疫球蛋白共價結(jié)合的聚丙烯酰胺微球,可同時檢測IGa 、IGG、IGM抗體。用洗滌后的精子懸液與免疫珠懸液混合后,免疫珠會粘附于表面有抗體的精子上,使用相關(guān)差顯微鏡觀察,大于等于20%的活動精子同免疫珠粘附時為陽性,但至少有50%活動精子被免疫珠免疫被才認(rèn)為有臨床意義。
4.混合免疫球蛋白試驗(MAR試驗)用混合的未加處理的新鮮精液與包被人IGG的膠乳;旌,再向混合液中加入特異的單克隆抗人IGG血清,在膠乳粒與活動精子之間形成混合凝集證明精子表面有IGG抗體存大。這可用為常規(guī)篩選方法。大于等于50%的活動精子同顆粒粘附表示可能為免疫性不育;10-50%活動精子與顆粒粘附,可疑為免疫性不育。
免疫珠試驗與MAR試驗兩者結(jié)果并非經(jīng)常一致免疫珠試驗與血清精子凝集試驗和制動試驗呈正相并。如這些試驗為陽性,還應(yīng)輔經(jīng)其它試驗以加強(qiáng)診斷的正確性。
ASAB還可用其它現(xiàn)更敏感的方法檢測如免疫酶法等,不育夫婦ASAB陽性者占25%-30%,其所針對的抗原絕大多數(shù)在精子膜上。
(二)精漿免疫抑制物質(zhì)
人類精液含30多種抗原,但其進(jìn)入女性生殖道后通常并不引起免疫應(yīng)答,這是因為在精漿中含有免疫抑制物質(zhì)(seminal plasma immunoinhibition material,SPIA)。SPIM免疫抑制效應(yīng)可能是多種物質(zhì)綜合作用的結(jié)果,其中的妊娠相關(guān)蛋白A亦稱為男性抑制物質(zhì)能抑制機(jī)體對精子的免疫反應(yīng),保護(hù)受精卵免受排斥,以難維持正常生殖生理過程,據(jù)研究,MIM活性減低與不育癥、習(xí)慣性流產(chǎn)、配偶對丈夫精液過敏等疾病密切相關(guān)的。一但MIM減低,對自身和配偶的ASAB形成抑制作用減弱,則抗體生成率增高;加一方面對ASAB的抗精了反應(yīng)亦缺乏抑制力,故可引起上術(shù)疾病。MIM檢測對上述疾病的診斷具有重要的意義。
精漿免疫抑制物質(zhì)測定常用SPIM抗補(bǔ)體試驗和MIM單向免疫擴(kuò)散試驗。
(三)精漿免疫球蛋白測定
正常男性精漿IGA、IGG、IGM含量分別為(90.3±57.7)mg/L(28.6±16.7)mg/L (2.3±1.9)mg/L.抗精子抗體陽性者IGM增高,生殖系炎癥者分泌型IGA增高。
六、微生物學(xué)檢查
男性生殖道任何部位感染均可從精液是檢出微生物。迄今已人精液中檢出的微生物達(dá)30多種。包括細(xì)菌、支原體、病毒和原蟲等。常見的病在微生物有金黃色葡萄球菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌、大腸埃希菌、類白喉桿菌、解脲支原體等。若炎癥部位有較多的上皮細(xì)胞脫落,還可能在細(xì)胞內(nèi)查沙眼衣原體包涵體的單純皰疹病毒及巨細(xì)胞病毒包涵體等。據(jù)報道由生殖道感染所致不育癥發(fā)病率比非感染不育癥高四倍。
精液的細(xì)菌學(xué)檢查應(yīng)在常規(guī)消毒的條件下,以手yin法采集精液于無菌容器內(nèi),常規(guī)涂片進(jìn)行革蘭氏染色或抗酸染色檢查等,亦可于37攝氏度液化30分鐘后作細(xì)菌培養(yǎng);需氧培養(yǎng)結(jié)果>1000CFU/ml方有臨床意義。
近年來淋病奈瑟菌引起的生殖道感染有所增加,許多實驗室開展了淋球菌快速檢查項目,如直接熒光抗體染色等,亦有應(yīng)用PCR技術(shù)檢查者。直接熒光抗體染色靈敏度高,但特異性差,PCR技術(shù)需嚴(yán)防污染。
七、精子功能檢查
精子與卵結(jié)合除精子濃度和數(shù)量因素外,gydjdsj.org.cn/pharm/還必須具備妝好的運動功能和對宮頸粘液、卵細(xì)胞放射冠、透明帶及卵細(xì)胞膜的穿透力。精子穿透力是評價精子功能的主要指標(biāo)之一,據(jù)報告,約18%精液常規(guī)檢查正常的精子不能穿透宮頸粘液,所以檢查精子功能對研究精子在體內(nèi)運行,受精能力發(fā)及男性不育的原因有重要價值,其常用的試驗有:
1.體內(nèi)穿透試驗:(in vivopenetration test)又稱性交后試驗。檢查于排卵期性交后一定時間內(nèi)宮頸中粘液活精子數(shù)量,存活率及活運動力,以評價精子對宮頸粘液的穿透能力,正常人可見>50個HPF有正;顒幽芰Φ木印.(dāng)宮頸粘液異;蛴锌咕涌贵w時,精子體內(nèi)穿透能力減弱或喪失。其結(jié)果還受雌激素分泌狀況等多種因素影響。
2.體外穿透試驗(invitro,penetration test)
(1)簡化玻片試驗:將一滴宮頸粘液置載正玻片上,用蓋玻片鋪平,兩片之間的厚度用哇化的玻璃珠控制,在載玻片兩側(cè)各滴一滴精液,使懷蓋玻片邊緣接觸,借毛細(xì)作用將精液移向蓋玻片,使宮頸粘液與精液之間現(xiàn)一清晰接觸界面,37攝氏度卵育30分鐘。精子在接觸界面處形成一指狀突起伸入粘液,精子穿過指狀突起進(jìn)入精液,然后呈扇形散開運動。本試驗的觀察指標(biāo)為:①粗精了子穿透并有90%以上具有明確直線運動的活動精子時為正常結(jié)果;②精子穿透粘液,但離開粘液與沮液接觸面<500μm為較差;③精子穿透粘液,但很快失活或僅作擺動力為異常;④精子未穿透與精液的接觸界面,精子接觸界面的精液側(cè)凝集為異常結(jié)果。
本試驗常帶來有一定的主觀性,因為在平面玻璃上使精液粘液觸界面的大小和形狀完全標(biāo)準(zhǔn)化是不可能和,因為而吸能定性評價精子粘液的相互作用。
(2)精子宮頸粘液接觸(sperm-cervicalmucus contact,SCMC)試驗:本試驗的目的是檢驗精液和燥頸內(nèi)是否存在損害精子運動功能的ASAB及其損害程度,精子與近排卵期的宮頸粘液等量混合,富強(qiáng)溫下作用30min,鏡下計數(shù)擺動的精子,求出擺動精子的出現(xiàn)率(%),以單獨的精液滴鏡檢作為精子活力的對照,擺動精子的出現(xiàn)率越高,意味著精子不能穿過宮頸粘液。說吸ASAB對精子運動功能的損害越重,見表11-1。
表11-1 ASAB對精子運動功能損害
SCMC實驗結(jié)果 | 擺動精子(%) | 精子運動功能受損 |
陰性 | 0-25 | 無 |
弱陽性 | 26-50 | 輕微(可疑) |
陽性 | 51-75 | 明顯 |
強(qiáng)陽性 | 76-100 | 嚴(yán)重 |
玻片試驗與SCMC試驗陽性者可用其它供者的精液或燥頸粘液分別進(jìn)行交叉試驗,以利于判斷ASAB的來源是清液或燥頸粘液。
(3)無透明帶倉鼠卵-精子穿透試驗(Zone free hamstar egg sperm penetration test,ZFHESPT)簡稱精子倉鼠卵穿透試驗是一種極為嚴(yán)格的生物學(xué)試驗,技術(shù)復(fù)雜,影響因素多。若能加強(qiáng)質(zhì)量控制,再加上其它客觀檢查如精子活力等,可作為測定功能和基礎(chǔ)。
其方法將精子于BWW培養(yǎng)液中經(jīng)37攝氏度獲能,再與用胰蛋白酶外理去除透明帶的倉鼠混合繼續(xù)孵育完成受精過種程。然后以相差顯微鏡檢查,計數(shù)卵子受精率和受精指數(shù)。
受精率(%)=受精卵數(shù)/卵細(xì)胞總數(shù)×100%
由于卵細(xì)胞已去除透明帶一個卵細(xì)胞可被多個精子穿透。FI為穿透卵細(xì)胞的精子總數(shù)與卵細(xì)胞總數(shù)之比,從整體上反映精子穿透力與項體反應(yīng)。FI越高說明精子受精能力越強(qiáng)。
FI=穿透卵細(xì)胞的精子數(shù)/卵細(xì)胞總
[參考值] 受精率≥10%
[臨床意義] 精子倉鼠卵穿透試驗可測定人精子的獲能、項體反應(yīng)和對卵細(xì)胞的穿透性能,綜合反映精子的受精能力,生育力正常的男性本試驗結(jié)果正常者占82%,不育癥患者僅有2%正常,因此對不育癥的診斷有較高的應(yīng)用價值,穿透力較高的精子可選作人工授精用,成功率較高。
前列腺液(pristatic fluid)是精液的重要組成部分,約占精液的30%通過前列腺按摩術(shù)采集的前列腺液,常常混有精囊液,由按摩時觸及精囊所致前列腺液成分較復(fù)雜,含有多種無機(jī)離子和有機(jī)化合物,其中前列腺特異抗原是前列腺癌的腫瘤標(biāo)記之一。用于前列腺癌的診斷前列腺酸性磷酸酶更靈敏、特異。此外,前列腺液中還含有淀樣小體,少量上皮細(xì)胞和白細(xì)胞等有形成分。
前列腺液檢查主要用于慢性前列腺炎的診斷、病原微生物檢查及療效觀察等,也可用于性病檢查。
一、標(biāo)本采集
前列腺液標(biāo)本應(yīng)由臨床醫(yī)師進(jìn)行前列腺按摩術(shù)采集。液量少時可直接滴在玻片上,量多量收集在潔凈干燥的試管內(nèi),若按摩不出前列腺液,可檢查按摩后的尿液。采集微生物培養(yǎng)的標(biāo)本無須無菌操作,將標(biāo)本收集在滅gydjdsj.org.cn/wsj/菌的容器內(nèi)。
疑為前列腺結(jié)核、膿腫或腫瘤的患者禁忌前列腺按摩。一次按摩失敗或檢查結(jié)果陰性,而明確有臨床指征者,可隔3-5天后重新復(fù)查。
二、一般性狀檢查
正常成年男性經(jīng)前列腺按摩一次可采集數(shù)滴至1毫升前列腺液。前列腺炎時多減少,甚至采不出。正常的前列腺液稀薄,呈淡乳白色。前列腺或精囊炎進(jìn)可變粘稠、黃煞費苦心混濁、呈膿性,有時含絮狀物或粘液絲。若有出血可呈不同程度的紅色,見于精囊炎、前列腺炎、前列腺結(jié)核、結(jié)石和惡性腫瘤等;也可因按摩時用力過重所致正常前列腺液呈弱酸性,PH6.3-6.5。超過50歲時稍增高。混入精囊液較多時,PH也增高。
三、化學(xué)檢查
前列腺液的化學(xué)成分復(fù)雜,可因疾病而變化,故可將其作為鑒別診斷的參考指標(biāo)。對上些顯著的變化進(jìn)行動態(tài)觀察,尚可用以評價療效和判斷預(yù)后。常見前列腺疾病的前列腺液化學(xué)成分變化見表11-2。
表11-2 常見前列腺疾病前列腺液化學(xué)成分變化
Zn(mmd/L) | Ld5/LD1 | Tf(mg/L) | C3(mg/L) | C4(mg/L) | IgG(mg/L) | IgA(mg/L) | IgM(mg/L) | |
參考值 | 5.38±0.75 | 0.48±0.09 | 133±40 | 33±29 | 44±23 | 300±75 | 120±30 | 70±5 |
前列腺炎 | 1.84±0.38 | 4.21±0.80 | 154±41 | 64±16 | 47±10 | 720±215 | 260±120 | 140±65 |
前列腺肥大 | 6.07±0.79 | 1.36±0.17 | 192±44 | 49±14 | 77±24 | __ | __ | __ |
前列腺癌 | 3.41±1.60 | 5.21±0.79 | 466±70 | 204±33 | 116±18 | __ | __ | __ |
四、顯微鏡檢查
(一)非染色標(biāo)本
1.卵磷脂小體呈圓形或卵圓形、折光性強(qiáng),大小不均,多大于血小板,在政黨前列腺液涂片在均勻分布,布滿視野。前列腺炎進(jìn)卵磷脂小體減少,分布不均,有成簇分布現(xiàn)象,嚴(yán)重者卵磷脂小體可消失,
2.紅細(xì)胞正常前列腺液中偶見紅細(xì)胞,在前列腺炎、結(jié)核、結(jié)石和惡性腫瘤時可見紅細(xì)胞增多;按摩時手法過重也可見紅細(xì)胞增多。
3.白細(xì)胞正常前列腺液中WBC<10/HPF,分散存在。若WBC>10/HPF,成簇分布,是慢性前列腺炎的指征之一。
4.前列腺顆粒細(xì)胞:胞體較大含卵磷脂顆粒較多,可能是吞噬了卵磷脂顆粒的巨噬細(xì)胞,正常前列腺液中此種細(xì)胞不超芝1/HPF,前列腺炎時可增多數(shù)倍至10倍,老年人的前列腺液中也可見此種細(xì)胞增多。
5.淀粉樣小體:圓形或卵圓形,具有同心圓線紋的層狀結(jié)構(gòu),微黃煞費苦心或褐色,形似淀粉顆粒,故名淀粉樣小體,其中心常含碳酸鈣沉積物。如與膽固醇結(jié)合可形成結(jié)石。前列腺液中的淀粉樣小體隨年齡增長遞增,無臨床意義。
6.精子 因精囊受擠壓而排出,無臨床意義。
7.滴蟲 見于滴蟲性前列腺炎。
(二)染色標(biāo)本
瑞特、H-E或巴氏染色的標(biāo)本細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰易辯,適合于檢查炎癥變性的細(xì)胞和癌細(xì)胞,有助于前列腺炎和惡性腫瘤的診斷及鑒別診斷。
五、微生物學(xué)檢查
用前列腺液制作涂片進(jìn)行革蘭氏染色或抗酸染色。革蘭氏染色可橙出前列朱和精囊感染的病原菌。以葡萄球菌最常見的,其次是鏈球菌的革蘭氏陰性桿菌(常為大腸埃希菌),也可見到革蘭氏陰性球菌(淋病奈瑟菌的可能性最大)。前列腺液中的致病性分支桿菌只有結(jié)核分支桿菌一種。進(jìn)行抗酸菌檢查有助于慢性前列腺炎與結(jié)核的鑒別診斷。
涂片檢查細(xì)菌陽性率低,且不易確定細(xì)菌種屬,也有能用藥敏感試驗,故必要時尚需做培養(yǎng)檢查。