第二部分 綜合性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)1 神經(jīng)干動(dòng)作電位的測(cè)定
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
1．學(xué)習(xí)生物電活動(dòng)的細(xì)胞外記錄法。
2．觀察坐骨神經(jīng)干動(dòng)作電位的基本波形、潛伏期、幅值及時(shí)程。
【實(shí)驗(yàn)原理】
神經(jīng)組織屬于可興奮組織，當(dāng)受到有效刺激時(shí)，膜電位在靜息電位的基礎(chǔ)上將發(fā)生一系列快速、可逆、可擴(kuò)布的電位變化，即動(dòng)作電位。動(dòng)作電位可沿神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，是神經(jīng)興奮的客觀標(biāo)志。在神經(jīng)細(xì)胞外表面，已興奮的部位帶負(fù)電，未興奮部位帶正電。如果將兩個(gè)引導(dǎo)電極分別置于神經(jīng)干的表面，當(dāng)神經(jīng)干一端受刺激興奮時(shí)，興奮向另一端傳導(dǎo)并依次通過(guò)兩個(gè)記錄電極，在顯示器上可記錄到兩個(gè)方向相反的電位偏轉(zhuǎn)波形，此波形稱為雙相動(dòng)作電位。若在兩個(gè)引導(dǎo)電極之間夾傷神經(jīng)使其失去傳導(dǎo)興奮的能力，神經(jīng)興奮不能通過(guò)損傷部位，致使其中一個(gè)電極則成為電位恒定的參考電極。因此，只能記錄到一個(gè)方向的電位偏轉(zhuǎn)波形，此波形稱為單相動(dòng)作電位。
此外，由于坐骨神經(jīng)干由許多神經(jīng)纖維組成，其產(chǎn)生的動(dòng)作電位是許多神經(jīng)纖維動(dòng)作電位的代數(shù)疊加，故上述電位又稱為復(fù)合動(dòng)作電位。由于不同神經(jīng)纖維的興奮性不同，在一定范圍內(nèi)，復(fù)合動(dòng)作電位的幅度可隨刺激強(qiáng)度的增加而增大。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
蛙類手術(shù)器械一套，神經(jīng)屏蔽盒，電子刺激器，計(jì)算機(jī)，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，任氏液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．制備坐骨神經(jīng)腓神經(jīng)標(biāo)本 蟾蜍坐骨神經(jīng)腓神經(jīng)標(biāo)本制備過(guò)程與坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本的制作過(guò)程相仿。不同的是只分離神經(jīng)，而且盡可能分離得長(zhǎng)一些，從脊椎旁的主干下沿腓神經(jīng)至踝關(guān)節(jié)止。神經(jīng)兩端用細(xì)線結(jié)扎后，置于任氏液中10min備用。
圖2-1 神經(jīng)干動(dòng)作電位實(shí)驗(yàn)裝置
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置 一對(duì)記錄電極(R1、R2)與生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)輸入通道相連；生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的刺激輸出與神經(jīng)屏蔽盒一對(duì)刺激電極（S1、S2)相連；神經(jīng)屏蔽盒接地電極接地（圖2-1)。
3．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-神經(jīng)干動(dòng)作電位的引導(dǎo)”。點(diǎn)擊刺激設(shè)置圖標(biāo)，參數(shù)設(shè)置見表2-1（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。
表2-1 儀器參數(shù)設(shè)置表
| 參數(shù) | MSP600 | MedLab | BL-410 | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣頻率 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù) Y軸壓縮比 濾波 時(shí)間常數(shù) 靈敏度 | 同步觸發(fā)示波 通道1 AC 神經(jīng)干AP 500 10kHz 0.003s | 記憶示波 20μs 2：1 通道2 通道4 AC 記錄刺激標(biāo)記神經(jīng)干AP 刺激標(biāo)記 200～1000 5～50 4：1 64：1 10kHz | 0.625ms/div 20000Hz 通道1 AC 神經(jīng)干AP 200 10kHz 0.01s |
| 刺 激 器 參 數(shù) | 刺激模式 主周期 波寬 初幅度 增量 末幅度 脈沖數(shù) 延時(shí) | 單刺激 0.05ms 100ms | 自動(dòng)幅度調(diào)節(jié) 1s 0.1ms 0.2V 0.02V 1V 1 5ms | 單刺激 1 0.2ms 0.2(逐次遞增0.02V至1V) 1 1ms |
【觀察項(xiàng)目】
1．預(yù)實(shí)驗(yàn) 目的是檢查整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的工作狀態(tài)。將神經(jīng)屏蔽盒的所有電極用任氏液棉球擦拭，然后將一浸濕任氏液的棉線置于刺激電極、接地電極和記錄電極上。調(diào)節(jié)刺激強(qiáng)度由0V逐漸增大，觀察顯示器上是否有象正弦波那樣的50Hz交流電干擾。如有干擾，應(yīng)檢查各儀器的接地情況，以排除干擾。當(dāng)顯示器的掃描線上只有刺激偽跡和基本平滑的橫線時(shí)，表示無(wú)交流電干擾。停止刺激，取下棉線。
2．觀察復(fù)合動(dòng)作電位 將神經(jīng)標(biāo)本用玻璃分針輕輕搭在神經(jīng)屏蔽盒內(nèi)的電極上，坐骨神經(jīng)粗的一端置于刺激電極上，細(xì)的一端置于記錄電極上。盒的底部放一浸濕任氏液的濾紙，以保持盒內(nèi)的濕度，防止神經(jīng)干燥。蓋好屏蔽盒的蓋子，以減少電磁干擾。
（1)雙相動(dòng)作電位 給予標(biāo)本單刺激，刺激強(qiáng)度從最小開始，逐漸增加刺激強(qiáng)度, 找出剛能引起微小的雙相動(dòng)作電位波形的刺激強(qiáng)度即閾強(qiáng)度。繼續(xù)增加刺激強(qiáng)度，觀察動(dòng)作電位幅度在一定范圍內(nèi)隨刺激強(qiáng)度增加而增大的變化情況，找出最大刺激強(qiáng)度。讀取雙相動(dòng)作電位上下相的幅度和持續(xù)時(shí)間。（圖2-2)
（2)單相動(dòng)作電位 在兩個(gè)記錄電極之間用眼科鑷夾傷神經(jīng)，便可見雙相動(dòng)作電位只剩下向上的第一相，而向下的第二相則消失，此即單相動(dòng)作電位。（圖2-2)
圖2-2 神經(jīng)干雙相動(dòng)作電位（左)和單相動(dòng)作電位（右)
【注意事項(xiàng)】
1．在神經(jīng)干標(biāo)本制作過(guò)程中，切勿損傷神經(jīng)干，并常用任氏液保持神經(jīng)標(biāo)本濕潤(rùn)，但神經(jīng)及電極不能有水珠，以免短路。勿用手或金屬鑷子接觸神經(jīng)。
2．標(biāo)本及兩端結(jié)扎線不可碰觸標(biāo)本盒，也不可折疊返回，以免引起短路。
3．刺激偽跡是刺激電流沿神經(jīng)表面電解質(zhì)溶液傳導(dǎo)到記錄電極下而被傳導(dǎo)、放大出來(lái)的電信號(hào)。刺激偽跡可指示刺激開始的時(shí)間。偽跡沒(méi)有潛伏期，其幅度隨刺激強(qiáng)度增大而增大，位相隨刺激極性的改變而改變。偽跡不可過(guò)大，以免影響動(dòng)作電位的波形，可采取一定措施加以衰減。
4．實(shí)驗(yàn)中如雙相動(dòng)作電位為先下后上時(shí)，可對(duì)調(diào)兩輸入端的引導(dǎo)電極插頭。
【思考題】
1．采用細(xì)胞外記錄法所記錄的神經(jīng)干動(dòng)作電位的原理是什么？
2．在引導(dǎo)神經(jīng)干雙相動(dòng)作電位時(shí)，為什么動(dòng)作電位的第一相的幅值比第二相的幅值大？
3．單根神經(jīng)纖維動(dòng)作電位與神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位有何區(qū)別？
4．在實(shí)驗(yàn)中，神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的幅值可在一定范圍內(nèi)隨刺激強(qiáng)度的增加而增大，這與“全或無(wú)”定律矛盾嗎？
（肖愛嬌 朱大誠(chéng))
實(shí)驗(yàn)2 神經(jīng)興奮傳導(dǎo)速度的測(cè)定
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
了解神經(jīng)興奮傳導(dǎo)速度測(cè)定的基本原理和方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
神經(jīng)纖維一端受到刺激而興奮后，其動(dòng)作電位可沿細(xì)胞膜傳導(dǎo)至另一端，其傳導(dǎo)的速度取決于神經(jīng)纖維的粗細(xì)、溫度、有無(wú)髓鞘等因素。測(cè)定神經(jīng)纖維上動(dòng)作電位傳導(dǎo)的距離（S)與通過(guò)這段距離所用的時(shí)間（t),即可根據(jù)V=S÷t求出動(dòng)作電位的傳導(dǎo)速度。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
蛙類手術(shù)器械一套，神經(jīng)屏蔽盒，電子刺激器，計(jì)算機(jī)，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，任氏液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．制備坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)標(biāo)本 參見綜合性實(shí)驗(yàn)1。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置 按圖2-3連接裝置，兩對(duì)記錄電極分別與生物信號(hào)放大系統(tǒng)的兩個(gè)通道相連。
3．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-神經(jīng)干興奮傳導(dǎo)速度的測(cè)定”。點(diǎn)擊刺激設(shè)置圖標(biāo)，參數(shù)設(shè)置見表2-2（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。
| 參數(shù) | MSP600 | MedLab | BL-410 | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣頻率 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù) Y軸壓縮比 濾波 時(shí)間常數(shù) | 同步觸發(fā)示波 通道1 通道2 AC AC 神經(jīng)干AP 1kHz 0.01s | 記憶示波 20μs 2：1 通道2 通道4 AC AC 神經(jīng)干AP AP傳導(dǎo)速度 200～1000 200～1000 4：1 4：1 10kHz 0.2s | 0.625ms/div 20000Hz 通道1 通道2 AC AC 神經(jīng)干AP AP傳導(dǎo)速度 200 200 10kHz 10kHz 0.01s 0.01s |
| 刺 激 器 參 數(shù) | 刺激模式 波寬 幅度 延時(shí) | 單刺激
| 單刺激 0.1ms 1V 5ms | 單刺激 0.2ms 1V 1ms |
表2-2 儀器參數(shù)設(shè)置表
【觀察項(xiàng)目】
給予神經(jīng)一定強(qiáng)度的刺激，顯示器上分別記錄到前后兩個(gè)動(dòng)作電位曲線（圖2-4)。移動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的測(cè)量光標(biāo)的掃描速度計(jì)算出兩個(gè)動(dòng)作電位起點(diǎn)的間隔時(shí)間，即動(dòng)作電位先后到達(dá)兩對(duì)記錄電極的時(shí)間差或動(dòng)作電位從R1傳導(dǎo)到R3所需的時(shí)間（t)，再人工準(zhǔn)確地測(cè)出R1到R3之間的距離（S)，并按電腦提示輸入數(shù)據(jù)，系統(tǒng)便會(huì)自動(dòng)計(jì)算出傳導(dǎo)速度（m/s)。
【注意事項(xiàng)】
1．制備坐骨神經(jīng)腓神經(jīng)標(biāo)本時(shí)，應(yīng)越長(zhǎng)越好，最好達(dá)到10cm以上，因此宜用大蟾蜍。
2．神經(jīng)干應(yīng)平直地置于電極之上，兩端不可與屏蔽盒接觸，也不可把神經(jīng)干兩端纏繞于電極之上，兩端任其自然懸空。
3.應(yīng)適時(shí)給神經(jīng)干滴淋任氏液，以保持標(biāo)本濕潤(rùn)。
4.應(yīng)精確測(cè)量?jī)呻姌O間的距離，以免傳導(dǎo)速度計(jì)算值出現(xiàn)人為的偏差。
圖2-3 神經(jīng)興奮傳導(dǎo)速度實(shí)驗(yàn)裝置 圖2-4神經(jīng)干動(dòng)作電位（兩對(duì)記錄電極)
【思考題】
1.按公式V=（S2- S1)/（T2- T1)計(jì)算的傳導(dǎo)速度比按公式V=S/T計(jì)算的要精確些，為什么？
2.本實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的傳導(dǎo)速度能否代表該神經(jīng)干中所有纖維的傳導(dǎo)速度，為什么？
（肖愛嬌 朱大誠(chéng))
實(shí)驗(yàn)3 神經(jīng)纖維興奮性不應(yīng)期的測(cè)定
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
1.了解測(cè)定不應(yīng)期的原理和方法。
2．觀察神經(jīng)纖維在一次興奮過(guò)程中，其興奮性變化的規(guī)律。
【實(shí)驗(yàn)原理】
可興奮組織在接受一次刺激而興奮后，其興奮性會(huì)發(fā)生周期性的變化，包括絕對(duì)不應(yīng)期、相對(duì)不應(yīng)期、超常期和低常期，然后再恢復(fù)到正常的興奮性水平。興奮性的高低或有無(wú)，可以通過(guò)閾值的大小來(lái)衡量。采用前后兩個(gè)刺激，第一個(gè)刺激稱為“條件刺激”，用來(lái)引起神經(jīng)的一次興奮；第二個(gè)刺激稱為“測(cè)試刺激”，用來(lái)測(cè)定神經(jīng)興奮性的改變。通過(guò)調(diào)節(jié)條件刺激與測(cè)試刺激之間的時(shí)間間隔，來(lái)測(cè)定神經(jīng)纖維的絕對(duì)不應(yīng)期。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
蛙類手術(shù)器械一套，神經(jīng)屏蔽盒，電子刺激器，計(jì)算機(jī)，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，任氏液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．制備坐骨神經(jīng)腓神經(jīng)標(biāo)本 參見綜合性實(shí)驗(yàn)1。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置 連接方法基本同實(shí)驗(yàn)1。不同之處是用一導(dǎo)線將刺激器的監(jiān)視輸出連接到記錄系統(tǒng)的另一個(gè)通道上，此通道可監(jiān)視雙脈沖刺激。
3．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-神經(jīng)干興奮不應(yīng)期的測(cè)定”。參數(shù)設(shè)置見表2-3（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。
【觀察項(xiàng)目】
1．引導(dǎo)動(dòng)作電位 按刺激器參數(shù)輸出雙脈沖刺激神經(jīng)，調(diào)節(jié)脈沖之間的間隔時(shí)間，引導(dǎo)出先后兩個(gè)動(dòng)作電位波形。在間隔時(shí)間較大時(shí)，可先后記錄出的兩個(gè)幅值相等的動(dòng)作電位（圖2-5)。
2．相對(duì)不應(yīng)期 逐漸縮短雙脈沖間隔時(shí)間，可見到兩個(gè)動(dòng)作電位逐漸靠攏，直到第二個(gè)動(dòng)作電位幅度開始降低（圖2-6)。然后再縮短間隔時(shí)間，使第二個(gè)動(dòng)作電位降低到微小程度直到消失。從第二個(gè)動(dòng)作電位幅度開始降低到消失，此時(shí)期為相對(duì)不應(yīng)期。
| 參數(shù) | MSP600 | MedLab | BL-410 | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣率 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù) Y軸壓縮比 濾波 時(shí)間常數(shù) | 同步觸發(fā)示波 通道1 AC 神經(jīng)干AP 1kHz 0.01s | 記憶示波 20μs 2：1 通道2 通道4 AC 記錄刺激標(biāo)記 神經(jīng)干AP 刺激標(biāo)記 200～500 50～100 8：1 16：1 0.2s | 0.625ms/div 20000Hz 通道1 AC 神經(jīng)干AP 200 10kHz 0.01s |
| 刺 激 器 參 數(shù) | 刺激模式 主周期 波寬 首間隔（間距) 增量 末間隔 脈沖數(shù) 延時(shí) 幅度 | 單刺激 10ms -0.5ms | 自動(dòng)間隔調(diào)節(jié) 1s 0.1ms 10ms -0.2ms 1ms 2 5ms 1V | 串刺激 1 0.1ms 10ms（逐次遞減0.2ms) 1ms 2 5ms 1V |
表2-3 儀器參數(shù)設(shè)置表
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圖2-5雙脈沖刺激間隔時(shí)間較大時(shí)動(dòng)作電位 圖2-6雙脈沖刺激間隔時(shí)間縮小時(shí)動(dòng)作電位
3．絕對(duì)不應(yīng)期 繼續(xù)縮短雙脈沖間距，使第二個(gè)刺激位于第一個(gè)動(dòng)作電位的上升支和下降支的開始階段，此時(shí)期即使增加刺激強(qiáng)度，也不能引起第二個(gè)動(dòng)作電位，這一時(shí)期為絕對(duì)不應(yīng)期。
4．恢復(fù) 漸漸延長(zhǎng)雙脈沖刺激的間距，使第二個(gè)動(dòng)作電位再次出現(xiàn)。當(dāng)間距時(shí)間達(dá)到一定數(shù)值時(shí)，第二個(gè)動(dòng)作電位的幅度又與前一動(dòng)作電位的幅度相等，則表明興奮性已恢復(fù)。
【注意事項(xiàng)】
同綜合性實(shí)驗(yàn)1
【思考題】
1.神經(jīng)興奮不應(yīng)期測(cè)定的原理。
2.組織發(fā)生興奮后，其興奮性的周期性變化有哪些？
3.神經(jīng)干不應(yīng)期與單根神經(jīng)纖維的不應(yīng)期有何不同？
4.不應(yīng)期長(zhǎng)短有何生理意義?
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)4 蛙心搏動(dòng)起源分析以及溫度對(duì)其自律性的影響
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1.采用斯氏結(jié)扎法觀察蛙心起搏點(diǎn)，分析心臟興奮傳導(dǎo)途徑。
2.理解內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要性。
【實(shí)驗(yàn)原理】
哺乳動(dòng)物心臟特殊傳導(dǎo)系統(tǒng)具有自律性，但各部分的自律性高低不同。正常情況下，竇房結(jié)自律性最高，它自動(dòng)產(chǎn)生的興奮向外擴(kuò)布，依次激動(dòng)心房肌、房室交界、房室束、心室內(nèi)傳導(dǎo)組織和心室肌，引起整個(gè)心臟興奮和收縮。由于竇房結(jié)是主導(dǎo)整個(gè)心臟興奮和跳動(dòng)的正常部位，故稱之為正常起搏點(diǎn)；其他部位自律組織受竇房結(jié)的“搶先占領(lǐng)或超速驅(qū)動(dòng)壓抑”控制，并不表現(xiàn)出它們自身的自動(dòng)節(jié)律性，只是起著興奮傳導(dǎo)作用，故稱之為潛在起搏點(diǎn)。一旦竇房結(jié)的興奮不能下傳時(shí)，則潛在起搏點(diǎn)可以自動(dòng)發(fā)生興奮，使心房或心室依從節(jié)律性最高部位的興奮節(jié)律而跳動(dòng)。
哺乳類動(dòng)物心臟的正常起搏點(diǎn)是竇房結(jié)。兩棲類動(dòng)物心臟的正常起搏點(diǎn)是靜脈竇，在正常情況下，其心房和心室在靜脈竇沖動(dòng)作用下依序搏動(dòng)，只有當(dāng)正常起搏點(diǎn)的沖動(dòng)受阻時(shí)，“超速壓抑”解除，心臟的自律性次之的部位才可能顯示其自律性。本試驗(yàn)利用結(jié)扎阻斷傳導(dǎo)通路的方法來(lái)確定蛙心起搏點(diǎn)和傳導(dǎo)途徑，并用改變蛙心不同部位局部溫度的方法來(lái)觀察溫度對(duì)心臟自律性的影響。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
蛙類手術(shù)器械一套，蛙心夾，滴管，小離心管，棉球，絲線，任氏液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
l．取蟾蜍或蛙一只，用探針破壞中樞神經(jīng)系統(tǒng)，仰臥位固定于蛙板上。
2．用剪刀剪開胸骨表面皮膚并自劍突向兩側(cè)角方向打開胸腔，剪開胸骨，可見心臟包在心包中，仔細(xì)剪開心包，暴露心臟。
3．剪開心包膜，參見圖2-7識(shí)別心房、心室、房室溝、動(dòng)脈圓錐、動(dòng)脈干、靜脈竇、竇房溝（半月線)。觀察靜脈竇、心房和心室的活動(dòng)順序及各部位的速率。
4．在主動(dòng)脈干下穿線備用。
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【觀察項(xiàng)目】
l．觀察靜脈竇、心房、心室的活動(dòng)順序及各部位在單位時(shí)間內(nèi)的跳動(dòng)次數(shù)。
2．觀察不同溫度下的心跳頻率
用盛有35℃～40℃熱水的小離心管（或用加熱的刺針柄)或用小冰塊先后分別地接觸心室、心房和靜脈竇以改變它們的溫度，并分別觀察和記錄心臟跳動(dòng)有何變化？
3．按圖2-8所示，在靜脈竇和心房交界的半月形白線（竇房溝)處用線沿著半月形白線的近心尖側(cè)結(jié)扎 (斯氏第一扎)。觀察心房和心室的跳動(dòng)是否停止？靜脈竇是否照常在跳動(dòng)？
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4．在第一結(jié)扎后，約經(jīng)15 min～30min，房室可恢復(fù)跳動(dòng)（為促其恢復(fù)，可用鑷柄輕叩房室交界區(qū))。分別計(jì)數(shù)靜脈竇、心房和心室跳動(dòng)頻率，注意觀察它們的跳動(dòng)是否一致。
5．于房室交界處的房室溝進(jìn)行第二結(jié)扎(斯氏第二扎)，以阻斷房-室間的興奮傳導(dǎo)，觀察并計(jì)數(shù)靜脈竇、心房、心室跳動(dòng)情況。
6．松開結(jié)扎線，使心房、心室恢復(fù)跳動(dòng)，并分別計(jì)算各部位的心跳次數(shù)，比較第一和第二結(jié)扎前后，靜脈竇、心房、心室跳動(dòng)頻率，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表2-4，分析心臟各部分的自律性及傳導(dǎo)順序。
表2-4 結(jié)扎不同部位對(duì)心臟各部跳動(dòng)的影響
|
| 靜脈竇 | 心房 | 心室 | ||||
| 結(jié)扎前 | |||||||
| 第一扎 | |||||||
| 第二扎 |
【注意事項(xiàng)】
1．破壞腦和脊髓要徹底。
2．剪胸骨和胸壁時(shí)，伸入胸腔的剪刀要緊貼胸壁，以免損傷心臟和血管。
3．在改變心臟某局部溫度操作中，所接觸的局部位置要準(zhǔn)確，可暫不滴任氏液，盡量減少該局部溫度過(guò)快波及其他部位而影響結(jié)果。
4．實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常用任氏液濕潤(rùn)心臟。
5．第一結(jié)扎時(shí)，注意勿扎住靜脈竇。第一結(jié)扎后，如心房、心室長(zhǎng)時(shí)間不恢復(fù)跳動(dòng)，可提前進(jìn)行第二結(jié)扎而促使心房、心室恢復(fù)跳動(dòng)。而每次結(jié)扎不宜扎得過(guò)緊過(guò)死，以能剛阻斷興奮傳導(dǎo)為合適。
6. 結(jié)扎后如心房和心室停跳的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可用玻璃分針給心房和心室以機(jī)械刺激，或者給心房心室加溫，促進(jìn)心房心室恢復(fù)跳動(dòng)。
【思考題】
1．分析本實(shí)驗(yàn)每一項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果的產(chǎn)生原因。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可得出什么結(jié)論？
2．當(dāng)靜脈竇局部溫度發(fā)生變化時(shí)，心率為何會(huì)隨之發(fā)生變化？與只改變心房或心室局部溫度所引起效應(yīng)為什么不同？
3．如何解釋在結(jié)扎后，心房沒(méi)有立即恢復(fù)跳動(dòng)？這一結(jié)果說(shuō)明什么問(wèn)題？
4．本實(shí)驗(yàn)?zāi)芊褡C實(shí)心房和心室的特殊傳導(dǎo)組織具有自動(dòng)節(jié)律性？為什么？
（肖愛嬌 朱大誠(chéng))
實(shí)驗(yàn)5 影響心臟活動(dòng)的體液因素
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp;
1．學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。
2．觀察Na+、K+、Ca2+、腎上腺素(E)、乙酰膽堿(Ach)等體液因素對(duì)心臟活動(dòng)的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
靜脈竇（蛙心起搏點(diǎn))能按一定節(jié)律自動(dòng)產(chǎn)生興奮，因此離體蛙心在適宜環(huán)境中，在一定時(shí)間內(nèi)仍能產(chǎn)生節(jié)律性興奮和收縮活動(dòng)。
此外，心臟活動(dòng)還受體液和神經(jīng)的調(diào)節(jié)和影響。心臟的泵血功能和正常節(jié)律性活動(dòng)有賴于心臟生活的理化環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，如果理化環(huán)境被干擾或破壞，心臟活動(dòng)就會(huì)受到影響。其中，心臟受植物神經(jīng)的雙重支配，交感神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放去甲上腎上腺素，使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)增快，心率加快；而迷走神經(jīng)興奮時(shí)，其末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心率減慢。蟾蜍或蛙的心臟離體后，只要用理化特性近似于其血漿的任氏液灌流，在一定時(shí)間內(nèi)，可保持節(jié)律性收縮和舒張。改變灌流液的成分，心臟活動(dòng)的頻率和幅度會(huì)隨之發(fā)生變化。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
蛙類手術(shù)器械，任氏液，滴管，蛙心夾，蛙心插管，微調(diào)固定器，試管夾，鐵支架，滑輪，燒杯，絲線，張力換能器，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，0.65﹪NaCl溶液，3﹪CaCl2溶液，1﹪KCl溶液，1:10000去甲腎上腺素溶液，1:10000乙酰膽堿溶液，1:10000普萘洛爾溶液，5×10-4阿托品溶液，3﹪乳酸，2.5﹪NaHCO3溶液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．離體蛙心制備
(1)取蟾蜍一只，毀壞腦和脊髓，將其仰臥位固定于蛙板上。從劍突下將胸部皮膚向上剪開（或剪掉)，然后剪掉胸骨，打開心包，暴露心臟，用小鑷子提起心包膜，眼科剪剪去心包膜。仔細(xì)辨認(rèn)心臟結(jié)構(gòu)（圖3-7)。
(2)在主動(dòng)脈干下方穿引兩根線。一條在主動(dòng)脈上端結(jié)扎作插管時(shí)牽引用，另一根則在動(dòng)脈圓錐上方，系一松結(jié)，用于結(jié)扎和固定蛙心插管。
(3) 動(dòng)脈插管 左手持左主動(dòng)脈上方的結(jié)扎線，用眼科剪在松結(jié)上方左主動(dòng)脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許任氏液的大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動(dòng)脈圓錐。當(dāng)插管頭部到達(dá)動(dòng)脈圓錐時(shí)，再將插管稍稍后退，并轉(zhuǎn)向心室中央方向，在心室收縮期插入心室。判斷蛙心插管是否進(jìn)入心室，可根據(jù)插管內(nèi)任氏液的液面是否能隨心室的舒縮而上下波動(dòng)而定。如蛙心插管已進(jìn)入心室，則將預(yù)先準(zhǔn)備好的松結(jié)扎緊，并固定在蛙心插管的側(cè)鉤上，以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動(dòng)脈左右分支。
(4) 游離心臟 輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處做一結(jié)扎，結(jié)扎線應(yīng)盡量下壓，以免傷及靜脈竇。在結(jié)扎線外側(cè)剪斷所有組織，將蛙心游離出來(lái)。用任氏液反復(fù)換洗蛙心插管內(nèi)含血的任氏液，直至蛙心插管內(nèi)無(wú)血液殘留為止。離體心臟已制備好，可供實(shí)驗(yàn)。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置
（1)用試管夾將蛙心插管固定在鐵支架上，用蛙心夾在心室舒張期夾住心尖，并將蛙心夾的線頭通過(guò)滑輪連至張力換能器的懸梁臂上。此線應(yīng)有一定的緊張度，但注意勿過(guò)度牽拉心臟。
（2)張力換能器輸出線接生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。
（3)打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“循環(huán)實(shí)驗(yàn)—蛙心灌流”。使用鼠標(biāo)單擊工具條上的“開始”命令按扭，從而啟動(dòng)波形的記錄。根據(jù)信號(hào)窗口中顯示的波形，再適當(dāng)調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)參數(shù)以獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果參數(shù)設(shè)置見表2-5。
【觀察項(xiàng)目】
1．描記正常的蛙心搏動(dòng)曲線，注意觀察心跳頻率、強(qiáng)度及心室的收縮和舒張程度。曲線的疏密：反映心跳的頻率；曲線的規(guī)律性：反映心跳的節(jié)律；曲線的幅度：反映心室收縮的強(qiáng)弱；曲線的基線：反映心室舒張程度。
2．把蛙心插管內(nèi)的任氏液全部更換為0.65﹪NaCl溶液，觀察心跳變化。
3．吸出0.65﹪NaCl溶液，用任氏液反復(fù)換洗數(shù)次，待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液內(nèi)滴加3﹪CaCl2溶液1～2滴，觀察心跳變化。
表2-5 儀器參數(shù)設(shè)置表
| 參數(shù) | MSP600 | Medlab系統(tǒng) | BL-410系統(tǒng) | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù)(增益) Y軸壓縮比 濾波 | 連續(xù)示波 | 記錄儀 2ms 50:1 通道1 DC 張力 50～100 4:1 | 1.0s/div 400Hz 通道1 DC 張力 5mV 10Hz |
4．吸出含CaCl2溶液的任氏液，用任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，在任氏液中滴加1﹪KCl溶液1～2滴，觀察心跳變化。
5．吸出含KCl的任氏液，用任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液中加1:10000去甲腎上腺素溶液1～2滴，觀察心跳變化。接著加入1:10000普萘洛爾溶液1～2滴,觀察心跳變化，然后，再加1:10000去甲腎上腺素溶液1～2滴，觀察與前面去甲腎上腺素的曲線有何不同？
6．用任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液中加1:10000乙酰膽堿溶液1～2滴，觀察心跳變化。接著加5×10-4阿托品溶液1～2滴，觀察心跳變化，然后再滴入1:10000乙酰膽堿溶液1～2滴，觀察心跳變化。
7．用任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，在任氏液中滴加2.5﹪NaHCO31～2滴，觀察心跳變化。
8．用任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，在任氏液中滴加3﹪乳酸1～2滴，觀察心跳變化。
【注意事項(xiàng)】
1．制備蛙心標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇。
2．每次換入灌流液或加試劑，一旦出現(xiàn)明顯效應(yīng)后，應(yīng)立即用任氏液換洗，以免心肌受損，而且必須待心跳恢復(fù)正常后方能進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
3．蛙心插管內(nèi)灌流液面高度應(yīng)始終保持一致。
4．每次滴加藥品和換取任氏液，必須及時(shí)做標(biāo)記。
5．經(jīng)常滴加任氏液于心臟表面使其保持濕潤(rùn)狀態(tài)。
6．吸取任氏液和吸取蛙心插管內(nèi)溶液的吸管應(yīng)區(qū)分專用，不可混淆使用。而且，吸管不能接觸蛙心插管，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
7．化學(xué)藥物作用不明顯時(shí)，可再適量滴加，密切觀察藥物劑量添加后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8．固定換能器時(shí)，應(yīng)稍向下傾斜，以免自心臟滴下的液體流入換能器內(nèi)。
【思考題】
1．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中插管內(nèi)的灌流液面為什么都應(yīng)保持相同的高度？
2．那些因素對(duì)心臟收縮有影響？各種因素對(duì)心臟收縮活動(dòng)有什么影響？分析各項(xiàng)結(jié)果所產(chǎn)生的原因。
3．了解機(jī)體環(huán)境對(duì)器官生存的影響。通過(guò)資料，了解當(dāng)發(fā)生疾病時(shí)，機(jī)體內(nèi)環(huán)境的改變特點(diǎn)。
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)6 影響心輸出量的因素
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1. 掌握蛙動(dòng)、靜脈插管技術(shù)。
2. 觀察前、后負(fù)荷、心肌收縮性能對(duì)心輸出量的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
心輸出量（cardiac output, CO)是指每分鐘一側(cè)心室所射出的血量。它為每搏輸出量與心率的乘積。因此，心輸出量的多少取決于每搏輸出量和心率。每搏輸出量取決于心室舒張末期容積和心室射血能力，心室射血能力又與動(dòng)脈血壓及心肌收縮性能有關(guān)。所以，影響心輸出量的主要因素是心室舒張末期容積、心肌收縮性能、動(dòng)脈血壓和心率。在一定范圍內(nèi)前負(fù)荷的增加，心肌收縮能力增加，心輸出量增加；超過(guò)一定范圍心輸出量反而減少。在一定范圍內(nèi)后負(fù)荷的增加可引起前負(fù)荷相應(yīng)增加從而使心輸出量保持不變，但超過(guò)一定范圍心輸出量減少。心肌收縮力增加心輸出量增加。心率在一定范圍內(nèi)增加，心輸出量增加；但超過(guò)了一定范圍心舒張期充盈不足，可引起前負(fù)荷下降，故心輸出量反而減少。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
蛙或蟾蜍。
【實(shí)驗(yàn)用品】
恒壓貯液瓶，蛙類手術(shù)器械，細(xì)塑料管，任氏液，直尺，1ml注射器，小燒杯，20ml量筒，1:10000腎上腺素，1:10000乙酰膽堿，鐵支架，刺激器，刺激電極。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1. 破壞蛙的腦和脊髓后，將蛙仰臥固定在蛙板上，沿腹白線剖開腹腔和胸腔，露出心臟、腹腔靜脈和主動(dòng)脈。用玻璃分針穿過(guò)主動(dòng)脈下方，將心臟翻向頭部，識(shí)別靜脈竇、后腔靜脈（下腔靜脈)、肝靜脈和前腔靜脈的解剖位置。后腔靜脈最粗位于肝葉背側(cè)的深部，需撥開肝葉才能看到。
2. 腔靜脈插管 在后腔靜脈下方穿兩根絲線，將其中一根穿過(guò)主動(dòng)脈下方，再繞回結(jié)扎除后腔靜脈外的全部靜脈血管（注意：結(jié)扎時(shí)勿傷靜脈竇)；在后腔靜脈做一小切口，隨即把恒壓貯液瓶相連的塑料管向心插入靜脈，并結(jié)扎固定。同時(shí)讓少量液體緩慢輸入（注意：恒壓瓶要預(yù)先裝上任氏液，同時(shí)排盡整個(gè)管道的氣體)。
3. 主動(dòng)脈插管 翻正心臟，分離結(jié)扎右側(cè)主動(dòng)脈。在右側(cè)主動(dòng)脈下方穿線并在動(dòng)脈圓錐的上方剪一小口，將細(xì)塑料管向心插入動(dòng)脈，并結(jié)扎固定。此時(shí)可見液體從細(xì)塑料管中流出，將細(xì)塑料固定與鐵支架上。
4. 恒壓貯液瓶中心管口為零點(diǎn)。零點(diǎn)與心臟水平之間的垂直距離決定了心臟的灌流壓。所以它的高低表示了前負(fù)荷的大小。鐵支架上細(xì)塑料管的最高點(diǎn)與心臟之間的距離，決定了心臟收縮所需克服的靜水壓，它的高度代表收縮時(shí)后負(fù)荷的大小。用刺激電極直接與心臟接觸，選擇比實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自率較高的頻率，并能引起心臟收縮的強(qiáng)度的電刺激控制心率。
【觀察項(xiàng)目】
1．肉眼觀察心舒末容積和心肌收縮力。
2. 心室舒張末期容積（前負(fù)荷)對(duì)心輸出量的影響固定后負(fù)荷，改變前負(fù)荷，找最適前負(fù)荷。
（1)固定后負(fù)荷于5cmH2O。
（2)調(diào)整貯液瓶高度，使前負(fù)荷分別于5cmH2O，10cmH2O，15cmH2O……在每一個(gè)前負(fù)荷下記錄心輸出量（CO)，直至增加前負(fù)荷，CO不再增加為止（表2-6)。
表2-6 前負(fù)荷改變對(duì)CO、HR的影響
| 前負(fù)荷（cmH2O) | CO ml/min | HR beats/min |
| 5 10 15 20 25 |
2. 動(dòng)脈血壓（后負(fù)荷)對(duì)心輸出量的影響
(1)將前負(fù)荷固定于20cm左右，后負(fù)
荷置于10cm處，人工控制心率，記錄
1min流出的液體量。將動(dòng)脈塑料管插管
緩慢抬高，當(dāng)肉眼觀察到流出液體明顯
減少或完全停止時(shí)，測(cè)定此時(shí)后負(fù)荷的
高度（A cm)，并記錄1min內(nèi)流出的液
體量。
(2)在10cm與A cm之間等距離找兩點(diǎn)分別測(cè)定1min內(nèi)流出的液體量。以后負(fù)荷為橫坐標(biāo)，以心輸出量為縱坐標(biāo)，繪制心輸出量-后負(fù)荷關(guān)系曲線。
3. 心肌收縮能力對(duì)心輸出量的影響
(1) 滴加腎上腺素溶液（1:10000)2～3滴，作用1min～2min，記錄各參數(shù)，繪制心功曲線。
(2) 滴加乙酰膽堿溶液2～3滴，作用1min～2min，記錄各參數(shù)，繪制心功曲線。
4. 心率對(duì)心輸出量的影響
將前負(fù)荷固定于20cm，后負(fù)荷固定于10cm左右，改變?nèi)斯て鸩l率，記錄不同頻率時(shí)的心輸出量；繪制心輸出量-心率關(guān)系曲線。
【注意事項(xiàng)】
1.手術(shù)時(shí)不要損傷靜脈竇。
2.整個(gè)實(shí)驗(yàn)中管道不要扭曲，輸液管道中不得存有氣泡。
3.保持標(biāo)本濕潤(rùn)，心臟表面經(jīng)常滴加任氏液，防止組織干燥。
4.實(shí)驗(yàn)時(shí)貯液瓶零點(diǎn)不應(yīng)太高。
【思考題】
1. 什么是最適前負(fù)荷？如何找最適前負(fù)荷？
2. 何謂心肌收縮性能？受哪些因素影響？
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)7 家兔減壓神經(jīng)放電
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．觀察家兔在體減壓神經(jīng)傳入沖動(dòng)的發(fā)放。
2．學(xué)習(xí)在體記錄神經(jīng)活動(dòng)的方法。
3. 觀察動(dòng)脈血壓變化與減壓神經(jīng)放電的關(guān)系，加深對(duì)減壓反射的理解和認(rèn)識(shí)。
【實(shí)驗(yàn)原理】
當(dāng)機(jī)體處于不同的生理狀態(tài)或機(jī)體內(nèi)、外環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，可引起各種心血管反射，使心輸出量和各器官的血管收縮狀況發(fā)生相應(yīng)的改變，動(dòng)脈血壓也可發(fā)生變化。這些心血管反射主要包括頸動(dòng)脈竇和主動(dòng)脈弓壓力感受性反射、心肺感受器引起的心血管反射、頸動(dòng)脈體和主動(dòng)脈體化學(xué)感受性反射等。其中，壓力感受性反射（bororeceptor reflex)在平時(shí)經(jīng)常地起作用。當(dāng)動(dòng)脈血壓升高或降低時(shí)，壓力感受器的傳入沖動(dòng)也隨之增加或減少，通過(guò)中樞機(jī)制引起心率、心肌收縮力、心輸出量、血管阻力等發(fā)生相應(yīng)變化，使動(dòng)脈血壓降低或回升，從而調(diào)節(jié)血壓相對(duì)穩(wěn)定，這一反射稱為降壓反射。家兔降壓反射的主動(dòng)脈弓壓力感受器的傳入神經(jīng)在頸部單獨(dú)成一束，與迷走神經(jīng)和頸交感神經(jīng)伴行，稱為主動(dòng)脈神經(jīng)或減壓神經(jīng)。它是降壓反射的傳入神經(jīng)，可將感受器感受血壓變化的傳入沖動(dòng)傳送到中樞。用電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法可引導(dǎo)、顯示、記錄減壓神經(jīng)放電，并用監(jiān)聽器監(jiān)聽減壓神經(jīng)放電的聲音，幫助試驗(yàn)者加深對(duì)減壓反射的理解和認(rèn)識(shí)。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，兔手術(shù)臺(tái)，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，引導(dǎo)電極，電極架，注射器，玻璃分針，燒杯，棉球及絲線，紗布，皮兜架，滴管，液體石蠟，生理鹽水，利血平，20﹪氨基甲酸乙酯，1:10000腎上腺素，1:10000乙酰膽堿。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．手術(shù)
（1)麻醉和固定 用 20﹪氨基甲酸乙酯，按5ml/kg體重（1g／kg體重)的劑量從兔耳緣靜脈緩慢注入，待動(dòng)物麻醉后，取仰臥位固定于兔手術(shù)臺(tái)上。
（2)分離頸部血管和神經(jīng) 頸部剪毛，作長(zhǎng)5cm～7cm的正中切口，鈍性分離皮下組織和淺層肌肉后，沿縱行的氣管前肌和斜行的胸鎖乳突肌間鈍性分離，將胸鎖乳突肌向外側(cè)分開，即可見到深層位于氣管旁的血管神經(jīng)束，仔細(xì)辨認(rèn)并小心地分離左側(cè)的減壓神經(jīng)，下穿濕絲線備用，分離時(shí)特別注意不要過(guò)度牽拉，并隨時(shí)用生理鹽水濕潤(rùn)。然后分離右側(cè)的頸總動(dòng)脈，穿線備用。
（3)氣管插管 在氣管下穿線，于甲狀軟骨下1～2個(gè)環(huán)狀軟骨間用粗剪刀剪開氣管的一半，并向下方作一gydjdsj.org.cn/hushi/縱切口，使切口呈倒“T”形。插入氣管插管，并用備好的線固定。(圖2-9)
圖2-9 氣管插管示意圖
（4)頸總動(dòng)脈插管 分離右側(cè)頸總動(dòng)脈平甲狀軟骨上緣，約2cm～3cm（盡量向頭端分離，但不要損傷其分支)，近心端用動(dòng)脈夾夾閉，遠(yuǎn)心端用線扎牢。在結(jié)扎處的近端剪一以45°角斜向近心端的小口，向心臟方向插入已注滿肝素的動(dòng)脈插管（注意管內(nèi)不應(yīng)有氣泡，如有氣泡，將影響記錄使血壓變化的幅度，用線將插管與動(dòng)脈扎緊，并固定)。（圖2-10)
圖2-10 頸總動(dòng)脈插管示意圖
（5)安置電極 用玻璃針輕輕地把減壓神經(jīng)放到引導(dǎo)電極上，用溫石蠟油棉花遮蓋神經(jīng)以防干燥并起絕緣、保溫作用。注意神經(jīng)不可牽拉過(guò)緊，記錄電極應(yīng)懸空并固定于電極支架上，不能觸及周圍組織。將接地線就近夾在皮膚切口組織上。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置
（1)神經(jīng)放電引導(dǎo)電極接到生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第1通道上，記錄減壓神經(jīng)放電。
（2)頸總動(dòng)脈插管通過(guò)壓力換能器輸入到生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第2通道上，記錄動(dòng)脈血壓曲線變化。
（3)打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“循環(huán)實(shí)驗(yàn)—兔減壓神經(jīng)放電”。點(diǎn)擊刺激器設(shè)置，參數(shù)設(shè)置見表2-7（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。再點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，選擇“監(jiān)聽—打開監(jiān)聽”，并確定。
表2-7 儀器參數(shù)設(shè)置表
| 參數(shù) | MSP600 | MedLab | BL-410 | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣頻率 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù) Y軸壓縮比 濾波 時(shí)間常數(shù) | 同步觸發(fā)示波 通道1 DC 神經(jīng)放電 5000 1kHz 0.001s | 記憶示波 20μs 200：1 通道1 通道2 AC DC 神經(jīng)放電 血壓 10000～50000 100～200 8：1 4：1 | 2.5s/div 通道1 AC 張力 100 30Hz |
【觀察項(xiàng)目】
1．正常減壓神經(jīng)放電 觀察減壓神經(jīng)的群集放電的節(jié)律、波形和幅度。群集放電的節(jié)律與心率同步，其幅度約為30μV～100μV，其大小隨血壓高低而變。一簇群集放電的波形呈三角形，幅度先大后小。見圖2-11。在監(jiān)聽器中減壓神經(jīng)放電的聲音類似火車開動(dòng)樣的“轟轟”聲。
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a：原始圖 b：積分圖
圖2-11 減壓神經(jīng)群集性放電
2．壓迫頸動(dòng)脈竇 觀察減壓神經(jīng)群集性放電和動(dòng)脈血壓曲線的變化。
3．夾閉頸動(dòng)脈 觀察減壓神經(jīng)群集性放電和動(dòng)脈血壓曲線的變化。
4．注射腎上腺素 從耳緣靜脈注射1: 10000腎上腺素 0.3ml，注意觀察血壓上升的高度，上升過(guò)程中減壓神經(jīng)群集放電頻率的變化，何時(shí)開始增多？何時(shí)不能分辨出群集形成？并持續(xù)觀察到血壓恢復(fù)至正常為止。
5．注射乙酰膽堿 從耳緣靜脈注射1: 10000乙酰膽堿 0.3ml，觀察血壓與減壓神經(jīng)群集放電頻率的變化以及二者的關(guān)系，并記錄動(dòng)脈血壓，看降低到何種程度時(shí)減壓神經(jīng)的群集放電才減少或完全停止；以及其恢復(fù)過(guò)程。
6．切斷減壓神經(jīng)，分別在中樞端和外周端記錄神經(jīng)放電，有何不同？
【注意事項(xiàng)】
1．麻醉不宜過(guò)淺，以免動(dòng)物躁動(dòng)，產(chǎn)生肌電干擾。
2．儀器和動(dòng)物均要接地，并注意適當(dāng)屏蔽。
3．分離神經(jīng)時(shí)動(dòng)作要輕柔，不要牽拉；分離后及時(shí)滴加溫?zé)嵋后w石蠟，以防止神經(jīng)干燥，并可保溫。
4．保持神經(jīng)與引導(dǎo)電極接觸良好；引導(dǎo)電極不可觸及周圍組織，以免帶來(lái)干擾。
【思考題】
1．正常減壓神經(jīng)放電的基本波形有何特征？
2. 靜脈注射腎上腺素、乙酰膽堿后，減壓神經(jīng)放電頻率、幅度有何變化？腎上腺素、乙酰膽堿是如何影響動(dòng)脈血壓的？
3．減壓神經(jīng)放電和動(dòng)脈血壓有何關(guān)系？
4．根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析減壓神經(jīng)是傳出神經(jīng)還是傳入神經(jīng)？
5．理解減壓反射的生理意義。
（肖愛嬌 朱大誠(chéng))
實(shí)驗(yàn)8 心血管活動(dòng)的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
1．學(xué)習(xí)哺乳類動(dòng)物動(dòng)脈血壓的直接測(cè)量方法。
2．通過(guò)觀察動(dòng)脈血壓的變化，掌握心血管活動(dòng)的神經(jīng)和體液調(diào)節(jié)。
【實(shí)驗(yàn)原理】
心臟和血管的活動(dòng)受神經(jīng)、體液和自身機(jī)制的調(diào)節(jié)。支配心臟的傳出神經(jīng)主要為心交感神經(jīng)和心迷走神經(jīng)，心交感神經(jīng)興奮可致心率加快，房室交界的傳導(dǎo)加快，心房肌和心室肌的收縮能力加強(qiáng)，而心迷走神經(jīng)興奮可致心率減慢，心肌收縮能力減弱，房室傳導(dǎo)速度減慢。絕大多數(shù)血管平滑肌受自主神經(jīng)支配，主要是交感縮血管神經(jīng)纖維，興奮時(shí)使血管收縮，外周阻力增加，同時(shí)由于容量血管收縮，靜脈回流增加，心輸血量亦增加。神經(jīng)系統(tǒng)通過(guò)心血管反射(如壓力感受性反射等)調(diào)節(jié)心血管的活動(dòng)，改變心輸出量和外周阻力，從而調(diào)節(jié)動(dòng)脈血壓。
心血管活動(dòng)除受神經(jīng)調(diào)節(jié)外，還受體液因素的調(diào)節(jié)，其中最主要的為腎上腺素和去甲腎上腺素。腎上腺素可與α和β兩類腎上腺素能受體結(jié)合，使心率加快，收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)加快，心輸出量增加。其對(duì)血管的作用取決于血管平滑肌上兩類受體分布的情況。一般來(lái)說(shuō)，在整體情況下，小劑量腎上腺素主要引起體內(nèi)血液重新分配，對(duì)總外周阻力影響不大，但大劑量的腎上腺素亦可使外周阻力明顯升高。去甲腎上腺素主要激活α受體，所以其作用主要是引起外周血管廣泛收縮，通過(guò)增加外周阻力而使動(dòng)脈血壓升高，對(duì)心臟的直接作用遠(yuǎn)較腎上腺素為弱，而且在外源性給予時(shí)，常因明顯的升壓作用而通過(guò)竇弓反射引起反向性心率變慢，血壓出現(xiàn)雙峰曲線。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
生物實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)，壓力換能器，動(dòng)脈插管，兔手術(shù)臺(tái)，哺乳動(dòng)物手術(shù)器械，活動(dòng)雙凹夾，試管夾，鐵支柱，三通管，刺激器電極，雙極保護(hù)電極，注射器（ lm1三只，5m1、20m1各一只)，有色絲線、紗布，脫脂棉花，20﹪氨基甲酸乙酯，生理鹽水，1∶1000肝素，1:10000去甲腎上腺素，1:10000腎上腺素，1:10000乙酰膽堿。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1.手術(shù)準(zhǔn)備
(1)麻醉 動(dòng)物稱重后，用20﹪氨基甲酸乙酯5m1/kg（或1﹪戊巴比妥鈉，2.5 ml～3ml/kg)由兔耳緣靜脈緩慢注入（圖2-12)。注射中注意觀察動(dòng)物肌張力、呼吸頻率及角膜反射的變化，防止麻醉過(guò)深。
（2)動(dòng)物固定 將麻醉好的動(dòng)物仰臥位固定于兔手術(shù)臺(tái)上，頸部放正，必要時(shí)可在頸部下方墊一小墊，將頸部墊高，以便手術(shù)。
（3)分離頸部血管和神經(jīng) 頸部剪毛，作長(zhǎng)5cm～7cm的正中切口，分離皮下組織和淺層肌肉后，沿縱行的氣管前肌和斜行的胸鎖乳突肌間鈍性分離，將胸鎖乳突肌向外側(cè)分開，即可見到深層位于氣管旁的血管神經(jīng)束，仔細(xì)辨認(rèn)并小心地分離左側(cè)的迷走神經(jīng)和減壓神經(jīng)，下穿不同顏色的濕絲線備用，分離時(shí)特別注意不要過(guò)度牽拉，并隨時(shí)用生理鹽水濕潤(rùn)。然后分離雙側(cè)的頸總動(dòng)脈，穿線備用。
(4)氣管插管 在氣管下穿線，于甲狀軟骨下1～2個(gè)環(huán)狀軟骨間用粗剪刀剪開氣管的一半，并向下方作一縱切口，使切口呈倒“T”形。插入氣管插管，并用備好的線固定。
（5)頸總動(dòng)脈插管
圖2-12兔耳緣靜脈注射示意圖
2. 儀器準(zhǔn)備
（1)將壓力換能器的輸出端與三通管相連。其中三通管的一端連接動(dòng)脈插管，用注射器將肝素通過(guò)三通管緩慢注入換能器和動(dòng)脈插管內(nèi)，將換能器和動(dòng)脈插管內(nèi)的空氣排盡（注意：注入肝素前應(yīng)保證換能器通過(guò)動(dòng)脈插管與大氣相通，否則注入肝素時(shí)將會(huì)使換能器內(nèi)壓力劇升而損壞換能器)。
（2)將壓力換能器的輸入端與生物實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)的前面板CH1接口相連，將刺激電極插頭與生物實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)的前面板刺激器接口相連。
（3)調(diào)節(jié)參數(shù)
選擇“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”菜單中的“循環(huán)實(shí)驗(yàn)”菜單項(xiàng)，以彈出“循環(huán)實(shí)驗(yàn)”子菜單。在“循環(huán)實(shí)驗(yàn)”子菜單中選擇“兔動(dòng)脈血壓調(diào)節(jié)”實(shí)驗(yàn)?zāi)K。放開動(dòng)脈夾，記錄動(dòng)脈血壓。根據(jù)信號(hào)窗口中顯示的波形，再適當(dāng)調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)參數(shù)以獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果。
【觀察項(xiàng)目】
（1)正常血壓曲線 動(dòng)脈血壓隨心室的收縮和舒張而變化。心室收縮時(shí)血壓上升，心室舒張時(shí)血壓下降，這種血壓隨心動(dòng)周期波動(dòng)稱為“一級(jí)波”（心搏波)，其頻率與心率一致。此外可見動(dòng)脈血壓亦隨呼吸而變化，吸氣時(shí)血壓先是下降，繼則上升，呼氣時(shí)血壓先是上升，繼則下降。這種波動(dòng)叫“二級(jí)波”（呼吸波)，其頻率與呼吸頻率一致。有時(shí)還可見到一種低頻率（幾次到幾十次呼吸波為一周期)的緩慢波動(dòng)，稱為“三級(jí)波”，可能與心血管中樞的緊張性周期有關(guān)。
（2)夾閉一側(cè)頸總動(dòng)脈 用動(dòng)脈夾夾閉左側(cè)頸總動(dòng)脈5s～10s，觀察血壓變化。
（3)牽拉頸總動(dòng)脈殘端 手持右側(cè)頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端的結(jié)扎線，或用止血鉗挾住殘端，向心臟方向輕輕拉緊，然后做有節(jié)奏的往復(fù)牽拉（約2s～5s)，持續(xù)5s～10s，注意勿拉脫結(jié)扎線，觀察血壓變化。
（4)刺激減壓神經(jīng) 先用雙極保護(hù)電極刺激完整的左側(cè)減壓神經(jīng)，使用鼠標(biāo)單擊工具條上的“刺激”命令按扭，或者從“基本功能”菜單中選擇“刺激”命令項(xiàng)中的“啟動(dòng)刺激”命令。觀察血壓變化（血壓如不下降，應(yīng)檢查刺激器是否有輸出或所刺激的是否為減壓神經(jīng))。然后在神經(jīng)游離段（應(yīng)有1.5cm～2cm長(zhǎng))的中部做雙重結(jié)扎，在兩結(jié)扎線的中間剪斷減壓神經(jīng)，以同樣的刺激參數(shù)分別刺激其中樞端和外周端，觀察血壓變化。
（5)刺激迷走神經(jīng) 結(jié)扎并剪斷左側(cè)迷走神經(jīng)，刺激其外周端，使用鼠標(biāo)單擊工具條上的“刺激”命令按扭，或者從“刺激”菜單中選擇“啟動(dòng)刺激”命令。觀察血壓變化。
（6)靜脈注射去甲腎上腺素 由耳緣注射0.01﹪去甲腎上腺素0.2m1～0.3m1，觀察血壓變化。
（7)靜脈注射腎上腺素 由耳緣注射1:10000腎上腺素0.2m1～0.4ml，觀察血壓變化。
（8)靜脈注射乙酰膽堿 由耳緣注射1:10000乙酰膽堿0.2m1～0.3m1，觀察血壓變化。
【注意事項(xiàng)】
1．麻醉動(dòng)物注射麻醉藥時(shí)，要注意注入的速度，一般前1/3快推，中1/3 中速，后1/3慢速并注意觀察動(dòng)物的角膜反射和呼吸。
2. 分離暴露頸動(dòng)脈鞘時(shí)，需注意保持血管神經(jīng)的自然位置，以便判定減壓神經(jīng)。
3. 操作切忌粗暴，隨時(shí)用生理溶液濕潤(rùn)組織以保持活性。忌用金屬器械觸及、夾捏神經(jīng)。
4．每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)等血壓基本恢復(fù)并穩(wěn)定后再進(jìn)行下一項(xiàng)。
5. 每次注射藥物后應(yīng)立即注入少量生理鹽水，以防止藥液殘留在針頭內(nèi)及局部靜脈中，影響下一種藥物使用的效果。
【思考題】
1．正常血壓的一級(jí)波、二級(jí)波及三級(jí)波各有何特征？其形成機(jī)制何在？
2．夾閉頸總動(dòng)脈與牽拉頸總動(dòng)脈殘端的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何不同，如何聯(lián)系起來(lái)推斷出結(jié)論？
3．刺激完整的減壓神經(jīng)及其中樞端和外周端，血壓各有何種變化？為什么？
4．比較去甲腎上腺素和腎上腺素對(duì)血壓的影響有何不同，為什么？
5．動(dòng)脈血壓是如何保持相對(duì)穩(wěn)定的？
6．實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，可采用股動(dòng)脈放血觀察不同失血量對(duì)心血管活動(dòng)的影響。
7. 處死動(dòng)物的方法有哪些?
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)9 人體肺容量和肺通氣量的測(cè)定
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)應(yīng)用肺量計(jì)測(cè)定正常人體肺容量和肺通氣量的基本實(shí)驗(yàn)方法。
2．掌握人體潮氣量、肺活量、時(shí)間肺活量等的正常值。
【實(shí)驗(yàn)原理】
肺的主要功能是進(jìn)行氣體交換，肺內(nèi)氣體與外界大氣不斷進(jìn)行交換，吸入氧氣、排出二氧化碳，以維持內(nèi)環(huán)境中氧氣、二氧化碳濃度的相對(duì)穩(wěn)定，保證細(xì)胞新陳代謝的正常進(jìn)行。肺通氣是指氣體進(jìn)出肺的過(guò)程，肺容量是指肺容納的氣體量，而肺通氣量是指單位時(shí)間內(nèi)吸入或呼出的氣量。其中潮氣量、肺活量、時(shí)間肺活量等在一定程度上可反映肺的容量和通氣功能。因此，潮氣量、肺活量、時(shí)間肺活量等的測(cè)定可作為衡量肺功能的重要指標(biāo)。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
人。
【實(shí)驗(yàn)用品】
肺量計(jì)，盛冷開水的塑料盒，橡皮吹嘴，鼻夾，氧氣，碳酸鈉鈣，墨水，75﹪酒精棉球。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．肺量計(jì)的結(jié)構(gòu)和使用方法
肺量計(jì)（圖2-13)主要由一對(duì)套在一起的圓筒所組成：外筒是裝清水的水槽，槽底有排水閥門可以放水，水槽中央有進(jìn)氣管，管的上端露出水面，管下端有通向槽外的三通閥門，呼、吸氣體即經(jīng)此出入。內(nèi)筒為倒置于水槽中的浮筒，可隨呼吸氣體的進(jìn)出而升降。肺量計(jì)頂部有進(jìn)氣接頭，可由此向筒內(nèi)充入氣體；浮筒容量約 6L～8L，一般為鋁制，重量較輕；筒頂連有細(xì)鋼絲繩，通過(guò)滑輪架在另一端懸一平衡錘，錘的重量恰能與浮筒的重量相平衡。
當(dāng)三通閥門開放時(shí)，呼吸氣可經(jīng)通氣管進(jìn)出肺量計(jì)，浮筒即隨之上下移動(dòng)，根據(jù)浮筒的升降從刻度標(biāo)尺上可讀出氣體容量，并由描筆記錄在專用記錄紙上。專用記錄紙上印有表示容積的直格和表示走紙速度的橫格，一般一小直格為100ml，一橫格為 25mm/s。
2．實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
（1)將儀器水平放置，支架插入支架座內(nèi)，吊絲經(jīng)滑輪與浮筒頂部的調(diào)節(jié)螺帽固定。
（2)調(diào)節(jié)水平調(diào)節(jié)盤，使肺量計(jì)的內(nèi)筒、外筒不相接觸，能自由升降。
（3)肺量計(jì)內(nèi)裝入適量清水，調(diào)整調(diào)節(jié)螺帽，使肺量計(jì)不充氣時(shí)記錄筆尖處于零位。
（4)在肺量計(jì)的二氧化碳吸收器中裝入碳酸鈉鈣。
（5)打開肺量計(jì)的進(jìn)氣接頭，使筒內(nèi)充滿空氣（或氧氣)4L～5L，然后關(guān)閉接頭。
（6)裝好記錄紙，記錄筆中灌足墨水，并與記錄紙接觸，整機(jī)接上電源。
（7)受試者閉目靜立（或坐)，口中銜好用75﹪酒精棉球消毒過(guò)的橡皮吹嘴，并用鼻夾夾鼻，練習(xí)用口呼吸2min～3min。
（8)打開電源開關(guān)和記錄開關(guān)，用50mm/min（1橫格/30s)的走紙速度描記呼吸曲線。
圖2-13 肺量計(jì)外部正面觀
l．螺紋管 2．電源開關(guān) 3．記錄開關(guān) 4．變速器開關(guān) 5．氧氣接頭 6．0位調(diào)節(jié)螺帽
7．滑輪 8．支架 9．浮筒 10．記錄筆 11．記錄紙座架 12．三通管
【觀察項(xiàng)目】
1．潮氣量、補(bǔ)吸氣量、補(bǔ)呼氣量和肺活量（圖2-14)
（1)潮氣量 被測(cè)者靜坐（或靜立)，平靜呼吸，描記正常呼吸曲線30s，計(jì)算5次吸入或呼出氣量的平均值。
（2)補(bǔ)吸氣量 平靜呼吸數(shù)次后，在一次平靜吸氣末，再繼續(xù)吸氣直至不能再吸氣為止，所吸的氣量（小直格數(shù)×100ml)即為補(bǔ)吸氣量。
（3)補(bǔ)呼氣量 平靜呼吸數(shù)次后，在一次平靜呼氣末再繼續(xù)呼氣直至不能再呼為止，所呼出的氣量即為補(bǔ)呼氣量。
（4)肺活量 平靜呼吸數(shù)次后，受試者盡力作最大吸氣后，作最大限度的呼氣，所呼出的氣量即為肺活量。重復(fù)2～3次。取最大一次的肺活量記錄。
2．時(shí)間肺活量
（1)肺量計(jì)內(nèi)重新裝新鮮空氣4L～5L。調(diào)節(jié)好筆尖位置以便描記。
（2)受試者口銜吹嘴，夾住鼻子，用口呼吸。開動(dòng)慢鼓（0.83mm/s)，記錄平靜呼吸3～4次后，令受試者作最大限度的吸氣，在吸氣之末屏氣1s～2s，此時(shí)開動(dòng)快鼓（25mm/s)，然后用最快的速度作用力深呼氣，直到不能再呼為止。隨即停止走紙。從記錄紙上測(cè)出第一、第二和第三秒鐘內(nèi)的呼出氣量，并計(jì)算它們各占全部呼出氣量的百分率（圖2-15)。
3．每分通氣量和最大通氣量
（1)每分通氣量 每分通氣量=潮氣量×呼吸頻率。
（2)最大通氣量 受試者站立，先進(jìn)行平靜呼吸數(shù)次后，按主試者口令，在15s內(nèi)盡力作最深最快呼吸。用50mm/min的走紙速度描記呼吸曲線， 15s內(nèi)吸入或呼出的總氣量×4即為最大通氣量。
圖2-14 肺活量組成成分分析曲線
1.潮氣量 2.補(bǔ)吸氣量 3.補(bǔ)呼氣量 4.肺活量
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圖2-15 時(shí)間肺活量曲線
【注意事項(xiàng)】
1．肺量計(jì)中的水應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前4h灌足，使水溫與室溫相平衡。橡皮吹嘴在實(shí)驗(yàn)前需用75﹪酒精棉球消毒后，浸于冷開水中備用。更換受試者時(shí),應(yīng)重新消毒。
2．每次測(cè)定前受試者都應(yīng)練習(xí)幾次，測(cè)定時(shí)受試者不應(yīng)看著描筆呼吸。
3．碳酸鈉鈣變?yōu)辄S色即不宜使用。
4．測(cè)定時(shí)應(yīng)注意防止從鼻孔或口角漏氣，以免影響測(cè)定結(jié)果。
【思考題】
1．根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)的正常值，判斷受試者的肺通氣功能是否正常。
2．潮氣量的測(cè)定為什么要取平均值？肺活量的測(cè)定為什么要取最大值？
3．肺活量的測(cè)定有何意義？與時(shí)間肺活量的測(cè)定的意義有何不同？
4．測(cè)定最大通氣量時(shí)，為什么只進(jìn)行15s深呼吸而不是1min?
5．如何評(píng)價(jià)肺容量與肺通氣量？
（肖愛嬌 崔艷茹)
實(shí)驗(yàn)10 家兔膈神經(jīng)放電
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)引導(dǎo)兔在體膈神經(jīng)放電的電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法。
2．觀察膈神經(jīng)自發(fā)放電與呼吸運(yùn)動(dòng)的關(guān)系。
【實(shí)驗(yàn)原理】
呼吸運(yùn)動(dòng)的節(jié)律來(lái)源于呼吸中樞，呼吸肌屬于骨骼肌，其活動(dòng)依賴膈神經(jīng)和肋間神經(jīng)的支配。腦干呼吸中樞的節(jié)律性活動(dòng)通過(guò)膈神經(jīng)和肋間神經(jīng)下傳至膈肌和肋間肌，從而產(chǎn)生節(jié)律性呼吸肌舒縮活動(dòng)，引起呼吸運(yùn)動(dòng)。因此引導(dǎo)膈神經(jīng)傳出纖維的放電，可直接反映腦干呼吸中樞的活動(dòng)，同時(shí)能加深對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的認(rèn)識(shí)。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，兔手術(shù)臺(tái)，氣管插管，神經(jīng)放電引導(dǎo)電極，壓力換能器或呼吸換能器，固定支架，U型皮兜固定架，注射器（30ml，20ml，lml)，50cm長(zhǎng)橡皮管一條，玻璃分針，二氧化碳?xì)饽遥?0﹪氨基甲酸乙酯，生理鹽水，液體石蠟（加溫至 38℃～40℃)，尼可剎米注射液。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．手術(shù)
（1)麻醉和固定 用20﹪氨基甲酸乙酯5ml／kg體重由兔耳緣靜脈注射，待動(dòng)物麻醉后，取仰臥位固定于兔手術(shù)臺(tái)上。
（2)氣管插管 剪去頸部兔毛，沿頸部正中切開皮膚，用止血鉗鈍性分離氣管，在甲狀軟骨以下剪開氣管，插入Y形氣管插管，用棉線將氣管插管結(jié)扎固定。氣管插管的兩個(gè)側(cè)管各連接一3cm長(zhǎng)的橡皮管。將插氣管插管的一個(gè)側(cè)管的尾端的塑料套管連到壓力換能器（套管內(nèi)不充灌生理鹽水)上。
（3)分離頸部膈神經(jīng) 膈神經(jīng)由第4、5頸神經(jīng)的腹支匯合而成。先將動(dòng)物頭頸略傾向?qū)?cè)，用止血鉗在術(shù)側(cè)頸外靜脈與胸鎖乳突肌之間向深處分離直至見到粗大橫行的臂叢神經(jīng)叢。在臂叢的內(nèi)側(cè)有一條較細(xì)的由頸4、5脊神經(jīng)分出的如細(xì)線般的神經(jīng)分支，即為膈神經(jīng)。膈神經(jīng)橫過(guò)臂叢神經(jīng)并和它交叉，向后內(nèi)側(cè)行走，貼在前斜角肌腹緣表面，與氣管平行進(jìn)入胸腔。用玻璃分針在臂叢上方分離膈神經(jīng)2cm～3cm，穿線置外周端（近心臟)備用。
（4)分離迷走神經(jīng) 分離兩側(cè)迷走神經(jīng)，穿線備用。
（5)安置電極 頸部另一側(cè)接地。借助于U型架作好皮兜，并注入38℃液體石蠟保溫，防止神經(jīng)干燥。用玻璃分針將膈神經(jīng)放至引導(dǎo)電極上。注意神經(jīng)不可牽拉過(guò)緊，引導(dǎo)電極應(yīng)懸空，不要觸及周圍組織。
2. 連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置
（1)神經(jīng)放電引導(dǎo)電極接到生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第1通道上，記錄膈神經(jīng)放電。
（2)壓力換能器或呼吸換能器輸入到生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第2通道上，記錄呼吸運(yùn)動(dòng)變化。
（3)打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，進(jìn)入“呼吸實(shí)驗(yàn)—膈神經(jīng)放電”。參數(shù)設(shè)置見表2-8（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。再點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)設(shè)置”，選擇“監(jiān)聽-打開監(jiān)聽”，并確定。
表2-8 儀器參數(shù)設(shè)置表
| 參數(shù) | MSP600 | Medlab系統(tǒng) | BL-410系統(tǒng) | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù)(增益) Y軸壓縮比 濾波 | 同步觸發(fā)示波 通道1 DC 神經(jīng)放電 5000 1kHz | 記錄儀 25µs 20:1 通道1 通道3 AC DC 生物電放電 呼吸 500 500 64:1 4:1 | 2.5s/div 通道1 DC 張力 100 30Hz |
【觀察項(xiàng)目】
1．正常呼吸時(shí)的膈神經(jīng)放電 觀察動(dòng)物正常呼吸時(shí)的胸廓的運(yùn)動(dòng)、呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電曲線的關(guān)系，通過(guò)監(jiān)聽器監(jiān)聽與吸氣運(yùn)動(dòng)相一致的膈神經(jīng)放電聲。膈神經(jīng)放電見圖2-16。
2．二氧化碳濃度升高后的膈神經(jīng)放電 將CO2氣囊上的注射器針頭插入氣管插管內(nèi)，打開CO2氣囊上的螺旋夾，氣囊加壓，使CO2沖入氣管內(nèi)，觀察膈神經(jīng)放電和呼吸運(yùn)動(dòng)的變化。
3．注射乳酸后的膈神經(jīng)放電 由兔耳緣靜脈注射3﹪乳酸2ml，觀察膈神經(jīng)放電與呼吸運(yùn)動(dòng)的變化。
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a：原始圖 b：積分圖
圖2-16 兔膈神經(jīng)群集性放電
4．增加無(wú)效腔時(shí)的膈神經(jīng)放電 于氣管插管的另一側(cè)管上連接50cm長(zhǎng)橡皮管一條，觀察膈神經(jīng)放電與呼吸運(yùn)動(dòng)的變化。出現(xiàn)明顯效應(yīng)后立即去掉橡皮管，待呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電曲線恢復(fù)正常后再進(jìn)行下一項(xiàng)內(nèi)容的觀察。
5．注射尼可剎米后的膈神經(jīng)放電 由兔耳緣靜脈注入稀釋的尼可剎米 lml（內(nèi)含50mg)，觀察膈神經(jīng)放電和呼吸運(yùn)動(dòng)的變化。待呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電曲線恢復(fù)正常后再進(jìn)行下一項(xiàng)內(nèi)容的觀察。
6．肺牽張反射時(shí)的膈神經(jīng)放電
（1)肺擴(kuò)張反射時(shí)的膈神經(jīng)放電 觀察一段正常呼吸運(yùn)動(dòng)后，在一次呼吸的吸氣末，將氣管插管的另一側(cè)管（呼吸通氣的側(cè)管)連一30ml注射器（內(nèi)裝有20ml空氣),同時(shí)將注射器內(nèi)事先裝好的20ml空氣迅速注入肺內(nèi)，使肺維持在擴(kuò)張狀態(tài)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電的變化。出現(xiàn)明顯效應(yīng)后立即放開堵塞口。
（2)肺縮小反射時(shí)的膈神經(jīng)放電 當(dāng)呼吸運(yùn)動(dòng)恢復(fù)后，于一次呼吸的呼氣末，同上用注射器抽取肺內(nèi)氣體約20ml，使肺維持在萎縮狀態(tài)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電的變化。出現(xiàn)明顯效應(yīng)后立即放開堵塞口。
（3)切斷迷走神經(jīng)前后的膈神經(jīng)放電 先切斷一側(cè)迷走神經(jīng)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電的變化。再切斷另一側(cè)迷走神經(jīng)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電的變化。然后用中等強(qiáng)度電流刺激一側(cè)迷走神經(jīng)中樞端，再觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和膈神經(jīng)放電的變化。在切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)后，重復(fù)上述肺內(nèi)注氣和從肺內(nèi)抽氣的試驗(yàn)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)及膈神經(jīng)放電的改變。
【注意事項(xiàng)】
1．分離膈神經(jīng)動(dòng)作要輕柔，分離要干凈，不要讓凝血塊或組織塊粘著在神經(jīng)上。
2．如氣溫暖和，可不作皮兜。改用溫?zé)嵋后w石蠟條覆蓋在神經(jīng)上。
3．引導(dǎo)電極盡量放在膈神經(jīng)遠(yuǎn)端，以便神經(jīng)有損傷時(shí)可將電極移向近端。注意動(dòng)物和儀器的接地良好，以避免電磁干擾對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
4．每項(xiàng)試驗(yàn)做完，待膈神經(jīng)放電和呼吸運(yùn)動(dòng)恢復(fù)后，方可繼續(xù)下一項(xiàng)試驗(yàn)，以便前后對(duì)照。
5．膈神經(jīng)放電的觀察系其群集放電的頻率、振幅。呼吸運(yùn)動(dòng)的觀察是指它的頻率和深度。
6．用注射器自肺內(nèi)抽氣時(shí)，切毋過(guò)多，以免引起動(dòng)物死亡。
【思考題】
1．增高二氧化碳濃度、增加無(wú)效腔、注射尼可剎米、切斷迷走神經(jīng)干對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)的頻率、深度和膈神經(jīng)放電頻率、振幅各有何影響？為什么？
2. 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果能否說(shuō)明膈神經(jīng)放電與呼吸運(yùn)動(dòng)的關(guān)系？為什么？
3．膈神經(jīng)與迷走神經(jīng)在肺牽張反射中各起什么作用？試述黑-伯反射的反射弧及其生理意義。
4．試描述膈神經(jīng)放電的形式。與減壓神經(jīng)放電形式相比較，有何不同？
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)11 家兔呼吸運(yùn)動(dòng)的影響因素
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)測(cè)定呼吸運(yùn)動(dòng)及胸膜腔內(nèi)壓的實(shí)驗(yàn)方法。
2．觀察神經(jīng)和體液因素對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)及胸膜腔內(nèi)壓的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
正常節(jié)律性呼吸運(yùn)動(dòng)是呼吸中樞節(jié)律性活動(dòng)的反映，是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)參與下，通過(guò)多種傳入沖動(dòng)的作用，反射性調(diào)節(jié)呼吸的頻率和深度來(lái)完成的。其中較為重要的調(diào)節(jié)活動(dòng)有呼吸中樞的直接調(diào)節(jié)和肺牽張反射、化學(xué)感受器等的反射性調(diào)節(jié)。因此體內(nèi)外各種刺激可以作用于中樞或通過(guò)不同的感受器反射性地影響呼吸運(yùn)動(dòng)。
平靜呼吸時(shí)，胸膜腔內(nèi)壓力雖然隨著呼氣和吸氣而升降、隨著呼吸深度的變化而變化，但其數(shù)值始終低于大氣壓力而為負(fù)值，故胸膜腔內(nèi)壓也稱為胸內(nèi)負(fù)壓。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，兔手術(shù)臺(tái)，氣管插管，注射器（20ml，5ml)，50cm長(zhǎng)橡皮管一條，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，張力換能器，壓力換能器，紗布，絲線，刺激電極，胸內(nèi)插管或粗穿刺針頭，碳酸鈉鈣瓶，20﹪氨基甲酸乙酯溶液或1﹪戊巴比妥鈉，3﹪乳酸溶液，二氧化碳球囊，生理鹽水。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．手術(shù)
（1)麻醉和固定 用 20﹪氨基甲酸乙酯，按 5ml/kg體重（1g／kg體重)或用1﹪戊巴比妥鈉，按3.0ml/kg～3.5ml/kg的劑量從兔耳緣靜脈緩慢注入，待動(dòng)物麻醉后，取仰臥位將兔固定于兔手術(shù)臺(tái)上。
（2)氣管插管 剪去頸部、劍突和右側(cè)胸部的毛。沿頸部正中切開皮膚，用止血鉗鈍性分離氣管，在甲狀軟骨以下剪開氣管，插入Y形氣管插管，用棉線將氣管插管結(jié)扎固定。氣管插管的兩個(gè)側(cè)管各連接一3cm長(zhǎng)的橡皮管。（參見綜合性實(shí)驗(yàn)8)
（3)分離迷走神經(jīng) 在頸部分離出兩側(cè)迷走神經(jīng)，在神經(jīng)下穿線備用。手術(shù)完畢后用熱生理鹽水紗布覆蓋手術(shù)傷口部位。（參見綜合性實(shí)驗(yàn)8)
（4)游離劍突軟骨 切開胸骨下端劍突部位的皮膚，并沿腹白線切開約2cm左右，打開腹腔。用紗布輕輕將內(nèi)臟沿膈肌向下壓；暴露出劍突軟骨和劍突骨柄，辨認(rèn)劍突內(nèi)側(cè)面附著的兩塊膈小肌，仔細(xì)分離劍突與膈小肌之間的組織并剪斷劍突骨柄（注意壓迫止血)，使劍突完全游離。此時(shí)可觀察到劍突軟骨完全跟隨膈肌收縮而上下自由移動(dòng)；此時(shí)用彎針鉤住劍突軟骨，使游離的膈小肌經(jīng)劍突軟骨和張力換能器相連接。
（5)插胸內(nèi)套管 將胸內(nèi)套管尾端的塑料套管連至壓力換能器（套管內(nèi)不充灌生理鹽水)。在兔右胸腋前線第4～5肋骨之間，沿肋骨上緣作一長(zhǎng)2cm的皮膚切口，用止血鉗把插入點(diǎn)處的表層肌肉稍稍分離。將胸內(nèi)插管的箭頭形尖端從肋間插入胸膜腔后（此時(shí)可記錄到曲線向零線下移位并隨呼吸運(yùn)動(dòng)升高和降低，說(shuō)明已插入胸膜腔內(nèi))，迅速旋轉(zhuǎn)90º并向外牽引，使箭頭形尖端的后緣緊貼胸廓內(nèi)壁，將插管的長(zhǎng)方形固定片同肋骨方向垂直，旋緊固定螺絲，胸膜腔將保持密封而不致漏氣。
也可用粗的穿刺針頭（如腰椎穿刺針)代替胸內(nèi)套管，則操作更為方便，無(wú)需切開皮膚及分離表層肌肉。將穿刺針頭尾端的塑料套管連至壓力換能器（套管內(nèi)不充灌生理鹽水)，再將穿刺針頭沿肋骨上緣順肋骨方向斜插入胸膜腔，看到上述變化后，用膠布將針尾固定在胸部皮膚上，以防針頭移位或滑出。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置
（1)張力換能器連至生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第1通道上，記錄呼吸運(yùn)動(dòng)曲線。
（2)壓力換能器連至生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第2通道上，記錄胸膜腔內(nèi)壓曲線。
（3)打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“輸入信號(hào)”，按計(jì)算機(jī)提示逐步進(jìn)入呼吸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。
【觀察項(xiàng)目】
1．平靜呼吸 記錄正常呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線，作為對(duì)照，觀察曲線與呼吸運(yùn)動(dòng)的關(guān)系，比較吸氣時(shí)和呼氣時(shí)的胸膜腔內(nèi)壓，讀出胸膜腔內(nèi)壓數(shù)值。
2．用力呼吸 在吸氣末和呼氣末，分別夾閉氣管插管兩側(cè)管，此時(shí)動(dòng)物雖用力呼吸，但不能呼出肺內(nèi)氣體或吸入外界氣體，處于憋氣的用力呼吸狀態(tài)。觀察和記錄此時(shí)對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的最大幅度，尤其觀察用力呼氣時(shí)胸膜腔內(nèi)壓是否高于大氣壓。
3．增加吸入氣中二氧化碳濃度 將裝有二氧化碳的球囊導(dǎo)氣管口對(duì)準(zhǔn)氣管插管逐漸松開螺旋夾，使二氧化碳?xì)饬骶徛仉S吸入氣進(jìn)入氣管，觀察高濃度二氧化碳對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的影響。呼吸運(yùn)動(dòng)發(fā)生明顯變化后，夾閉二氧化碳球囊，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線恢復(fù)的過(guò)程．
4．低氧 將氣管插管的側(cè)管通過(guò)碳酸鈉鈣瓶與盛有一定容量空氣的氣囊相連。這時(shí)家兔呼吸時(shí)，吸入氣囊空氣中的氧，但它呼出的二氧化碳被碳酸鈉鈣吸收。因此呼吸一段時(shí)間，氣囊內(nèi)的氧越來(lái)越少，但二氧化碳含量并沒(méi)有增多。觀察動(dòng)物低氧時(shí)呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的變化情況。
5．增大無(wú)效腔 將50cm長(zhǎng)的橡皮管用小玻璃管連接在側(cè)管上，家兔通過(guò)此橡皮管進(jìn)行呼吸。觀察經(jīng)一段時(shí)間后的呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線變化。呼吸發(fā)生明顯變化后即去掉橡皮管，使其恢復(fù)正常。
6．血中酸性物質(zhì)增多 用5ml注射器，由耳緣靜脈較快地注入3﹪乳酸2ml，觀察此時(shí)呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的變化。
7．切斷迷走神經(jīng) 描記一段對(duì)照呼吸曲線后，先切斷一側(cè)迷走神經(jīng)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線有何變化。再切斷另一側(cè)迷走神經(jīng)，觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的變化。然后用中等強(qiáng)度電流刺激一側(cè)迷走神經(jīng)中樞端，再觀察呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的變化。
8．氣胸 剪開前胸皮膚肌肉，切斷肋骨，打開右側(cè)胸腔，使胸膜腔與大氣相通，引起氣胸。觀察肺組織萎縮、胸膜腔內(nèi)壓消失、呼吸運(yùn)動(dòng)曲線等的變化情況。
【注意事項(xiàng)】
1．氣管插管時(shí)，應(yīng)注意止血，并將氣管分泌物清理干凈。氣管插管的側(cè)管上的夾子在呼吸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不能更動(dòng)，以便比較實(shí)驗(yàn)前、后呼吸運(yùn)動(dòng)和胸膜腔內(nèi)壓曲線的幅度變化。
2．每項(xiàng)觀察項(xiàng)目前均應(yīng)有正常描記曲線作為對(duì)照。每項(xiàng)觀察時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，出現(xiàn)效應(yīng)后應(yīng)立即去掉施加因素，待呼吸運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常后再進(jìn)行下一項(xiàng)觀察。
3．經(jīng)耳緣靜脈注射乳酸時(shí)，注意不要刺穿靜脈，以免乳酸外漏，引起動(dòng)物躁動(dòng)。電極刺激迷走神經(jīng)中樞端之前，一定要調(diào)整好刺激強(qiáng)度，以免因刺激強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)而造成動(dòng)物全身肌肉緊張，發(fā)生屏氣，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4．插胸內(nèi)套管時(shí)，切口不宜過(guò)大，動(dòng)作要迅速，以免過(guò)多空氣漏入胸膜腔。如用穿刺針，不要插得過(guò)猛過(guò)深，以免刺破肺組織和血管，形成氣胸和出血過(guò)多。如果穿刺針刺入較深而未見壓力變化，應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)一下針頭或變換一下角度或拔出，看針頭是否被堵塞。此法雖簡(jiǎn)便易行，但針頭易被血凝塊或組織塊所堵塞，應(yīng)加以注意。
【思考題】
1. 平靜呼吸時(shí)，如何確定呼吸運(yùn)動(dòng)曲線與吸氣和呼氣運(yùn)動(dòng)的對(duì)應(yīng)關(guān)系？ 比較吸氣、呼氣、憋氣時(shí)的胸膜腔內(nèi)壓。
2．二氧化碳增多、低氧和乳酸增多對(duì)呼吸運(yùn)動(dòng)有何影響？其作用途徑有何不同？
3．在平靜呼吸時(shí)，胸膜腔內(nèi)壓為何始終低于大氣壓？ 在什么情況下胸膜腔內(nèi)壓可高于大氣壓？
4.切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)前后，呼吸運(yùn)動(dòng)有何變化？迷走神經(jīng)在節(jié)律性呼吸運(yùn)動(dòng)中起什么作用？
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)12 消化道平滑肌生理特性
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)家兔離體小腸標(biāo)本制作方法。
2．觀察哺乳動(dòng)物胃腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的一般特性。
3．觀察某些因素對(duì)離體小腸平滑肌活動(dòng)的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
在整個(gè)消化道中，除口、咽、食管上端和肛門外括約肌是骨骼肌外，其余部分都是由平滑肌組成的。消化道平滑肌的特性與骨骼肌不同，其興奮性較骨骼肌為低，具有自動(dòng)節(jié)律性、較大的伸展性，對(duì)牽張、溫度和化學(xué)刺激比較敏感。胃腸平滑肌的收縮反應(yīng)主要由副交感神經(jīng)控制。肌細(xì)胞膜上富含M膽堿能受體，M受體激動(dòng)劑和拮抗劑均可明顯影響其收縮反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)觀察離體小腸平滑肌在模擬內(nèi)環(huán)境（離子成分、晶體滲透壓、酸堿度、溫度、氧分壓等方面類似于內(nèi)環(huán)境)中的活動(dòng)。同時(shí)研究某些神經(jīng)、體液、化學(xué)物質(zhì)以及溫度改變消化道平滑肌自動(dòng)節(jié)律性、伸展性等生理特性的影響。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，恒溫平滑肌槽或麥?zhǔn)显〔�，氧氣瓶，螺旋夾，張力換能器（量程為 25g以下)，燒杯，溫度計(jì)，乳膠管，樂(lè)氏液，1:10000腎上腺素，1:10000乙酰膽堿，1mol/L氫氧化鈉溶液，1:10000阿托品。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．麥?zhǔn)显〔刍蚝銣仄交〔鄣臏?zhǔn)備
（1)麥?zhǔn)显〔?nbsp; 將麥?zhǔn)显〔壑糜谒⊙b置內(nèi)，水浴裝置中水的溫度恒定在38℃～39℃之間，在麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)盛38℃～39℃樂(lè)氏液，溫度計(jì)懸掛在浴槽內(nèi)，用以監(jiān)測(cè)溫度的變化。氧氣瓶經(jīng)乳膠管緩慢向浴槽底部通氧氣，調(diào)節(jié)乳膠管上的螺旋夾，控制通氧氣速度，使氧氣氣泡一個(gè)接一個(gè)地通過(guò)中心管，為樂(lè)氏液供氧（圖2-17)。
|
槽的中心管加入樂(lè)氏液，外部容器中加裝
溫水，開啟電源加熱，浴槽溫度將自動(dòng)穩(wěn)
定在38℃左右。將浴槽通氣管與氧氣瓶相
連接，調(diào)節(jié)橡皮管上的螺旋夾，使氣泡一
個(gè)接一個(gè)地通過(guò)中心管，為樂(lè)氏液供氧。
2．離體小腸標(biāo)本制作 用木錘猛擊兔
頭枕部，使其昏迷后，迅速剖開腹腔，以
胃幽門與十二指腸交界處為起點(diǎn)，先將腸
系膜沿腸緣剪去，再剪取2Ocm～3Ocm腸管。
腸段取出后，置于38℃左右樂(lè)氏液內(nèi)輕輕
漂洗，在腸管外壁用手輕輕擠壓以除去腸
管內(nèi)容物。當(dāng)腸腔內(nèi)容物洗凈后，用38℃
左右的樂(lè)氏液浸浴，當(dāng)腸管出現(xiàn)明顯活動(dòng)時(shí)，
將其剪成約3cm長(zhǎng)的腸段。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出一
段長(zhǎng)約3cm～4cm的腸段，用線結(jié)扎其兩端， 圖2-17 離體腸段灌流裝置
迅速將小腸一端的結(jié)扎線固定于通氣管的掛
鉤上，另一端固定于張力換能器上。適當(dāng)調(diào)節(jié)換能器的高度，使腸段勿牽拉過(guò)緊或過(guò)松。調(diào)節(jié)通氣橡皮膠管上的螺旋夾，使氣泡逐個(gè)地逸出至浴管內(nèi)，以供給標(biāo)本足夠的氧氣。
3. 連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置 張力換能器接到生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)第1通道上，記錄離體小腸平滑肌的收縮曲線。
4．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，按計(jì)算機(jī)提示逐步進(jìn)入消化道平滑肌的生理特性的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。參數(shù)設(shè)置見表2-9（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況調(diào)整各參數(shù))。
| 參數(shù) | MSP600 | Medlab系統(tǒng) | BL-410系統(tǒng) | |
| 采 樣 參 數(shù) | 顯示方式 掃描速度 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù)(增益) Y軸壓縮比 濾波 | 同步觸發(fā)示波 50ms 20:1 通道1 DC 張力 100 30Hz | 記錄儀 50ms 20:1 通道2 DC 張力 50～100 4:1 | 2.5s/div 通道1 DC 張力 100 30Hz |
表2-9 儀器參數(shù)設(shè)置表
【觀察項(xiàng)目】
1．自動(dòng)節(jié)律性收縮曲線 描記一段離體小腸平滑肌的自動(dòng)節(jié)律性收縮曲線。注意基線的水平，收縮曲線的基線升高，表示小腸平滑肌緊張性升高；相反，收縮曲線的基線下移，表示緊張性降低。同時(shí)應(yīng)觀察收縮曲線的節(jié)律、波形、頻率和幅度。
2．溫度的作用 將浴槽中的樂(lè)氏液更換成25℃樂(lè)氏液，觀察收縮曲線的節(jié)律、波形、頻率和幅度。再更換成42℃樂(lè)氏液，觀察小腸平滑肌收縮曲線的變化。最后再更換成38℃樂(lè)氏液，待小腸平滑肌的收縮曲線恢復(fù)正常后，再進(jìn)行以下各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)（均在38℃條件下進(jìn)行)。
3. 乙酰膽堿 用滴管向浴槽內(nèi)滴1:10000乙酰膽堿溶液2滴，觀察小腸平滑肌活動(dòng)的變化。待作用明顯后，立即從浴槽排水管放出含有乙酰膽堿的樂(lè)氏液，加入預(yù)先準(zhǔn)備好的38℃樂(lè)氏液，如此反復(fù)沖洗3次，以洗滌或稀釋殘留的乙酰膽堿，使達(dá)到無(wú)效濃度。待小腸平滑肌的收縮曲線恢復(fù)至對(duì)照水平時(shí)，再進(jìn)行下一項(xiàng)試驗(yàn)（以下各項(xiàng)均以同樣方法進(jìn)行洗滌)。
4．阿托品 用滴管向浴槽內(nèi)滴入1:10000阿托品2～4滴，觀察小腸平滑肌活動(dòng)的變化。待作用明顯后，再加入1：10000乙酰膽堿溶液2滴，觀察小腸平滑肌的收縮曲線有無(wú)變化。
5．腎上腺素 在浴槽中加入1:10000腎上腺素溶液2滴，觀察觀察小腸平滑肌活動(dòng)的變化。
6．鹽酸 在浴槽中加1mol/L鹽酸溶液2滴。觀察小腸平滑肌的反應(yīng)。待效果明顯后立即更換新的樂(lè)氏液。
7．氫氧化鈉的作用 在浴槽中加1mol/L 氫氧化鈉溶液 2滴，觀察小腸平滑肌的反應(yīng)。待效果明顯后立即更換新的樂(lè)氏液。
【注意事項(xiàng)】
1. 在加藥之前應(yīng)先準(zhǔn)備好38℃樂(lè)氏液，以備實(shí)驗(yàn)中更換用液。
2．每次實(shí)驗(yàn)效果明顯后，應(yīng)立即更換浴槽內(nèi)的樂(lè)氏液，并沖洗2～3次，以免平滑肌出現(xiàn)不可逆反應(yīng)。
3．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)力求保持樂(lè)氏液的溫度穩(wěn)定、液面的高度固定、通氧速度恒定。實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)平滑肌的反應(yīng)曲線改變各藥液的加入量，實(shí)驗(yàn)效果明顯后，更換樂(lè)氏液要快，以免平滑肌出現(xiàn)不可逆反應(yīng)。
【思考題】
1．胃腸平滑肌有哪些生理特性？
2．阿托品、乙酰膽堿、腎上腺素對(duì)小腸平滑肌的收縮曲線有何影響？根據(jù)哺乳類動(dòng)物小腸平滑肌的神經(jīng)支配及神經(jīng)遞質(zhì)的知識(shí)，討論這些藥品引起小腸平滑肌收縮曲線改變的機(jī)制。
3．溫度、酸堿度改變對(duì)小腸平滑肌收縮曲線有何影響？請(qǐng)討論小腸內(nèi)理化環(huán)境與小腸平滑肌生理特性間的關(guān)系。
4. 加入阿托品后再加入乙酰膽堿對(duì)小腸平滑肌的收縮曲線各有何影響？ 為什么？ 如將加藥順序顛倒，小腸平滑肌的收縮曲線將如何改變？ 為什么？
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)13 大鼠胃運(yùn)動(dòng)的記錄方法
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)大鼠胃運(yùn)動(dòng)的記錄方法。
2．觀察胃的自主運(yùn)動(dòng)曲線，研究神經(jīng)、體液因素對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響。
【實(shí)驗(yàn)原理】
胃的運(yùn)動(dòng)受神經(jīng)、體液因素的調(diào)節(jié)。各級(jí)腦中樞對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)是通過(guò)交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)傳出的。在神經(jīng)調(diào)節(jié)中，副交感神經(jīng)通過(guò)釋放乙酰膽堿使其運(yùn)動(dòng)加強(qiáng)，交感神經(jīng)通過(guò)釋放去甲腎上腺素使其運(yùn)動(dòng)減弱。體液因素乙酰膽堿、去甲腎上腺素對(duì)胃的運(yùn)動(dòng)也有影響。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
大鼠。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，鼠固定板，保護(hù)電極， 壓力換能器，注射器（20ml，1ml)，高彈乳膠水囊，生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，20﹪氨基甲酸乙酯，1:10000乙酰膽堿，1:10000腎上腺素，阿托品，利血平注射液，生理鹽水。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．麻醉 將大鼠用20﹪氨基甲酸乙酯(1g/kg)腹腔注射麻醉, 待動(dòng)物麻醉后, 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2．分離膈下迷走神經(jīng) 在靠近賁門部的食管周圍分離迷走神經(jīng)的腹側(cè)支和背側(cè)支。
3．將高彈乳膠水囊(容積約 0.5ml) 置于腺胃末端, 相當(dāng)于胃竇部, 水囊一端連一聚乙烯管, 從腹壁引出與壓力換能器聯(lián)接, 后者與生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)連接。
4．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，按計(jì)算機(jī)提示逐步進(jìn)入胃運(yùn)動(dòng)觀察的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。
5．記錄胃運(yùn)動(dòng) 待胃運(yùn)動(dòng)曲線穩(wěn)定20min～30min后，胃內(nèi)基礎(chǔ)壓力維持在0.98kPa左右，開始記錄。
【觀察項(xiàng)目】
1．記錄正常胃運(yùn)動(dòng)曲線 觀察正常情況下的胃運(yùn)動(dòng)曲線。
2．刺激迷走神經(jīng) 電刺激膈下迷走神經(jīng)，觀察、記錄胃運(yùn)動(dòng)曲線。再切斷膈下迷走神經(jīng), 觀察、記錄胃運(yùn)動(dòng)曲線。
3．阻斷交感神經(jīng)遞質(zhì) 實(shí)驗(yàn)組大鼠分別在實(shí)驗(yàn)前48 h (1.5 mg/kg)和24 h (5 mg/kg)兩次腹腔注射利血平, 耗竭大鼠體內(nèi)的交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素。觀察胃運(yùn)動(dòng)的變化。
4．乙酰膽堿 在胃上滴加1:10000乙酰膽堿5～10滴，觀察乙酰膽堿對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響。在此基礎(chǔ)上，滴加阿托品5～10滴，觀察胃運(yùn)動(dòng)的變化。
5．腎上腺素 在胃上滴加1:10000腎上腺素5～10滴，觀察腎上腺素對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響。
【注意事項(xiàng)】
1．動(dòng)物麻醉宜淺，可用低于5ml/kg體重的劑量進(jìn)行麻醉。
2．避免牽拉腹內(nèi)臟器，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3．注意辨別膈下迷走神經(jīng)，并進(jìn)行鈍性分離。
4．每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)后，待胃運(yùn)動(dòng)曲線恢復(fù)正常后，再進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。
【思考題】
1．刺激迷走神經(jīng)對(duì)胃運(yùn)動(dòng)曲線有何影響？簡(jiǎn)述其作用機(jī)制。
2．乙酰膽堿、阿托品和腎上腺素對(duì)胃運(yùn)動(dòng)曲線各有何影響？為什么？
3. 利血平通過(guò)什么原理耗竭神經(jīng)遞質(zhì)？
（肖愛嬌)
實(shí)驗(yàn)14 小白鼠能量代謝的測(cè)定
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
了解測(cè)定能量代謝的方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
機(jī)體內(nèi)的能量代謝與耗氧量有特定的關(guān)系，可能通過(guò)測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)的耗氧量，間接地計(jì)算出能量代謝率。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
小白鼠。
【實(shí)驗(yàn)用品】
gydjdsj.org.cn廣口瓶，橡皮塞，玻璃管，橡皮管，彈簧夾，水檢壓計(jì)，10ml注射器，液體石蠟，計(jì)時(shí)器，碳酸鈉鈣（鈉石灰)。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．按圖2-18連接實(shí)驗(yàn)裝置：將廣口瓶塞用打孔器打兩個(gè)孔，插入玻璃管，在玻璃管上連接橡皮管，再用橡皮管分別連注射器和水檢壓計(jì)。用石蠟密封可能漏氣的接口等處，使該裝置連接嚴(yán)密而不漏氣（在注射器內(nèi)也應(yīng)涂抹少量液體石蠟,以防止漏氣)。注射器內(nèi)裝10ml空氣。
2．將小白鼠放入廣口瓶?jī)?nèi)，蓋緊廣口瓶瓶塞，打開A、B兩夾。
【觀察項(xiàng)目】
1. 測(cè)定4分鐘的耗氧量：待小白鼠安靜后,夾緊A、B兩夾，記下時(shí)間。觀察4分鐘內(nèi)水檢壓計(jì)所示壓力的變化。由于小白鼠代謝消耗O2，而所產(chǎn)生的CO2又被鈉石灰吸收，所以廣口瓶?jī)?nèi)氣體減少，因此可見廣口瓶一側(cè)的水柱升高。在4分鐘末打開B夾，立刻將注射器內(nèi)空氣注入，使水檢壓計(jì)兩側(cè)液面相平為止。所注入空氣量即是4分鐘內(nèi)小白鼠的耗氧量。重復(fù)三次取平均值。
2．計(jì)算：假定小白鼠所食為混合食物，呼吸商為0.82，每消耗1L氧所產(chǎn)生的熱量為2.02×104J(4.825kcal)，那么把24小時(shí)總耗氧量乘以2.02×104J(4.825kcal)即得出24小時(shí)的產(chǎn)熱量。
【注意事項(xiàng)】
1．鈉石灰要新鮮干燥。
2．在實(shí)驗(yàn)開始前要預(yù)先檢查實(shí)驗(yàn)裝置是否漏氣。
3．動(dòng)物的能量代謝上、下午不同，與實(shí)驗(yàn)室溫度也有關(guān)系，應(yīng)予以注意。
【思考題】
1．間接測(cè)熱法的原理是什么？
2．瓶中放鈉石灰的作用是什么？為什么一定要用新鮮干燥的鈉石灰？
(伍慶華)
實(shí)驗(yàn)15 影響家兔動(dòng)脈血壓、泌尿機(jī)能因素的觀察
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
學(xué)習(xí)哺乳動(dòng)物動(dòng)脈血壓的直接測(cè)量方法，輸尿管插管或膀胱插管技術(shù)，觀察神經(jīng)和體液因素對(duì)動(dòng)脈血壓、尿生成的影響，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和理解影響動(dòng)脈血壓、尿生成因素的作用機(jī)制。
【實(shí)驗(yàn)原理】
動(dòng)脈血壓是心血管功能活動(dòng)的綜合指標(biāo)。正常心、血管的活動(dòng)在神經(jīng)、體液因素的調(diào)節(jié)控制下，保持相對(duì)穩(wěn)定，動(dòng)脈血壓相對(duì)恒定。
尿生成過(guò)程包括腎小球?yàn)V過(guò)、腎小管和集合管重吸收及分泌、排泄過(guò)程。腎小球?yàn)V過(guò)作用受濾過(guò)膜通透性、腎小球有效濾過(guò)壓和腎小球血漿流量等因素的影響。腎小管和集合管重吸收受小管液的溶質(zhì)濃度和血液中血管升壓素及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等因素的影響。任何影響這些過(guò)程的因素都會(huì)影響尿量的變化。
因此通過(guò)改變神經(jīng)、體液因素或施加藥物，可同時(shí)觀察動(dòng)脈血壓和尿量的改變，以間接反映諸因素對(duì)心血管功能活動(dòng)和腎臟功能的調(diào)節(jié)及影響。如靜脈注射去甲腎上腺素，主要激活α受體，因而使外周阻力增加，動(dòng)脈血壓增加。同時(shí)，使腎血管收縮，腎血流量減少，腎小球?yàn)V過(guò)減少，也可作用于近端腎小管和髓袢細(xì)胞膜上的腎上腺素能受體，增加近端小管和髓袢上皮細(xì)胞對(duì)Na+、Cl-和水的重吸收，使尿量減少。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，兔手術(shù)臺(tái)，生物信號(hào)采集系統(tǒng)，保護(hù)電極，鐵支架，試管夾，氣管插管，動(dòng)脈夾，三通開關(guān)，動(dòng)脈導(dǎo)管，放血插管，注射器（lml，5ml，20ml)及針頭，有色絲線，紗布，棉花，膀胱插管，輸尿管導(dǎo)管（或細(xì)塑料管)， 1:10000去甲腎上腺素溶液，生理鹽水，20﹪氨基甲酸乙酯，肝素生理鹽水，0.1﹪肝素溶液，50﹪葡萄糖溶液，垂體后葉素，呋塞米，尿糖試紙。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．手術(shù)
（1)動(dòng)物的麻醉與固定 用20﹪氨基甲酸乙酯1g/kg體重（5ml/kg)由兔耳緣靜脈注射。動(dòng)物麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。
|
⑶分離頸部神經(jīng)和血管 在氣管兩側(cè)辨別并分離頸總動(dòng)脈、迷走神經(jīng)、交感神經(jīng)和減壓神經(jīng)(圖2-19)。三條神經(jīng)中，迷走神經(jīng)最粗，交感神經(jīng)次之，減壓神經(jīng)最細(xì)，常與交感神經(jīng)緊貼在一起。分別在各神經(jīng)下方穿以不同顏色的絲線備用。分離時(shí)特別注意不要過(guò)度牽拉，并隨時(shí)用生理鹽水濕潤(rùn)。頸總動(dòng)脈下方穿兩條線備用。
（4)插動(dòng)脈插管 在氣管旁分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，靜脈注射肝素（1OOOu/kg體重)以抗血凝。在左側(cè)頸總動(dòng)脈的近心端夾一動(dòng)脈夾，并在動(dòng)脈夾遠(yuǎn)心端距動(dòng)脈夾約3cm處結(jié)扎。用小剪刀在結(jié)扎線的近側(cè)剪一小口，向心臟方向插入充滿肝素生理鹽水的動(dòng)脈插管（已連接血壓換能器)。用備用的線結(jié)扎固定。
（5)輸尿管插管法 腹部剪毛，自恥骨聯(lián)合上緣沿正中線向上作一長(zhǎng)約5cm的皮膚切口，再沿腹白線剪開腹壁和腹膜（勿損傷腹腔臟器)，找到膀胱，將膀胱向下翻出腹外。暴露膀胱三角，辨認(rèn)輸尿管，并向腎的方向仔細(xì)地分離兩側(cè)輸尿管2cm～3cm。用線將輸尿管近膀胱端結(jié)扎，然后在結(jié)扎上方的管壁處斜剪一小切口，把充滿生理鹽水的細(xì)塑料管向腎臟方向插入輸尿管內(nèi)，用線結(jié)扎、固定好。再以同樣方法插好另一側(cè)輸尿管。兩側(cè)的細(xì)塑料插管可用Y形管連起來(lái)，然后連到記滴器上記滴。此時(shí)，可看到尿液從細(xì)塑料管中慢慢逐滴流出。手術(shù)完畢后，將膀胱與臟器送回腹腔，用溫生理鹽水紗布覆蓋在腹部創(chuàng)口上，以保持腹腔內(nèi)溫度。
也可用膀胱插管法導(dǎo)尿：同上述輸尿管插管法，切開腹壁將膀胱輕移至腹壁上。先辨認(rèn)膀胱和輸尿管的解剖部位，用棉線結(jié)扎膀胱頸部，以阻斷它與尿道的通路，然后在膀胱頂部選擇血管較少處剪一縱行小切口，插入膀胱插管（可用一滴管代替)，插管口最好正對(duì)著輸尿管在膀胱的入口處，但不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。將切口邊緣用線固定在管壁上。膀胱插管的另一端用導(dǎo)管連接至記滴器記滴。此時(shí)，可看到尿液從插管中緩慢逐滴流出。手術(shù)完畢后，用溫?zé)岬纳睇}水紗布覆蓋在腹部的膀胱與臟器上，以保持溫度。
（6)股動(dòng)脈插管 在后肢腹股溝部切開皮膚3cm～5cm，用血管鉗分離皮下組織及筋膜，可看到股神經(jīng)、股靜脈和股動(dòng)脈，股動(dòng)脈的位置在中間偏后，恰被股神經(jīng)和股靜脈所遮蓋。小心分離出股動(dòng)脈約2cm～3cm，穿線備用。用兩個(gè)動(dòng)脈夾分別夾閉末梢端和近心端，在兩個(gè)動(dòng)脈夾之間剪一斜口，向近心端方向插入股動(dòng)脈插管，并結(jié)扎固定；插管所連導(dǎo)管的末端置于量杯中，為防止血液凝固，可在量杯中加入少許肝素。
2．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置
將壓力換能器固定在鐵支架上，換能器的位置大致與心臟在同一水平。將動(dòng)脈導(dǎo)管經(jīng)三通開關(guān)與壓力換能器正中的一個(gè)輸入接口相連，壓力換能器側(cè)管上的輸入接口與另一三通開關(guān)連接。壓力換能器的輸入信號(hào)插頭與生物信號(hào)采集系統(tǒng)的信號(hào)放大器輸入盒的某通道相連。用注射器通過(guò)三通開關(guān)向壓力換能器及動(dòng)脈導(dǎo)管內(nèi)注滿肝素生理鹽水，排盡氣泡，然后關(guān)閉三通開關(guān)備用。將刺激電極輸入端與生物信號(hào)采集系統(tǒng)或電刺激器的刺激輸出口相連，將刺激電極輸出端與保護(hù)電極相連。
打開計(jì)算機(jī)啟動(dòng)生物信號(hào)采集系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，按計(jì)算機(jī)提示逐步進(jìn)入影響尿生成的因素的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，在“增減通道”選擇“通道2”，進(jìn)入壓力實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。小心松開動(dòng)脈夾，即可記錄動(dòng)脈血壓曲線，尿量情況。
【觀察項(xiàng)目】
l．記錄動(dòng)脈血壓曲線（kPa)和基礎(chǔ)尿量（滴/分鐘) 記錄動(dòng)脈血壓曲線（kPa)同步記錄實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物的基礎(chǔ)尿量（滴/分鐘)作為正常對(duì)照數(shù)據(jù)。
2．注射生理鹽水 從耳緣靜脈迅速注入37℃生理鹽水20ml，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
3. 注射50﹪葡萄糖溶液 用尿糖試紙接取1滴尿液進(jìn)行尿糖測(cè)定（見附注)，然后從耳緣靜脈注射50﹪葡萄糖溶液5ml，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。在尿量明顯增多時(shí)，再用尿糖試紙接取1滴尿液進(jìn)行尿糖測(cè)定。
4. 注射垂體后葉素 從耳緣靜脈注射垂體后葉素2單位，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
5. 靜脈注射呋塞米 從耳緣靜脈注射呋塞米（5mg/kg體重)，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
6. 靜脈注射去甲腎上腺素 由耳緣靜脈注入1:10000去甲腎上腺素0.3ml，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
7．夾閉頸總動(dòng)脈 用動(dòng)脈夾夾閉右側(cè)頸總動(dòng)脈15s，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
8. 電刺激減壓神經(jīng) 用設(shè)置的串刺激刺激減壓神經(jīng)，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。在神經(jīng)中部雙結(jié)扎并中間剪斷，分別刺激其中樞端與外周端，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
9．電刺激迷走神經(jīng) 結(jié)扎并剪斷右側(cè)迷走神經(jīng)．電刺激其外周端，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
10．動(dòng)脈插管放血 分離一側(cè)股動(dòng)脈，插管放血，使動(dòng)脈血壓迅速下降至10.7 kPa以下，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。當(dāng)停止放血后，繼續(xù)記錄一段時(shí)間。
11. 補(bǔ)充循環(huán)血量 從耳緣靜脈注入37℃生理鹽水以補(bǔ)充循環(huán)血量，觀察記錄動(dòng)脈血壓、尿量的變化。
【注意事項(xiàng)】
1．麻醉藥注射量要準(zhǔn)，速度要慢，同時(shí)注意呼吸變化，以免過(guò)量引起動(dòng)物死亡。如實(shí)驗(yàn)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，動(dòng)物蘇醒掙扎，可適量補(bǔ)充麻醉藥。
2．在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要保持動(dòng)脈插管與動(dòng)脈方向一致，防止刺破血管或引起壓力傳遞障礙。
3．注意保護(hù)神經(jīng)不要過(guò)度牽拉，并經(jīng)常保持濕潤(rùn)。
4．為保證動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)時(shí)有充分的尿液排出，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)給家兔多喂青菜，或用橡皮導(dǎo)管向胃灌入清水40ml～50ml，以增加其基礎(chǔ)尿量。
5. 手術(shù)操作要輕柔，腹部切口不可過(guò)大，不要過(guò)度牽拉輸尿管，以免因輸尿管攣縮而不能導(dǎo)出尿液。剪腹膜時(shí)，注意勿傷及內(nèi)臟。
6．輸尿管插管時(shí)，應(yīng)仔細(xì)辨認(rèn)輸尿管，要將插管插入輸尿管管腔內(nèi)，注意不要插入管壁與周圍結(jié)締組織間，也不要扭曲輸尿管，否則可能會(huì)妨礙尿液排出。
7. 本實(shí)驗(yàn)需多次兔耳緣靜脈注射，故需注意保護(hù)耳緣靜脈，開始注射時(shí)應(yīng)盡量從耳尖部位開始，再逐步向耳根移行，以免造成后期注射困難，或選用小兒頭皮針刺入耳緣靜脈固定，以便于多次注射使用。
8. 每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前均應(yīng)有對(duì)照數(shù)據(jù)和記錄，原則上是前一項(xiàng)藥物作用基本消失，尿量和血壓基本恢復(fù)到正常水平后再進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。
9．盛接動(dòng)脈放血的容器應(yīng)加入一定量的肝素抗凝，并在放血過(guò)程中，輕輕搖動(dòng)容器以使肝素與血液均勻地混合。
【思考題】
1．夾閉一側(cè)頸總動(dòng)脈，血壓發(fā)生什么變化？機(jī)制如何？
2．刺激兔完整的降減壓神經(jīng)及其中樞端和外周端，血壓各有何變化？為什么？
3．為何預(yù)先切斷迷走神經(jīng)，再刺激其外周端？血壓有何變化？為什么？
4．尿的生成受哪些因素的影響或調(diào)節(jié)？其機(jī)制是什么？
5. 注射50﹪葡萄糖溶液前后為什么要作尿糖定性試驗(yàn)？ 尿糖和尿量之間有何關(guān)系？
6.分析上述各實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因。
【附注】 尿糖試驗(yàn)方法 用 “尿糖試紙”測(cè)定尿中葡萄糖。取一條試紙，用試紙的粉紅色測(cè)試區(qū)沾取一滴剛流出的新鮮尿液，觀察粉紅色測(cè)試區(qū)的顏色，若粉紅色測(cè)試區(qū)轉(zhuǎn)為暗紅色或黑色，則表示尿糖實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性（尿糖含量可經(jīng)比色卡測(cè)知)。若粉紅色測(cè)試區(qū)顏色不變，則為尿糖陰性（-)。
(伍慶華)
實(shí)驗(yàn)16 去小腦動(dòng)物的觀察
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp;
觀察毀壞小白鼠一側(cè)小腦后肌緊張和平衡功能障礙現(xiàn)象，了解小腦對(duì)軀體運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)機(jī)能。
【實(shí)驗(yàn)原理】
小腦是軀體運(yùn)動(dòng)的重要調(diào)節(jié)中樞之一，它與大腦皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)、腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、脊髓和前庭器官有廣泛的聯(lián)系。古小腦（絨球小結(jié)葉)調(diào)節(jié)身體的平衡；舊小腦參與調(diào)節(jié)肌緊張和隨意運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)，新小腦參與隨意運(yùn)動(dòng)的設(shè)計(jì)。小腦損傷后可發(fā)生軀體運(yùn)動(dòng)障礙，表現(xiàn)為身體平衡失調(diào)，肌張力增強(qiáng)或減弱以及共濟(jì)失調(diào)等癥狀。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
小白鼠。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，鼠手術(shù)臺(tái)，探針，干棉球，紗布，200ml燒杯，乙醚。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．術(shù)前觀察 手術(shù)前觀察正常小鼠的運(yùn)動(dòng)情況(姿勢(shì)、肌張力和運(yùn)動(dòng)的表現(xiàn))。
2．麻醉 將小白鼠罩于燒杯內(nèi)，然后放入一團(tuán)浸透乙醚的棉球，待其呼吸變?yōu)樯疃也辉儆须S意運(yùn)動(dòng)時(shí)，將其取出。
3．手術(shù) 將小白鼠俯臥于鼠臺(tái)上，用鑷子提起頭部皮膚，用剪刀在兩耳之間頭正中橫剪一小口，再沿正中線向前方剪開長(zhǎng)約1cm, 向后剪至枕部耳后緣水平，將頭部固定，用手術(shù)刀背剝離頸肌，暴露頂間骨，通過(guò)透明的顱骨可看到頂間骨下方的小腦，再?gòu)捻旈g骨一側(cè)的正中，用探針垂直刺入深約3mm～4mm，再將探針稍作攪動(dòng)，以破壞該側(cè)小腦。探針拔出后用棉球壓迫止血（圖2-20)。
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待小白鼠清醒后觀察其運(yùn)動(dòng)情況，觀察行走是否平衡，有無(wú)旋轉(zhuǎn)或翻滾，站立姿勢(shì)以及肢體肌緊張度的變化。
【注意事項(xiàng)】
1．麻醉不可過(guò)深，以防死亡，也不要完全密閉燒杯，避免窒息死亡。
2．搗毀小腦時(shí)不可刺入過(guò)深，以免傷及中腦、延髓或?qū)?cè)小腦，也不能過(guò)淺，小腦未被損傷，反而成為刺激作用。
3．手術(shù)時(shí)應(yīng)被免損傷硬腦膜竇，注意止血。
【思考題】
1．一側(cè)小腦損傷會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物軀體運(yùn)動(dòng)和站立姿勢(shì)發(fā)生何種變化？為什么？
2．小腦在調(diào)節(jié)軀體運(yùn)動(dòng)中有哪些功能？
3．從本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明小腦萎縮有何臨床表現(xiàn)？
(伍慶華)
實(shí)驗(yàn)17 兔大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的刺激效應(yīng)及去大腦僵直
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．通過(guò)電刺激兔大腦皮層不同部位，觀察大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的刺激效應(yīng)，了解皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)對(duì)軀體運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用。
2．觀察去大腦僵直現(xiàn)象，了解高位中樞對(duì)肌緊張的調(diào)節(jié)作用。
【實(shí)驗(yàn)原理】
1．大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)是調(diào)節(jié)軀體運(yùn)動(dòng)機(jī)能的高級(jí)中樞，在人和高等動(dòng)物它主要位于中央前回和運(yùn)動(dòng)前區(qū)。它通過(guò)錐體系及錐體外系下行通路，控制腦干和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的活動(dòng)，從而控制肌肉運(yùn)動(dòng)。這些皮層部位呈有秩序的排列，稱為皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)機(jī)能定位或運(yùn)動(dòng)的軀體定位結(jié)構(gòu)。在大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)有精細(xì)的功能定位，電刺激大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)不同部位，能引起特定的肌肉或肌群收縮。功能代表區(qū)的大小與運(yùn)動(dòng)的精細(xì)復(fù)雜程度有關(guān)，運(yùn)動(dòng)愈精細(xì)和（或)愈復(fù)雜的肌肉，其代表區(qū)的面積愈大。在較低等的哺乳動(dòng)物，如兔和大鼠，其大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)機(jī)能定位已初步形成，因此可以借以了解高等動(dòng)物的大腦皮層運(yùn)動(dòng)機(jī)能的生理特性。
2．中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要是腦干及其以上結(jié)構(gòu)對(duì)伸肌的緊張性具有易化和抑制兩種作用，通過(guò)這兩種作用調(diào)節(jié)著伸肌的緊張程度，以維持姿勢(shì)和協(xié)調(diào)機(jī)體的運(yùn)動(dòng)。腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)是這兩種作用發(fā)生功能聯(lián)系的一個(gè)重要整合機(jī)構(gòu)。如在動(dòng)物中腦上、下丘之間切斷動(dòng)物的腦干（該動(dòng)物稱為去大腦動(dòng)物)，則抑制肌緊張的作用減弱而易化肌緊張的作用相對(duì)加強(qiáng)，表現(xiàn)為動(dòng)物的四肢伸直，頭尾昂起，脊柱挺硬，即角弓反張的現(xiàn)象，這是一種伸肌緊張亢進(jìn)狀態(tài)，稱為去大腦僵直。進(jìn)一步可用實(shí)驗(yàn)的方法證明去大腦僵直形成的脊髓通路。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
家兔。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，顱骨鉆，小咬骨鉗，明膠海綿，紗布，生理鹽水，20﹪氨基甲酸乙酯，氣管插管，絲線，電刺激器，同心圓電極，骨蠟，液體石蠟。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．麻醉動(dòng)物 耳緣靜脈注射20﹪氨基甲酸乙酯4ml/kg體重，達(dá)到淺麻醉狀態(tài)。
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3．頭部手術(shù)
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【觀察項(xiàng)目】
1．將同心圓電極的連線與電刺激器相連。參考電極放于兔的背部，剪去此處的毛并用少許生理鹽水濕潤(rùn)以便接觸良好。用同心圓電極接觸到皮層表面，逐點(diǎn)刺激一側(cè)大腦皮層的不同部位。
2．刺激參數(shù)：波寬0.1ms～0.2ms，刺激頻率20Hz～50Hz，刺激強(qiáng)度10V～20V，每次刺激持續(xù)5s～10s，每次刺激后休息1min～2min。觀察刺激不同部位引起的肢體和頭面部運(yùn)動(dòng)的情況，并將觀察的結(jié)果標(biāo)記在皮層輪廓圖上(圖2-21)。
3．在另一側(cè)大腦皮層重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。
4．將兔擺放成側(cè)臥位，幾分鐘后可見兔的軀干和四肢逐漸變硬伸直，前肢較后肢更明顯，頭昂舉，尾上翹，呈角弓反張狀態(tài)，即為去大腦僵直現(xiàn)象（圖2-22)。
5．明顯的僵直現(xiàn)象出現(xiàn)后，在下丘稍后方再次切斷腦干，觀察肌緊張變化。
【注意事項(xiàng)】
1．動(dòng)物麻醉不宜過(guò)深，也不宜過(guò)淺，呈中等麻醉狀態(tài)，即表現(xiàn)為動(dòng)物瞳孔擴(kuò)大，夾趾反應(yīng)引起的屈肌反射減弱，肌張力中度松弛而不是顯著松弛，角膜反射明顯減弱而不是完全消失。術(shù)中動(dòng)物掙扎可給少許局部麻醉。
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3．刺激點(diǎn)自頭部前端向后部，自內(nèi)向外按順序刺激，每隔0.5mm為一點(diǎn)，每次刺激由弱漸強(qiáng)，以出現(xiàn)反應(yīng)為度，每次刺激持續(xù)5s～10s才能確定有無(wú)反應(yīng)， 因?yàn)榇碳ご竽X皮層引起骨骼肌收縮的潛伏期較長(zhǎng)。
4．顱骨擴(kuò)大創(chuàng)面出血較多時(shí)，可先行短暫夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，開顱術(shù)后即松開動(dòng)脈夾恢復(fù)血流。
5．刺激電極間距宜小，但勿短路。
6．咬骨接近骨中線和枕骨時(shí)尤需防止傷及矢狀竇而致大出血，應(yīng)暫時(shí)保留矢狀竇處的顱骨，細(xì)心將矢狀竇與頭骨內(nèi)壁剝離，然后再輕輕去除保留的顱骨，并在矢狀竇的前后兩端各穿一線結(jié)扎。
7．橫斷腦干幾分鐘后，僵直仍不明顯時(shí)，可試用牽拉四肢（肢體伸肌傳入)，扭動(dòng)頸部（頸肌傳入)，動(dòng)物仰臥（前庭傳入)等辦法，使僵直易于出現(xiàn)。
8．切斷部位要準(zhǔn)確，過(guò)低將傷及延髓，導(dǎo)致呼吸停止，過(guò)高則不出現(xiàn)去大腦僵直現(xiàn)象。如動(dòng)物橫斷腦干后5min～10min仍不出現(xiàn)僵直現(xiàn)象，呼吸尚平穩(wěn)，可在原切斷面再向后2mm處重新再切一刀。
【思考題】
1．為什么刺激大腦皮層引起的肢體運(yùn)動(dòng)往往有左右交叉現(xiàn)象？
2．根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)有何特征？
3．刺激大腦皮層引起骨骼肌收縮的神經(jīng)路徑是什么？
4．產(chǎn)生去大腦僵直的機(jī)制是什么？
5．什么叫α僵直和γ僵直？去大腦僵直應(yīng)屬于哪種僵直？為什么？
6．將動(dòng)物脊髓的背根切斷，會(huì)出現(xiàn)什么結(jié)果？
（伍慶華)
實(shí)驗(yàn)18 耳蝸微音器電位和聽神經(jīng)動(dòng)作電位
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．了解耳蝸微音器電位的記錄方法。
2．觀察微音器電位與聽神經(jīng)動(dòng)作電位的特點(diǎn)及關(guān)系。
3．理解微音器電位和微音器效應(yīng)的原理。
【實(shí)驗(yàn)原理】
耳蝸是聽覺系統(tǒng)的感音換能部位，當(dāng)受到刺激后，可由置于耳蝸及其附近的電極引導(dǎo)出一系列電位波動(dòng)，主要包括耳蝸微音器電位和聽神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位。微音器電位實(shí)際是耳蝸內(nèi)的毛細(xì)胞將聲波刺激的機(jī)械能轉(zhuǎn)換為聽神經(jīng)沖動(dòng)過(guò)程中所產(chǎn)生的感受器電位，其特點(diǎn)是其波形、頻率、位相等均與刺激的聲波一致，電位的幅度隨聲音刺激的強(qiáng)度而升高，無(wú)潛伏期，無(wú)不應(yīng)期，不易發(fā)生疲勞和適應(yīng)。聽神經(jīng)動(dòng)作電位是繼微音器電位后出現(xiàn)的一組雙向電位波動(dòng)，是眾多聽神經(jīng)的復(fù)合動(dòng)作電位，其幅度隨聲音刺激強(qiáng)度而增高。其電位大小能反應(yīng)被興奮的神經(jīng)纖維數(shù)目的多少。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
豚鼠。
【實(shí)驗(yàn)用品】
哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械，小骨鉆，引導(dǎo)電極（涂有絕緣層的針灸針或銀球電極)，參考電極與接地電極（用針灸針代替)，蛙板，生物信號(hào)采集系統(tǒng)，揚(yáng)聲器或耳塞，燒杯，紗布，注射器，膠泥，20﹪氨基甲酸乙酯。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．耳部手術(shù) 取體重約300g～400g健康的幼年豚鼠，用20﹪氨基甲酸乙酯按5ml/kg體重腹腔注射麻醉，將已麻醉的豚鼠側(cè)臥于蛙板上，剪去上面一側(cè)耳后部毛，沿耳廓根部的后部切開皮膚，分離皮下組織，刮凈肌肉，暴露顳骨乳突部，用小骨鉆在乳突上鉆一小孔，再仔細(xì)擴(kuò)大為直徑為3mm～4mm的骨孔，該孔內(nèi)部即為鼓室。
2．安放電極 將豚鼠頭部側(cè)握于左手，用右手把銀球電極前端稍稍彎曲，并將電極從骨孔插向深部，輕輕地安放在圓窗膜上（在骨孔前內(nèi)側(cè)壁有一直徑約0.2cm的小孔，其上封閉的膜即為圓窗膜)，使銀球與圓窗膜相接觸，并用膠泥固定，參考電極置于手術(shù)切口肌肉或皮膚上，接地電極插入動(dòng)物前肢（圖2-23)。
3．連接實(shí)驗(yàn)儀器裝置 將電極（引導(dǎo)、參考、接地電極)與MSP600生物信號(hào)采集系統(tǒng)的某一通道接口相連（紅色夾子夾引導(dǎo)電極，白色夾子夾參考電極，黑色夾子夾接地電極)，刺激輸出端與耳塞相連。
4．打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)生物信號(hào)采集系統(tǒng)，點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)?zāi)K”，按計(jì)算機(jī)提示逐步進(jìn)入記錄耳蝸微音器電位的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。選擇相應(yīng)的采樣參數(shù)和刺激參數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(表2-10)。
【觀察項(xiàng)目】
1．短聲刺激 將耳機(jī)對(duì)準(zhǔn)動(dòng)物外耳道，啟動(dòng)刺激器輸出，調(diào)節(jié)幅度，給予動(dòng)物適當(dāng)?shù)亩搪暣碳ぁＴ谄聊簧峡煽吹酱碳污E后的微音器電位，以及在它后面的聽神經(jīng)動(dòng)作電位。反轉(zhuǎn)刺激器輸出的極性或交換耳機(jī)兩端的接線改變聲音的相位，可看到微音器電位的相位倒轉(zhuǎn)180°，而聽神經(jīng)動(dòng)作電位的相位沒(méi)有變化。
2．語(yǔ)音刺激 直接對(duì)豚鼠外耳道說(shuō)話或唱歌，采用連續(xù)采樣方式采樣，在屏幕上可見到與所給聲音的頻率和振幅相應(yīng)的電位變化。
表2-10 儀 器 參 數(shù) 設(shè) 置 表
| 系統(tǒng) | 采樣參數(shù) | 刺激參數(shù) | |||
| MSP600 | 增益 時(shí)間常數(shù) 濾波 | 2000 0.01 3kHz | 模式 方式 波形 延時(shí) 波寬 強(qiáng)度 | 弱電壓刺激 單刺激 矩形波 100.00ms 1.00ms 3.000V | |
| MedLab | 顯示方式 采樣間隔 X軸壓縮比 通道 DC/AC 處理名稱 放大倍數(shù) Y軸壓縮比 | 示波器（疊加觸發(fā)) 20μs 50:1 通道1 通道4 AC 記錄刺激標(biāo)記 耳蝸電位 刺激標(biāo)記 10 000 5～50 4:1 64:1 | 刺激模式 主周期 波寬 幅度 間隔 脈沖數(shù) 延時(shí) 周期數(shù) | 主周期刺激 ２Ｓ 0.1ms 0.5V 50ms 1 1ms 連續(xù) | |
| BL-410 | 放大倍數(shù) 時(shí)間常數(shù) 濾波 掃描速度 | 2000 0.1s 1kHz 10 ms/div | 刺激方式 幅度 波寬 延時(shí) | 單刺激 3V 1ms 100ms | |
【注意事項(xiàng)】
1．挑選豚鼠時(shí)可擊掌測(cè)試其反應(yīng)，選取聽覺靈敏度較好的動(dòng)物
2．骨孔周圍組織必須刮凈，避免產(chǎn)生滲出液進(jìn)入鼓室而影響試驗(yàn)。
3．引導(dǎo)電極注意絕緣，防止發(fā)生短路。
4．安置引導(dǎo)電極時(shí)，應(yīng)謹(jǐn)慎精確，線路事先安裝好，電極沿水平再稍向內(nèi)，上前方正好接觸圓窗的后外沿即可，切勿將圓窗膜戳破，以免淋巴流出，使電位減小和實(shí)驗(yàn)時(shí)程縮短。
【思考題】
1．何謂微音器電位？試解釋其產(chǎn)生原理。
2．微音器電位和聽神經(jīng)動(dòng)作電位有何特點(diǎn)、區(qū)別與聯(lián)系？
(伍慶華)
實(shí)驗(yàn)19 腎上腺摘除動(dòng)物的觀察
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>
1．學(xué)習(xí)腎上腺摘除的方法。
2．通過(guò)觀察摘除腎上腺，造成動(dòng)物腎上腺功能缺損，對(duì)動(dòng)物存活率、姿態(tài)活動(dòng)、肌肉緊張度及游泳運(yùn)動(dòng)的影響，了解腎上腺的重要生理功能。
【實(shí)驗(yàn)原理】
腎上腺分皮質(zhì)和髓質(zhì)兩部分。腎上腺皮質(zhì)分泌的激素與水鹽代謝和物質(zhì)代謝和應(yīng)激功能密切相關(guān)，為維持機(jī)體生命活動(dòng)所必需。而腎上腺髓質(zhì)的內(nèi)分泌功能是通過(guò)嗜鉻細(xì)胞分泌腎上腺素和去甲腎上腺素來(lái)實(shí)現(xiàn)的。動(dòng)物摘除腎上腺后，腎上腺皮質(zhì)功能失調(diào)現(xiàn)象會(huì)迅速出現(xiàn)，而腎上腺髓質(zhì)功能失調(diào)現(xiàn)象對(duì)機(jī)體的影響較小。
【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】
小白鼠或大白鼠。
【實(shí)驗(yàn)用品】
手術(shù)器械一套，蛙板，大燒杯（500ml)，秒表，冰水，動(dòng)物秤，棉球，生理鹽水，75﹪乙醇，乙醚。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1．動(dòng)物分組 選擇成熟、健康體重30g的小白鼠（大白鼠體重150g～200g)20只，分別稱重編號(hào)后分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各10只，雌雄數(shù)量各半。
2．摘除動(dòng)物兩側(cè)腎上腺
（1)取實(shí)驗(yàn)組小白鼠（大白鼠)用乙醚麻醉后，取俯臥位固定于蛙板上，剪去背部的
毛。
（2)在小白鼠（大白鼠)背部胸腰椎交界處正中線作一長(zhǎng)約1cm～2cm的皮膚切口。
（3)牽動(dòng)皮膚切口，暴露左側(cè)肋骨下緣靠肋脊角處，分離肌肉，直至腹腔內(nèi)，略將內(nèi)臟上推，找到腎臟，在腎臟上方靠脊柱側(cè)，可見一粉黃色的腎上腺。
（4)用眼科鑷將腎上腺摘除，注意不要弄破被膜。如有出血以小棉球輕壓止血。
（5)同法摘除對(duì)側(cè)腎上腺。
（6)縫合背部切口，并用75﹪乙醇消毒。
（7)對(duì)照組小白鼠（大白鼠)也進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)組相同的手術(shù)創(chuàng)傷，但不摘除腎上腺。
3．術(shù)后動(dòng)物飼養(yǎng) 術(shù)后兩組動(dòng)物在相同條件下飼養(yǎng)1周，室溫應(yīng)盡量保持在20℃～25℃，喂以高熱量和高蛋白飼料，飲水供應(yīng)充分。
【觀察項(xiàng)目】
1．觀察腎上腺摘除對(duì)動(dòng)物存活率的影響 動(dòng)物經(jīng)上述手術(shù)后飼養(yǎng)7d，于第8d分別統(tǒng)計(jì)兩組動(dòng)物的存活率，并將存活的動(dòng)物分別稱體重。比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的存活率和體重增減情況。
2．觀察腎上腺摘除對(duì)禁食2d的動(dòng)物的姿態(tài)活動(dòng)及肌肉緊張度的影響 對(duì)術(shù)后飼養(yǎng)7d仍存活的動(dòng)物從第8d起停止喂食，只供飲水2d，第10d分別從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取動(dòng)物2只，置于實(shí)驗(yàn)桌上，觀察比較它們經(jīng)過(guò)2d禁食后活動(dòng)姿態(tài)及肌肉緊張度等方面情況。
3．觀察腎上腺摘除對(duì)動(dòng)物游泳運(yùn)動(dòng)的影響 將禁食2d的兩組動(dòng)物各取3只投入盛由4℃～5℃冷水的燒杯中，并按動(dòng)秒表記錄各組動(dòng)物在水中的游泳時(shí)間，直至該組動(dòng)物全部溺水下沉?xí)r止。比較兩組動(dòng)物游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間。
4．觀察動(dòng)物游泳運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)情況 將溺水下沉的動(dòng)物及時(shí)撈起后，分別觀察記錄兩組動(dòng)物恢復(fù)活動(dòng)的時(shí)間和活動(dòng)情況，并進(jìn)行比較。
【注意事項(xiàng)】
1．麻醉勿過(guò)深。
2．進(jìn)行腎上腺摘除術(shù)時(shí)動(dòng)作要輕柔，勿用力按壓動(dòng)物，以避免動(dòng)物窒息致死。
3．分離背部肌層，尋找腎上腺時(shí)，注意避開該處附近的血管，盡量減少出血。
4．術(shù)后的動(dòng)物盡可能分籠單獨(dú)飼養(yǎng)，以免其互相撕咬致死。
5．保持實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物飼養(yǎng)的自然環(huán)境相同。
6．不要損害腎上腺的完整，剝離時(shí)要結(jié)扎血管后再剝離。
【思考題】
1．摘除腎上腺后的動(dòng)物與保留腎上腺的動(dòng)物在冷水中的游泳能力及溺水后恢復(fù)活動(dòng)的時(shí)間有何差異？分析其原因。
2．如果只摘除動(dòng)物的腎上腺髓質(zhì)而保留皮質(zhì)，其對(duì)寒冷刺激的耐受力如何？為什么？
3．根據(jù)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了腎上腺具有什么功能？
(伍慶華)
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