3.細(xì)胞毒試驗(yàn) TC細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞對(duì)其靶細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒(殺傷)作用。常用的栓測(cè)細(xì)胞毒效應(yīng)的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細(xì)胞胞混合,于37℃培養(yǎng)1小時(shí)左右,51Cr即可進(jìn)入靶細(xì)胞,與胞漿蛋白結(jié)合,洗去游離的51Cr后,即可得到51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞,將待檢細(xì)胞毒性的細(xì)胞與51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞混合(比例約為50:1或100:1)靶細(xì)胞被殺傷越多,釋放到上清液中的液游離的51Cr越多,且不能被其他細(xì)胞吸收。用γ射線測(cè)量?jī)x檢測(cè)上清液中的cpm值,即可計(jì)算出待檢細(xì)胞殺傷活性的高低。
細(xì)胞毒試驗(yàn)檢測(cè)Tc細(xì)胞效應(yīng)功能是否健全,及經(jīng)IgG介導(dǎo)的ADCC效應(yīng),或NK細(xì)胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4.混合淋巴細(xì)胞的反應(yīng)(MIR) 是體外研究T細(xì)胞的較好的方法,雙向MLR常被用來(lái)篩選骨髓移植的供體。來(lái)自不同供體的淋巴細(xì)胞分別與病人的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)4~5天,在最后8小時(shí)摻入51TdR摻入法測(cè)T細(xì)胞的反應(yīng)性;蛴眉(xì)胞毒法觀察受刺激的T細(xì)胞與活的靶細(xì)胞混合(靶細(xì)胞來(lái)自與刺激細(xì)胞相同的個(gè)體)如果T細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生了細(xì)胞毒T細(xì)胞,可殺死活的細(xì)胞,根據(jù)靶細(xì)胞釋放51Cr的多少算出T細(xì)胞移動(dòng)抑制因子)和LIF(白細(xì)胞移動(dòng)抑制因子)來(lái)評(píng)估細(xì)胞免疫功能。近年來(lái)應(yīng)用測(cè)定IL-2的免疫酶技術(shù),操作簡(jiǎn)單,并能定量以取代了MIF和LIF的測(cè)定。單個(gè)核細(xì)胞與分裂原一起培養(yǎng)24小時(shí),然后測(cè)定清液中的IL-2活性。在細(xì)胞免疫功能缺損時(shí),特別是AIDS病人,IL-2分泌明顯降低。而有些疾病,如多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)等病人體內(nèi)血清中IL-2水平升高,表明病人T細(xì)胞活性增高。發(fā)生移植排斥反應(yīng)的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定各種體液中活化的T細(xì)胞脫落的IL-2受體(CD25),一般來(lái)說(shuō)IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的,IL-2和IL-2受體的檢測(cè)可用于對(duì)某些疾病的監(jiān)測(cè),如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞因子產(chǎn)生能力檢測(cè)是檢查細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的生物活性或抗原性。現(xiàn)已可用核酸雜交技術(shù),即從組織中或細(xì)胞中提取RNA,與同位素或酶標(biāo)記的該種細(xì)胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗(yàn),即印跡(dot blotting)或Northern印跡,若查出有某種因子的mRNA存在,即說(shuō)明該細(xì)胞在所處培養(yǎng)條件下有產(chǎn)生某種細(xì)胞因子的能力。