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全血細(xì)胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

 

  10.RNA酶A(Sigma)

 。1)儲(chǔ)備液

  稱取RNA酶A 1g溶于100ml醋酸鈉中,置沸水中煮10min,分裝后儲(chǔ)于-20℃。

  (2)工作液

  用儲(chǔ)備液按1:100稀釋。

  11.20×SSC

  NaCl            175g

  檸檬酸三鈉         88g

  dH2O           1000ml

  固定試劑溶解后,dH2O定容至1000ml,調(diào)pH至7.4,高壓滅菌。

  12.雜交液(高深度,HMmix)

  去離子甲酰胺          6.0ml

  100×Denhardt’s液      1.0ml

  50%硫酸葡聚糖         2.0ml

  1%人或鮭精DNA

  20×SSC

  ※:臨用前加入,終濃度為100~200μg/ml。

  該液為高濃度雜交液, 存于4℃。

  13.PBT液

  BSA            5%

  Triston X-100/(PBS)   0.1%

  注:BSA液用前應(yīng)用Whatman 3mm濾紙過濾。

  14.抗生物素(α-生物素)單克隆抗體

  用PBT液1:100稀釋。

  該單抗現(xiàn)可從英國Dako公司購得。

  15.金(10~20nm)標(biāo)羊抗兔二抗

  用PBT液1:50稀釋。

  16.銀溶液(Janesen)

  17.Hoedst 33258(Sigma)

  儲(chǔ)備液(100×)

  Hoedst染料           5mg

  甲醇              10ml

  工作液:用2×SSC 1:100稀釋儲(chǔ)備液。

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