一、衰老與抗衰老研究的有關(guān)策略
�。ㄒ�)基因克隆策略
衰老與抗衰老研究中一個十分重要的核心便是衰老或長壽基因的研究，作為前提和基礎(chǔ)，必需先對欲研究的衰老或長壽基因進行克隆，這樣才能從本質(zhì)上研究衰老或長壽基因的調(diào)控機制以及各種內(nèi)外環(huán)境因素對調(diào)控的影響，為人類利用這些調(diào)控路徑造福于健康長壽事業(yè)做出貢獻。
人類染色體DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中包含了大約10萬個基因，迄今為止，只有不到30種基因被克隆。近年來，基因克隆的新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，大大加快了基因克隆的步伐。衰老與抗衰老領(lǐng)域完全可以利用這些方法。
1．依賴mRNA或蛋白表達的方法
如果已知某個基因的表達產(chǎn)物，則可以根據(jù)其氨基酸順序合成寡核苷酸探針從cDNA文庫中調(diào)出cDNA克��；利用克隆的DNA片段也可直接篩選cDNA文庫；通過Northern雜交法也可得到某一克隆片段內(nèi)的表達順序。但實際情況往往是我們不知道待研究基因的表達產(chǎn)物，或者不能獲得足夠重的純化的表達產(chǎn)物去測氨基酸序列或作為配體利用。而且，一個基因的表達往往要求特異的組織。
（1)Northern雜交分析篩選法
利用Northern雜交法分析可以迅速得到某一克隆片段，如YAC、cosmid和phage內(nèi)轉(zhuǎn)當(dāng)序列。YAC DNA較為復(fù)雜，直接進行Northern雜交分析難以得到可靠的轉(zhuǎn)錄子，故必須先把YAC亞克隆為cosmid 或phage的重疊群，以檢測到轉(zhuǎn)當(dāng)順序的克隆或亞克隆再去篩選cDNA文庫，以得到cDNA克隆。
（2)cDNA文庫篩選法
每種細(xì)胞中約15000個基因可以表達，但其含量從幾個拷貝到20萬拷貝不等，所以，就面臨一個文庫完整性的問題�？梢韵率�3種方法使文庫趨于完整：①用基因組DNA進行雜交選擇；②用二次復(fù)性法；將cDNA變性后拷貝少的片段復(fù)性得慢，去掉雙鏈后各種轉(zhuǎn)錄子的拷貝數(shù)將會勻衡，然后以PCR擴增，得到一個完整的cDNA文庫；③構(gòu)建各種特異性組織的混合文庫池。對于上述完整cDNA文庫可以單拷貝或復(fù)雜探針來篩選。
�。�3)雜交篩選法
將cDNA文庫和大片段的基因組DNA雜交，通過PCR（引物與cDNA文庫載體克隆位點兩端序列對應(yīng))可以篩選到基因組DNA中的表達序列。該法還可用來篩選某一給定大片段內(nèi)的微衛(wèi)星DNA。
2．不依賴表達的方法
這些方法不用構(gòu)建某一特定組織某一適當(dāng)發(fā)育時期的cDNA文庫，它主要是用于對某一小段被認(rèn)為含有潛在的外顯子的DNA片段進行研究。
這類方法有CpG島篩選法、NotI連鎖片段篩選法、外顯子捕獲法、Zoo blot篩選法、剪接位點篩選法等等。
3．其它基因克隆法
由于計算機技術(shù)的飛速發(fā)展，利用所獲得的基因序列在計算機基因組數(shù)據(jù)庫中鑒定那些潛在的外顯子成為可能。不同種之間的DNA序列可在計算機中進行比較，那些保守的序列意味著可能是某種外顯子或者具有某種重要的生理功能。對cDNA文庫中隨機挑選的cDNA克隆進行序列分析和染色體定位也是克隆基因的一種方法。隨著DNA測序技術(shù)的自動化和機器人的使用，DNA序列分析的速度越來越快，利用DNA序列分析軟件可在基因組DNA中鑒定侯選的開始閱讀框架（open reading frames)。
被譽為抗體第三次革命中的抗體工程新技術(shù)——噬菌體抗體庫技術(shù)（technology of the repertoire of antibodies displayed on phages)是克隆人源性抗體基因的新技術(shù)，它使人類繞過雜交瘤和預(yù)免疫（by-passing immunization and hybridoma)這些雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)而研制任意一種基因工程抗體的夢想終于變成了現(xiàn)實。由于篇幅所限，其復(fù)雜的工作原理這里不再贅述。以該技術(shù)所制備的人源性基因工程抗體克服了雜交瘤單抗的不足（如人體應(yīng)用的異質(zhì)性問題)。因內(nèi)王琰、侯景春等已經(jīng)成功地應(yīng)用該技術(shù)克隆、篩選了人源性抗HBsAG、HTV（漢坦病毒)的單鏈抗體基因（ScFv)。應(yīng)用該技術(shù)可以克隆、篩選所有其表達物具有配體的基因，如受體基因等。它在對促衰老基因以及抗衰老基因或者某種抗衰老作用物（如受體)等研究方面具有很大潛力。目前，該技術(shù)正向全分子抗體基因以及高效率表達方向發(fā)展。
�。ǘ�)基因治療策略
對衰老的基因治療方面目前還研究極少，但可以肯定地說衰老的基因治療具有誘人的前景。
可以從兩個方面來考慮這個問題。首先，對于已經(jīng)闡明的具有促衰老作用而無其它重要生理功能的基因可以考慮用基因治療的方法給予抑制或破壞；其次，對于已經(jīng)肯定的具有長壽作用而對人體又無不利影響的基因可以考慮以基因工程的方法促其表達。具體方法很多，例如反義核酸、基因打靶、轉(zhuǎn)基因技術(shù)等。這里提出2種新的方法作一簡要介紹。
第一種是對于衰老基因可以考慮應(yīng)用核酶（ribozyme)技術(shù)予以破壞其mRNA而干擾或中斷其表達。目前，該技術(shù)已廣泛地用于HBV、HCV、HIV等病毒基因的處理研究。核酶是對特異性RNA序列具有剪切催化作用的一類特殊的RNA，可以人為地設(shè)計其結(jié)構(gòu)和特異性。
第二種是對于某種較短的，具有一定獨立作用能力的長壽基因片段可以考慮以基因的細(xì)胞內(nèi)定位表達技術(shù)來將該基因予以細(xì)胞內(nèi)定位表達，以緩解或克服衰老機體內(nèi)該基因的退化性減少。
二、對未來衰老與抗衰老研究的展望
衰老與抗衰老研究無疑將在未來生命科學(xué)研究領(lǐng)域占有十分重要的地位，但是，就目前人類在這方面的研究來看還很薄弱。
今后一個時期內(nèi)，有關(guān)衰老與抗衰老的研究重點還應(yīng)放在以最新生物學(xué)技術(shù)研究有關(guān)長壽與衰老基因的克隆、結(jié)構(gòu)分析以及對這些基因的調(diào)控機制；機體衰老過程中自由基、突變以及其它有害刺激因素啟動細(xì)胞衰老凋亡的分子機制和這些過程被調(diào)控的分子機理；利用衰老基因與長壽基因的研究成果進行的基因治療方面研究等。
在上述研究的基礎(chǔ)上，研究開發(fā)新一代強有力延緩衰老的制劑或者技術(shù)性手段也必然成為很有價值的研究熱門。同時，充分發(fā)掘祖國醫(yī)學(xué)在這方面的潛力和優(yōu)勢，將是抗衰老研究方面的極為重要的組成部分。
