隱孢子蟲(Cryptosporidium Tyzzer,1907)廣泛存在于動(dòng)物中,亦為人體的重要寄生孢子蟲,可引起隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)。寄生于人體的種主要是微小隱孢子蟲(C.parvum),該蟲是機(jī)會(huì)致病原蟲,但也是一種重要的腹瀉病原。本病在國(guó)外的研究報(bào)道日趨增多,國(guó)內(nèi)近幾年也逐漸引起人們的注意。
形態(tài)與生活史
隱孢子蟲的生活史簡(jiǎn)單,不需轉(zhuǎn)換宿主就可以完成。生活史有無(wú)性生殖、有性生殖和孢子生殖三個(gè)階段,均在同一宿主體內(nèi)進(jìn)行,稱為內(nèi)生階段。隨宿主糞便排出的卵囊具感染性。
卵囊呈圓形或橢圓形,直徑4~6µm,成熟卵中內(nèi)含4個(gè)裸露的子孢子和由顆粒物組成的殘留體(residual body),子孢子為月牙形。糞便中的卵囊若不染色,難以辯認(rèn)。在改良抗酸染色標(biāo)本中,卵囊為玫瑰紅色,背景為藍(lán)綠色,對(duì)比性很強(qiáng)。因觀察的角度不同,囊內(nèi)子孢子排列似不規(guī)則,呈多態(tài)狀,殘留體為暗黑(棕)色顆粒狀。電鏡觀察囊壁為三層。
陷孢子蟲卵巢
人和牛及其它易感動(dòng)物吞食成熟卵囊后,子孢子在消化液的作用下自囊內(nèi)逸出,先附著于腸上皮細(xì)胞,再進(jìn)入細(xì)胞,在胞膜下胞質(zhì)外形成納蟲空泡,蟲體即在泡內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖,先發(fā)育為滋養(yǎng)體,經(jīng)三次核分裂發(fā)育為Ⅰ型裂殖體。成熟的Ⅰ型裂殖體含有8個(gè)裂殖子。裂殖子被釋出后侵入其它上皮細(xì)胞,發(fā)育為第二代滋養(yǎng)體。第二代滋養(yǎng)體經(jīng)2次核分裂發(fā)育為Ⅱ型裂殖體。成熟的Ⅱ型裂殖體含4個(gè)裂殖子。這種裂殖子釋出后發(fā)育為雌配子體或雄配子體,進(jìn)入有性生殖階段。雌配子體進(jìn)一步發(fā)育為雌配子,雄配子體產(chǎn)生16個(gè)雄配子,雌雄配子結(jié)合后形成合子,進(jìn)入孢子生殖階段。合子發(fā)育為卵囊,成熟的卵囊含有4個(gè)裸露的子孢子(圖12-10)。卵囊有薄壁和厚壁兩種類型。薄壁卵囊約占20%,僅有一層單位膜,其子孢子逸出后直接侵入宿主腸上皮細(xì)胞,繼續(xù)無(wú)性繁殖,使宿主自身體內(nèi)重復(fù)感染;厚壁卵囊約占80%,在宿主細(xì)胞或腸腔內(nèi)孢子化(形成子孢子)。孢子化的卵囊隨宿主糞便排出體外,即具感染性。整個(gè)生活史約需5~11天完成。用人源卵囊感染BALB/c小鼠,感染后10和11天糞檢找到卵囊。
致病
隱孢子蟲主要寄生于小腸上皮細(xì)胞的刷狀緣,由宿主細(xì)胞形成的納蟲空泡內(nèi)?漳c近端是胃腸道感染該蟲蟲數(shù)最多的部位,嚴(yán)重者可擴(kuò)散到整個(gè)消化道。肺、扁桃體、胰腺和膽囊等器官亦發(fā)現(xiàn)有蟲體。
由于本蟲寄生于腸粘膜,使之表面可出現(xiàn)凹陷,或呈火山口狀,腸絨毛萎縮,變短變粗,或融合、移位和脫落,上皮細(xì)胞出現(xiàn)老化和脫落速度加快現(xiàn)象,但感染輕者腸粘膜的變化不明顯。由于蟲體的寄生,破壞了腸絨毛的正常功能,影響消化吸收而發(fā)生腹瀉。但其致病機(jī)制很可能是多因素的,如腸粘膜表面積的縮小,多種粘膜酶的減少可能也起重要作用。
本病的臨床癥狀和嚴(yán)重程度取決于宿主的免疫功能與營(yíng)養(yǎng)狀況。免疫功能正常人的感染后,主要表現(xiàn)為急性水樣腹瀉,一般無(wú)膿血,日排便2~20余次,嚴(yán)重感染的幼兒可出現(xiàn)噴射性水樣瀉,排便量多。腹痛、腹脹、惡心、嘔吐、食欲減退或厭食、口渴和發(fā)熱亦較常見。病程長(zhǎng)短不一,短者1~2天,長(zhǎng)者數(shù)年,20天至2個(gè)月上下占多數(shù),由急性轉(zhuǎn)為慢性而反復(fù)發(fā)作者并不少見。
免疫功能受損者感染本蟲后,通常癥狀明顯而病情重,持續(xù)性霍亂樣水瀉最為常見,一日數(shù)次至數(shù)十次。也有同時(shí)并發(fā)腸外器官寄生,如呼吸道等,其病情更為嚴(yán)重復(fù)雜。有人統(tǒng)計(jì)57例艾滋病病人感染者,42例死于本病,為艾滋病患者主要致死病因之一。故國(guó)外艾滋病病人檢查隱孢子蟲已被列為常規(guī)項(xiàng)目。
免疫缺陷者感染后癥狀嚴(yán)重,表明細(xì)胞免疫和體液免疫對(duì)消除本蟲的感染是必不可少的。不論免疫功能是否正常感染本蟲后血中均可檢出特異抗體,但因該蟲寄生于腸粘膜表面,體液中的抗體可能不起保護(hù)作用,但能降低再感染的嚴(yán)重性。
診斷
早期對(duì)隱孢子蟲病的診斷須進(jìn)行腸粘膜活組織檢查,近年則主要從糞便中查出卵囊確診。檢查方法多用糞便直接涂片染色法。水樣瀉的臨床癥狀可作參考。
金胺-酚染色法:染色后在熒光顯微鏡下可見卵囊為圓形,發(fā)出乳白色略帶綠色的熒光,中央淡染,似環(huán)狀。本法簡(jiǎn)便、敏感,適用于批量標(biāo)本的過(guò)篩檢查,但需要熒光顯微鏡,限制了在基層衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的廣泛應(yīng)用。
改良抗酸染色法:染色后背景為藍(lán)綠色,卵囊呈玫瑰紅色,內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰。
金胺酚-改良抗酸染色法:上述方法染色后,標(biāo)本中多存在非特異的紅色抗酸顆粒,貌似卵囊,難以鑒別。本法先用金胺-酚染色后,再用改良抗酸染色法復(fù)染,染后用光學(xué)顯微鏡檢查,其卵囊同抗酸染色,而非特異性顆粒呈藍(lán)黑色,顏色與卵囊不同有利于卵囊的檢查,并提高了檢出率和準(zhǔn)確性。
免疫診斷,國(guó)外已有幾種方法,其中單克隆熒光抗體法較敏感特異。