無胸腺裸鼠特點及應用

　�。ǘ�)飼料條件

　　因為裸鼠缺乏T細胞，易受細菌、病毒和霉菌感染的損害，如按常規(guī)動物方式飼養(yǎng)，只有少數裸鼠能生存一個月以上，最多不超過四個月，而放在隔離器（Isolator)中飼料的可存活一年以上。因此，裸鼠的壽命與飼料的衛(wèi)生條件有密切的關系。一般是先在隔離器中繁殖。然后放入無特定病原體屏障環(huán)境中飼料。

　　無病原體條件的飼料需要在動物和外界之間裝置一個屏障，屏障越嚴，飼料健康裸鼠就越有保證，然而，如不注意選擇屏障的類型，它的效果就沒有保證，故應持續(xù)檢查是否符合條件。

　　1．無病原條件飼料裸鼠設備

　�、艓в忻芊饪諝膺^濾裝置的塑料籠。每一籠自為一個單元。它包括一個標準的透明塑料籠，籠蓋上覆有空氣過濾材料。后者與籠子的貼近處用膠帶纏繞數周予以密封。然后，此籠可置于一般實驗室的標準籠架上。過濾材料呈片狀，由疏紡的（但非紡織的)聚酯纖維制成。它應該能夠防止微生物從籠外進入籠內。

　　全套籠具皆經高壓蒸汽滅菌。使用它和喂養(yǎng)管理（如加飲水和飼料、清籠、斷奶等)時，都必須在一個防護罩內進行。罩內所含有的是正壓過濾空氣。而且還是層流（無湍流的)、單向的。

　　上述的用具有操作方式是存養(yǎng)無致病原動物最簡單的方法。

　　⑵動物隔離器。最常使用的此種器具有系由柔軟片狀的透明聚乙烯基塑料制成，但也可用有機玻璃、不銹鋼、鋁皮和尼龍等材料來作。市售成品有一定規(guī)格，也可專門根據需要來設計大小，這是一個無菌的生活小室，可排除任何微生物。室氣進出該器都經過濾。全部食品和用品都經滅菌后，再經一個無菌的入口小室送入器內，可排除任何微生物。最初，選用化學滅菌劑和高壓蒸氣對該器進行滅菌處理。

　　在無菌環(huán)境中，遺傳學背景相同的裸小鼠和通常的雜合子型小鼠壽命長短相近。但是，Poiley氏等（1974)發(fā)現，在這種環(huán)境中，新生小鼠的存活率，較之在普遍環(huán)境中的為低。為了使它們胃腸道的功能更接近于正常，有人提議給無菌環(huán)境中的裸鼠接種一次非致病的細菌（Poliey氏等，1974；Eaton等，1975)。這樣，常常可以起到改進生殖性能的作用，并有助于把無菌小鼠從隔離器中轉移到條件較差的存養(yǎng)設備中去。

　　為了最有效的控制環(huán)境，從而得以盡力保存無菌的（或帶有一定菌群)裸體小鼠，隔離器是理想的存養(yǎng)設備。但它也有缺點，這就是費勞力，在一定空間中繁育動物的數量有限。

　　⑶空氣層流器。它包括標準的小室，覆罩和網架。每套器具形成一個獨立的環(huán)境，與室內通風系統(tǒng)無關。它自己輸入過濾空氣，把超凈空氣完滿地注入鼠籠，并以柱狀排出。由于每套器具互不相干，又有正壓空氣防護，所以可把它們放在通常條件下。它們是手提式的，既便于維修，又能最大限度地利用房舍和設備。

　　使用此種方法是否成功，取決于管理工作的好壞。密切監(jiān)視房室的污染和人員流動，只準專職人員入室。應當在正壓、單向氣流條件下料理維修鼠籠，接觸小鼠的一切物品（飼料和其它物品)都必須滅菌。飲水須經處理除去細菌，專職工作者須穿戴無菌的外科口罩、帽子、手套和后長衣，觸及動物時須用頭端包有橡皮的鑷子，而且必須經變性乙醇（就放在一邊)的浸洗。

　　⑷空氣層流室。有別于上述的一個房間內放置的小型空氣層流器，而是整個房間的環(huán)境都為正壓過濾空氣所籠罩。設計時，須裝置空氣進入的開關，空氣入口要裝指示器。工作人員在室內的穿戴同上所述。室內應用的飼料、墊料和籠具的滅菌，須用兩端有開關的高壓蒸氣滅菌器。

　　引種方法可最大限度地利用房舍以繁育動物。雖然裝設此種房間的經費昂貴，但是，空氣層流室加上嚴格限制人員的出入，可保證生育期的裸體小鼠順利生產，它是大量繁殖裸小鼠的最好方式。舉例來說，由于采用它，近五年來（1973～1977)，在Frederick癌癥研究中心平均每年生產裸體小鼠在20,000以上。

　　2．環(huán)境控制

　�、艤囟�。適于裸體小鼠的室溫為26～28℃（78～820F)，裸體小鼠無毛、其散失體溫較有毛小鼠為快。處于連續(xù)空氣層流中，它們的散熱更快，需要大約28℃（800F)的室溫予以補償。一般飼料室內溫度控制在25℃±1℃也可以。如果裸鼠和有毛雜合子鼠同籠飼養(yǎng)時室溫可略低一點。飼料在在連續(xù)空氣層流室中的裸鼠需要將層流室內溫度提高到28℃。

　　⑵濕度。相對溫度應保持在40～60%，此時，成年裸體小鼠皮膚水分散失最少。濕度過低，對新生裸鼠生存不利，這在空氣層流環(huán)境中尤為重要。

　�、峭�風。一般認為，每小時需要通風換氣10～15次，要用高效過濾器（99.9%)保證良好的空氣過濾，除盡空氣中大于0.3μm的顆粒�？諝獬隹谝灿羞^濾裝置（也可以用效能上較低的)以防止空氣倒流時的污染，而且要先設計好怎樣從室外維修這些過濾器。

　　在空氣層流室內，空氣的正壓至少為0.65cmH2O�？諝獾牧飨蚝退俣纫�控制得均勻而自由。過濾的空氣連續(xù)掠過鼠籠時，奔流于動物環(huán)境之中，在理論是一個防止外源性污染的屏障。

　　⑷光照。每日應當維持10小時光照，14小時無光的明暗周期。不用窗戶，用人工照明，使全年光照恒定，但應避免過強的熒光燈光照。

　　3．籠具和墊料

　　培育裸體小鼠的籠具，籠底面積應當為97平方厘米（15平方吋)，高度應為12.7厘米（5吋)，應選可耐受高壓蒸氣滅菌的塑料或不銹鋼制作。其造型應當便于重疊，以利滅菌和存貯。透明塑料籠較好，用時不必打開籠蓋就要觀察動物�；\底要放墊料，不能用網。

　　籠子必須每周清潔一次，或視需要處理，以保證環(huán)境清潔、干燥。用去污劑或其它洗滌劑清洗后的籠子或其它物品，必須充分沖洗干凈。否則，會刺激裸體小鼠的皮膚。

　　墊料直接接觸裸體小鼠的皮膚，不能帶有刺激性�？蛇x用不帶塵土和尖塊的硬木屑，研磨過的玉米桿，或用松木刨花。用前都要滅菌，且滅菌后不結成塊狀才可使用。

　　為裸體小鼠建巢可用棉花或棉紙。但是，如果墊料有一吋厚，而且室溫控制得恰到好處，能使裸鼠感染舒適，一般就不需要墊棉花或棉紙了。

　　4．供食和供水

　�、棚曃埂Ｂ泱w小鼠的營養(yǎng)需求與其它品系的小鼠相似。所以，任何市售飼料均可使用。食物必須滅菌，可將食物鋪成單層后放在小盤中或放在有孔的口袋中，進行高壓蒸氣滅菌（45分鐘，120℃)。滅菌前，不耐熱的營養(yǎng)素要加大用量（Williams氏等，1968)。另外，可補充全小麥面包和復制牛奶以改進生育能力，并防止同類噬食現象（Poiley氏等，1974)。

　�、骑嬎�。有時，自來水中含有少量的各種非致病菌（包括銹色假單細胞菌)。為了避免經水源而污染裸體小鼠種群，有人建議將飲水過氯化達到12～15ppm；或用鹽酸酸化飲水，使之pH達到2.5～2.8，都可有效地控制其污染率，特別是假單細胞菌屬細菌的污染。如由于高壓滅菌而過多地損失維生素則可在飲水中加入復合維生素（例如，每1000ml加入1ml各種維生素)，將該混合液通過直徑0.2μm微孔薄膜過濾除菌，每平方吋的壓力不得超過10磅。維生素混合液及水應適當地進行某些細菌培養(yǎng)的檢查，并應隔天更換水瓶，水瓶和飲水管在兩次使用之間必須洗滌和消毒。

　　通過飲水供給抗菌素，可消除胃腸道的細菌（Van Der Waaij氏，1966)。并且，這也是一個防止裸體小鼠在嚴格的環(huán)境控制下可能發(fā)生的外源污染的附加措施。我們使用的四種配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收，每一種配方應每周更換一次，每四周輪換一遍，可減少抗藥菌株的出現。

　　假如你一開始就在嚴格控制的環(huán)境中繁育無菌裸體小鼠，則也可以不必使用抗菌素，因為加用抗生素后在繁育技術上出現差錯的可能性也就增加了。

表4－4　裸體小鼠飲水中所用抗菌素的種類和用法

　　5．空氣層流室的保養(yǎng)

　　層流室內從地面到天花板以及設備均需保持無塵和無破碎。每月必須檢測室內的無菌情況，每平方米放一個平皿，檢查室內空氣中的細菌數量。落下菌的檢查各國規(guī)定不同，見下表

表4－5　各國層流室落下菌限度的規(guī)定

　　除落下菌數目不得超過限度外，并且不能有致病菌存在，否則，需要重新消毒。

　　一切可移動的設備最好高壓滅菌，不可移動的裝置（如墻、地板、天花板等)要用液體酚類消毒劑徹底清潔，消毒應重復進行三次。消毒后房間應密封，48小時后作微生物學污染檢測，如檢測是陰性，才允許使用。工作人員入內必須穿戴全套滅菌外科手術衣和消毒的長靴。

　　（三)裸鼠生產

　　為了保證裸鼠具有相應品系的遺傳純度和嚴格的微生物控制要求，應根據裸鼠所具有特殊性，建立以下生產制度進行生產（見圖4-1)。

圖4-1 裸鼠生產制度

　　1．核心群的動物（GF)：按微生物學要求，應是經過無菌剖腹手術飼料在小型隔離器內的無菌動物。按遺傳學要求，一個隔離器內的動物應是相應的近交系，采用兄妹交配，一個隔離器是帶有nu純合基因的，采用回交和互交方法進行維持。

　　2．擴大群動物（GB)：按微生物學要求，應是來自核心群的無菌的幼小裸鼠和雜合鼠，放入大隔離器內或水平層流的小隔離房內，并對這些幼鼠導入復合的正常腸內菌叢，使之變成悉生動物。按遺傳學要求，應保持nu等位基因的純合子和雜合子進行生產。

　　3．生產群動物的種子群，應來自擴大群的動物，飼料在屏障系統(tǒng)內，一個生產周期為6～20個月。

　　試驗期裸鼠也應以裸鼠的免疫功能缺陷特性，按以下體系進行試驗與飼料（見圖4-2)。

　　⑴裸鼠移植癌建立和檢疫。

　　⑵腫瘤維持。

　�、谴罅恳浦�。

圖4-2 維持腫瘤預防感染體系

　　總之，應按生產裸鼠所有的要求進行，否則試驗不易獲得成功。

　　飼料繁殖裸鼠必須注意的問題：

　�、沤�立屏障系統(tǒng)是飼料繁殖裸鼠的重要條件。裸鼠先天性胸腺缺失，免疫系統(tǒng)不健全，缺乏對付外來因子的抵抗力，對病原體極易感染，在常規(guī)環(huán)境中，最多只能生存數月，因此，必須要在無病原隔離飼料環(huán)境中飼料。根據我國目前實際情況，尚不能新建更多的高標準的動物實驗設施，而改造現有建筑的辦法是可行的。改建后的屏障飼養(yǎng)室雖與科技發(fā)達國家相比是比較簡陋的，但基本上達到了屏障系統(tǒng)設施的要求，費用大為降低，也可使裸鼠繁殖工作正常進行。

　　⑵裸鼠繁殖方法最好選用純合子隱性（nu/nu)雄鼠與雜合子（nu/+)雌鼠進行交配生產。因為純合子隱性雄鼠一般能正常生育，其仔代裸鼠和正常仔鼠的比例為1：1；所有正常的仔鼠都是雜合子，當用這些小鼠作實驗對照時，就可明顯地觀察到純合子與雜合子之間的不同差異。裸鼠繁殖的其它二種方法，均存在一定缺點，如采用雜合子（nu/+)雌雄鼠交配時，其子代中裸鼠與表現型正常的仔鼠的比例為1：3，所繁殖的裸鼠少，而且繁殖的正常小鼠可能是nu/+或+/+兩種基因的小鼠，除非通過育種，否則不易區(qū)別。又如采用純合子隱性（nu/nu)雄鼠和雌鼠交配繁殖，雖然所有的子代都是裸鼠，但這種繁育方法不很有效，因為雌裸鼠繁殖力低，同時護理也很困難。

　�、亲惺蟪錾�后存活與否，關鍵在于哺乳，如不注意哺乳則哺乳期裸鼠死亡率很高。主要原因在于同窩哺乳的有雜毛純合仔鼠發(fā)育快，體大健壯，競爭力強，與純合裸鼠爭食母乳而影響純合裸鼠的發(fā)育，以致其消瘦死亡。為了提高裸鼠生長發(fā)育速度及存活率，采用純合裸鼠，雜合仔鼠分別哺乳，并對雌鼠加喂高蛋白、高維生素飼料。

　�、葹榱吮３州^長期的正常繁殖生長，就必須建立微生物監(jiān)測方法來控制質量。因裸鼠免疫機能的缺陷，易受微生物、病毒和寄生蟲感染，特別是易受小鼠肝炎病毒的感染，一但裸鼠感染上小鼠肝炎，同窩裸鼠會于生后36～134天相繼死亡，無一幸免。病鼠肝發(fā)生大理石樣變化，質較硬，呈黃色、粗造、結節(jié)樣、邊緣不齊。對裸鼠的飼料繁殖威脅很大。在裸鼠的飼料中，常易發(fā)生所謂“消耗性綜合征”（Wasting syndrome)實與裸鼠常見病之一的鼠病毒性肝炎感染有密切關系，用剖腹產可避免此病毒感染。

　　采用微生物的檢查方法時，要考慮裸鼠的生理特性，裸鼠屬于免疫機能缺陷的動物，鼠肝炎病毒、仙臺病毒等感染后，血清中不產生抗體。因此，只能檢查同胎雜合仔鼠血清中的抗體情況，或直接分離病原體，或將裸鼠的肝組織接種于雜合仔鼠后，再用血清學方法測定其相應抗體。因此，對裸鼠一些致病性的病毒和臺澤氏病原體等的檢查方法，主要是檢查同胎雜合鼠血清中抗體的產生情況，來判斷裸鼠是否被這些病原體所感染。

上一頁  [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一頁