病毒感染的實驗室檢查診斷

　�。ǘ�)直接檢測病毒抗原

　　1．免疫熒光（IF)技術(shù) 如前所述IF可用于細(xì)胞培養(yǎng)病毒的鑒定，也適用檢測臨床標(biāo)本中病毒抗原，具有快速、特異的優(yōu)點。直接免疫熒光技術(shù)是用熒光素直接標(biāo)記特異性抗體，檢測病毒抗原；間接免疫熒光技術(shù)是先用特異性抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的抗體與特異性抗體結(jié)合，從而間接識別抗原�？扇⊙屎砻撀浼�(xì)胞，檢測呼吸道合胞病毒、流感及副流感病毒抗原；取病灶刮片或腦活檢標(biāo)本，檢測單純皰疹病毒抗原；取尿沉渣檢測巨細(xì)胞病毒抗原等。近年來使用單克隆抗體大大提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。

　　2．免疫酶法（IEA)原理與應(yīng)用范圍同免疫熒光技術(shù)，IEA是用酶（通常是過氧化物酶)取代熒光素標(biāo)記抗體，酶催化底物形成有色產(chǎn)物，在普通光學(xué)顯微鏡下清晰可見，不需熒光顯微鏡，便于推廣使用。

　　3．放射免疫測定法（RIA) 有競爭RIA和因相RNA二種方法。競急RIA是同位素標(biāo)記的已知抗原與標(biāo)本中未標(biāo)記的待檢抗原競爭性結(jié)合特異性抗體的試驗，將形成的復(fù)合物分離出來，用放射免疫檢測儀測定放射活性，同時與系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原測定結(jié)果進行比較，確定出待檢抗原的濃度。因相RIA是用特異性抗體包被因相以捕獲標(biāo)本中的抗原，然后加入放射性標(biāo)記的特異性抗體與抗原結(jié)合，測定放射活性，得知抗原的量。RIA是最敏感的方法，已用于測定糞便中甲肝病毒、輪狀病毒抗原及血液中乙肝病毒抗原。

　　4．酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)先將特異性抗體包被（吸附)到塑料微培板孔中以捕捉標(biāo)本中相應(yīng)抗原，然后加入酶標(biāo)特異性抗體，相應(yīng)抗原被夾在抗體之間，當(dāng)加入酶的底物后顯色，顯色程度直接反映了標(biāo)本中病毒抗原的量。因其敏感性接近RIA，又不接觸放射性物質(zhì)，已被多數(shù)實驗室采用。

　　此外，對難以分離培養(yǎng)，形態(tài)特殊且病毒數(shù)量較多的標(biāo)本，可用電鏡或免疫電鏡法直接觀察，是一種快速診斷與鑒定病毒的方法，如輪狀病毒、乙肝病毒。

　　四、特異性抗體的檢測特異性抗體的檢測

　　病毒感染后通常誘發(fā)針對病毒一種或多種抗原免疫應(yīng)答，特異性抗體效價升高或lgM抗體出現(xiàn)有輔助臨床診斷的價值。

　�。ㄒ�)補體結(jié)合試驗（CF) CF分二個階段：1.抗原與抗體（一個為已知，一個為待檢)混合，加入定量補體，若抗原與抗體相對應(yīng)，則補體被消耗；2.在上述混合物中加入溶血素致敏的綿羊紅細(xì)胞，若補本已與抗原抗體復(fù)合物完全結(jié)合，沒有剩補體存在，那么綿羊紅細(xì)胞不會溶血，結(jié)果為陽性，說明待檢標(biāo)本中有特異性存在，出現(xiàn)陽性結(jié)果時血清標(biāo)本最高稀釋度為抗體的效價。反之為陰性結(jié)果。由于補體結(jié)合抗體產(chǎn)生早，消失快，適于診斷病毒近期感染。（表23-5)。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供

*此例的抗體效價升高4倍，有診斷意義。

　�。ǘ�)中和試驗（NT)在活體或活細(xì)胞內(nèi)測定病毒被特異性抗體中和、而失去致病力的試驗。試驗時：①須先測出病毒的半數(shù)致死量（LD50)或半數(shù)感染量（ID50)；②隨即取活病毒與被試血清按不同比例混合，放置1～2小時讓其充分中和；③將病毒與血清混合液注入各組動物、雞胚或組織細(xì)胞培養(yǎng)管內(nèi)培養(yǎng)；④根據(jù)動物、雞胚死亡數(shù)或細(xì)胞病變的管數(shù)，計算出百分比（%)，然后再計算這些試驗對象中的半數(shù)免于死亡或免于致病所需要的最少量血清（或最大量的病毒)，就是該血清的中和抗體效價（稱為50%終點的中和效價)。診斷病毒性疾病時，須取病人雙份血清同時做對比試驗，病后血清的中和抗體效價也必須超過病初血清4倍以上，才能確診（表23-6)。用此法鑒定病毒時，須將病毒分別與免疫血清及血清正常血清（對照)混合做對比試驗，免疫血清比正常血清多中和50～100倍劑量的病毒，才能斷定是該病毒。、

表23－6　病人雙份血清的病毒中和試驗結(jié)果（組織細(xì)胞培養(yǎng)的中和試驗)

　說明：①TCID50=組織培養(yǎng)半數(shù)感染劑量。

　　②每種稀釋度接種4支組織細(xì)胞培養(yǎng)管；0=未出現(xiàn)細(xì)胞致病作用；+=出現(xiàn)細(xì)胞致病作用。

　�、鄞死�的病后血清中和抗體效價比病初血清增高8倍，有診斷意義。

　　病毒中和抗體的特異性高，持續(xù)時間久，以往受顯性或隱性感染后，血中可長期存在中和抗體，所以適用于流行病學(xué)調(diào)查或人群免疫水平研究，但因試驗方法繁雜，耗用動物、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)較多，故一般不作常規(guī)使用。

　　（三)血凝抑制試驗（Hemagglutination inhibition test,HIT)某些病毒（流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腦炎病毒等)能凝集紅細(xì)胞，而抗體與這些病毒結(jié)合后卻能阻止它們的凝集，若雙份血清有≥4倍以上滴度增高，也可用于診斷這類病毒感染。本法簡便、快速、經(jīng)濟、特異性高，常用于流行病學(xué)調(diào)查等。

　�。ㄋ�)lgM捕捉ELISA 特異性lgM出現(xiàn)于病毒感染的早期或病毒感染的活動期，因此可從急性期病人單份血清中檢出特異性lgM，這是病毒感染實驗室早期診斷的可靠方法。實驗中先用u鏈血清包被微培板孔，用以捕捉血清標(biāo)本中的lgM類抗體，再加入特異性病毒抗原及酶標(biāo)抗體以證實特異性lgM的存在�，F(xiàn)已廣泛用于病毒病的早期診斷。在先天性感染中，lgM檢測有特殊意義，因lgM不能通過胎盤，新生兒血清中發(fā)現(xiàn)抗病毒lgM提示為宮內(nèi)感染。

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