1．細胞培養(yǎng) 用分散的活細胞培養(yǎng)稱細胞培養(yǎng)（Cell culture)。所用培養(yǎng)液是含血清（通常為胎牛血清)、葡萄糖、氨基酸、維生素的平衡溶液，pH7.2～7.4。細胞培養(yǎng)適于絕大多數(shù)病毒生長，是病毒實驗室的常規(guī)技術。
原代細胞培養(yǎng)(Primary cell culture)用胰蛋白酶將人胚（或動物)組織分散成單細胞，加一定培養(yǎng)液，37℃孵育1-2天后逐漸在培養(yǎng)瓶底部長成單層細胞，如人胚腎細胞、兔腎細胞。原代細胞均為二倍體細胞，可用于產生病毒疫苗，如兔腎細胞生產風疹疫苗，雞成纖維細胞產生麻疹疫苗，猴腎細胞生產脊液灰質炎疫苗。因原代細胞不能持續(xù)傳代培養(yǎng)，故不便用于診斷工作。
二倍體細胞培養(yǎng)(Diploid cell cultune)原代細胞只能傳2-3代細胞就退化，在多數(shù)細胞退化時，少數(shù)細胞能繼續(xù)傳下來，且保持染色體數(shù)為二倍體，稱為二倍體細胞。二倍體細胞生長迅速，并可傳50代保持二倍體特征，通常是胚胎組織的成纖維細胞（如WI-38細胞系)。二倍體細胞一經建立，應盡早將細胞懸浮于10%二甲基亞砜中，大量分裝安瓿貯存于液氮（-196℃)內，做為“種子”，供以后傳代用。目前多用二倍體細胞系制備病毒疫苗，也用于病毒的實驗室診斷工作。
傳代細胞培養(yǎng) (Continous cell culture)通常是由癌細胞或二倍體細胞突變而來（如 Hela 、Hep-2、 Vero細胞系等)，染色體數(shù)為非整倍體，細胞生長迅速，可無限傳代，在液氮中能長期保存。目前廣泛用于病毒的實驗室診斷工作，根據病毒對細胞的親嗜性，選擇敏感的細胞系使用。
表23-3 病毒增殖用部分細胞系及來源
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細胞系名稱 |
來源 |
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二倍體細胞系 HDCS MRC-9 WI-38 傳代細胞系 Hela Hep-2 Vero BHK |
人胚肺細胞 人宮頸癌細胞 人上皮細胞 猴腎細胞 地鼠腎細胞 |
淋巴細胞培養(yǎng)（Lymphocyte culture)正常成熟的淋巴細胞不經特殊處理不能在體外傳代培養(yǎng)。然而EBV感染的B淋巴細胞卻能在體外持續(xù)傳代，這是病毒轉化細胞的例證，也是分離出EBV的標志。T淋巴細胞在加入T細胞生長因子（IL-2)后可在體外培養(yǎng)，為研究人類逆轉錄病毒（HIV、HTLV)提供了條件，HIV在T淋巴細胞培養(yǎng)物中增殖形成多核巨細胞。
2．動物試驗這是最原始的病毒分離培養(yǎng)方法。常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等。接種途徑根據各病毒對組織的親嗜性而定，可接種鼻內、皮內、腦內、皮下、腹腔或靜脈，例如嗜神經病毒（腦炎病毒)接種鼠腦內，柯薩奇病毒接種乳鼠（一周齡)腹腔或腦內。接種后逐日觀察實驗動物發(fā)病情況，如有死亡，則取病變組織剪碎，研磨均勻，制成懸液，繼續(xù)傳代，并作鑒定。醫(yī)學全在線網站www.med126.com
3．雞胚培養(yǎng)用受精孵化的活雞胚培養(yǎng)病毒比用動物更加經濟簡便。根據病毒的特性可分別接種在雞胚絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黃囊、腦內或靜脈內，如有病毒增殖，則雞胚發(fā)生異常變化或羊水、尿囊液出現(xiàn)紅細胞凝集現(xiàn)象，常用于流感病毒及腮腺炎病毒等的分離培養(yǎng)；但很多病毒在雞胚中不生長。
