雜交瘤（Hybidoma)合成單克隆抗體（Monoclonal Antibodies,McAb)是近年來生物醫(yī)學(xué)中的一項重大突破。從根本上解決了免疫學(xué)中長期存在的“特異性”和“重復(fù)性”問題，在短短的幾年里，在許多不同科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)發(fā)揮了巨大作用。
單克隆抗體技術(shù)是在1975年由Kohler和Milstein首創(chuàng)的，他們在60年代發(fā)展起來的細(xì)胞雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上，成功地把兩種細(xì)胞融合在一起，一種是已適應(yīng)體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞（都來自BALB/C品系的小鼠)和一種經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這種融合的雜交細(xì)胞兼有兩個親代細(xì)胞的特征，即既有骨髓瘤細(xì)胞無限生長的能力，又有漿細(xì)胞合成單一抗體的能力。因此，這種免疫細(xì)胞通過克隆化，成為單克隆系（單一純化的無性繁殖細(xì)胞系)，就能產(chǎn)生大量單一類型的高純度抗體，這種抗體就叫作“單克隆抗體”，如果把雜交細(xì)胞再種入動物體內(nèi)，可形成“雜交細(xì)胞瘤”，瘤子產(chǎn)生大量抗體，就可以從動物體液中抽出含有單克隆抗體的體液，把這種雜交細(xì)胞在體外培養(yǎng)，培養(yǎng)液中就有大量的單克隆抗體，可供實驗研究和臨床研究使用。
目前，雜交瘤單克隆護(hù)體的應(yīng)用范圍愈來愈廣泛，已經(jīng)深入到整個生物醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域，諸如生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、藥理學(xué)、病毒學(xué)、細(xì)菌學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、藥物學(xué)、血液病學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)等等。幾乎所有抗原物質(zhì)都可以應(yīng)用這項技術(shù)獲得針對單一抗原決定簇單克隆抗體。所以，可以說它是一把分子刀，用它可以剖析任何一種抗原物質(zhì)的細(xì)微結(jié)構(gòu)；它又是一種均質(zhì)的、高特異性的抗體，可用它研究免疫學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)和其他學(xué)科中各種復(fù)雜的現(xiàn)象，同時還可用于診斷各種疾病，包括惡性腫瘤；它又可當(dāng)作一種藥劑治療某些疾病，甚至腫瘤；還可以用于提純各種蛋白質(zhì)。
實驗動物在雜交瘤單克隆抗體技術(shù)中占有極為重要的作用。它是形成單克隆抗體的必須條件。正如Milstein指出：如果在理論上沒有克隆選擇學(xué)說，在技術(shù)上沒有細(xì)胞融合（Cell Fusion)和培養(yǎng)方法，在材料上沒有實驗性骨髓瘤和體外培養(yǎng)的髓瘤細(xì)胞，就不可能出現(xiàn)單克隆抗體。這充分說明了實驗動物和骨髓瘤細(xì)胞系在雜交瘤技術(shù)中的重要作用。
（一)小鼠BALB/C系
它是此技術(shù)中最常用的動物。目前用于細(xì)胞融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞幾乎都來源于BALB/C系小鼠。其雜交瘤可接種于BALB/C或它的雜交第1代小鼠，從帶瘤動物取血清或腹水制備單克隆抗體。
BALB/C系小鼠起源于Bagg從1913年開始維持的白化株（Albine stock)小鼠，Dowell從1923年開始作近交系培育，至1932年達(dá)26代，之后Snell將BALB加C即BALB/C，以前的近交歷史不清，繼之以Andervont為主，使BALB/C廣泛傳gydjdsj.org.cn/wszg/播和應(yīng)用。1973年美國NIH增培育到近交157代。毛色基因為AA、bb、cc(白色)。H-2為d型。亞系有：BALB/cCd,BALB/cJ,BALB/cAnN等。該品系小鼠的主要特性：
1．免疫學(xué)特性：易患慢性肺炎。多數(shù)個體于6月齡以后出現(xiàn)免疫球蛋白過多癥。主要是IgG1和IgA量的增加。免疫球蛋白的絕對量依飼養(yǎng)條件而異。腹腔注射礦物油后可引起漿細(xì)胞瘤。發(fā)生率0-60%，依亞系及gydjdsj.org.cn/pharm/飼養(yǎng)條件而異。較難誘發(fā)免疫耐受性。
2．生理學(xué)特性：血壓較高。網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)器官與體重之比較大。大部分雄鼠在20日齡出現(xiàn)脾臟淀粉樣性變。對放射線極度敏感。
3．癌發(fā)生率：乳腺癌發(fā)生率低（3%)，但對致癌因子敏感。腎上腺和肺常發(fā)生，雌鼠的肺癌發(fā)生率為21%，網(wǎng)狀細(xì)胞瘤為8%，血管瘤為6%，淋巴肉瘤為4.5%。
4．老化及壽命：老齡鼠出現(xiàn)心臟病和多發(fā)性動脈硬化癥。平均壽命雄鼠為569～648天，雌鼠561～816天。252日齡平均體重為雄鼠30克雌鼠28克。
5．對細(xì)菌及病毒反應(yīng)：該品系小鼠對鼠傷寒沙門氏菌C′5敏感，對麻疹病毒中度敏感。
6．飼養(yǎng)注意點：生育年齡長（至12月齡)，容易飼養(yǎng)繁殖，最適稍高溫度。為26-27℃因為體型較細(xì)，除了日常飼料外，每日早晚每只各喂1克白面包，每星期喂二次木魚（日本傳統(tǒng)加工食品)，稍肥后較易繁殖，根據(jù)我們的飼養(yǎng)經(jīng)驗每周加三次煮熟的雞蛋，效果很為滿意。該品系小鼠易患肺炎，最好不要和其它近交系小鼠同室飼養(yǎng)，不使其它近交系小鼠發(fā)病的環(huán)境病原菌易使BALB/C鼠患鼠。
（二)大鼠LOU（又稱LOU/Wsl)系
該品系可能來自Wistar大鼠，是1956年開始近親交配而形成的品系。約在一歲齡時，大鼠回盲部淋巴結(jié)產(chǎn)生一種自發(fā)性腫瘤，發(fā)展迅速，當(dāng)觸及腫瘤后的一個月內(nèi)死亡。此種腫瘤的發(fā)生率超過10%，形態(tài)為極低分化為淋巴細(xì)胞，稱之為大鼠回盲部免疫細(xì)胞瘤（Rat Ileocecal Immunoocytoma)，此種腫瘤移植于同系大鼠或其雜交第1代均易發(fā)生。
此種腫瘤約有60%病例合成單克隆性IgG或IgA，或K型Bence-Jones蛋白。未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生IgM。大鼠Y3-Ag1.2.3骨髓瘤細(xì)胞系是LOU系大鼠骨髓瘤體外培養(yǎng)所慕名而獲，故LOU系大鼠也適用于B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)。
LOU/C大鼠8月齡以上的雄鼠自發(fā)性漿細(xì)胞瘤發(fā)生率為30%，而雌鼠為16%，常發(fā)生在回腸淋巴結(jié)，其中60%的這種漿細(xì)胞瘤合成單克隆免疫球蛋白IgG1(35%)、IgE(36%)或IgA。LOU/C與LOU/M的組織相溶性相同，可以互相接種進(jìn)行皮膚移植。
雙特異性單克隆抗體（BSMCA)的研究，是項國劍橋大學(xué)分子生物學(xué)實驗室Milstein博士（單克隆抗體技術(shù)創(chuàng)始人之一)正在進(jìn)行的研究，國際上剛開始，制備雙特異性單克隆抗體就必須要使用LOU大鼠。同時，用LOU大鼠制備單克隆抗體其腹水產(chǎn)量比用BALB/C小鼠大幾十倍，能較好地解決單克隆抗體的大量制備。雙特異性單克隆抗體技術(shù)和雜交～雜瘤技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的新進(jìn)展，BSMCA可代替交聯(lián)劑，代替酶標(biāo)技術(shù)，在免疫組化和免疫測定技術(shù)有廣泛的應(yīng)用價值，在癌癥的導(dǎo)向治療和體外免疫掃描診斷上有廣闊的應(yīng)用前景。
（一)自發(fā)性骨髓瘤
根據(jù)報導(dǎo)能合成免疫球蛋白的腫瘤存在于狗、馬、地鼠、大鼠和小鼠。除大鼠、小鼠外，這類腫瘤在其它動物僅偶然發(fā)現(xiàn)，故未能廣泛用于研究。在小鼠中，與Ig產(chǎn)生相關(guān)聯(lián)的腫瘤包括漿細(xì)胞瘤（骨髓瘤)和淋巴瘤。這些腫瘤能分泌Ig或有Ig結(jié)合在在細(xì)胞表面，或分泌與表面結(jié)合同時存在。至今研究最廣泛的、能產(chǎn)生Ig的小鼠腫瘤為漿細(xì)胞瘤。其來源為單克隆性，幾乎每一種漿細(xì)胞瘤細(xì)胞都只產(chǎn)生一種Ig分子，含有相同的輕鏈和重鏈。小鼠自發(fā)性漿細(xì)胞瘤最常發(fā)生于回盲部粘膜固有層，伴有粘膜潰瘍和粘膜下炎癥。晚期腫瘤轉(zhuǎn)移至腸系膜淋巴結(jié)。Pilgrim系統(tǒng)研究了125例小鼠回盲部漿細(xì)胞瘤，診斷依據(jù)是在回首部有形態(tài)異常的漿細(xì)胞。此種腫瘤一般難以移植成功。據(jù)報導(dǎo)，已建成的移植性瘤株有：產(chǎn)生IgG的×5563，產(chǎn)生IgA的×5647、SPCI和DPCI（均來源于C3H/He小鼠)及YPCI（來源于BALB/CXA的F1雜交小鼠)。
（二)誘發(fā)性骨髓瘤
1959年Mervin首先報導(dǎo)BALB/C小鼠誘發(fā)性漿細(xì)胞瘤是將裝有C3H小鼠乳腺癌組織的微孔擴散盒植入小鼠腹腔，6個月后在腹膜下結(jié)蹄組織的發(fā)生漿細(xì)胞瘤或纖維肉瘤并有出血性腹水。后來發(fā)現(xiàn)，BALB/C小鼠腹腔注入Freund 佐劑可誘發(fā)漿細(xì)胞瘤，只注射礦物油也可誘發(fā)漿細(xì)胞瘤。1962年P(guān)otter報導(dǎo)，小鼠腹腔注入礦物油0.5毫升，兩個月1次，共3次，40～60%雌鼠可誘發(fā)漿細(xì)胞瘤。其誘發(fā)可能與多種因素有關(guān)，最重要的是遺傳因素。BALB/C小鼠有獨特的敏感性，漿細(xì)胞瘤誘發(fā)率很高，其它純系小鼠如DBA/2、A/He、A/LN、C57BL/He、C57BL/Ka、C3H/He等，注射礦物油或植入擴散盒僅偶見誘發(fā)漿細(xì)胞瘤。NZB小鼠可能和BALB/C系小鼠一樣敏感，但由于動物死于其它原因，誘發(fā)率通常較低。BALB/C與其它品系小鼠雜交的第1代，注射礦物油的誘發(fā)率一般很低，但例外的是（BALB/C×NZB)F1的誘發(fā)率高達(dá)60%。另一有關(guān)因素是激素，BALB/C小鼠注射礦物油時，雄性鼠誘發(fā)率比雌鼠高。雌鼠注射睪丸酮可提高誘發(fā)率，注射孕酮、雌二醇、皮質(zhì)醇則可抑制漿細(xì)胞瘤發(fā)生。注射純的鏈烷化合物Pristane（2，6，10，14-四甲基十五烷)可以在BALB/C小鼠誘發(fā)漿細(xì)胞瘤。1983年P(guān)otter報導(dǎo)，漿細(xì)胞瘤的誘發(fā)率大致和注射Pristane的量成正比，注射總量為1.5毫升（分三次注射，每次0.5毫升)的誘發(fā)率為61%；劑時1毫升（一次注射)的誘發(fā)率為42%，1毫升分兩次注射的誘發(fā)率為39%；一次注射0.5毫升的誘發(fā)率僅為22%。鼠齡對誘發(fā)率也有影響，比較2個月、8個月和1年齡的動物，其誘發(fā)率以1年鼠齡動物最低。
淋巴細(xì)胞雜交瘤（Lymphocytic Hybridoma)技術(shù)需要骨髓細(xì)胞系（Myeloma Cell Line)。在淋巴細(xì)胞融合技術(shù)中，理想的骨髓瘤細(xì)胞系應(yīng)能獲得高融合率，并得到產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤。有些骨髓瘤細(xì)胞系不僅融合率不高，而且本身分泌免疫球蛋白（Ig)，致使雜交瘤細(xì)胞仍分泌親系骨髓瘤的Ig鏈。據(jù)估計，細(xì)胞融合時，在兩種重鏈和兩種輕鏈隨機組合的情況下，得到的雜交瘤可能產(chǎn)生10種Ig分子，特異性抗體只占其總量的1/16。為了得到只分泌特異性抗體的雜交瘤，需選擇本身不產(chǎn)生Ig的骨髓瘤細(xì)胞系。其次，適用的骨髓瘤細(xì)胞系應(yīng)對8-氮雜鳥嘌呤（8-azaguanine,8-AG)或6-硫鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG)有抗藥性，缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Hypoxanthineguanine Phosporibosyl Transferase,HGPRT)，不能利用外源性次黃嘌呤（H)，在含HAT（次黃嘌呤Aypoxanthine，氨基蝶呤Aminopterin，胸腺嘧啶核苷Thymidine)的培育液中死亡。
現(xiàn)已建立的用于B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的小鼠和大鼠的骨髓細(xì)胞系有下列幾種
（一)小鼠骨髓瘤細(xì)胞系
1．小鼠P3-NS1/1-Ag4-1(1976年kohler)。是常用的骨髓瘤細(xì)胞系，來源NS1/1是小鼠骨髓瘤P3（MOPC21)細(xì)胞系的亞系，P3細(xì)胞分泌IgG1(K)。NS1/1細(xì)胞不合成重鏈（rl)，只合成而不分泌輕鏈（K).P3-NS1/1-Ag4-1是NS1/1的亞系，抗8-Ag(20μg/ml)，在HAT培養(yǎng)液中死亡。
2．小鼠P3-X63-Ag8。是Kohler和Milstein首次獲得產(chǎn)生McAb雜交瘤所用的骨髓瘤細(xì)胞系。來源：它來自BALB/c小鼠的P3（MOPC21)骨髓瘤細(xì)胞系，分泌IgG1(K),抗8-AG（20μg/ml)，在HAT培養(yǎng)液中不生長。
3．小鼠P3-X63-Ag8.653(1979年Kearney)。是P3-X63-Ag8的亞克隆，不可逆地喪失表達(dá)免疫球蛋白rl重鏈和K輕鏈的能力，其生長特性、融合率及所產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞系的穩(wěn)定性等方面均可與PS-X63-Ag8或P3-NS1/1-Ag4-1相比擬。
4．小鼠P3-X63-Ag8-U1（1980年Sharon)。是P3-X63-Ag8骨髓瘤細(xì)胞系的變系。P3-X63-Ag8分泌重鏈（rl)和輕鏈（K)，P3-NS1/1-Ag4-1則只合成而不分泌輕鏈（K)。
5．小鼠SP2/O-Ag14（1978年Shulman)。Kohler等將PS-X63-Ag8骨髓瘤細(xì)胞系與具有抗綿羊紅細(xì)胞活性、產(chǎn)生r2b重鏈和K輕鏈的BALB/c小鼠脾細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞系Sp2/HLGK，從后者得到的Sp2/HL-Ag進(jìn)行再克隆，得到Sp2-Ag14。它抗8-AG，在HAT培養(yǎng)液中死亡，不分泌Ig鏈，其細(xì)胞含有約73個染色體，比P3-X63-Ag8骨髓瘤細(xì)胞系多8個染色體，用其融合得到的雜交瘤數(shù)與P3-X63-Ag8相似。
6．小鼠45.6TG1.7（1976年Margulies )。來源于小鼠MPC-11骨髓瘤，分泌重鏈（r2b)和輕鏈（k)，抗6-TG（5μg/ml),在HAT培養(yǎng)液中死亡。
7．小鼠45.6TG1.7.5(1980年Sharon)。是45.6TG1.7骨髓瘤細(xì)胞系的亞系。
8．小鼠PuBul-Ou(1976年Kohler)。是分泌IgG2a（k)的骨髓瘤細(xì)胞系，對哇巴因（Ouabain)抗藥。
（二)大鼠骨髓瘤細(xì)胞系
在細(xì)胞融合技術(shù)中，使用大鼠骨髓瘤細(xì)胞系的優(yōu)點是，從帶瘤大鼠得到的血清和腹水量約比小鼠高10倍，適于大量生產(chǎn)McAb或同種異型的抗大鼠抗體。
1．大鼠Y3-Ag1.2.3（1979年Galfre)。Lou系大鼠的骨髓瘤經(jīng)體外培養(yǎng)獲得的細(xì)胞系R210，從它得到抗8-AG的亞系210·RCr3.Agl（分泌k輕鏈)，后者經(jīng)兩次克隆，選獲Y3-Ag1.2.3。它經(jīng)5個月連續(xù)培養(yǎng)后，與脾細(xì)胞的融合率可達(dá)到小鼠髓瘤細(xì)胞系的水平。在顯微鏡下，Y3-Ag1.2.3系及其雜交瘤細(xì)胞比小鼠P3-X63-Ag8骨髓瘤細(xì)胞要小的多。它在OMM培養(yǎng)液（含5%胎牛血清)生長良好，在軟瓊脂易產(chǎn)生克隆。Y3-Ag1.2.3及其雜交瘤所產(chǎn)生的克隆，細(xì)胞分布較分散，不象小鼠×小鼠雜交瘤的克隆細(xì)胞密集。用它與DA系大鼠脾細(xì)胞融合，獲得抗小鼠IgG的大鼠McAb。其雜交瘤YAZ/4OH（LK)細(xì)胞接種在（LOU×DA)F1大鼠可以產(chǎn)生腫瘤，帶瘤大鼠血清中抗體含量為10～15mg/ml。因此認(rèn)為210.RCY3-Ag1.2.3是適用于大鼠×大鼠細(xì)胞融合的骨髓瘤細(xì)胞系。
2．大鼠YB2/o（1982和Kilmaruin)。此細(xì)胞系不分泌k輕鏈。將YB2/o及Y3-Ag1.2.3分別與經(jīng)酵母微管蛋白免疫的大鼠脾細(xì)胞融合，結(jié)果證明兩者均適用作細(xì)胞融合的親系，而且YB2/O產(chǎn)生的雜交瘤不分泌骨髓瘤的抗體鏈。接種雜交瘤的大鼠血清滴度可達(dá)1：106。
