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臨床生物化學(xué):第二節(jié) 臨床診斷中常用的血清酶類及其同工酶

上一節(jié)介紹了血清中酶濃度變化的機(jī)制以及在判斷血清中酶測(cè)定結(jié)果的意義時(shí)必須注意的一些事項(xiàng),但在具體應(yīng)用各種酶測(cè)定來(lái)診斷疾病時(shí),還各有其特點(diǎn)。臨床醫(yī)師多從疾病出發(fā),將酶測(cè)定結(jié)果和其它各種檢查結(jié)果綜合起來(lái),分清主次,辨證地加以應(yīng)用;對(duì)一個(gè)檢驗(yàn)醫(yī)師而言,單從…

上一節(jié)介紹了血清中酶濃度變化的機(jī)制以及在判斷血清中酶測(cè)定結(jié)果的意義時(shí)必須注意的一些事項(xiàng),但在具體應(yīng)用各種酶測(cè)定來(lái)診斷疾病時(shí),還各有其特點(diǎn)。

臨床醫(yī)師多從疾病出發(fā),將酶測(cè)定結(jié)果和其它各種檢查結(jié)果綜合起來(lái),分清主次,辨證地加以應(yīng)用;對(duì)一個(gè)檢驗(yàn)醫(yī)師而言,單從這方面考慮顯然是不夠的,還應(yīng)對(duì)具體每個(gè)酶有一個(gè)較全面的了解,這樣才能為臨床提供咨詢,解釋好各項(xiàng)測(cè)定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本節(jié)以常用的具體酶為中心,系統(tǒng)介紹該酶在臨床論斷中的應(yīng)用,包括該酶的作用、性質(zhì)特點(diǎn)、組織分布與其臨床應(yīng)用價(jià)值。

一、肌酸激酶(CK)及其同工酶

肌酸激酶(CK)催化下列反應(yīng):

以前臨床常習(xí)慣將此酶稱為肌酸磷酸激酶(CPK),此名稱不確切,目前國(guó)外已摒棄不用。此反應(yīng)逆向反應(yīng)速度約為正向反應(yīng)速度6倍,與大多數(shù)激酶一樣,Mg2+為它的輔基,需雙硫鍵維持酶的分子結(jié)構(gòu)。測(cè)定酶活性時(shí)必須加入巰基化合物,N-乙酰半胱氨酸(NAC)是目前最常用的激活劑。

CK作用生成的磷酸肌酸含高能磷酸鍵,是肌肉收縮時(shí)能量的直接來(lái)源,在3種肌組織和腦組織中含量最高。

CK是由兩種不同亞基(M和B)組成的二聚體,這樣正常人體組織常含3種同工酶,按電泳速率快慢順序分別為:CK-BB(CK1),CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。

除細(xì)胞質(zhì)外,在心肌、骨骼肌和腦等組織細(xì)胞的線粒體內(nèi)還存在另一種結(jié)構(gòu)不同的CK,它也是二聚體,常簡(jiǎn)寫為CK-MiMi,電泳時(shí)速度最慢,故命名為CK4

【組織分布】

CK主要存在于骨骼肌、心肌、腦組織中,此外還存在于一些含平滑肌的器官如胃腸道,子宮內(nèi)。而在肝、紅細(xì)胞中含量極微或者沒(méi)有。

骨骼肌無(wú)論在每克組織含量(328U/G濕重)還是絕對(duì)含量上都大大超過(guò)其它組織和器官。其中主要為CK-MM,不含CK-BB,僅有少量CK-MB(<3%)。心肌中CK雖只有骨骼肌的1/10(313U/G濕重),但CK-MB占CK總量的14%-42%,這在人體中是絕無(wú)僅有的。腦組織以及其中含平滑肌器官中的CK則幾乎全部是CK-BB,它同時(shí)也是人胚胎中CK的主要存在形式。

【生理變異】

年齡、性別和種族對(duì)CK含量都有一定影響。

新生兒CK常為正常成年人的2-3倍?赡芘c分娩時(shí)骨骼肌損傷和缺氧有關(guān),過(guò)6-10周可逐步下降接近成年人值。

CK含量和肌肉運(yùn)動(dòng)密切相關(guān),其量和人體肌肉總量有關(guān),男性參考值高于女性可能與這點(diǎn)有聯(lián)系。國(guó)外調(diào)查,白種男性CK均值只為黑種人的66%,可能與種族有關(guān),但也不排除兩個(gè)人種之間體力勞動(dòng)的差別。

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

雖然紅細(xì)胞中不含CK,但含有大量腺苷酸激酶(AK),目前常用的測(cè)CK的酶偶聯(lián)法的反應(yīng)體系中含有ADP。AK催化下列反應(yīng):

生成的ATP在指示酶6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下,可使NAD+生成NADH,340nm處吸光度升高,引起CK人為地升高。為去除AK的干擾,不少試劑盒中加入AK的抑制劑二腺苷-5-磷酸(DAPP)和AMP。但也有些試劑中未加入DAPP,此時(shí)溶血標(biāo)本將產(chǎn)生明顯干擾。

肝素外,其它常用抗凝劑都能抑制CK活性。如不能及時(shí)測(cè)定,可將血清放冰箱貯存,-20℃中可長(zhǎng)期保存。

【參考值范圍】

成年男性參考上限為180U/L(37℃),女性為130U/L(37℃)。

正常血清中用電泳法查不到CK-BB,CK-MB不超過(guò)5%,如用免疫法測(cè)CK同工酶,依方法不同結(jié)果有異,可參考有關(guān)文獻(xiàn)。

【臨床應(yīng)用】

CK及其同工酶是目前世界上臨床測(cè)定次數(shù)最多的酶,80年代初期統(tǒng)計(jì)分別達(dá)一億次和一千萬(wàn)次。這是因?yàn)镃K在骨骼肌、心肌和腦疾患時(shí)常明顯升高,如同時(shí)測(cè)定同工酶還有助于疾病的鑒別診斷。表7-4是各種疾病時(shí)CK的變化。

此酶測(cè)定主要用于早期診斷AMI和判斷溶栓治療的療效以及判斷疾病預(yù)后,特別在無(wú)Q波型AMI,此時(shí)心電圖無(wú)Q波變化,常需其它檢查來(lái)協(xié)助臨床醫(yī)師診斷和鑒別診斷AMI。目前有些國(guó)外學(xué)者認(rèn)為在診斷AMI不需要同時(shí)作許多酶,只要單測(cè)CK一項(xiàng)即可。這是因?yàn)椋?/p>

⑴心肌細(xì)胞含有大量CK:按每克組織含酶量計(jì)算,CK超過(guò)天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST,即谷草轉(zhuǎn)氨酶)和乳酸脫氫酶(LD)等。所以當(dāng)發(fā)生AMI、心肌細(xì)胞壞死時(shí),釋放出來(lái)的CK量超過(guò)其它酶。

⑵CK由于分子量不大,而且大量存在于胞質(zhì)中,所以在各種酶中最早進(jìn)入血液:一般在AMI后4-8小時(shí)就可能超過(guò)參考值上限。LD由于分子量大(約為125000),故增高明顯遲于其它酶。同樣線粒體中的酶,如線粒體AST在血中濃度升高明顯推遲。

表7-4 總CK和CK同工酶在疾病時(shí)的變化

疾病總CKCK同工酶
急性心肌梗死(AMI)常用酶中CK增高最早(4-8h),24h達(dá)峰值,2-3d恢復(fù)正常,中度升高,常在3000U/L以下診斷AMI“金標(biāo)準(zhǔn)”(>6%),增高稍早于總CK(?),2-3天恢復(fù)正常
心肌炎(病毒性,風(fēng)濕性)急性期輕度升高,可達(dá)5倍正常上限CK-MB可增高
心導(dǎo)管,冠狀動(dòng)脈造影可有中度升高一般無(wú)變化
運(yùn)動(dòng)試驗(yàn))可輕度升高CK-MB正常
肌肉損傷(挫傷、手術(shù),肌注藥物、癲癇、酒精和毒素中毒,過(guò)度運(yùn)動(dòng))升高程度和損傷程度有關(guān),嚴(yán)重病例可達(dá)10000U/L以上,肌注藥物引起CK升高,一般不超過(guò)正常上限2倍,持續(xù)不超過(guò)一天主要為CK-MM升高,CK-MB絕對(duì)值雖可升高,但百分比<6%
肌萎縮(Duchenne和Becker型)有癥狀患者CK可達(dá)50倍正常上限,女性攜帶者CK可為3-6倍正常上限,可查CK以篩選攜帶者有些患者也可出現(xiàn)CK-MB升高
多發(fā)性肌炎與肌炎CK明顯增高主要為CK-MM
神經(jīng)性肌肉疾患CK正常無(wú)變化
腦血管意外(腦出血,腦血栓)部分患者血中和CSF中CK升高CK-BB可增高
惡性腫瘤約10%病例CK-BB升高
甲狀腺功能低下可高達(dá)50倍正常上限主要累及CK-MM
Reye綜合征明顯升高可在達(dá)70倍正常上限主要為CK-MM
臥床患者程度不等地下降主要為CK-MM
甲狀腺功能亢進(jìn)程度不等地下降主要為CK-MM
激素治療個(gè)別患者可下降主要為CK-MM
Ⅰ型巨CK血癥電泳位于CK-MB和CK-MM之間可能是CK和IgA,或IgG復(fù)合物
Ⅱ型巨CK血癥電泳位于CK-MM后面,為線粒體CK和其聚合體

(3)由于CK主要存在于肌肉組織中,其它臟器如肝、腎、血細(xì)胞中含量極微:在診斷AMI時(shí),其特異性遠(yuǎn)比一般代謝酶如LD、AST等為高,特別是溶血標(biāo)本對(duì)CK測(cè)定結(jié)果影響較小。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外使用動(dòng)態(tài)法測(cè)定酶活性,大大提高了CK測(cè)定的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,并且可以在很短時(shí)間(約5分鐘)測(cè)定完畢,特別適合于急診患者。但CK測(cè)定的局限性也很明顯,由于CK大量存在于3種肌肉組織中,尤其是骨骼肌中CK含量不論按濃度含量或按全身總量計(jì)算都大大超過(guò)心肌。因此骨骼肌局部或全身疾病都很容易引起血中總CK活性升高。血CK的極度增高主要見(jiàn)于全身疾病。曾有一例橫紋肌溶解癥患者,血中CK含量高達(dá)100000U/L,而在AMI時(shí),就是大面積梗死,血中CK含量也很少超過(guò)3000U/L。肌注某些藥物也可能引起CK一過(guò)性升高,但一般不超過(guò)正常上限值的2倍,持續(xù)時(shí)間不超過(guò)1天。因此國(guó)外有些醫(yī)院將CK參考值上限的2倍作為診斷AMI的判斷值,以減少假陽(yáng)性。盡管CK測(cè)定診斷AMI的靈敏度很高,但特異性卻明顯偏低,其假陽(yáng)性率達(dá)15%-30%。CK在體內(nèi)的半壽期明顯比其它酶短,心肌組織一次梗死后,CK急劇升高并很快恢復(fù)正常(48-72小時(shí)),這樣在亞急性心肌梗死時(shí)CK可能正常,但其它酶如AST,特別是LD很可能居高不下。

以往對(duì)CK診斷AMI常強(qiáng)調(diào)下列幾點(diǎn):①AMI發(fā)病后8小時(shí)內(nèi)查血CK不高,不應(yīng)輕易除外AMI診斷,并以此結(jié)果作為基礎(chǔ)值,和以后測(cè)定值作比較,任何懷疑AMI者應(yīng)盡早抽血送檢;②發(fā)病后24小時(shí)CK測(cè)定結(jié)果臨床意義最大,因?yàn)榇藭r(shí)正當(dāng)CK的峰值時(shí)間,如不超過(guò)正常值上限可排除AMI診斷;③發(fā)病后48小時(shí)內(nèi)應(yīng)多次測(cè)CK活性,如不出現(xiàn)一個(gè)典型升高和下降的過(guò)程,應(yīng)懷疑AMI的診斷。

近年文獻(xiàn)指出,某些AMI患者血中CK可以不超過(guò)正常值,特別是不超過(guò)參考值上限的2倍,這些病例又多見(jiàn)于無(wú)Q波心肌梗死。長(zhǎng)期以來(lái)認(rèn)為CK峰值高低對(duì)AMI預(yù)后判斷有一定價(jià)值。

CK-MB由于大量存在于心肌組織中,其它組織和器官中含量很少,所以CK-MB是目前診斷AMI的一個(gè)極其可靠的生化指標(biāo),特異性可達(dá)95%乃至更高。一般認(rèn)為其靈敏度比CK總活性稍差,但也有文獻(xiàn)報(bào)道,約有12.5%AMI患者總CK不高,但CK-MB超過(guò)正常。

CK-MB測(cè)定方法和試劑盒很多,同一標(biāo)本不同實(shí)驗(yàn)室往往結(jié)果不同。從測(cè)定原理來(lái)分,可分為測(cè)酶活性與酶質(zhì)量?jī)纱箢惙椒。第一類方法先用物理、化學(xué)和免疫等各種手段將CK-MB和其它同工酶分開(kāi),然后根據(jù)酶的催化活性測(cè)CK-MB濃度,用活性單位/升(U/L)或百分比報(bào)告結(jié)果。測(cè)酶質(zhì)量方法則是利用CK-MB的抗原性,根據(jù)抗原抗體反應(yīng)測(cè)CK-MB酶蛋白濃度,單位為μg/L。兩者結(jié)果有時(shí)不一致,因?yàn)槿缑缸冃允Щ畹员A艨乖裕藭r(shí)用測(cè)酶活性的方法結(jié)果不高,但用測(cè)質(zhì)量方法可以增高。80年代早期德國(guó)學(xué)者根據(jù)此結(jié)果認(rèn)為AMI患者血中存在著滅活的CK。但最近用改進(jìn)方法測(cè)CK-MB,發(fā)現(xiàn)兩法差異不大。國(guó)內(nèi)普遍使用測(cè)酶活性方法,目前較多使用電泳方法分離CK-MB。電泳法特點(diǎn)是準(zhǔn)確可靠,當(dāng)出現(xiàn)一些異常同工酶如巨CKⅠ、巨CKⅡ等,從電泳圖譜上很容易發(fā)現(xiàn),并可通過(guò)光密度計(jì)進(jìn)行定量測(cè)定,不會(huì)將CK-BB和各種異常同工酶誤認(rèn)為是CK-MB而誤診。其主要缺點(diǎn)是靈敏度較差。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)一些單位用免疫抑制法測(cè)CK-MB,其原理為抗M亞單位的抗血清可以和CK-MM及CK-MB中的M亞單位形成抗原抗體復(fù)合物,從而完全抑制M亞單位的酶活性,因?yàn)檎Q逯袔缀鯚o(wú)CK-BB,故將此值乘以2可以認(rèn)為大致代表CK-MB的活性。此法簡(jiǎn)單迅速,缺點(diǎn)是特異性差,如患者血清中還存在著CK-BB或者異常CK時(shí),都將出現(xiàn)假陽(yáng)性。故可作為過(guò)篩試驗(yàn),如有疑問(wèn)時(shí)用電泳法核實(shí)。另外此法正常值明顯高于其它方法。如Sclavo公司試劑盒的正常值為18U/L,而電泳等其它方法都是<5U/L。有人認(rèn)為這是因?yàn)镃K-MM還可以進(jìn)一步分為若干亞型,一般抗MM血清對(duì)MM3抑制較好,但對(duì)MM1抑制較差,而正常情況下血中MM亞型的存在以MM1為主,故導(dǎo)致正常值明顯偏高。AMI第一天血中以MM3為主,但第二天以后則以MM1為主,因此使用此類方法診斷AMI和解釋結(jié)果時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。

國(guó)外從80年代初建立了多種測(cè)CK-MB酶質(zhì)量的方法。應(yīng)用最多的是美國(guó)Hybriteeh公司的ELISA方法,正常人在5μg/L以下,此法結(jié)果和電泳法相關(guān)良好。缺點(diǎn)是測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)達(dá)半天,只適合成批標(biāo)本。近兩年來(lái)應(yīng)用單克隆技術(shù)制備出特異性極高的只和CK-MB作用的抗血清,并已有多種試劑盒供應(yīng)。最近Deerson以CK-MB≥10μg/L以及CK-MB指數(shù)≥3.0(μg/UCK×100)為AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)。CK-MB單克隆抗體方法簡(jiǎn)單,特異性高,是目前重點(diǎn)發(fā)展的方法,近來(lái)有人認(rèn)為此法有助于不穩(wěn)定型心絞痛的診斷,可惜國(guó)內(nèi)應(yīng)用不多。

CK-MB的局限性在于骨骼肌損傷時(shí)也可能釋放出一定量的CK-MB。雖一般認(rèn)為骨骼肌含有的CK-MB在總CK中不超過(guò)5%,但也有例外。Evans報(bào)道1例橫紋肌肉瘤的CK-MB高達(dá)274U/L,占總CK的28%。因此當(dāng)CK-MB增高時(shí),臨床也應(yīng)考慮有無(wú)非心肌來(lái)源的可能性。

骨骼肌中有大量CK,所以CK明顯升高(3000U/L)大都見(jiàn)于肌肉疾病。此時(shí)CK測(cè)定用于鑒別肌萎縮病因,如Duchenne型和Becker型肌萎縮患者,常在臨床前期血中CK就可中度和高度增加。該病是伴性遺傳,在75%女性Duchenne型肌萎縮攜帶者和50%女性Becker型肌萎縮攜帶者血中也可查到CK升高。此外各種原因(病毒,細(xì)菌和寄生蟲(chóng))引起的肌肉感染性疾病都能引起CK升高。但由于神經(jīng)疾病引起的肌萎縮癥,CK常不增高。

腦中雖含有較大量CK,腦血管意義時(shí)有大量CK釋放入組織間隙,但由于血腦屏障存在,只能在部分病例中查到血中和腦脊液中CK升高,以及出現(xiàn)CK-BB,但陽(yáng)性率不高,這妨礙了CK在這方面的臨床應(yīng)用。

人胚胎期主要為CK-BB,有人根據(jù)“癌胚”理論,提出CK-BB可作為腫瘤標(biāo)記物,可惜的是陽(yáng)性率不高,只占惡性腫瘤的10%左右。

二、乳酸脫氫酶(LD)及其同工酶

乳酸脫氫酶(LD)酶催化下列反應(yīng):

不同方法測(cè)出LD結(jié)果差異較大,這是因?yàn)長(zhǎng)D有5種不同的同工酶,每種同工酶的最適反應(yīng)條件不同。例如同為催化乳酸變?yōu)楸,LD1的最適pH為9.8,而LD5的最適pH為8.8。很難找出一個(gè)測(cè)定血清總LD的最適條件,檢驗(yàn)醫(yī)師在解釋測(cè)定結(jié)果時(shí)應(yīng)加以注意。

LD催化反應(yīng)是無(wú)氧糖酵解的最終反應(yīng),廣泛存在于人體各組織中,故測(cè)總酶臨床意義不大,但LD是由兩種不同亞基(M,H)組成的四聚體,形成5種結(jié)構(gòu)不同的同工酶,其中H型亞基中酸性氨基酸較多,電泳時(shí)負(fù)電荷多,因此電泳速率較快。按電泳向陽(yáng)極泳動(dòng)快慢,分別命名為L(zhǎng)D1(H4),LD2(H3M),LD3(H2M2),LD4(HM3)和LD5(M4)。

【組織分布】

LD雖廣泛存在于人體各組織中,但是不同組織中同工酶組成有差異,大致可分為三類:一類以LD1為主,心肌為此類代表,LD可占總酶活性50%以上,此外有紅細(xì)胞等。另一類以LD5為主,以橫紋肌為代表,此外有肝臟等。第三類以LD3為主,脾、肺為此類代表。LD主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,線粒體中未查到。

【生理變異】

血清LD高低和性別關(guān)系不大,嬰兒酶活性可達(dá)成年人兩倍,兒童和少年活性比成年人高10%-15%,血清LD同工酶目前常用電泳法測(cè)定,由于具體方法差異,各學(xué)者報(bào)告的結(jié)果出入較大,但在成年人存在著如下規(guī)律:LD2>LD1>LD3>LD4>LD5,值得注意的是有學(xué)者報(bào)告,部分正常兒童血中LD1可大于LD2。

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

由于血小板中也含大量LD,血清中和血漿所測(cè)LD有一定差異,一般都選用血清為測(cè)定標(biāo)本,采血后應(yīng)迅速分離血清,因紅細(xì)胞中LD含量比血清高100倍以上,不宜用溶血血清為測(cè)定標(biāo)本。

LD尤其是LD4和LD5與其它酶不同,不是熱變性而是冷變性,在4℃貯存活性下降快于室溫25℃,一般說(shuō)25℃放2-3天LD活性變化不大,有條件者最好還是在采血后24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,標(biāo)本應(yīng)貯存于室溫。

【參考值范圍】

根據(jù)催化反應(yīng)方向的不同,有兩大類測(cè)LD方法,一大類為國(guó)際臨床化學(xué)協(xié)會(huì)(IFFC)推薦方法,以丙酮酸為底物,其參考值范圍為8www.med126.com0-500U/L(37℃);另一大類以乳酸為底物,在我國(guó)應(yīng)用較普遍,其參考值范圍為50-150U/L。

【臨床應(yīng)用】

LD及其同工酶是臨床上常用酶之一,尤其是LD同工酶和CK-MB是臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室最常測(cè)的兩種同工酶。臨床常用于診斷和鑒別診斷心、肝和骨骼肌的疾病。表7-5是LD及其同工酶在這些疾病時(shí)的變化情況。

表7-5 總LD和LD同工酶在疾病的變化

疾病總LDLD同工酶
AMI常測(cè)酶中,升高最慢(8-10h),但升高時(shí)間最長(zhǎng)(5-10d),峰值可達(dá)10倍正常上限LD1>LD2,并可持續(xù)到兩周(部分病例總LD正常)
充血性心衰,心肌炎可升高達(dá)5倍正常上限LD1>LD2
巨細(xì)胞性貧血可升高達(dá)5倍正常上限,治療正確迅速下降LD1>LD2
病毒性肝炎部分病例可升高達(dá)5倍正常上限LD5>LD4(部分病例總LD正常
肝硬化常輕度升高LD5明顯升高,LD5>LD4
原發(fā)性肝癌部分病例升高LD5明顯升高,LD5>LD4
梗阻性黃疸不定常LD4>LD5
肌肉損傷視損傷程度不同而異以LD5升高為主
肌萎縮可高達(dá)10倍正常上限以LD5為主
某些惡性腫瘤(白血病結(jié)腸癌……)可升高,個(gè)別病例高達(dá)5倍正常上限以LD3為主,LD3>LD1
變異某些病倒,電泳出現(xiàn)LD6,常顯示預(yù)后不佳

實(shí)用中此酶用于診斷AMI,特別是亞急性AMI。在AMI時(shí),LD由于分子量較大(125000),在常用酶中升高最遲,但其半壽期較長(zhǎng),增高持續(xù)時(shí)間可達(dá)5-10天,此時(shí)其它酶活性已恢復(fù)正常,在亞急性AMI診斷上有一定價(jià)值。可惜的是,LD總酶診斷AMI的特異性較差,很多其它疾病,此酶都升高。LD同工酶則不同,診斷特異性可達(dá)95%以上,僅次于CK-MB,甚至有學(xué)者認(rèn)為,只要測(cè)此二同工酶,不需作其它酶學(xué)檢查就可診斷AMI。LD同工酶的高特異性是因?yàn)槿梭w各組織器官中LD同工酶的分布情況并不相同,除心肌外,只有少數(shù)器官如紅細(xì)胞中的LD是以LD1為主,絕大多數(shù)的AMI患者血中的LD同工酶都可出現(xiàn)LD1>LD2變化,即所謂的“反轉(zhuǎn)”(flip)類型變化,其持續(xù)時(shí)間甚至可超過(guò)總LD升高時(shí)間,達(dá)兩周之久。臨床上可見(jiàn)部分患者在恢復(fù)期,所有酶活性都降至正常,但仍有“反轉(zhuǎn)”類型的LD同工酶變化,這些患者常有復(fù)發(fā)傾向,除AMI和心肌損傷,此種“反轉(zhuǎn)”類型變化還見(jiàn)于溶血性貧血和巨細(xì)胞性貧血,但此類疾病在臨床上不難與AMI相區(qū)分。

60年代臨床上曾經(jīng)用過(guò)所謂“α-羥丁酸脫氫酶”的測(cè)定來(lái)診斷AMI。實(shí)際上并不存在這種酶,所測(cè)的主要是LD1的活性,目前國(guó)外已較少測(cè)定此酶而改用更精確的測(cè)LD同工酶的方法。

其次,LD及其同工酶常用于肝臟疾病的診斷和鑒別診斷,由于肝細(xì)胞中主要為L(zhǎng)D1,在肝實(shí)質(zhì)病變時(shí)常出現(xiàn)LD5>LD4,但由于正常血清中LD5含量很少,不少病例就是出現(xiàn)同工酶異常LD5>LD4時(shí),總LD活性仍為正常,故LD同工酶檢查陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于總LD,一般在膽道疾患或梗性黃疸早期未累及肝實(shí)質(zhì)時(shí),不出現(xiàn)LD5>LD4,仍為L(zhǎng)D4>LD5。值得注意的是,在骨骼肌疾病和損傷時(shí),也會(huì)出現(xiàn)類似變化,臨床上診斷各型肌萎縮也常測(cè)定LD及LD同工酶,早期常為L(zhǎng)D5升高,但在晚期LD1和LD2也升高。

惡性腫瘤可由于腫瘤細(xì)胞惡性增長(zhǎng)和壞死而引起血清LD升高,如轉(zhuǎn)移到肝臟往往伴有LD4和LD5升高,此外一部分腫瘤,如白血病等常有LD3和LD4的增高。

三、氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT,AST)及其同工酶

氨基轉(zhuǎn)移是氨基酸代謝中基本生化反應(yīng)之一,在機(jī)體內(nèi)存在著多達(dá)60種氨基轉(zhuǎn)移酶,丙氨酸基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)是其中最重要的兩種。

ALT催化下列反應(yīng):

AST催化下列反應(yīng):

它們都需要磷酸吡哆醛(維生素B4)為輔基,不含磷酸吡哆醛的酶蛋白稱為脫輔基酶蛋白,沒(méi)有催化活性。血清除含有有活性的全酶外,還有部分不含磷酸吡哆醛的酶蛋白,如在測(cè)定前,先加入足量磷酸吡哆醛,所測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶活性常有明顯升高。

AST有兩種受不同基因控制的同工酶分別存在于細(xì)胞質(zhì)(c-AST)和線粒體(m-AST)中,而一般認(rèn)為ALT不存在同工酶,我國(guó)學(xué)者證實(shí)在人組織和血清中也存在類似AST的兩種同工酶,即細(xì)胞質(zhì)ALT(c-ALT)和線粒體ALT(m-ALT)。

【組織分布】

AST廣泛存在于多種器官中,按含量多少順序?yàn)樾呐K、肝、骨骼肌和腎,還有少量存在于胰腺、脾、肺及紅細(xì)胞中,肝中AST大部分(70%)存在于肝細(xì)胞線粒體中。

ALT也廣泛存在于多種器官中,含量最多的不是心臟,而是肝,順序?yàn)楦、腎、心、骨骼肌等,與AST相比,在各器官中含量都比AST少,肝中ALT絕大多數(shù)存在于細(xì)胞質(zhì)中,只有少量在線粒體中。

【生理變異】

此二酶生理變異較小,性別、年齡、進(jìn)食、適度運(yùn)動(dòng)對(duì)酶活性無(wú)明顯影響,每天雖有生理性波動(dòng),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表7-6 ALT和AST在疾病時(shí)的變化

疾病ALTASTAST/ALT
病毒性肝炎隨不同病期和嚴(yán)重程度而異,常明顯升高,可達(dá)10-100倍正常上限同ALT,但程度沒(méi)有ALT明顯,恢復(fù)到正常早于ALT<1.0
重癥肝炎不超過(guò)20倍正常上限,出現(xiàn)“肝疸分離”增高程度常超過(guò)ALT>1.0
肝硬化變化不定,常輕度增高同ALT,但增高程度常超過(guò)ALT>1.0
右心衰竭合并肝溢血正;蜉p度升高,個(gè)別可高達(dá)10倍正常上限增高程度常超過(guò)ALT>1.0
梗阻性黃疸變化不足,常不超過(guò)5倍正常上限同ALT不定,常<1.0
Gilbert綜合征無(wú)變化無(wú)變化
溶血性黃疸無(wú)變化無(wú)變化
AMI正;蜉p度升高明顯升高,與CK和LD相比,無(wú)何優(yōu)點(diǎn)>1.0
心肌炎正;蜉p度升高急性期可輕度升高>1.0
肌肉損傷正;蜉p度升高可高達(dá)2-5倍正常上限>1.0
肌萎縮明顯上升,可達(dá)8倍正常上限同ALT>1.0

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

紅細(xì)胞中AST和ALT分別為血清含量的15倍與7倍,所以明顯溶血標(biāo)本不宜測(cè)此二酶。

宜采用血清為測(cè)定標(biāo)本,此二酶在4℃冰箱中貯存一周,活性無(wú)明顯變化,最好不要冰凍,因?yàn)樵谌趦鰰r(shí)很容易破壞酶的活性。

【參考值范圍】

一般臨床使用方法中不加入磷酸吡哆醛,其參考值范圍較加入磷酸吡哆醛的為低,ALT為5-40U/L(37℃),AST為8-40U/L(37℃)。

【臨床應(yīng)用】

根據(jù)此二酶在人體器官中分布情況,臨床醫(yī)師習(xí)慣將ALT用在診斷肝臟疾病,測(cè)定AST診斷AMI。在AMI時(shí),不論在出現(xiàn)升高時(shí)間,還是升高持續(xù)時(shí)間,其變化介于CK和LD之間,無(wú)特殊價(jià)值,隨診斷AMI的新試驗(yàn)日益增多,國(guó)外已建議不用。ALT在AMI時(shí)一般不增高或輕度增高,明顯升高常說(shuō)明有右心衰竭合并肝淤血,m-AST變化比總酶更慢,但其增高程度與壞死病變程度密切相關(guān),是判斷AMI預(yù)后的一個(gè)很好指標(biāo)。

目前轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定主要用于肝膽疾病的診斷和鑒別診斷。ALT是我國(guó)目前測(cè)定次數(shù)最多的酶,假如能同時(shí)測(cè)定AST,并計(jì)算出文獻(xiàn)上常提到的Deritis比值,即AST/ALT之比,在診斷和鑒別診斷上將是很有用的。

(一)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)

以前常簡(jiǎn)稱GPT,近年來(lái)國(guó)外多以ALT為此酶縮寫。ALT是我國(guó)測(cè)定次數(shù)最多的酶,這是因?yàn)槲覈?guó)肝炎較多,而肝是含ALT最豐富的器官,且大部分存在于肝細(xì)胞的胞質(zhì)中。肝炎時(shí),細(xì)胞膜通透性增加,由于肝細(xì)胞中ALT濃度約比血清高7000倍,只要有1/1000的肝細(xì)胞中的ALT進(jìn)入血液就足以使血中ALT升高1倍,故此酶是肝損傷的一個(gè)很靈敏指標(biāo)。肝炎時(shí)早在黃疸前期就升高,峰值可達(dá)數(shù)千單位,為正常上限的百余倍。一般而言在急性肝炎時(shí),血清ALT活性高低與臨床病情輕重相平行,又由于ALT半壽期較長(zhǎng),往往是肝炎恢復(fù)期最后降至正常的酶,是判斷急性肝炎是否恢復(fù)的一個(gè)很好指標(biāo)。此外在慢性肝炎特別是慢性活動(dòng)性肝炎ALT也經(jīng)常升高。因此臨床醫(yī)師對(duì)急慢性肝炎患者經(jīng)常檢查ALT并據(jù)此診斷和判斷病情。

應(yīng)注意兩種情況,重癥肝炎時(shí)由于大量肝細(xì)胞壞死,此時(shí)血中ALT可僅輕度增高,臨終時(shí)常明顯下降,但膽紅素卻進(jìn)行性升高,即所謂的“膽酶分離”,常是肝壞死征兆。另一種情況是少數(shù)人血清中ALT長(zhǎng)期持續(xù)升高,肝穿無(wú)明顯病理改變,預(yù)后良好,對(duì)此現(xiàn)象目前仍在研究之中。

肝炎時(shí)ALT常有明顯變化,但不能反過(guò)來(lái)認(rèn)為凡ALT升高者就有肝炎,其它肝膽疾病如膽石癥、膽囊炎、肝癌和肝淤血時(shí)也可升高。由于肝臟以外不少器官也含有ALT,因此在AMI、多發(fā)性肌炎、急性腎盂腎炎等患者血中ALT也可升高,但一般而言,這些疾病ALT升高很少超過(guò)正常上限10倍,常以400U/L為界,超過(guò)此值絕大多數(shù)可診斷為肝炎。但也有例外,有人報(bào)告?zhèn)別肝淤血、膽石癥等患者可超過(guò)此界,但在這種情況時(shí),ALT變化往往很快,過(guò)幾天復(fù)查,ALT就可降至400U/L以下。

(二)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)

以前常簡(jiǎn)稱GOT,現(xiàn)多以AST為縮稱,既往認(rèn)為AST主要存在于心肌中,主要用于診斷AMI。但目前由于AST在AMI時(shí)升高遲于CK,恢復(fù)早于LD,故診斷AMI價(jià)值越來(lái)越小,國(guó)外不少學(xué)者認(rèn)為診斷AMI,完全可以不測(cè)AST。

另一方面肝中AST含量雖低于心肌,但絕對(duì)含量(U/mg)仍高于ALT。肝中AST和ALT含量比值約為2.5:1.0。只是由于ALT主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,AST主要存在于線粒體中,病變較輕的肝臟疾病如急性肝炎時(shí)血中ALT升高程度高于AST,但在慢性肝炎,特別是肝硬化時(shí),病變累及線粒體,此時(shí)AST升高程度超過(guò)ALT。故在國(guó)外對(duì)疑是肝炎患者常同時(shí)測(cè)AST和ALT,并計(jì)算AST/ALT比值,正常約為1.15,急性肝炎第1、2、3和4周分別為0.7、0.5、0.3和0.2。如比值有升高傾向,應(yīng)注意有無(wú)發(fā)展為慢性肝炎可能,慢性肝炎時(shí)可升到1.0以上,肝硬化時(shí)可達(dá)2.0,此比值對(duì)判斷肝炎的轉(zhuǎn)歸特別有價(jià)值。

四、堿性磷酸酶(ALP)

堿性磷酸酶(ALP)是指一組底物特異性很低,在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶,需要鎂和錳離子為激活劑。近年為認(rèn)為ALP真正作用是將底物中磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)含羥基基團(tuán)化合物上,磷酸乙醇胺有可能是ALP在體內(nèi)作用的底物。

ALP確切的生理作用目前仍不十分清楚,一般認(rèn)為骨中ALP和骨的鈣化作用密切相關(guān),成骨細(xì)胞中的ALP作用產(chǎn)生磷酸,與鈣生成磷酸鈣沉積于骨中。ALP還廣泛存在于肝細(xì)胞血竇側(cè)和膽小管膜上、腎近側(cè)曲管刷狀緣和小腸粘膜的微絨毛,據(jù)此推測(cè)它可能還與物質(zhì)的吸收和運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程有關(guān)。

各器官的ALP在理化性質(zhì)都有些差異,臨床上長(zhǎng)期認(rèn)為存在著肝、骨、小腸和胎盤等ALP,在病理時(shí)還可能出現(xiàn)“高分子”ALP,以及一些和腫瘤有關(guān)的變異ALP,如Regan、NagaoALP等。深一步研究發(fā)現(xiàn)這些ALP主要受3個(gè)基因位點(diǎn)控制,相應(yīng)生成3大類ALP,即小腸、胎盤和組織非特異ALP,后者包括臨床上所謂的骨、肝、腎等組織器官,它們的氨基酸結(jié)構(gòu)類似,抗原性無(wú)差別,這些酶電泳速率和對(duì)不同抑制劑反應(yīng)差異來(lái)自ALP中所含糖基的不同。

【組織分布】

ALP廣泛存在于機(jī)體各組織器官中,按每克濕組織ALP含量多少排列,順序?yàn)楦、腎、胎盤、小腸、骨等。

【生理變異】

總論中已經(jīng)提到ALP變化與年齡密切相關(guān),簡(jiǎn)言之,新生兒ALP略高于成年人,以后逐漸增高,在1-5歲有一次高峰,可達(dá)成年人上限2.5-5倍,以后下降,到兒童身長(zhǎng)增高期又再次上升,第二高峰在10-15歲之間,可達(dá)成人上限4-5倍。20歲后降至成年人值,到老年期又輕度升高,可能與生理性的激素變化有關(guān)。

孕婦血清ALP在妊娠3個(gè)月即開(kāi)始升高,9個(gè)月可達(dá)峰值,約為正常值的2倍,ALP升高可維持到分娩后1個(gè)月,升高的ALP來(lái)自胎盤,和胚泡壁的細(xì)胞滋養(yǎng)層的發(fā)育程度直接相關(guān)。

高脂餐后,血清ALP活性升高,尤以血型為O型或B型的分泌型(唾液中可分泌血型抗原者)人群更為突出,增高的ALP多為小腸ALP。

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

為避免脂肪餐的影響,宜空腹采血,除肝素外,其它常用抗凝劑可與Mg2+作用,引起ALP活性下降。最好用血清為測(cè)定標(biāo)本,紅細(xì)胞膜上有ALP,明顯溶血標(biāo)本會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果。

ALP在室溫和冰箱放置后,活性逐漸升高,可增加5%-10%。冷凍血清融凍后,其中活性開(kāi)始偏低,以后慢慢升高。所以應(yīng)在采血當(dāng)日就測(cè)定ALP活性。

目前常用的凍干質(zhì)控血清,復(fù)溶后ALP活性常有一個(gè)活性升高過(guò)程,有些制品復(fù)溶24小時(shí)后,活性可升高50%-100%,使用時(shí)應(yīng)加以注意。

【參考值范圍】

ALP測(cè)定結(jié)果與所用方法種類和測(cè)定溫度密切相關(guān),就是同一底物,因緩沖液不同,其結(jié)果可有2-3倍差異,目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的方法中以磷酸對(duì)硝基酚為底物,2-氨基-2-甲基丙醇為緩沖液,在37℃測(cè)定時(shí),成年人參考值范圍為20-110U/L。

ALP在不同年齡人群中有較大差異,在以上有關(guān)章節(jié)中已加以論述,解釋結(jié)果時(shí)必須加以注意。國(guó)外文獻(xiàn)指出ALP雖然有較大的人群差異,但是個(gè)體間差異很小。有條件應(yīng)將測(cè)定結(jié)果與被測(cè)者的“正常值”進(jìn)行比較。

【臨床應(yīng)用】

ALP早在本世紀(jì)30年代就用于臨床,是臨床醫(yī)師非常熟悉的酶之一,在70年代前ALP是世界上臨床測(cè)定次數(shù)最多的酶,主要用于骨骼和肝膽系統(tǒng)疾病的診斷和臨床鑒別診斷,可參見(jiàn)下表:

表7-7 堿性磷酸酶在疾病時(shí)的變化

(缺)

ALP和骨化過(guò)程密切相關(guān),很多骨骼疾病如變形性骨炎(Paget病)、副甲狀旁腺功能亢進(jìn)、佝僂病、軟骨癥、原發(fā)性和繼發(fā)性骨腫瘤、骨折和肢端肥大癥的患者血中ALP都可升高,尤其是變形性骨炎,增高非常明顯,可達(dá)正常上限值的50倍。此病在我國(guó)少見(jiàn),我國(guó)常用于早期診斷佝僂病和軟骨病,ALP升高早于血鈣、磷變化以及X線檢查,是一個(gè)很靈敏的診斷指標(biāo),但應(yīng)注意骨質(zhì)疏松患者血中ALP一般都在正常范圍內(nèi)。

目前ALP測(cè)定主要用于黃疸的鑒別診斷,阻塞性黃疸時(shí)血清ALP常早期明顯升高,甚至可達(dá)正常上限值的10-15倍,在完全阻塞性黃疸病例中,80%病例血中ALP超過(guò)正常上限5倍。一般而言血清ALP持續(xù)低于正常上限值2倍時(shí),阻塞性黃疸可能性較小,肝性黃疸時(shí)ALP輕度升高,一般不超過(guò)正常上限的2-3倍,約有半數(shù)原發(fā)性肝癌血中ALP升高,升高程度也常較明顯,甚至可達(dá)正常上限值的15-20倍。如在無(wú)黃疸肝臟疾病人血中發(fā)現(xiàn)有ALP升高應(yīng)警惕有無(wú)肝癌可能。

ALP升高還可見(jiàn)于其它疾病,如急慢性胰腺炎、慢性腎衰、腸梗塞、肺梗塞等疾病,但無(wú)太大臨床價(jià)值,某些藥物如孕激素、雌激素、胎盤白蛋白等也可引起血中ALP升高。

血ALP下降見(jiàn)于甲狀腺功能低下、惡性貧血和遺傳性堿性磷酸酶減少癥等。

五、γ-谷氨;D(zhuǎn)移酶及其同工酶

γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT)是一種底物特異性不高的酶,可作用于一系列含谷氨;幕衔铩T隗w內(nèi)可能催化下列反應(yīng):

由于有多個(gè)多肽參與反應(yīng),歷史上曾命名為γ-谷氨;D(zhuǎn)肽酶,簡(jiǎn)寫為GGTP。

本酶為含SH基的糖蛋白,其生理功能尚不十分清楚。Meister認(rèn)為細(xì)胞外游離氨基酸需通過(guò)γ-谷氨;h(huán)的一系列生化反應(yīng)方能進(jìn)入細(xì)胞,位于細(xì)胞膜上的本酶起關(guān)鍵作用,與組織中氨基酸和肽的分泌吸收,合成過(guò)程有關(guān)。

不同器官GGT的理化性質(zhì)有差異,用瓊脂糖電泳可將GGT分為四個(gè)區(qū)帶。但目前認(rèn)為控制GGT的基因位點(diǎn)只有一個(gè),上述差異是由于酶蛋白中糖基組成不同而引起。

【組織分布】

人體各器官中GGT含量按下列順序排列:腎、前列腺、胰、肝、脾、腸、腦等。大部分酶與細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)結(jié)合,例如在肝細(xì)胞膽管側(cè)的細(xì)胞膜上。雖然此酶在腎臟含量最高,學(xué)者相信血清中GGT主要來(lái)自肝臟。

【生理變異】

年齡與妊娠與否對(duì)GGT影響不大,不似ALP常明顯升高,如同時(shí)測(cè)此二酶,有助于臨床醫(yī)師判斷肝臟是否有病變。

男性血中GGT含量明顯高于女性,可能與前列腺有豐富的GGT有關(guān)。酗酒會(huì)引起GGT明顯升高,升高程度與飲酒量有關(guān),診斷疾病時(shí)必須排除這一因素。

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

GGT是一個(gè)比較穩(wěn)定的酶,室溫中2天、4℃放1周活性無(wú)變化,-20℃可儲(chǔ)存1年,紅細(xì)胞中GGT含量很低,溶血對(duì)本酶測(cè)定干擾不大。

【參考值范圍】

以γ-谷氨酰-3-羧基-4-對(duì)硝基苯胺和雙甘肽為底物的動(dòng)態(tài)法,在37℃測(cè)定,成年男性的參考值為7-56U/L,成年女性為0-30U/L。

【臨床應(yīng)用】

GGT在疾病時(shí)的變化可參閱表7-8:

表7-8 γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶在疾病時(shí)的變化

增高無(wú)變化
膽道疾病明顯增高,可達(dá)5-30倍正常上限骨疾患
(膽石癥、炎癥)陽(yáng)性率高,為85%-93%妊娠
肝實(shí)質(zhì)疾。ǜ窝,肝硬化)輕度增高,可達(dá)2-5倍正常上限
肝癌(原發(fā),繼發(fā))明顯增高且陽(yáng)性率高
誘導(dǎo)作用輕度升高,停藥后降至正常
(乙醇,苯巴比妥,抗抑郁藥,抗癲癇藥,含雌激素避孕藥

GGT測(cè)定在我國(guó)臨床應(yīng)用很廣,可能是因?yàn)槲覈?guó)肝臟疾病發(fā)病率高,而GGT又是肝膽疾病中陽(yáng)性率最高的酶。德國(guó)內(nèi)科學(xué)會(huì)通過(guò)對(duì)13000例肝膽患者調(diào)查,發(fā)現(xiàn)95%病例GGT升高,其次才是ALT,陽(yáng)性率為83%,第三位是膽堿酯酶,如同時(shí)測(cè)此三種酶,陽(yáng)性率可達(dá)99%。

膽道疾病如膽石癥、膽道炎癥、肝外梗阻時(shí),GGT不僅陽(yáng)性率高,而且升高明顯,可高達(dá)正常上限的5-30倍,肝臟實(shí)質(zhì)疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化時(shí)GGT一般只是中度升高(2-5倍),這點(diǎn)有助于肝膽疾病的鑒別診斷。

GGT又是診斷惡性腫瘤有無(wú)肝轉(zhuǎn)移的一種很有用的試驗(yàn),腫瘤患者如GGT升高常說(shuō)明有肝轉(zhuǎn)移可能。

當(dāng)ALP升高時(shí),同時(shí)測(cè)GGT有助于鑒別ALP的來(lái)源,如GGT正常說(shuō)明此時(shí)ALP升高常來(lái)自肝外的器官,如骨骼www.med126.com疾病等。

臨床在使用GGT時(shí)一定要注意它是一種誘導(dǎo)酶,不少藥物能使血中GGT活性升高,如巴比妥類藥物、抗癲癇的苯妥英鈉、抗抑郁癥的三環(huán)化合物、抗熱解痛類的對(duì)乙酰氨基酚可引起GGT升高;抗凝藥香豆素、含雌激素的避孕藥以及治療血脂升高的氯貝丁酯(法脂乙酯)都可引起GGT輕度升高。還有酗酒可使其升高,這些因素限制了此酶的應(yīng)用價(jià)值。醫(yī)師在應(yīng)用此酶診斷疾病時(shí),必須先除外這些非病理因素引起GGT增高的可能,國(guó)外有些國(guó)家由于酗酒人多,以致不測(cè)或少測(cè)此酶。

六、淀粉酶(AMY)及其同工酶

AMY對(duì)食物中多糖化合物的消化起著重要作用。作用于多種糖化合物,如淀粉、糖原等。它不同于植物中的β-淀粉酶,僅作用于多糖化合物的末端,α-淀粉酶可以隨機(jī)作用于多糖化合物內(nèi)部的α-1,4葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生一系列分子不等的產(chǎn)物:糊精、麥芽四糖、麥芽三糖、麥芽糖和葡萄糖。

AMY是一種需鈣的金屬酶,其最適pH在6.5-7.5之間,鹵素和其它陰離子有激活作用(Cl->Br->NO3->I-)。其分子量較小,約55ku,易由腎臟排出,尿中AMY活性濃度常高于血。

兩個(gè)不同基因位點(diǎn)分別控制,并生成兩種結(jié)構(gòu)和抗原性有明顯差異的AMY同工酶:一種由胰腺分泌,習(xí)慣上命名為胰腺淀粉酶(P-AMY);另一種主要來(lái)自唾液腺,常命名為唾液腺淀粉酶(S-AMY),但并不意味著只有唾液腺產(chǎn)生此種同工酶,其它器官如肺、骨、卵巢和甲狀腺也能生成S-AMY。

【組織分布】

機(jī)體中胰腺含AMY最多,由腺泡細(xì)胞合成后通過(guò)胰管分泌入小腸,唾液腺也分泌大量AMY入口腔開(kāi)始消化多糖化合物,此外AMY還見(jiàn)于卵巢、肺、睪丸、橫紋肌和脂肪組織中,在某些肺癌卵巢癌患者中可查到AMY升高,且主要為S-AMY,肝中AMY很少乃至沒(méi)有。

【生理差異】

成年人血中AMY與性別、年齡、進(jìn)食關(guān)系不大,新生兒AMY缺乏,滿月后才出現(xiàn)此酶,逐步升高,約在5歲時(shí)達(dá)到成人水平,老年人AMY開(kāi)始下降,約低25%。

尿AMY濃度由于受尿液濃縮或稀釋的影響,隨意留尿測(cè)定AMY的診斷價(jià)值受到一定限制,國(guó)外學(xué)者多建議留6小時(shí)或24小時(shí)尿液測(cè)其AMY總含量更為可靠。

【標(biāo)本采集、處理和貯存】

有些實(shí)驗(yàn)室常用血漿作為標(biāo)本測(cè)AMY,這樣可以更快地報(bào)告結(jié)果。但由于AMY為需鈣酶,大多數(shù)常用抗凝劑都將抑制AMY活性,還是以血清為標(biāo)本較好。收集標(biāo)本時(shí)必需注意避免唾液的污染,否則將引起假陽(yáng)性。

AMY是一種很穩(wěn)定的酶,室溫中一周,4℃幾個(gè)月酶活性都無(wú)變化。

【參考值范圍】

國(guó)內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍使用蘇木杰(Somogyi)的碘-淀粉呈色法,由于各實(shí)驗(yàn)室所用水解淀粉來(lái)源不同,不同實(shí)驗(yàn)室所測(cè)結(jié)果有所差異,但大多數(shù)血AMY都在200蘇氏單位以下。

愈來(lái)愈多臨床實(shí)驗(yàn)室使用人工合成基質(zhì),在自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定AMY,但目前尚無(wú)成熟的AMY推薦法,不同廠家出的試劑盒由于所用基質(zhì)不同,結(jié)果很難一致,其參考值范圍可參考各廠家說(shuō)明書(shū)。

【臨床應(yīng)用】

臨床上測(cè)定血清AMY主要用于診斷急性胰腺炎,此酶常在腹痛后2-12小時(shí)升高,20-30小時(shí)達(dá)到高峰,一般為正常上限值的4~6倍,最高可達(dá)40倍。此值的高低和疾病預(yù)后關(guān)系不大,但此值愈高,急性胰腺炎的可能性就愈大,約在3-4天內(nèi)AMY活性恢復(fù)正常。急性胰腺炎時(shí)尿AMY也增高,且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng),但由于尿濃度還受尿液濃縮稀釋影響,很難定出正常和病理界限,定時(shí)收尿測(cè)排泄AMY總量,結(jié)果雖較可靠但收集麻煩。國(guó)外學(xué)者認(rèn)為測(cè)尿AMY診斷價(jià)值很小。臨床醫(yī)師有時(shí)要求測(cè)胸水或腹水中AMY活性,如顯著升高說(shuō)明此時(shí)急性胰腺炎病變累及胸、腹腔。

診斷急性胰腺炎時(shí)必需與其它急腹癥相鑒別,可惜的是此時(shí)AMY也有不同程度升高,一般說(shuō)來(lái)不超過(guò)正常上限的4倍或者500蘇氏單位。此值常用作診斷急性胰腺炎的判斷值,但也不是絕對(duì)的,個(gè)別急腹癥患者AMY可超過(guò)此值,甚至達(dá)到2000蘇氏單位。

唾液腺疾病如腮腺炎患者血AMY也可升高,但臨床上不難鑒別,且主要為S-AMY升高,有別于胰腺炎以P-AMY升高為主。

國(guó)外報(bào)道在1%-2%人群中可出現(xiàn)巨淀粉酶血癥,血中AMY和免疫球蛋白(IgG或IgA)形成大分子的復(fù)合物,臨床化驗(yàn)特點(diǎn)為血中AMY持續(xù)升高,尿中AMY正;蛳陆怠_M(jìn)一步檢查可發(fā)現(xiàn)血中AMY分子量增高,此現(xiàn)象不和具體疾病有關(guān),增高者也多無(wú)臨床癥狀,注意應(yīng)與病理性AMY升高相區(qū)分。

七、酸性磷酸酶(ACP)及其同工酶

酸性磷酸酶(ACP)是一組作用類似堿性磷酸酶的酶,不同點(diǎn)是最適pH偏酸,從pH4.5-7.0。

本酶生理作用還不十分清楚,主要存在于細(xì)胞的溶酶體中,是溶酶體的標(biāo)記酶之一,推測(cè)此酶參加細(xì)胞中的分解代謝。

目前發(fā)現(xiàn)有4個(gè)不同的基因位點(diǎn)生成4類不同的同工酶,第一個(gè)基因位點(diǎn)生成前列腺ACP,其它組織僅有微量存在,有特異抗原性,用免疫學(xué)方法很易與其它ACP分開(kāi);第二個(gè)基因位點(diǎn)生成為溶酶體ACP,存在于細(xì)胞的溶酶體中;第三個(gè)基因位點(diǎn)生成為紅細(xì)胞ACP,實(shí)際上不僅存在于紅細(xì)胞中,還廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中;第四個(gè)基因位點(diǎn)生成ACP存在于破骨細(xì)胞和一些吞噬細(xì)胞,如肺泡的巨噬細(xì)胞,病理時(shí)還存在于高雪細(xì)胞和白血病的“毛細(xì)胞”中。

【組織分布】

它幾乎存在于體內(nèi)所有細(xì)胞中,雖然在細(xì)胞質(zhì)中可找到ACP,但主要在于溶酶體,ACP主要組織來(lái)源是前列腺、紅細(xì)胞和血小板。正常男性血清中1/3和1/2ACP來(lái)自前列腺,其余部分和女性血中ACP可能來(lái)自血小板或破骨細(xì)胞。

【生理變異】

男女性血中ACP含量無(wú)差異,新生兒ACP活性與成人相似,出生后1個(gè)月中血清酶活性甚高,然后隨年齡的增長(zhǎng)而逐漸下降,青春期又可出現(xiàn)一活性峰值,至20歲降至成人水平。

【標(biāo)本的采集、處理和貯存】

常用抗凝劑抑制ACP活性,以血清為測(cè)定標(biāo)本較好。

ACP是常用酶中最不穩(wěn)定的一個(gè),尤其在37℃和偏堿性時(shí)滅活更快,此時(shí)放置1小時(shí),酶活性可喪失50%,如將pH降至6.5以下,酶比較穩(wěn)定。最簡(jiǎn)單方法可按1ml血清加入10%醋酸20μl酸化,此時(shí)酶在常溫可穩(wěn)定1天,4℃3天,-20℃穩(wěn)定幾個(gè)月。

【參考值范圍】

不同方法參考值也不同,國(guó)外多推薦使用磷酸麝香草酚為底物的方法,因?yàn)榍傲邢貯CP對(duì)此底物親合度高,測(cè)定結(jié)果基本能反映ACP含量高低,此法參考值范圍為0.5-1.9U/L,男女無(wú)差異。

【臨床應(yīng)用】

主要用于論斷前列腺癌,由于酶不穩(wěn)定,測(cè)定困難,目前正被其它前列腺癌標(biāo)記物如前列腺特異抗原(PSA)所取代。

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