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MTT實(shí)驗結(jié)果顯示，當(dāng)粉防己堿的濃度在10μmol/L以上時，對HeLa細(xì)胞的生長具有抑制作用，且隨著濃度和時間的增加，抑制率逐漸增高，具有時間、濃度依賴性。隨著濃度的增加，作用24h后，抑制率增加明顯，24h IC50為17μmol/L。而作用48h后，各濃度抑制率均達(dá)60%以上。至作用72h，各濃度抑制率已達(dá)90%以上(P<0.05，圖1)。
2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測粉防己堿誘導(dǎo)各組細(xì)胞的凋亡情況
結(jié)果顯示，用0μmol/L、15μmol/L粉防己堿處理細(xì)胞24h后，處理組細(xì)胞凋亡率為(51.8±0.97)%，明顯高于對照組凋亡率[(24.3±1.23)%](P<0.05，圖2)。
2.3 AnnexinV/PI雙染法激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化
未加粉防己堿的空白對照組細(xì)胞AnnexinV和PI均為低染;處理組(15μmol/L)作用24h后出現(xiàn)AnnexinV和PI多為高染的中、晚期凋亡細(xì)胞。說明粉防己堿對HeLa細(xì)胞具有誘導(dǎo)其凋亡的作用。與流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果基本一致(圖3)。
3 討 論
宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第二大惡性腫瘤，占所有腫瘤的10%。傳統(tǒng)的宮頸癌治療模式與分期密切相關(guān)，Ⅰ期、ⅡA期以手術(shù)為主，輔以放療，ⅡB期以上以放療為主，輔以手術(shù)和化療。近年來,隨著腫瘤化學(xué)治療的基礎(chǔ)與臨床研究的迅速發(fā)展，化療藥物的不斷開發(fā)及給藥途徑和方法的改進(jìn)，以順鉑(DDP)為核心的聯(lián)合化療及放化療在宮頸癌治療中取得了一定療效，然而化療與放療均有嚴(yán)重的副作用。因此，尋找副作用小同時對腫瘤又有較好的抑制作用的藥物成為目前研究的一個熱點(diǎn)。
許多研究證明，粉防己堿在腫瘤細(xì)胞和動物模型中都具有抗癌作用。其用于腫瘤治療主要包括以下幾方面：①直接抗腫瘤作用。通過激活凋亡相關(guān)基因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或通過影響細(xì)胞周期進(jìn)程，發(fā)揮直接抗腫瘤作用。大量研究證明，粉防己堿可以使許多細(xì)胞如U937、HL60、A549、HepG2和T細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯和凋亡，從而抑制人肝細(xì)胞癌，乳腺癌及食管癌，結(jié)腸癌，卵巢癌等腫瘤細(xì)胞的生長[9-11]。②放療增敏作用。通過抑制放射線引起的潛在致死性損傷的修復(fù)，及誘導(dǎo)凋亡的作用，實(shí)現(xiàn)放療增敏的作用[15]。③減毒作用。研究表明粉防己堿可通過增高人體內(nèi)SOD活性降低脂質(zhì)過氧化物水平，減輕阿霉素引起的心肌損害[16]，或通過抑制炎癥反應(yīng)而起到減輕毒性反應(yīng)的作用[17]。④逆轉(zhuǎn)耐藥性。通過作用于P-糖蛋白(P-gP)，使其外排泵功能失活從而提高細(xì)胞內(nèi)藥物濃度[18]，或通過下調(diào)多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)等機(jī)制抗腫瘤。
