實習(xí)二、蛋白質(zhì)功效比值(PER)課題設(shè)計
一、實驗?zāi)康模?/b>
掌握蛋白質(zhì)功效比值的概念及意義，了解動物實驗的設(shè)計、分組及動物飼料的配制等。
二、實驗原理：
蛋白質(zhì)功效比值(protein efficiencyratio，PER)是測定蛋白質(zhì)生物利用率最常用的方法，其定義為在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，處于生長發(fā)育期的幼齡動物每攝入1g待測蛋白所增加的體重克數(shù)。本方法是美國公職分析化學(xué)家協(xié)會( AOAC)推薦的測定食物蛋白質(zhì)營養(yǎng)效應(yīng)的官方標(biāo)準(zhǔn)方法之一，國際上廣泛應(yīng)用。本法方便、具體，雖然動物攝入的蛋白質(zhì)克數(shù)與體重增加之間并不成線性關(guān)系，但仍不失為評價蛋白質(zhì)量的較好方法。此外，為了減少各實驗室測定結(jié)果的差異，常以已經(jīng)標(biāo)定的酪蛋白（標(biāo)準(zhǔn)參考蛋白)的PER值為2.5，以此校正測得的PER值。本法適用于含氮量高于1.80%的物質(zhì)。
三、實驗動物
要求用同一來源、同一品系、年齡相近、剛斷奶（出生21～28天)的雄性大鼠。實驗室應(yīng)保持各種環(huán)境條件適宜于大鼠的正常生長發(fā)育（室溫22～24℃，相對濕度50%～65%，室內(nèi)空氣要流通)。動物在實驗室適應(yīng)3～7天才能投入實驗使用。
四、動物分組
每一種待測樣品設(shè)一個實驗組，外加一個參考（標(biāo)準(zhǔn))酪蛋白組（陽性對照組)。大鼠按體重順序，以隨機(jī)區(qū)組法分組，每組動物不少于10只，每組動物數(shù)相同。各組動物平均體重組間差不大于5g，組內(nèi)個體差不大于10g。
五、動物飼料配方
PER實驗用合成飼料�；A(chǔ)飼料中各成分物質(zhì)用量如下。
(1)樣品量X（g)= 1.6×100／樣品N(%)
(2)植物油（棉子油或豆油)為： 8-X×樣品乙醚浸出物(%)/100
(3)混合無機(jī)鹽為：5-X×樣品灰分(%)
(4)混合維生素1
(5)纖維素為1-X×樣品粗纖維(%)/100
(6)水分為5- X×樣品水分(%)/100
(7)最后加玉米淀粉或蔗糖至100g，充分混勻。
在配制飼料前，應(yīng)先測定樣品中各種營養(yǎng)素的含量（蛋白質(zhì)、脂肪、水分、纖維素和灰分)以使各組實驗飼料及參考酪蛋白組飼料間各種營養(yǎng)素相等（達(dá)到AOAC標(biāo)準(zhǔn))，使之相互之間具有可比性。實驗組蛋白質(zhì)來源為待測樣品，而對照組（參考酪蛋白組)的蛋白質(zhì)則要來自參考酪蛋白。
(1)參考酪蛋白：國外用ANRC（商品名稱)酪蛋白，此物已經(jīng)標(biāo)化，其PER=2.50。如無ANRC酪蛋白，也可用經(jīng)過標(biāo)化的酪蛋白作為參考酪蛋白。
(2)混合鹽（美國藥典，USP)：稱取NaCl 139.3g，取其一部分置乳缽中，加入0．79g KI，研磨，過60目篩，放入棕色瓶中。將余下的NaCl加入下列成分研磨：KH2P04389.Og；CaC03 381.4g；MgS04（無水)57.3g； FeS04·7H2027.Og；MnS04H20 4.01g；CuS045H20 0.447g；ZnS04·7H20 0.54g；CoCl2·6H200.023g；研勻后過60目篩，與已制備的NaCl-KI混合，棕色瓶儲存?zhèn)溆谩?/p>
(3)混合維生素：VitA（干燥穩(wěn)定)2000IU,VitD（干燥穩(wěn)定)200IU, VitE（干燥穩(wěn)定)10 IU, VitK 0.5mg，膽堿200mg，對氨基苯甲酸10mg，肌醇10mg，煙酸4mg,VitB20.8mg, VitB1 0.5mg，泛酸鈣4mg, VitB6 0.5mg，葉酸0.2mg，生物素0.04mg,VitB120.003mg，加葡萄糖或淀粉至1 000mg。
六、動物飼養(yǎng)：
實驗期為28天，在此期間，動物單籠飼養(yǎng)，分別喂各組實驗飼料。動物自由攝食及飲水。在實驗期間盡可能保持實驗組動物與參考（標(biāo)準(zhǔn))酪蛋白組動物的全部環(huán)境條件一致。實驗期間應(yīng)記錄：(1)實驗開始時每只大鼠的體重（精確至O.lg)；(2)每天各只大鼠的飼料攝取量；(3)定期（最多4日)稱量每只大鼠的體重；(4)實驗最后一天記錄大鼠的體重和攝食量。
七、實驗結(jié)果處理及PER值計算
(1)計算每只動物28天內(nèi)體重增長值(g)
(2)計算每只動物28天內(nèi)蛋白質(zhì)攝入量(g)
(3)計算PER
直觀PER=體重增長值(g)／蛋白質(zhì)攝入量(g)
相對PER%=直觀PER×100／本實驗參考酪蛋白PER
校正PER=直觀PER×2.5／本實驗參考酪蛋白醫(yī).學(xué)全在線PER
八、結(jié)果評價
根據(jù)各組平均PER值，結(jié)合其他蛋白質(zhì)質(zhì)量評價指標(biāo)，對該樣品的蛋白質(zhì)質(zhì)進(jìn)行綜合評價。
九、實例計算
請就以下實驗結(jié)果，分別計算出脫脂大豆粉、濃縮大豆蛋白和分離大豆蛋白的直觀PER、相對PER及校正PER。
PER實驗結(jié)果 見表
| 實驗材料 | 動物增重（g) | www.gydjdsj.org.cn/jianyan/ 蛋白質(zhì)攝入量（g) | 直觀PER | 相對PER | 校正PER |
| 脫脂大豆蛋白 | 52.3 | 30.4 | |||
| 濃縮大豆蛋白 | 62.3 | 31.2 | |||
| 分離大豆蛋白 | 56.4 | 42.1 | |||
| 參考酪蛋白 | 80.9 | 31.1 |
