【摘要】 目的：探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)與膀胱癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測了48例膀胱癌存檔標(biāo)本和4例正常膀胱組織中bFGF的蛋白表達(dá)。結(jié)果：48例膀胱癌存檔蠟塊中有23例陽性，浸潤性癌顯著高于淺表癌(P＜0.01)，除G1和G2之間外各分級陽性率之間差異也有顯著性。陽性著色定位于腫瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、正常逼尿肌及腫瘤基質(zhì)。結(jié)論：bFGF可能通過自分泌和旁分泌機(jī)制誘導(dǎo)膀胱癌血管生成，或通過胞內(nèi)分泌作用刺激某些酶的產(chǎn)生，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤。bFGF高表達(dá)對預(yù)測膀胱癌患者的復(fù)發(fā)和預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。拮抗bFGF的作用可能是治療和預(yù)防膀胱癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的一條新途徑。
中圖分類號：R737.14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-4571(2000)06-0604-03
Expression of Basic Fibroblast Growth Factor in Bladder Cancer
BIAN Jia-sheng,FEI Feng-ling, XU zhong-fa,et al.
(Shandong Tumor Hospital, jinan 250117)
【Abstract】 Objective:To study the relationship between basic fibroblast growth factor(bFGF)and development of bladder cancer.Methods:The expression of bFGF protein of 48 samples of bladder cancer kept in archives were detected using immunohistochemical assay with a monoclonal antibody against bFGF.Results:There was no positive signal in 4 normal bladder mucosas. bFGF protein was localized in tumor cells,endothelial cells and normal detrusor muscle. 23 of 48 samples in archive was positive for bFGF protein. There was significant difference between the invasive and the superficial cancers(P＜0.01,)the difference also was between the grades except grade Ⅰand Ⅱ.Conclusions:bFGF may induce the angiogenesis of bladder cancer by autocrine and paracrine pathways,or promote tumor invasive by stimulating some enzymes production possibly by an intracrine pathway. Thus antagonizing the action of bFGF may provide an new way in treatment or prevent for the recurrent and matestasis of bladder cancer.
【Key words】 basic fibroblast growth factor (bFGF);bladder neoplasms;immunohistochemical assay;protein
在體外堿性成纖維生長因子(bFGF)是最有效的血管生成因子之一［1］，近年來研究表明癌癥患者包括膀胱癌患者的尿中bFGF水平是增高的［2，3］。膀胱癌患者的尿具有誘導(dǎo)血管生成的作用，且這種作用已被鑒定部分是由bFGF引起的［4，5］。目前關(guān)于膀胱癌組織中bFGF表達(dá)的報(bào)告很少，bFGF的作用機(jī)制也存在爭議，bFGF在膀胱癌中表達(dá)的臨床意義仍不清楚。為此我們應(yīng)用免疫組化方法對膀胱癌標(biāo)本中bFGF蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測。
1 材料與方法
1.1 一般資料
選1995年5月～1997年4月同濟(jì)醫(yī)院手術(shù)切除膀胱癌存檔標(biāo)本48例，其中男36例，女12例；年齡43～81歲，平均64.5歲。按照WHO分級標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級15例，Ⅱ級20例，Ⅲ級13例，淺表腫瘤33例，浸潤腫瘤15例。所選病例均為原發(fā)且術(shù)前均未接受化療和放療。
1.2 免疫組化方法
采用SP法，DAB顯色，兔抗人bFGF單克隆抗體滴度1∶50，對每個石蠟標(biāo)本行4 μm厚連續(xù)切片3張，1張重行HE染色觀察，1張行免疫組化染色，另1張為PBS替代染色。www.med126.com正常膀胱粘膜為正常對照�？谷薭FGF單抗及SABC試劑盒購于武漢博士德公司。
1.3 結(jié)果判定
光鏡下觀察，免疫組化呈黃色或棕黃色者為陽性，每張切片連續(xù)觀察5個高倍視野，因陽性著色見于腫瘤細(xì)胞胞漿、胞核、血管內(nèi)皮、腫瘤基質(zhì)、正常逼尿肌，不宜用陽性細(xì)胞數(shù)作為判斷陽性標(biāo)準(zhǔn)，故以平均每個視野中有1處著色即為陽性。
圖1 膀胱移行細(xì)胞癌I級
(部分癌細(xì)胞胞核呈陽性著色，IHC×200)
圖2 膀胱移行細(xì)胞癌Ⅱ級
(部分癌細(xì)胞核、間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞呈陽性著色，IHC×100)
圖3 膀胱移行細(xì)胞癌Ⅲ級
(癌細(xì)胞胞漿陽性、間質(zhì)細(xì)胞陰性，IHC×400)
圖4 膀胱移行細(xì)胞癌Ⅲ級
(血管內(nèi)皮呈強(qiáng)陽性著色，間質(zhì)斑狀著色，IHC×200)
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
統(tǒng)計(jì)分析采用SAS軟件包，率的比較用卡方檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
免疫組化自身對照片和4例正常膀胱粘膜為陰性，48例存檔膀胱癌標(biāo)本23例陽性，陽性著色見于腫瘤細(xì)胞胞漿、胞核、血管內(nèi)皮、腫瘤基質(zhì)、正常逼尿肌(圖1～4)。免疫組化結(jié)果與腫瘤分級和生長方式的關(guān)系見表1、2。
表1 48例膀胱癌標(biāo)本bFGF蛋白表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分級的關(guān)系
| 分級 | n | bFGF蛋白(+) | bFGF蛋白(-) |
| G1 | 15 | 3 | 12 |
| G2 | 20 | 9 | 11 |
| G3 | 13 | 11 | 2 |
注：P＞0.05(G1 vs G2)；P＜0.01(G1 vs G3)；P＜0.05(G2 vs G3)；P＜0.01(G3vsG1+G2)。
表2 48例膀胱癌標(biāo)本bFGF蛋白表達(dá)與腫瘤生長方式的關(guān)系
| 生長方式 | n | 陽性 | 陰性 |
| 淺表 | 33 | 10 | 23 |
| 浸潤 | 15 | 13 | 2 |
注：P＜0.01。
3 討論
bFGF不僅是多種細(xì)胞(包括上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞等)的有效有絲分裂原［6～8］，還影響許多其他細(xì)胞功能，如蛋白酶的產(chǎn)生、細(xì)胞潛移和血管生成等［9，10］。近年來的研究表明，bFGF 與膀胱癌的惡性潛能之間有著密切關(guān)系。膀胱癌患者尿中可檢測到 bFGF 樣蛋白，浸潤性膀胱癌細(xì)胞中也可檢測到 bFGF 及其受體 mRNA 和蛋白，而非浸潤性細(xì)胞株則未能測及［11］。www.med126.comO′Brien等人發(fā)現(xiàn) bFGFmRNA在正常膀胱組織中表達(dá)率為87%，而在膀胱癌組織中為12.5%。bFGF蛋白表達(dá)在正常膀胱粘膜組織與浸潤性膀胱癌之間無差異，但明顯高于淺表膀胱癌。bFGF主要定位于正常移行上皮的基底層、正常逼尿肌和腫瘤內(nèi)血管的部位，而腫瘤細(xì)胞少見［12］。本組結(jié)果顯示 bFGF 蛋白在腫瘤中表達(dá)形式多樣，腫瘤細(xì)胞的胞漿、胞核、血管內(nèi)皮、平滑肌均有陽性表達(dá)，而且不是標(biāo)本表達(dá)形式不一樣，有的腫瘤細(xì)胞胞核呈強(qiáng)陽性表達(dá)，有的僅見于胞漿。高分級浸潤性腫瘤 bFGF 蛋白表達(dá)明顯高于低分級淺表腫瘤。
O′Brien 等依據(jù)其實(shí)驗(yàn)結(jié)果指出，如果 bFGF 不同膀胱癌血管生成的主要因素，那么另外的調(diào)節(jié)機(jī)制參與比腫瘤細(xì)胞的直接合成更重要。侵襲性腫瘤侵入基底膜和滲入到膀胱的肌層時， bFGF 便從基底膜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等結(jié)構(gòu)中釋放出來，刺激腫瘤浸潤邊緣的血管生成［12］。某些體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)，bFGF 與血管內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的氨基葡聚糖形成復(fù)合物，此復(fù)合物可保護(hù) bFGF 不被水解，從而使 bFGF 以失活形式高量儲積。在一定條件下由乙酰肝素酶、血漿酶和組織蛋白酶D作用后釋放出來［13］。肌肉內(nèi)的 bFGF 可能也是以這種形式儲存的。浸潤性腫瘤細(xì)胞可分泌多種酶，包括乙酰肝素酶、尿激酶和組織蛋白酶等降解上述宿主結(jié)構(gòu)而造成浸潤［12］。本實(shí)驗(yàn)在正常的平滑肌和血管外基質(zhì)中也檢測到 bFGF 蛋白的存在，因此間接地支持了這一理論。
雖然O′Brien等并不否認(rèn)腫瘤細(xì)胞也可合成 bFGF ，但卻肯定膀胱癌中 bFGF 的主要來源不是腫瘤細(xì)胞［12］。Nguyen指出，免疫組化結(jié)果在某種程度上可確定血清、尿中增高的 bFGF 的可能來源［2］。由此，我們認(rèn)為腫瘤細(xì)胞也是 bFGF 的重要來源。這一結(jié)論與腎細(xì)胞癌中 bFGF 的表達(dá)也是一致的［14］。
根據(jù)以上結(jié)果推測，bFGF 可能通過自分泌和或旁分泌途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成和浸潤。這一觀點(diǎn)得到了體外實(shí)驗(yàn)的支持［15］。事實(shí)上，有15%～30%淺表膀胱癌可能進(jìn)展為浸潤性膀胱癌。有研究表明，bFGF 可通過胞內(nèi)分泌途徑調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生，從而增強(qiáng)膀胱癌細(xì)胞系的侵襲能力［16］。本組結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低級、淺表型膀胱癌有30.3%(10/33) bFGF 陽性表達(dá)，而且腫瘤細(xì)胞核陽性主要為低級的淺表型膀胱癌。這是否與 bFGF 通過胞內(nèi)途徑調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生有關(guān)，尚需增加觀察例數(shù)以及進(jìn)一步的研究。
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