葡萄球菌蛋白A（Staphylococal Protein A, SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)。早在1940年，Vevwey發(fā)現(xiàn)在某些金黃色葡萄球菌中，含有一種物質(zhì)，在雙向擴(kuò)散試驗(yàn)中能與正常人血清形成沉淀。Jensen（1959)也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象，并將其命名為A抗原。直到1963年Lofkvist等分離了該抗原，并證明它是一種蛋白質(zhì)。為與A與糖相區(qū)別，Grov（1960)將其命名為葡萄球菌蛋白A，簡稱SPA或蛋白A（Protein A)。由于SPA的一些免疫特性，它已引起廣大免疫學(xué)者的興趣，并發(fā)展成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。
一、SPA的性質(zhì)
（1)SPA存在于大多數(shù)（90%)金黃色葡萄球菌中，而不存在于表皮葡萄球菌中。并且主要存在于血漿凝固酶陽性菌株，而不存在于陰性菌株中。前者是致病的，后者是非致病的，但在體內(nèi)研究中尚未發(fā)現(xiàn)SPA和菌株致病性之間有任何肯定的關(guān)系。不同菌株間的SPA含量有明顯差異，以I株金黃色葡萄球菌含SPA量最高，SPA和細(xì)胞壁的肽聚糖呈共價(jià)結(jié)合。抗二甲氧基苯青霉素突變株（Methicillin—resistant strain)能產(chǎn)生分泌性SPA，它較之細(xì)胞壁所含的SPA在免疫學(xué)性質(zhì)上相似，但易分離，損失少。
�。�2)SPA為蛋白質(zhì)成分，僅含少量或不含碳水化合物，其分子量因提取方法不同而異，用脫氧核糖核酸酶消化細(xì)胞壁后超速離心或用加熱油提法，所測分子量為12000～15000。用沉淀平衡分析和在6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽中凝膠過濾，測出分子量為42000。SPA為多肽單鏈，內(nèi)含3個(gè)高度相似的Fc段結(jié)合區(qū)，每區(qū)由50個(gè)以上的氨基酸組成，不含色氨酸和半胱氨酸。其羧基末端是賴氨酸，氨基末端結(jié)構(gòu)尚未肯定。SPA粘度高于球蛋白，等電點(diǎn)為pH5.1，其天然結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，在應(yīng)用6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽變性劑的條件下，尚能保存某些三級(jí)結(jié)構(gòu)，如將此變性劑除去，則能自然矯正而恢復(fù)原有結(jié)構(gòu)。
�。�3)SPA之所以引起免疫學(xué)家的重視，是因?yàn)樗哂械拿庖邔W(xué)特性。SPA具有和人與許多動(dòng)物如豚鼠、豬、小鼠、猴等IgG結(jié)合的能力。SPA結(jié)合部位是Fc段而不是Fab段，這種結(jié)合不會(huì)影響抗體的活性。SPA具有的結(jié)合力是雙價(jià)的，每個(gè)SPA分子可以同時(shí)結(jié)合兩個(gè)IgG分子，也可一方面同IgG相結(jié)合，一方面與標(biāo)記物如熒光素、過氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。還有一個(gè)饒有興趣的事實(shí)是，和SPA結(jié)合后的IgG可用4mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽等使之解離。SPA對(duì)IgG免疫球蛋白亞型的結(jié)合有選擇性，如SPA與人IgG亞型：IgG1、IgG2、和IgG4有結(jié)合力，唯獨(dú)不結(jié)合IgG3。只結(jié)合IgA2，而不結(jié)合IgA1。SPA和禽類血清IgG不結(jié)合。
�。�4)SPA具有多種生物學(xué)作用，如引起豚鼠解離體回腸和收縮，在吞噬反應(yīng)中抑制IgG調(diào)理素吞噬和殺菌作用，SPA—Igg 復(fù)合物能固定人的補(bǔ)體和人、狗、豬的新鮮補(bǔ)體，對(duì)人類B細(xì)胞具有促有絲分裂因子的作用等。
二、SPA的應(yīng)用
自70年代開始，國外應(yīng)用SPA建立了許多敏感、特異性強(qiáng)、快速和簡易的實(shí)驗(yàn)方法，并在許多方面的應(yīng)用中積累了實(shí)際應(yīng)用的材料，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用到免疫學(xué)及其相關(guān)科學(xué)如細(xì)胞學(xué)、細(xì)菌學(xué)和病毒學(xué)等。其可能應(yīng)用的范圍可歸納為以下四個(gè)方面：
1．應(yīng)用于免疫球蛋白的制備和分析 SPA是一種比較理想的提純和分析免疫球蛋白的試劑。由于SPA與IgG及其某些亞型的Fc段有較強(qiáng)的結(jié)合力，可利用來提純、分析免疫球蛋白制劑，結(jié)合后的PSA—IgG可再用解離劑如4mol/L尿素、4mol/L，硫氰酸鹽或6mol/L的鳥嘌呤鹽酸鹽使之解離，多用SPA—Sepharose 層析柱分離IgG或其亞型及斷片如Fc、Fab等。醫(yī)學(xué)全在.線gydjdsj.org.cn
2．應(yīng)用于免疫細(xì)胞化學(xué) 由于SPA具有雙價(jià)結(jié)合力，在免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中可作為橋抗體或標(biāo)記抗體。由于SPA能與多種動(dòng)物的IgG的Fc段結(jié)合，因此，作為第二抗體或標(biāo)記抗體，SPA的最大優(yōu)點(diǎn)是不受種屬特異性的限制，故在目前各種免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中已得到廣泛的應(yīng)用。除不受種屬限制這一特點(diǎn)外，SPA法還具有染色時(shí)間短、靈敏性高和背景染色淡等優(yōu)點(diǎn)。據(jù)報(bào)告用國產(chǎn)酶聯(lián)SPA代替酶標(biāo)記抗體，應(yīng)用間接染色，時(shí)間較PAP法省時(shí)一半。SPA分子量�。�13000～42000)，易于穿透組織，而免疫球蛋白酶標(biāo)記抗體為200000，PAP復(fù)合物為430000，均較SPA分子量大。
3．應(yīng)用于多種細(xì)菌、支原體和病毒等病原體的簡易快速診斷可應(yīng)用SPA菌體作為載體，結(jié)合特異性抗體成為一種吸附原，作協(xié)同凝集劑，用于某些細(xì)菌和病毒的定群和分型（詳見第二章 第三節(jié) )。
4．可作為一種研究免疫復(fù)合物、膜抗原、膜受體和膜Ig的固相吸附劑 Hallgsen用同位素標(biāo)記SPA測定血IgG的凝集物，發(fā)現(xiàn)85%全身性紅斑狼瘡和42%類風(fēng)濕病人血清中凝集物增高。SPA用于細(xì)胞膜抗原、表面IgG和Fc受體的研究最大特點(diǎn)是能研究活細(xì)菌。Ghetie（1976)用SPA致敏綿羊紅血球，與經(jīng)IgG處理的細(xì)胞形成玫瑰花環(huán)，來鑒定帶Fc受體的細(xì)胞，反之，如用SPA抑制玫瑰花環(huán)形成，則可定量測定細(xì)胞表面的IgG。應(yīng)用SPA與膠體金或鐵蛋白相結(jié)合，可在電鏡水平檢查抗原抗體反應(yīng)的定位。特別是蛋白A—膠體金技術(shù)（Protein A—Gold technique, PGA技術(shù))自Pomano和Romano（1977)首次報(bào)告用于標(biāo)記細(xì)胞表面抗原、包括淋巴細(xì)胞、血小板、大鼠腎臟細(xì)胞及感染的病毒細(xì)胞獲得成功以后，已得到愈來愈廣泛的應(yīng)用（詳見第七章 )，是一種較為理想的免疫電鏡技術(shù)。
