�。ㄈ�)電鏡免疫細胞化學技術的應用
免疫電鏡在細胞超微結構水平應用抗原與相應抗體能特異性結合的原理，使用標記抗體對細胞內存在的抗原性物質進行定性、定位和定量觀察，是免疫細胞化學技術在亞細胞水平的進一步發(fā)展。
1．免疫電鏡標本制備 腎臟組織的免疫電鏡標本制備與一般透射電鏡標本的制備有所不同，其具體步驟如下：
�。�1)固定與包埋：腎臟組織一般采用低濃度戊二醛為固定劑，而不使用鋨酸，以盡可能多地保存抗原活性，常使用甲醛-戊二醛固定液（甲醛4%，戊二醛0.05%~0.5%)。包埋劑常使用 Lowicryl K4M（丙烯酸酯類化合物)或LRWhite 樹脂在-20~35℃低溫下包埋，以紫外線照射使之聚合。避免使用常規(guī)之環(huán)氧樹脂包埋，因環(huán)氧樹脂需加熱使之聚合，而使標本之抗原活性下降。
�。�2)修塊、定位及切片：包埋后之組織塊經初步修塊后，先在超薄切片機上用玻璃刀（勿用鉆石刀)切出一張0.5~1μm厚的半薄片，用1%鹼性復紅或美藍溶液進行染色，在光鏡下觀察組織內腎小球的數量及病變情況，挑選出一個病變最為典型的腎小球，作出標記。然后在組織塊上定出相應部位，用刀切去周圍組織，修成約0.1mm大小之組織塊，再用超薄切片機切出500 。A厚度的超薄切片。
�。�3)免疫標記：目前應用最多的是膠體金標記抗體（詳見第七章 )。
2．免疫電鏡觀察 腎組織標本皆采用包埋后染色，第一抗體為特異性抗血清（如兔抗人IgG)，第二抗體為膠體金標記之抗體（如豬抗兔IgG，金標記Au10)。最后用枸椽酸鉛（或醋酸鉛)作對照染色，在透射電鏡下觀察。根據金顆粒的分布狀況，可作定位、定性及定量觀察，了解腎小球超微結構成分的變化、探討腎臟疾病的病原及研究免疫復合物（沉積之電子致密物質)的組成成分等（詳見后)。
二、血清或腎臟洗脫液的檢查
腎臟疾病時，血清學檢查亦甚為重要，現僅就與免疫細胞化學有關者介紹如下：
1．血清或腎臟洗脫液內抗腎小球基底膜抗體的測定 在快速進行性腎小球腎炎（RPGN)及Goodpasture綜合征病人血清中常存在有抗腎小球基底膜抗體，對病人血清進行檢查有重要的診斷意義。動物實驗中，對馬杉氏腎炎等實驗性腎小球腎炎動物，進行腎臟洗脫液的檢查，以確定有無抗腎小球基底膜抗體的存在。一般常用免疫細胞化學技術進行檢查，先將病人血清與靈長類（如猴等)的腎組織冰凍切片在37℃濕盒內孵育半小時，再將切片用FITC熒光素或HRP標記的抗人Igg 抗體處理。如果病人血清中存在有抗腎小球基底膜抗體，即可與切片上的腎小球基底膜相結合，進一步與熒光標記抗人IgG抗體相反應，而顯示沿腎小球毛細血管壁呈連續(xù)線形之熒光分布（酶標抗體亦顯示同樣之連續(xù)線形分布)。本方法又可用于與抗腎小管基底膜抗體和抗核抗體的鑒別。
2．血清中循環(huán)免疫復合物內IgG亞類的分析 以3%聚乙二醇（PEG)沉淀病人血清中大分子蛋白質，分別使用鼠抗人IgG亞類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的單克隆抗體，以ELISA法測定免疫復合物內IgG亞類的分布狀況。以同樣方法亦可測定腎小球中沉積的免疫復合物內的IgG亞類。Noel 報道，不同腎炎時腎小球內沉積之IgG亞類有所不同。原發(fā)性膜性腎炎之沉積物為Igg 1和IgG4，狼瘡性腎炎之沉積物為IgG1、IgG2和IgG3。
3．血清中Tamm-Horsfall糖蛋白（THP)的測定 THP是由腎小管髓袢升支厚壁段及遠曲小管上皮細胞合成的糖蛋白，主要存在于正常人的尿中，血清中含有微量。當腎功能減退時，血及尿中THP明顯降低，尿毒癥時則血及尿中幾乎測不出THP。目前可使用抗THP單克隆抗體，用ELISA夾心法測定血清中THP的含量。第一抗體使用鼠抗人THP單克隆抗體，第二抗體為HRP標記的兔抗鼠IgG。
4．其它 血清中自身抗體如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗Sm抗體等的測定，對狼瘡性腎炎有診斷意義�？怪z點抗體的測定對進行性系統(tǒng)性硬化（硬皮病)有診斷意義，以上測定皆使用免疫熒光法，具體操作不再贅述。
