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中國幽門螺桿菌研究:幽門螺桿菌檢測的進(jìn)展

1983年澳大利亞學(xué)者M(jìn)arshall等首次從胃炎患者的胃粘膜中分離出一種螺旋彎曲桿菌,引起了廣泛關(guān)注和研究。由于檢測手段的不斷進(jìn)步和發(fā)展,提高了臨率診治胃十二指腸疾病的水平,更新了人們對胃十二指腸疾病的傳統(tǒng)觀念和認(rèn)識。1 幽門螺桿菌的研究現(xiàn)狀該菌從形態(tài)學(xué)上看,在…

1983年澳大利亞學(xué)者M(jìn)arshall等首次從胃炎患者的胃粘膜中分離出一種螺旋彎曲桿菌,引起了廣泛關(guān)注和研究。由于檢測手段的不斷進(jìn)步和發(fā)展,提高了臨率診治胃十二指腸疾病的水平,更新了人們對胃十二指腸疾病的傳統(tǒng)觀念和認(rèn)識。

1 幽門螺桿菌的研究現(xiàn)狀

該菌從形態(tài)學(xué)上看,在體內(nèi)呈螺旋桿狀,在體外培養(yǎng)呈彎桿狀,故被正式命名為幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)。1990年8月的悉尼國際胃腸會議肯定了Hp與慢性胃炎(CG)消化性潰瘍(PU)的關(guān)系。實驗證明,此菌的存在與病變程度有密切聯(lián)系。在一些胃十二指腸疾病中Hp感染率很高,檢出率為58%~100%。有人通過對胎兒、新生兒、嬰幼兒、正常人免疫學(xué)及細(xì)菌學(xué)的研究認(rèn)為,人體胃粘膜出現(xiàn)Hp是外源性感染方式,人與人及人與動物之間的傳染是Hp的可能傳播途徑。城市人口感率高于農(nóng)村人口,澳大利亞土著人的Hp感染率顯著低于隨機(jī)挑選的獻(xiàn)血員。揭示密切的社會接觸有利于Hp感染的流行。Hp感染的致病機(jī)理至今尚未完全闡明。賈博琦認(rèn)為,可能是隱性感染過程,即在Hp浸潤下,胃粘膜充血、水腫造成Hp生長的適宜環(huán)境,Hp借機(jī)侵入粘膜下層生長繁殖,并逐漸發(fā)展為慢性炎癥或潰瘍。張振華等認(rèn)為,Hp對人感染過程分為3個價段:①Hp借其螺旋狀菌體及其結(jié)構(gòu)的特征,穿透粘膜表面的不溶性粘液層;②借Hp表面菌毛樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)與胃粘膜上皮表面相應(yīng)的受體結(jié)合,在胃壁穩(wěn)定持續(xù)地定居;③再由Hp的LPS或其它的細(xì)胞毒素引起胃粘膜非特異性炎癥。在此基礎(chǔ)上再加上胃酸、胃蛋白酶的作用造成炎癥或潰瘍。Morgan通過對Hp的流行病學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、病因?qū)W、臨床診斷學(xué)與藥物治療等方面進(jìn)行的研究證實45%的Hp有細(xì)胞損害作用。Hp含有多種生物化學(xué)損傷因子:①Hp含類脂多糖脂肪酸A,它具有Gram陰性菌的內(nèi)毒素特性;②有豐富的尿素酶活性,它分解尿素成NH4+與CO2,而NH4+可破壞粘膜屏障,使跨膜電位發(fā)生改變,引起細(xì)胞通透性增加,H+逆相擴(kuò)散,產(chǎn)生糜爛和潰瘍。③Hp有蛋白分解酶,將高分子的粘液分解為低分解為低分子物,使粘度減低,不能阻止H+逆相擴(kuò)散。④Hp感染染致免疫反應(yīng),在急性活動期,局部出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(中性多核為主),在慢性期,局部出現(xiàn)淋巴細(xì)胞,漿細(xì)胞浸潤和SIgA及SC為主。⑤Hp增強(qiáng)活性氧的生成而介導(dǎo)粘膜損害。從組織學(xué)觀點看Hp感染加重了洗動性胃炎、中性粒細(xì)胞浸潤、破壞腺體導(dǎo)致萎縮性胃炎。也可損害胃排空而促進(jìn)潰瘍形成。總之Hp的存在及其致病性已不容置疑,關(guān)鍵在于提高對Hp的檢測水平,針對病因進(jìn)行有效治療并通過對Hp的臨測指導(dǎo)臨床治療。

2 幽門螺桿菌檢測的進(jìn)展

Hp的檢測方法目前已有尿素酶試驗、細(xì)菌培養(yǎng)、活檢標(biāo)本切片染色、直接涂片染色、14C呼試驗及免疫學(xué)方法等各種測定法。權(quán)衡利弊各有優(yōu)缺點。

2.1 尿素酶試驗

該試驗是所有檢測手段中最為簡便迅速的一種方法,在胃鏡檢查同時進(jìn)行,敏感性和特異性分別達(dá)91%和100%時,數(shù)分鐘即可做出診斷。檢查結(jié)果與直接涂片法、分離培養(yǎng)法、組織病理學(xué)結(jié)果一致或近似;顧z標(biāo)本的尿素酶活性主要與感染的數(shù)量多少有關(guān),量少時可能造成假性反應(yīng),而其它產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌也可能造成假陽性,但仍不失為一種最初檢測Hp感染的有效手段。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng)

胃粘膜組織的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷Hp感染的最可靠方法,往往做為驗證其它檢測手段的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但不少因素可能會影響Hp的培養(yǎng)而致假陰性。如:胃粘膜組織中的www.med126.comHp的數(shù)量過少、細(xì)菌繁殖能力差等。

2.3 活檢標(biāo)本切片染色

將胃粘膜活檢組織標(biāo)本用100%中性福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋、切片染色。染色的方法有很多種,主要有Warth-Starry(W-S)染色,改良Giemsa染色,Gresyefast,HE和熒光染色,其中(W-S)染色效果最好,細(xì)菌清晰易辨,特異性和敏感性幾乎均達(dá)100%。但該法繁瑣且需一定技術(shù)。此外HE染色法既可供組織學(xué)運用又可檢查Hp。也可做為一種常規(guī)檢測方法。Langdale-Brown等報道用吖啶橙熒光染色,Hp易辨認(rèn),且方法簡單、快速,尤其在Hp量少時優(yōu)于W-S和Giemsa染色,不易漏診。

2.4 直接涂片染色

Pinlard用相差顯微鏡直接檢查涂于玻璃片上的胃粘膜查Hp,敏感性達(dá)100%。

2.513C14C呼吸試驗

有人利用Hp產(chǎn)生的尿素酶能分解尿素的原理,將胃內(nèi)用核素標(biāo)記的尿素分解產(chǎn)生CO2和NH2,CO2被吸收后經(jīng)肺排出,如果胃粘膜有Hp存在,則呼出氣中就有核素標(biāo)記的CO2出現(xiàn)。檢測Hp的敏感性和特異性分別達(dá)到100%和88%,Hp清除后14CO2呼出減少。Ormand等發(fā)現(xiàn)收集服用核素標(biāo)記gydjdsj.org.cn/shouyi/的尿素后20min的呼氣體即可有效地檢測Hp感染。

2.6 免疫學(xué)方法

佐貫等采用乳膠凝集試驗檢測血中抗HpIgG抗體,并與組織培養(yǎng)法和鏡檢法進(jìn)行對照,血中抗Hp抗體與粘膜內(nèi)Hp檢出一致率為73.1%,特異性為60%~100%,敏感度為81.3%,對Hp感染的篩選診斷具有一定的實用價值。Rathbone等用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定73例經(jīng)胃鏡檢查并活檢確診的患者血清Hp抗體,發(fā)現(xiàn)其敏感性和特異性分別達(dá)到93%和97%。Engstrand等建立了檢測Hp的單克隆抗體方法,為診斷Hp感染提供了更為特異的方法。張啟波等利用初步純化的Hp的尿素酶為抗原對120例病人的血清抗Hp抗體進(jìn)行了ELISA測定,對照細(xì)菌培養(yǎng)等方法顯示敏感為95%,特異性為91%。吉林市第222醫(yī)院用血清免疫熒光方法診斷Hp感染,顯示很高的敏感性。浙江醫(yī)科大學(xué)用親和素一生物素(ABC)法檢測活檢組中的Hp抗原,可顯著提高診斷的靈敏性。

2.7 其它

Sehneider等報道,讓患者吞入系線膠囊以收集胃內(nèi)粘液,再通過涂片和尿素酶試驗檢測粘液內(nèi)的Hp,發(fā)現(xiàn)其特異性、敏感性也很高。郎大裕等用一種添加了尿素的pH指示劑的酚紅,使Hp染色,通過內(nèi)鏡觀察Hp在人胃內(nèi)的分布情況,應(yīng)用本法的30例胃潰瘍患者中26例色素撒布后立即可以見到發(fā)紅現(xiàn)象。全部病例都可在發(fā)紅的部位檢出Hp。

3 幽門螺桿菌檢測的展望

為克服Hp檢測中的假陽性結(jié)果,中山醫(yī)科大學(xué)與澳大利亞學(xué)者合作探討了血清學(xué)與尿素呼氣試驗診斷Hp感染的價值,在血清學(xué)試驗中對接近界限值的陽性血清再增加一個空腸彎曲菌吸收試驗,可提高血清學(xué)診斷的特異性,呼氣試驗的敏感性為98.7%,特異性為97.1%,并能準(zhǔn)確測定Hp陰轉(zhuǎn)及復(fù)發(fā)或再感染,可望成為抗Hp治療的藥物篩選及療效監(jiān)測的重要手段。Megraud等用DNA雜交技術(shù)檢測Hp,從理論上講其特異性好,有發(fā)展前途,但目前尚不能應(yīng)用于活檢標(biāo)本的Hp檢測。

綜上所述,Hp感染與胃十二指腸疾病的關(guān)系已證明,隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入Hp的檢查方法也將不斷取得突破性進(jìn)展。

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