中國(guó)幽門螺桿菌研究:檢測(cè)幽門螺桿菌感染幾種方法的比較

自1983年Warrn和Marshall從胃粘膜成功分離出幽門螺桿菌（Helicobacter Pylori，Hp)后，與胃炎及潰瘍病的關(guān)系引人關(guān)注，并指出Hp可能是其病因之一。檢測(cè)Hp感染方法較多。本文對(duì)95例胃粘膜組織行細(xì)菌培養(yǎng)、尿素酶試驗(yàn)、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin－Starry銀染檢測(cè)Hp的方法比較。力求尋找出簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、敏感性、特異性高的方法，實(shí)用于臨床診斷Hp感染。

1　對(duì)象gydjdsj.org.cn/zhicheng/和方法

1.1　對(duì)象

連續(xù)收集1990—03～1990—06因上消化道癥狀行內(nèi)鏡檢查（Olympus GIF XQ₁₀)。胃鏡診斷慢性胃炎及消化潰瘍患者95例。取距幽門5cm內(nèi)的胃竇粘膜5塊，分別供以上各種檢測(cè)用。男74例，女21例；17歲～62歲，平均年齡42.8歲；其中慢性胃炎30例、胃潰瘍8例，球部潰瘍37例，復(fù)合潰瘍20例。

1.2　方法

①細(xì)菌培養(yǎng)：將活檢標(biāo)本接種于肉浸液加8％～10％羊血及抗菌混合液的瓊脂平板中，于防良厭氧缺罐（5％O₂，7％CO₂、80％N2、8％H₂、濕度98％)內(nèi)，37℃、培養(yǎng)3d～7d，見1mm～2mm大小的露滴樣、光滑、灰白色菌落，菌落涂片鏡檢生化鑒定（尿素酶、氧化酶、觸酶等)。7d不見菌落為陰性。②尿素酶試驗(yàn)：采用改良Christensen細(xì)菌尿素酶鑒定試劑。取0.1ml試劑于平皿圓孔中，將胃粘膜置于此孔中，試劑由淡黃變淡紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性，其中1h內(nèi)變色為陽(yáng)性，2h～5h變色為延遲性。③直接涂片：粘膜涂于潔凈玻片上，范圍為1.5cm×2.5cm大小，酒精燈固定，革蘭染色，10×100倍油鏡觀察。Hp為革蘭陰性呈∽、C彎曲狀或螺旋狀，形態(tài)典型。④HE染色：常規(guī)HE染色，鏡檢。40×10倍光鏡下生病理診斷，100×10銳油鏡下觀察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面，胃小凹及胃腺腔中，呈淡紅變彎曲狀物，較難分辨。⑤改良W－S銀染：將脫蠟切片于43℃的1％AgNO₃液中浸潤(rùn)15min，準(zhǔn)備顯色劑。將浸染的切片于盛有顯色劑立式染缸中加蓋、加熱維持恒溫70℃約8min～10min，切片呈淺棕色。取出切片，熱水徹底沖洗，脫水，透明，中性樹脂封片。100×10倍鏡下觀察Hp，其在淡黃色背景上呈棕色或褐色彎曲狀物，易辨認(rèn)。⑥Giemsa染色：將脫蠟切片于Giemsa稀釋液中浸染20min，待組織呈藍(lán)色，蒸餾水漂洗，PBS液分色約3min～5min，透明，中性脂封片。100×10倍鏡下觀察。Hp呈深藍(lán)色彎曲狀物，較易分辨。⑦菌量分級(jí)：菌Marshall分級(jí)法0級(jí)；無(wú)菌；Ⅰ級(jí)：認(rèn)真尋找可見；Ⅱ級(jí)：多數(shù)高倍視野可見；Ⅲ級(jí)：高倍視野很多或成堆成串。

所有資料按四格表行X²檢驗(yàn)，若例數(shù)小于40或理論值小于1，則采用確切概率法計(jì)算。

2　結(jié)果

表1　檢測(cè)Hp各種方法的檢出率

^aP＜0.05

表2　胃粘膜組織切片三種染色菌量分級(jí)

^bP＜0.01

在各種方法中，改良W－S染檢出率最高，HE染最低，經(jīng)X²檢驗(yàn)，差異有顯著性（P＜0.05)；尿素酶試驗(yàn)、Giemsa染與改良W－S染比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05)；且其特異性、敏感性均在92％以上。表2之菌量分級(jí)，HE染與改良W－S染比較，差異有顯著性（P＜0.05)；Giemsa染與改良W－S染比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05)。

3　討論

本文對(duì)幾種常用gydjdsj.org.cn檢測(cè)Hp感染的方法進(jìn)行比較，其敏感性、特異性、檢出率及方法難易、速度、費(fèi)用上均有不同。檢出率以改良W－S染最高，HE染最低；特異性以培養(yǎng)法最高。細(xì)菌培養(yǎng)是鑒定Hp陽(yáng)性最可靠的方法，特異性100％，但培養(yǎng)需要一定條件和技術(shù)，影響因素多，敏感性較低，時(shí)間長(zhǎng)，一般單位難以開展。HE染色作病理診斷的同時(shí)兼作Hp檢測(cè)。但其敏感性差，菌量分級(jí)少，Hp難以分辨。改良W－S銀染是一種檢出率最高的經(jīng)典方法，但其操作方法復(fù)雜，顯色劑難配制。每次染色需加熱、恒溫及配顯色劑，熱水沖洗不徹底，雜質(zhì)影響觀察，銀試劑貴耗時(shí)耗資。Giemsa染與改良W－S染在檢出率及菌量分級(jí)方面比較，差異均無(wú)顯著性（P＞0.05)。特異性高，方法簡(jiǎn)單、便宜，是較理想的組織切片診斷Hp方法，這與國(guó)外學(xué)者報(bào)道一致。直接涂片Hp呈革蘭陰性菌，形態(tài)典型，有簡(jiǎn)單，快速（1h～2h內(nèi))之特點(diǎn)，但敏感性低。尿素酶試驗(yàn)具有快速（幾min至5h內(nèi))、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、敏感性及特異性高的優(yōu)點(diǎn)，與直接涂片法聯(lián)用可提高敏感性及特異性。

尿素酶試驗(yàn)聯(lián)合直接涂片法是檢測(cè)Hp感快速、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、特異性、敏感性高的方法，有利于各級(jí)醫(yī)院臨床推廣使用；Giemsa染是較理想組織切片診斷Hp感染的方法；培養(yǎng)及改良W－S銀染可在有條件單位開展。