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冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉—蟲草素和腺苷的含量測定方法--HPLC法

  
方法名稱:
  冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉—蟲草素和腺苷的含量測定-- HPLC法
應用范圍:
  測定冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉中蟲草素和腺苷的含量
方法原理:
 冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉加入90%甲醇回流提取,經(jīng)液相色譜儀分離,在260nm測定峰面積,標準曲線法測定蟲草素和腺苷的含量。
儀器設備及實驗條件:
 

儀器設備  日本島津高效液相色譜系統(tǒng)( SHIMADZU LC-10ATvp 、紫外檢測器SHIMADZU SPD-10Atvp、柱溫箱(天津奧特賽恩斯AT-330);

色譜條件 色譜柱:反相DIAMONSIL C18 烷基硅膠柱(250mm ×4.6mm,5μm);檢測波長:260nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:40℃;流動相:乙腈+水+甲醇= 2+85+2。
試樣制備:
 

蟲草素標準曲線的制備 精密稱取2.25 mg蟲草素對照品,90%甲醇定容至25mL,然后用90 %甲醇分別稀釋成0.45、1.26、4.50、9.00、13.50、18.00μg/mL系列對照溶液,分別取以上不同濃度的對照溶液準確進樣5μL,以峰面積對溶液濃度進行回歸,即得。

腺苷標準曲線的制備 精密稱取2.20mg腺苷對照品,90%甲醇定容至25mL,然后用90 %甲醇分別稀釋成1.76、4.40、8.8013.50、17.60、μg/mL系列對照溶液,分別取以上不同濃度的對照溶液準確進樣5μL,以峰面積對溶液濃度進行回歸,即得。

供試品溶液的配制 精密稱取0.5g冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉,置磨口錐形瓶中,加入20mL90%甲醇,水浴回流2h,抽濾,殘渣用90%甲醇洗滌3次,將濾液合并濃縮,90%甲醇定容至5mL容量瓶中,即得。
操作步驟:
  依供試品溶液的制備方法,制得供試品溶液,注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測定,計算含量。
附件:
  點擊下載 (解壓密碼:gydjdsj.org.cn)
備注:
 
參考文獻:
  王海霞,胡高升,蒙婭等.RP-HPLC 法測定冬蟲夏草發(fā)酵液凍干粉中蟲草素和腺苷含量.中國食品衛(wèi)生雜志.2007,19(4):309-312
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