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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 >> 藥學(xué)理論 >> 中藥及天然藥物質(zhì)量控制研究方法 >> 正文:板藍(lán)根--氨基酸含量測(cè)定--HPLC法中藥質(zhì)量控制方法/操作步驟
    

板藍(lán)根--氨基酸含量測(cè)定--HPLC法

  
方法名稱:
  板藍(lán)根--基酸含量測(cè)定-- HPLC法
應(yīng)用范圍:
  測(cè)定板藍(lán)根中氨基酸含量
方法原理:
 樣品加40%乙醇水溶液超聲提取,衍生化后經(jīng)液相色譜儀分離,以正亮氨酸為內(nèi)標(biāo),在360nm 處測(cè)定峰面積,外標(biāo)法測(cè)定氨基酸含量。
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件:
 

儀器設(shè)備  大連依利特分析儀器有限公司P200 Ⅱ泵、UV200 型紫外檢測(cè)器、Echrom 98 色譜數(shù)據(jù)處理工作站。

色譜條件  色譜柱:Sinochrom ODS-BP 柱(250mm×4.6mm, 5μm);流動(dòng)相:NaAc緩沖溶液(pH 6.4)-乙腈(體積比為85:15);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):360nm;進(jìn)樣量:10μL。
試樣制備:
 

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  分別準(zhǔn)確稱取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品約10 mg,置于10mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀釋至刻度, 搖勻,即得精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確稱取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品31.35,33.02 32.67mg,置于25mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品混合溶液。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品混合溶液0.51.0,1.5,2.02.5,3.0,3.5,4.0mL,置于10 mL量瓶中,加衍生緩沖液1.0 mL,搖勻,再加衍生溶液1.0 mL,搖勻,避光,于60℃水浴保溫1h,放冷,加平衡溶液至刻度,放置15min后分別進(jìn)樣10μL,測(cè)得峰面積,以峰面積對(duì)進(jìn)樣量做線性回歸,即得。

   衍生緩沖溶液的制備  稱取NaHCO3 4.2g,加水溶解并定容至100mL,得0.5mol/L NaHCO3溶液(pH9)。

   平衡溶解的制備  稱取KH2PO4 3.4g置于500mL量瓶中,加水溶解,加入0.1 mol/LnaOH 145.5mL,用水定容。

供試品溶液的制備  取板藍(lán)根粉末(40 目) 約0.5g,準(zhǔn)確稱定,加40%乙醇水溶液40mL后超聲提取30min,過(guò)濾,濾渣連同濾紙以40%乙醇15mL分3次洗滌,合并于濾液中,蒸干;殘?jiān)?0%乙醇水溶液溶解并定容至10mL量瓶中。準(zhǔn)確量取1mL置于10mL量瓶中,加衍生緩沖液1.0mL,搖勻;再加衍生溶液1.0mL,避光下于60℃恒溫水浴中衍生1h,取出放冷,加平衡溶液稀釋至刻度,搖勻,放置15min,即得。
操作步驟:
   依上述方法制備供試品溶液,取10μL進(jìn)樣,依法測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算含量。
附件:
  點(diǎn)擊下載 (解壓密碼:gydjdsj.org.cn)
備注:
 
參考文獻(xiàn):
  萬(wàn)紹暉,楊浩,耿秀梅.柱前衍生化反相高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根中的氨基酸.色譜.2005,23(4):408-410
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