決明子-大黃酚的含量測定方法-HPLC1

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方法名稱：	決明子-大黃酚的含量測定-HPLC1
應(yīng)用范圍：	用于決明子中大黃酚的含量測定
方法原理：	本品粉末加氯仿-甲醇（1∶1)提取，經(jīng)液相色譜分離，在254 nm處測定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件：	儀器設(shè)備 HP1100高效液相色譜儀，G1311A-四元泵，G1322A-脫氣機(jī)，G1316A-柱溫箱，1314A-UV可變波長檢測器，HPRev.A.0501化學(xué)工作站色譜條件色譜柱：SUPELC0SIL ^{T m}LC₁₈Column （5 μm，4.6 mm×250 mm) 流動(dòng)相：甲醇—0.5 %醋酸水溶液（75∶25) 流速：1.0 mL/min 測定波長：254 nm 柱溫：40 ℃
試樣制備：	對照品溶液制備精密稱取大黃酚對照品8.0 mg，置于25 mL容量瓶中，加氯仿-甲醇（1∶1)溶解并稀釋至刻度，制成0.32 mg/mL濃度的對照品溶液。供試品溶液制備 1)游離大黃酚樣品液：精密稱取生、炒決明子粉末（過60目篩)2.5 g，置圓底燒瓶中，加入氯仿-甲醇（1∶1)混合液25 mL，水浴加熱（60 ℃)回流1小時(shí)，濾過，減壓回收溶劑至干。加入氯仿-甲醇（1∶1)混合液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻靜置，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。2)總大黃酚樣品液：精密稱取生、炒決明子粉末（過60目篩)2.5 g，置圓底燒瓶中，加入甲醇25 mL，水浴加熱（60 ℃)回流2小時(shí)，放至室溫，濾過，回收溶劑至干，加入3 %鹽酸溶液30 mL，直火水解1 h，放至室溫，加入氯仿30 mL，水浴回流15 min，放至室溫。用分液漏斗分出氯仿層，用少量蒸餾水分2次洗滌，回收溶劑至干。加入氯仿—甲醇（1∶1)混合液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，稀釋至刻度。精密吸取1 mL，稀釋至10 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
操作步驟：	分別精密吸取大黃酚對照液以及決明子供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以外標(biāo)法計(jì)算大黃酚含量。
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備注：
參考文獻(xiàn)：	戚愛棣，閻雪梅，王虹. 液相色譜法測定決明子中大黃酚的含量. 天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2002，21（3)：49～50