HLA分型并不只是一種應(yīng)用性的臨床檢測指標(biāo),免疫遺傳學(xué)研究的發(fā)展,很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態(tài)性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)主要側(cè)重于分析HLA產(chǎn)物特異性;80年代起建立的DNA分型方法則側(cè)重于基因的分型。
一、血清學(xué)分型技術(shù)
。ㄒ)HLA-Ⅰ類抗原的檢測
HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)(microlymphocytotoxicitytest)或稱補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)(complement dependent cytotoxicity test)。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細(xì)胞,作用后加入免補(bǔ)體,充分作用后加入染料,在倒置顯微鏡下判斷結(jié)果,著染的細(xì)胞為死亡細(xì)胞,表示待檢淋巴細(xì)胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標(biāo)準(zhǔn)抗原清取自多次經(jīng)產(chǎn)婦或計(jì)劃免疫志愿者。
。ǘ)HLA-DR、DQ抗原檢測
該二抗原分型方法同HLA-Ⅰ類抗原,但所用抗血清須經(jīng)過血小板吸收以去除針對Ⅰ類抗原的抗體。另外,待測細(xì)胞須是經(jīng)純化的B細(xì)胞。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供
血清學(xué)分型是一項(xiàng)古老的技術(shù),雖然近年來已建立許多新的分型技術(shù),但血清學(xué)方法目前仍是HLA分型的基礎(chǔ)。
二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)
HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細(xì)胞(homozygote typing cell,HTC)及預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗(yàn)(primed lymphocyte test,PLT)檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細(xì)胞在識別非已HLA抗原決定簇后發(fā)生的增殖反應(yīng)。由于分型細(xì)胞來源困難以及操作手續(xù)繁瑣,細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)下正逐漸淘汰。
三、HLA的DNA分型技術(shù)
上述傳統(tǒng)的HLA分型方法有許多不足之處,近年來國內(nèi)外已將HLA分型技術(shù)由抗原水平發(fā)展到基因水平。
。ㄒ)限制性片段長度多態(tài)性檢測技術(shù)
這是首先建立的對多態(tài)性進(jìn)行檢測的DNA分析技術(shù)。個(gè)體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別,后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內(nèi)切酶識位置及酶切位點(diǎn)數(shù)目的不同,從而產(chǎn)生數(shù)量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個(gè)基因組DNA酶切片段進(jìn)行雜交,即可分析限制性長度片段多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)。一定的內(nèi)切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統(tǒng)方法測定的HLA特異性型別相關(guān)。80年代末發(fā)展起來的PCR(polymerase chain reaction)技術(shù)已被用于RFLP分析,即用等位特異限制酶裂解PCR擴(kuò)增的片段,然后再進(jìn)行分析,從而大提高了靈敏度。