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流式細(xì)胞術(shù)對外周血白細(xì)胞的免疫熒光分析

 

  三、淋巴細(xì)胞亞群的測定及其在臨床醫(yī)學(xué)中的實(shí)用意義

  淋巴細(xì)胞由于表面特異性抗原的差異可分為四大類(表10-3),這些不同抗原表現(xiàn)型的亞群執(zhí)行不同的機(jī)能。而且某些疾病會選擇性地?fù)p傷某些亞群而造成亞群之間的比例失調(diào)。根據(jù)FCM雙熒光分析的結(jié)果,現(xiàn)將不同的抗原和不同的機(jī)能的淋巴細(xì)胞亞群列于表10-4。

表10-13 主要淋巴細(xì)胞亞群的表面抗原

細(xì)胞表面抗原的類型 抗原表現(xiàn)的細(xì)胞
T協(xié)助、誘導(dǎo)細(xì)胞 T抑制、T細(xì)胞毒細(xì)胞 NK細(xì)胞 B細(xì)胞
獨(dú)特的        
CD3(Leu4)
CD4(Leu3)
CD8(Leu2) -/+
CD16(Leu11)
CD19(Leu12)
限制性的        
Leu7 -/+ -/+ +/-
Leu8 +/- +/- -/+ +/-
CD7(Leu9) +/- +/-
CD11(Leu15CR3) -/+ -/+

  +:表現(xiàn)的抗原;-:未表現(xiàn)的抗原;+/-:主要亞群有表現(xiàn)的抗原;-/+:抗原僅表現(xiàn)于少數(shù)亞群。

表10-14 淋巴細(xì)胞機(jī)能性亞群

細(xì)胞群 細(xì)胞機(jī)能 測試的單克隆抗體
T細(xì)胞 協(xié)助細(xì)胞 Leu3+8-
  抑制細(xì)胞—誘導(dǎo)細(xì)胞 Leu3+8+
  細(xì)胞毒細(xì)胞 Leu2+15-
  抑制細(xì)胞 Leu2+15-
  抑制作用  
  抑制—誘導(dǎo)細(xì)胞 Leu3+8+
  抑制--增強(qiáng)細(xì)胞 Leu2+8-
  抑制—增強(qiáng)細(xì)胞(激活) Leu2+8- DR+
  抑制—效應(yīng)細(xì)胞 Leu2+8+ 15+
  組織相容限制的細(xì)胞毒性細(xì)胞  
  第一類限制性 Leu2+15- DR-(7+?)
  第二類限制性 Leu3+
  第二類反應(yīng)性 Leu2+
  非組織相容性限制的細(xì)胞毒細(xì)胞  
  NK亞群 Leu7+ 11+15+
    Leu7- 11+15+
    Leu7- 11+DR+
B細(xì)胞   Leu12+ 14+16+ DR+
    CR2+ k+ 或λ+
  亞群 Leu12+1+
    Leu12+1-

  外周血白細(xì)胞的機(jī)能,特別是淋巴細(xì)胞的機(jī)能狀態(tài)在一定程度上反應(yīng)了機(jī)體的免疫機(jī)能。近幾年來,用FCM來測定某些疾病的淋巴細(xì)胞及其亞群已成為重要的診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo),如對骨髓、器官移植,白血病、淋巴瘤的診斷和對免疫缺陷病的估價(jià)等。測定淋巴細(xì)胞亞群的主要依據(jù)是在于淋巴細(xì)胞表面不同的抗原表現(xiàn)型,而這些表現(xiàn)型又依賴于相應(yīng)的單克隆抗體而被識別。所以,特異性很高的單克隆抗體結(jié)合先進(jìn)的FCM,已為臨床提供了不少非常有用而重要的資料,但被FCM所分析的淋巴細(xì)胞的整個臨床意義尚未完全認(rèn)識清楚。隨著更多確定淋巴細(xì)胞表現(xiàn)型的試劑的應(yīng)用,F(xiàn)CM對診斷和治療計(jì)劃的擬定以及預(yù)后的估計(jì)將會表現(xiàn)出更重要的實(shí)用意義。

  1.T淋巴細(xì)胞亞群的測定如前所述,在使用FCM分析時(shí),先用0。散射和90。光散射雙指標(biāo)將白細(xì)胞分為三群:淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞。在二維點(diǎn)圖上劃出淋巴細(xì)胞群范圍后,設(shè)立GFL的RFL單指標(biāo)的直方圖。命電子計(jì)算機(jī)僅計(jì)數(shù)所輸入的淋巴細(xì)胞,即劃線框出的那部分細(xì)胞。一般計(jì)數(shù)輸入的細(xì)胞可設(shè)1000~5000個。直方圖的分析可顯示陽性細(xì)胞的百分率。應(yīng)用輸入細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)以及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù),就能得到陽性細(xì)胞的絕對值,即每立方毫米血液中的絕對值。有時(shí)T淋巴細(xì)胞某亞群的絕對值比百分率更為重要,因?yàn)樗梢员砻鱐細(xì)胞某亞群的增高和減少。當(dāng)然,淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)也是一個重要數(shù)據(jù),應(yīng)當(dāng)準(zhǔn)確測出。

  CD4/CD8細(xì)胞的比值,有時(shí)也用于反映病人淋巴系統(tǒng)的機(jī)能狀態(tài)。不少臨床免疫實(shí)驗(yàn)室已把CD4/CD8的值作為常規(guī)血檢查的項(xiàng)目。在國際上,淋巴細(xì)胞亞群以及CD4/CD8并未建立統(tǒng)一數(shù)值,各實(shí)驗(yàn)室均需建立自己的標(biāo)準(zhǔn)。平均值一般為1.73~2.00。

  一般而言,影響淋巴細(xì)胞亞群的因素較多,如年齡、性別、種族、以及外周圍環(huán)境如季節(jié) 、藥品等的影響。T細(xì)胞的絕對值在兒童略高于成人。嬰兒CD4細(xì)胞的百分率較成年人高;老年人的CD8略低。正常人在一晝夜內(nèi)也有周期性的波動:上午CD4略低,下午4時(shí)之后開始增加,直至次晨,平均波動為15%~20%。盡管正常情況下淋巴細(xì)胞亞群有所變動,但仍屬正常范圍。某些疾病,如器官移植、免疫疾病、免疫抑制和一些淋巴細(xì)胞腫瘤,其淋巴細(xì)胞亞群及其比值測量結(jié)果均可能偏離正常范圍。

  有工作報(bào)道,傳統(tǒng)的T輔助誘導(dǎo)細(xì)胞(CD4+)具有抑制機(jī)能,而在T抑制細(xì)胞毒細(xì)胞(CD4+)中,有些又具有協(xié)助的功能。因此,對原來設(shè)想的CD4、CD8的機(jī)能分群有所混淆。預(yù)計(jì)會有新的單克隆抗體再從CD4和CD8的細(xì)胞中分出。不過就目前看來,不少臨床免疫實(shí)驗(yàn)室已用CD4/CD8比值結(jié)合淋巴細(xì)胞絕對值對多種疾病的診斷、治療和預(yù)后的估計(jì)提供了不少有價(jià)值的資料。

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