|
7.霉菌瓊脂培養(yǎng)基
照霉菌培養(yǎng)基的處方及制法，加入15～20g瓊脂，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，115℃滅菌20分鐘，趁熱斜放使凝固成斜面。
上述培養(yǎng)基分別按15ml與40ml分裝于試管中，裝量約為試管高度的2/5，在115℃滅菌30分鐘。細(xì)菌培養(yǎng)基經(jīng)30～35℃培養(yǎng)48小時，霉菌培養(yǎng)基經(jīng)20～25℃培養(yǎng)72小時后，應(yīng)無菌生長。
培養(yǎng)基的質(zhì)量應(yīng)通過靈敏度檢查。
培養(yǎng)基靈敏度檢查法
1.菌種
(1)藤黃微球菌(Micrococcus Lutea)[CMCC(B)28001]
(2)生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941]
(3)白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]
2.操作
取藤黃微球菌的營養(yǎng)瓊脂斜面和白色念珠菌的霉菌瓊脂斜面的新鮮培養(yǎng)物分別用0.9％滅菌氯化鈉溶液制成均勻的菌懸液;將生孢梭菌的不含瓊脂需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基的新鮮培養(yǎng)物,吸入滅菌離心管，離心，棄去上清液，菌體用0.9％滅菌氯化鈉溶液制成均勻菌懸液。分別取上述菌懸液用0.9％滅菌氯化鈉溶液稀釋至與細(xì)菌濁度標(biāo) 準(zhǔn)管相同的濃度，然后，作10倍系列稀釋并計數(shù)。
將藤黃微球菌1:10< 5>～1:10<8>菌液、生孢梭菌1:10<6>～1:10<9>菌液、白色念珠菌1:10< 5>～1:10<8>菌液各1ml,分別接種至9ml試驗培養(yǎng)基中,每個稀釋度至少接種3管,以未接種的培養(yǎng)基管作對照，細(xì)菌試驗管置 30～35℃培養(yǎng)3天,白色念珠菌試驗管置20～25℃培養(yǎng)5天。逐日記錄結(jié)果。
3.結(jié)果判定
以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的2/3以上呈現(xiàn)生長的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度（且接種菌量均應(yīng)小于10個），三次試驗中，以兩次達(dá)到的最高靈敏度為判定標(biāo)準(zhǔn)。
需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基靈敏度為藤黃微球菌1:10<6>；生孢梭菌1:10<7>，霉菌培養(yǎng)基靈敏度為白色念珠菌1:10<6>。
[附注]
肉浸液制備法
取新鮮牛肉，除去肌腱及脂肪，切細(xì)，絞碎后,每1000g加水3000ml，充分拌勻，在2～10℃浸泡20～24小時，煮沸1小時，濾過，壓干肉渣，補(bǔ)足液量，分裝，121℃滅菌30分鐘，置冷暗處備用。也可用牛肉浸出粉3g，加水1000ml,配成溶液代替。
對照用菌液
1.金黃色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）菌液
取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的營養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基內(nèi),在30～35℃培養(yǎng)16～18小時后，用0.9％滅菌氯化鈉溶液稀釋成1:10<6>。
2.生孢梭菌（Clostridium sporogenes）菌液
取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物1白金耳,再接種至相同培養(yǎng)基內(nèi)，在30～35℃培養(yǎng)18～24小時，用0.9％滅菌氯化鈉溶液稀釋至1:10<6>。
3.白色念珠菌（Candida albicans）菌液
取白色念珠菌[CMCC(F)98001]的霉菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳,接種至霉菌培養(yǎng)基內(nèi)，在20～25℃培養(yǎng)24小時后，用0.9％滅菌氯化鈉溶液稀釋至1:10<5>。
檢查法
1. 直接接種法
(1) 供試品如為注射液、供角膜創(chuàng)傷及手術(shù)用的滴眼劑或滅菌溶液, 任取供試品2支（瓶）以上，用適當(dāng)消毒液清潔供試品容器的外表面后,以無菌操作吸取規(guī)定接種量的供試品溶液，分別接種于需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基5管，其中1 管接種對照用菌液1ml，供作陽性對照；取1支需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基管作陰性對照, 另接種于霉菌培養(yǎng)基2管，供試品溶液的每管接種量與培養(yǎng)基的分裝量，應(yīng)根據(jù)供試品的裝量,按下列規(guī)定取用：
供試品裝量
每管接種量
培養(yǎng)基分裝量
2ml或2ml以下
0.5ml
15ml
2ml以上至20ml
1.0ml
15ml
20ml以上
5.0ml
40ml
接種后輕輕搖動,使勻。需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基在30～35℃培養(yǎng)5日, 霉菌培養(yǎng)基在20～25℃培養(yǎng)7日，抗生素類藥品均培養(yǎng)7日，放射性藥品培養(yǎng)5～7日。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日檢查是否有菌生長（陽性對照在24小時內(nèi)應(yīng)有細(xì)菌生長）；如在加入供試品溶液后，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時,可取該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另1支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 48～72小時后，觀察是否再現(xiàn)渾濁或在斜面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時，取培養(yǎng)液少量，涂片制成染色標(biāo)本，用顯微鏡觀察是否有菌生長。
上一頁 [1] [2] [3] 下一頁
... |
