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細(xì)胞色素C活力測定法,藥物分析考試西藥分析 | |||||
| 來源：醫(yī)學(xué)全在線 更新：2007-5-16 考研論壇 | |||||
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試劑 (1) 磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L) 取磷酸氫二鈉71.64g,加水使溶解成1000ml,作為甲液。另取磷酸二氫鈉27.60g，加水使溶解成1000ml，作為乙液。取甲液81ml與乙液19ml，混勻，調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (2) 磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L) 取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)500ml,加水稀釋成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (3) 磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L) 取磷酸鹽緩沖液 (0.2mol/L) 100ml，加水稀釋成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (4) 琥珀酸鹽溶液 取琥珀酸與氫氧化鉀各4.72g，加水使溶解成100ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (5) 氰化鉀溶液 取氰化鉀0.65g,加水使溶解成100ml后,用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (6) 去細(xì)胞色素C的心懸浮液醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com 取新鮮豬(牛)心2只，除去脂肪與結(jié)締組織,切成條,用絞肉機(jī)絞碎，置紗布兜中，用常水沖洗約2小時(經(jīng)常攪動，擠出血色素)，擠干,用水洗數(shù)次，擠干，置磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L)中浸泡約1小時，擠干，重復(fù)浸泡1次，用水洗數(shù)次,擠干，置組織搗碎機(jī)內(nèi)，加磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L)適量恰使豬(牛)心浸沒，搗成勻漿，離心10分鐘(普通離心機(jī))，取上層混懸液，加冰塊少量，迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至約5.5，立即離心15分鐘，取沉淀，加等體積的磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L),用玻璃勻漿器磨勻后,貯存于冰箱中；臨用時取1.0ml,加磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L)稀釋成10ml. 供試品溶液的制備 取供試品，加水制成每1ml中含細(xì)胞色素C約3mg的溶液。 測定法 取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml（如系還原型制劑，應(yīng)加入0.01mol/L鐵氰化鉀溶液0.05ml），置25ml具塞比色管中,加去細(xì)胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml，加水稀釋至10ml，搖勻,以同樣的試劑作空白，照分光光度法（附錄Ⅳ A），在550nm的波長處附近，間隔0.5nm找出最大吸收波長，并測定吸收度，直至吸收度不再增大為止，作為酶還原吸收度；然后各加連二亞硫酸鈉約5mg，搖勻,放置約10分鐘，在上述同一波長處測定吸收度，直至吸收度不再增大為止，作為化學(xué)還原吸收度；按下式計算。 酶還原吸收度 細(xì)胞色素C活力＝───────────×100％ 化學(xué)還原吸收度 |
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| 文章錄入：凌云 責(zé)任編輯：凌云 | |||||
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