研究表明，幽門螺桿菌（Helicobacterpylori,Hp)與胃炎、消化性潰瘍等胃部疾患密切相關(guān)，為此，我們對某些實驗性動物進行實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Wistar大鼠經(jīng)口感染Hp，可導致實驗性感染。從其胃組織中檢查到并分離出Hp，粘膜組織亦顯示某些病理變化。從而為研究Hp實驗性感染提供較為合適的一種動物模型。
1 材料和方法
1.1 菌株 幽門螺桿菌Hp379及Hp404株，系北京市積水潭醫(yī)院消化內(nèi)科就診的胃病患者，經(jīng)由內(nèi)窺鏡取得的胃粘膜進行細菌培養(yǎng)分離到的。經(jīng)過鑒定，由本室傳代保存。
1.2 動物 Wistar大鼠，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所。新西蘭種家兔，C57和BALB/小鼠，由本所動物室供給。
1.3 感染方法 Wistar大鼠的實驗分2次進行。第1次用出生5個月（體重175g～254g)的成年鼠，第2次用出生兩個月（體重152g～174g)的幼齡鼠。動物先禁食12h～14h，用胃管喂以5%Na2HCO32ml,15min后用胃管注入Hp379或Hp404株的菌液1.5ml(1010CFU/ml,30min后給食。每周感染1次，共4次。對照組動物不感染Hp，飼養(yǎng)條件與實驗組相同。用以感染的家兔為幼齡兔（體重1200g～1500gydjdsj.org.cn/pharm/g)。C57小鼠為4周齡幼鼠（10g～12g)，BABL/C用成年鼠（18g～20g)。感染方法同大鼠，家兔每次感染量為2ml，小鼠為0.5ml(1010CFU/ ml)，每周感染1次，共5次。動物在最后1次感染后的第7d～10d，禁食12h～14h后，乙醚麻醉處死，無菌操作取出胃，用滅菌PBS洗去胃內(nèi)容物，從靠近幽門端的不同部位剪取胃粘膜3～4小塊，加含10%小牛血清的布氏肉湯2ml，用組織研磨器制成漿，用以做尿素酶試驗，直接涂片檢菌和細菌培養(yǎng)。其余的胃組織用10%甲醛（PBS配制)固定，供病理學檢查。
1.4 細菌學檢查 ①尿素酶試驗基本參考Morris等的方法。②胃粘膜直接涂片檢菌法：取粘膜勻漿滴推成涂片，用甲醇固定10min，0.3%堿性復紅染色，鏡檢Hp菌。③Hp菌培養(yǎng)：以布氏瓊脂為基礎(chǔ)，加入6%脫纖維羊血及脫氧胸苷酸（TMP)5mg/L，萬古霉素6mg/L，兩性霉素2mg/L，制成血平板后，置4°C保存?zhèn)溆�。取胃粘膜勻漿0.2ml于血平板后，涂勻后放入含10%CO2、5%O2及85%N2的混合氣體培養(yǎng)箱中，57°C培養(yǎng)72h后觀察結(jié)果。
1.5 病理學檢查 甲醛固定的胃組織,石蠟包埋，切成6μm厚的組織切片。分別用蘇木素-伊紅和Warthin-Starry鍍銀染色，觀察病理改變和檢查組織切片中的Hp。
2 結(jié)果
2.1 尿素酶試驗 經(jīng)口感染Hp的8只大鼠，其胃粘膜做尿素酶試驗，多數(shù)在4h內(nèi)，個別的24h出現(xiàn)陽性反應(yīng)。對照組大鼠的胃粘膜呈陰性反應(yīng)。經(jīng)哭喊Hp的家兔、C57和BALA/C小鼠的胃粘膜，均呈陰性反應(yīng)。
2.2 涂片細菌檢查 感染Hp的8只大鼠的胃粘膜勻漿，制成涂片染色后鏡檢，均檢查到Hp。未感染的大鼠胃粘膜涂片未找到Hp。感染Hp的兔、C57和BALB/C小鼠的胃粘膜涂片亦未檢查到Hp。
2.3 細菌培養(yǎng) 各組動物的胃粘膜組織都做了Hp培養(yǎng)，結(jié)果只有感染Hp的大鼠胃組織，分離出Hp。其他各組均款培養(yǎng)出Hp。
2.4 組織切片細菌檢查 胃粘膜組織切片用Warthin-Starry染色，背景為淡黃色，Hp染色成黑色。感染Hp的大鼠，無論是幼齡鼠或是成年鼠，其胃粘膜切片中均可找到Hp，它們主要分布于粘液層。粘膜上皮細胞的表面和粘膜的隱窩處。切片中的Hp形成呈半圓、S或螺旋狀，未感染Hp的正常大鼠，胃組織中未找到Hp。感染Hp 的家兔、C57和BALB/C小鼠的胃切片中，亦未檢到Hp。
2.5 病理組織學檢查 感染Hp大鼠的胃組織切片中，可見粘膜上皮細胞變性病灶，細胞腫脹而變得不規(guī)則，gydjdsj.org.cn/shiti/胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)不清或消失。粘膜層見有單個核細胞浸潤病灶。
3 討論
上述結(jié)果表明Wistar大鼠對Hp易感。經(jīng)口感染Hp，可從其胃粘膜中檢查到并分離出Hp，胃粘膜亦出現(xiàn)病變。與之相反，家兔、C57和BALB/C小鼠，示能引起Hp的實驗性感染。Ehler曾用Lewis大鼠，C57BL/6和BALB/C小鼠做實驗，試圖建立Hp的動物模型，未獲成功。他們的小鼠實驗結(jié)果與我們的結(jié)果相同，都是陰性。但大鼠的實驗結(jié)果不同�？赡苁且驗閷嶒灄l件不同的緣故。
自從1983年首先從人胃中分離到Hp以后，相繼從水貂和恒河猴的胃組織中分離出Hp樣細菌。那么，我們從感染的Wistar大鼠胃組織中分離到的Hp是否亦是自然存在的呢？看來，這種可能性不大。因為，如前所述，未感染的對照組大鼠，用各種方法檢測，都沒有檢查到Hp菌
最近報道悉生仔豬經(jīng)口感染Hp，可從胃組織中分離出Hp。但用悉生仔豬做實驗，不但費用昂貴，而且不方便。根據(jù)本實驗結(jié)果，我們認為Wistar大鼠，尤其是幼齡鼠，是研究Hp菌較為理想的動物模型。但是，多次感染是必要的。
