MHC具有重要的生物學(xué)功能,主要包括參與胸腺對胸腺細(xì)胞的選擇作用,對機(jī)體免疫應(yīng)答的遺傳控制,參與免疫細(xì)胞相互識別,對免疫細(xì)胞相互作用的遺傳限制等。有關(guān)Ⅲ類抗原C2、C4和B因子的功能請參見有關(guān)補(bǔ)體系統(tǒng)的內(nèi)容。
成熟的、有功能的T細(xì)胞必須經(jīng)過在胸腺中陽性選擇和陰性選擇,MHC在這兩種選擇中起關(guān)鍵作用。
(一)陽性選擇過程(positive selection)
早期的胸腺細(xì)胞前體(prothymocyte)不足3%,為CD4-CD8-雙陰性細(xì)胞(double negative cells),隨后發(fā)CD4+CD8+雙陽性細(xì)胞(double positive cells),并受一以嚴(yán)格的選擇。假如一個雙陽性細(xì)胞表面能與胸腺皮質(zhì)上皮細(xì)胞表面MHc I類或Ⅱ類分子發(fā)生有效結(jié)合,就可被選擇而繼續(xù)發(fā)育,否則會發(fā)生程序性的細(xì)胞死亡(programmed cell death)。MHC I類分子選擇CD8復(fù)合受體(coreceptor),而使雙陽性細(xì)胞表面CD4復(fù)合受體減少;MHCⅡ類分子選擇CD4復(fù)合受體,而使CD8復(fù)合受體減少。這種選擇過程賦于成熟CD8+CD4-T細(xì)胞具有識別抗原與自身MHc I類分子復(fù)合物的能力,CD4+CD8-T細(xì)胞具有識別抗原與自身MHCⅡ類分子復(fù)合物的能力,成為T細(xì)胞MHC限制現(xiàn)象的基礎(chǔ)。
(二)陰性選擇過程(negativeselection)
經(jīng)過陽性選擇后的T細(xì)胞還必須經(jīng)過一個陰性選擇過程,才能成為成熟的、具有識別外來抗原能力的T細(xì)胞。位于皮質(zhì)與髓質(zhì)交界外的樹突狀細(xì)胞(DC)和巨噬細(xì)胞(Mφ)表達(dá)高水平的MHc I類抗原和Ⅱ類抗原,在胚胎發(fā)育過程中,機(jī)體自身抗原成分與DC或Mφ表面MHc I類、Ⅱ類抗原形成復(fù)合物。經(jīng)過陽性選擇后的胸腺細(xì)胞如能識別DC或Mφ細(xì)胞表面自身抗原與MHC抗原復(fù)合物,即發(fā)生自身耐受(self tolerance)而停止發(fā)育,而不發(fā)生結(jié)合的胸腺細(xì)胞才能繼續(xù)發(fā)育為識別外來抗原CD4+CD8-或CD4-CD8+單陽性細(xì)胞,遷移到外周血液中去(圖6-13)。
人們早已觀察到各種不同品系動物的免疫應(yīng)答是由遺傳控制的,如豚鼠對白喉毒素結(jié)核菌素的易感性在不同品系間有很大差異人類變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生與遺傳因素有關(guān)。但對這一問題的深入研究主要?dú)w功于60年代后免疫化學(xué)研究中合成多肽抗原的應(yīng)用,對H-2的深入了解以及同類系和H-2內(nèi)重組株小鼠的建立。
1.人工合成多肽抗原 化學(xué)合成多肽抗原主要有以下兩類:
(1)合成分枝多肽抗原:它是以線狀的多聚賴氨酸(L)聯(lián)上多聚丙氨酸(A)的側(cè)鏈,形成A-L骨架結(jié)構(gòu),然后再在丙氨酸鏈上偶聯(lián)不同的氨基酸,形成具有不同抗原特異性的分枝多肽抗原。最常用的是(T,G)-A-L,(H,G)-A-L和(φ,G)-A-L等(圖6-14)?乖禺愋杂赡┒税被崴鶝Q定,側(cè)枝和主干起載體的作用。
圖6-13 MHC與胸腺的選擇作用
(2)線狀多肽抗原:這是幾種氨基酸按不同比例和數(shù)量結(jié)合而成的線狀多肽,具有較強(qiáng)的抗原性,如GLφ等。單種氨基酸組成的均一多肽抗原性很弱,但偶聯(lián)上半抗原后則是很好的免疫原,例如多聚賴氨酸(PLL)與DNP偶聯(lián)形成的DNP-PLL被廣泛用于豚鼠免疫應(yīng)答遺傳控制的研究。
2.同類系小鼠(congenic mice)是遺傳北景完合相同,只是所需研究的那個基因不同的小鼠。建立同類系小鼠是諾貝爾獲得者Snell對免疫遺傳學(xué)作用出的突出貢獻(xiàn)。有了同類系小鼠和人工合成多肽抗原,就可以深入研究免疫應(yīng)答的基因控制以及與MHC的關(guān)系。同類系小鼠的培育的方法見圖6-15。
首先近交系(inbredstrain)A品系小鼠與另一個近交系B品系小鼠進(jìn)行交配,A品系MHC是a/a純合(homozygous)的,B品系MHC是b/b純合的。A與B品系雜交的子一代(F1)全部是a/b雜合狀態(tài)的。然后將F1小鼠與親本A品系進(jìn)行回交(backcross),其子代一半為a/a,另一半為a/b,a/b雜合狀態(tài)小鼠的皮片移植到A品系小鼠后迅速被排斥,而a/a子代小鼠的皮片移植到A品系小鼠后并不迅速被排斥。將通過皮片移植后發(fā)生迅速排所鑒定的a/b雜合小鼠又與A品系小鼠進(jìn)行回交,其子代一半為a/a,另一半為a/b,再用上述皮片移植排斥反應(yīng)的方法鑒定出a/a或a/b,將a/b雜合不再與A品系小鼠進(jìn)行回交。如此繼續(xù)20代后,a/b雜合小b等位基因仍然保留,但原來B品系小鼠中其它的遺傳座位都消失了,正如連續(xù)稀釋(serial dilution)一樣,F(xiàn)1小鼠保留了B品系基因的50%,回交后第一代平均只保留了B品系基因的25%,這樣經(jīng)過20次回交后除了保留B品系的MHC等位基因(b)以外,其余B品系的基因(非MHC基因)都消失。也就是說,經(jīng)過如此20代回交后a/b小鼠,除了第17號染色體上的MHC是a/b雜合以外,其余的遺傳背景(除17號染色體MHC以外和其余39對染色體)均與A品系相同。將經(jīng)過20代回交的a/b小鼠進(jìn)行品種間雜交(interbreed)或稱史妹交配,其子代的MHC基因25%是a/a純合,25%是b/b純合,50%是a/b雜合的。其中b/b純合小鼠皮片移植的A品系小鼠后即發(fā)生迅速的排斥。用b/b純合小鼠進(jìn)行品種間雜交,培育出一個新的品系即MHC基因位點(diǎn)上與B品系相同,而其它所有的遺傳背景與A品系相同,我們可稱作這個品系小鼠與A品系是同類系(congenic to strain A),或者叫做在A遺傳背景的B MHC。常用同類系小鼠單體型見表6-7。
圖6-14 合成分枝多肽抗原示意
注:(T,G)-A--L:(多聚酪氨酸,多聚谷氨酸)-多聚丙氨酸-多聚賴氨酸
(H,G)-A--L:(多聚酪氨酸,多聚谷氨酸)-多聚丙氨酸-多聚賴氨酸
(φ,G)-A--L:(多聚酪氨酸,多聚谷氨酸)-多聚丙氨酸-多聚賴氨酸
L:L型,D:D型
3.H-2內(nèi)重組株 通過不同的同類系雜交,根據(jù)交換重組定律,在雜交后代中選擇新的H-2內(nèi)重組體(interH-2recombinants)。不同的重組株在H-2內(nèi)的一些基因位點(diǎn)具有不同的等位基因,即H-2單體型(haplotype)不同。
例如品系A(chǔ),B10.A單體型為a,它是由H-2k和H-2d兩個雙親單體型的I-E亞區(qū)和S區(qū)之間發(fā)生交換重組而產(chǎn)生(表6-8)。H-2內(nèi)重組株(舉例)參見表6-9。
表6-7 常用同類系小鼠的單體型(標(biāo)準(zhǔn)品系,type strains)
品系 | 單體型 | K | I-A | S | D |
B10(C57BL/10) | H-2b | b | b | b | b |
B57BL/6 | H-2b | b | b | b | b |
DBA/2 | H-2d | d | d | d | d |
Balb/c | H-2d | d | d | d | d |
B10.D2 | H-2d | d | d | d | d |
C3H | H-2k | k | k | k | k |
CBA | H-2k | k | k | k | k |
B10.BR | H-2k | k | k | k | k |
圖6-15 同類系小鼠培育的方法
表6-8 A.B10.AH-2內(nèi)重組株的產(chǎn)生
單體型 | K | I-A | I-E | S | G | D | |
親代1 | k | k | k | k | k | k | k |
親代2 | d | d | d | d | d | d | d |
A.B10·A | a | k | k | k | d | d | d |
表6-9 H-2內(nèi)重組株(舉例)
品系 | 單體型 | 雙親單體型 | K | I區(qū) | S | G | D | |
A | E | |||||||
A.B10.A | a | k/d | k | k | k | d | d | d |
A.AL | a1 | k/d | k | k | k | k | k | d |
C3H.OL | o1 | d/k | d | d | d | k | k | k |
C3H.OH | o2 | d/k | d | d | d | d | d | k |
B10.A(4R) | h4 | a/b | k | k | b | b | b | b |
B10.AM | h5 | k/b | k | k | k | k | k | b |
B10.A(3R) | i3 | b/a | b | b | k | d | d | d |
B10.A(5R) | i5 | b/a | b | b | k | d | d | d |
A.TL | t1 | s/al | s | k | k | k | k | d |
A.Th,B10.S(7R) | t2 | s/a | s | s | s | s | s | d |
BSVS | ts | s/a2 | s | s | s | d | d | d |
B10.M(17R) | ag1 | s/f | k | k | k | d | d | f |
B10.M(11R) | ap1 | s/f | f | f | f | f | f | d |
1.免疫應(yīng)答基因的發(fā)現(xiàn) Benacerraf等(1963)首先證實(shí)豚鼠對人工合成抗原PLL(聚-L-賴氨酸)等的抗體應(yīng)答能力受單個常染色體顯性基因(單基因)的控制(表6-10)。實(shí)驗(yàn)表明,2和13兩個品系豚鼠對不同人工合成抗原的應(yīng)答能力不同。兩個品系雜交的子一代(F1)對三種抗原全部有應(yīng)答能力,說明應(yīng)答基因?yàn)轱@性。再將F1和隱性親本進(jìn)行回交,所得下一代對抗原的應(yīng)答表現(xiàn)出孟德爾定律的分離現(xiàn)象,應(yīng)答與無應(yīng)答個體呈1:1之比,說明遺傳是由單基因控制的。F1代與顯性親本進(jìn)行回交,下一代中全部對抗原發(fā)生應(yīng)答。Benacerraf將控制免疫應(yīng)答的基因稱為免疫應(yīng)答基因(immune responesgene ,Ir基因)。具有Ir基因的動物對相應(yīng)抗原呈高應(yīng)答者(responder),缺乏核基因者呈無應(yīng)答或低應(yīng)答者(non-responder)。
表6-10 豚鼠免疫應(yīng)答基因的發(fā)現(xiàn)
抗原 | 2 | 13 | (2*13)F1 | (2*13)F1*13 | (2*13)F1*2 | ||
50% | 50% | 50% | 50% | ||||
DNP-PLL | + | - | + | + | - | + | + |
Glutamyl alanine copolymer(GA) | + | - | + | + | - | + | + |
Glytamyl tyrosine copolymer(CT) | - | + | + | + | + | + | - |
注:DNP-PLL:二硝基苯—多聚賴氨酸 GA:谷氨酰丙氨酸多聚體 CT:谷氨酰酪氨酸多聚體
2.小鼠Ir基因位一地H-2 I區(qū)內(nèi)
(1)小鼠Ir-1基因與MHC連鎖基因:60年代中期,McDevitt和Sela等發(fā)現(xiàn)小鼠有類似針對合成分枝多肽(T,G)-A-L抗原的基因,稱Ir-1基因,并證明該基因與MHC存在著連鎖關(guān)系;如C57BL小鼠對(T,G)-A-L有高抗體應(yīng)答,而CBA小鼠則為低應(yīng)答;對(H,G)-A-L的反應(yīng)則CBA小鼠為高應(yīng)答,而C57BL為低應(yīng)答。以后又檢了一系列對特定抗原高應(yīng)答、中應(yīng)答或低應(yīng)答的小鼠品系(表6-11)。并用回交試驗(yàn)證實(shí)小鼠Ir基因?yàn)閱蝹常染色體顯性遺傳(圖6-16)。
表6-11 不同品系小鼠對三種人工合成抗原的抗體應(yīng)答
小鼠品系 | H-2 | 抗體產(chǎn)生應(yīng)答 | ||
單體型 | 抗(T,G)-A-L | 抗(H,G)-A-L | 抗(φ,G)-A-L | |
A/J | a | 低 | 高 | 高 |
A.BY | b | 高 | 低 | 高 |
C57BL | b | 高 | 低 | 高 |
B1,LP | b | 高 | 低 | 高 |
C3H,SW | b | 高 | 低 | 高 |
BALB/c | d | 中 | 中 | 高 |
DBA/2 | d | 中 | 中 | 高 |
CBA | k | 低 | 高 | 高 |
C3H/HeJ | k | 低 | 高 | 高 |
B10.BR | k | 低 | 高 | 高 |
AKR | k | 低 | 高 | 高 |
DBA/1 | q | 低 | 低 | 高 |
SJL | s | 低 | 低 | 低 |
A.SW | s | 低 | 低 | 低 |
(2)Ir-1基因定位于H-2 I區(qū)內(nèi):70年代初,McDevitt等又利用同類系和H-2內(nèi)重組系小鼠,將1r-1基因定位于H-2 I區(qū)內(nèi)(表6-12)。
Milich等(1982)應(yīng)用同類系小鼠證實(shí)對HBsAg a和d決定簇的體液免疫應(yīng)答也受MHC內(nèi)的基因所調(diào)節(jié)。單倍H-2q產(chǎn)生高應(yīng)答,H-2s.f產(chǎn)生低或無應(yīng)答,H-2a.b.d.k單倍型為中等應(yīng)答。進(jìn)一步用H-2內(nèi)重組系小鼠的實(shí)驗(yàn)表明,控制上述體液免疫應(yīng)答的基因可能位于K區(qū)和I-A亞區(qū)。
圖6-16 應(yīng)用回交試驗(yàn)證實(shí)小鼠對(多聚苯丙氨酸,多聚谷氨酸)-多聚丙氨酸-多降賴氨酸[φG)-A-L]應(yīng)答的Ir基因?yàn)閱蝹常染色體顯性遺傳
表6-12 位H-2 I區(qū)內(nèi)Ir基因位置(舉例)
抗原 | Ir基因 | 亞區(qū)位置 | H-2I區(qū)以外 | |
I-A | I-E | 的影響基因 | ||
(T,G)-A-L | Ir-1A | + | +(Ig) | |
(H,G)-A-L | Ir-(H,G)-A-L | + | ||
GL Pro | Ir-GLPro | + | ||
GL Leu | Ir-GL leu | +(β) | +(α) | |
GL Phe | Ir-GL Phe | +(β) | +(α) |
注:T酪氨酸 G-谷氨酸 A-丙氨酸
L賴氨酸 H-組氨酸 Pro-脯氨酸
Leu-亮氨酸 Phe-苯丙氨酸
(3)H-2對DHR的遺傳控制:對人工合成抗原誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏應(yīng)答(DHR)同樣受MHC的遺傳控制。H-2a.b.d.f.j.k.r.u.v單倍單倍型小鼠對多聚體GAT(谷氨酸60-丙氨酸90-酪氨酸10)的刺激表現(xiàn)為DHR應(yīng)答品系(R),H-2n.p.q.s單倍型屬于無應(yīng)答品系(NR)。R品系與NR品系雜交,F(xiàn)1為R品系,F(xiàn)1與NR回交,后代1/2為R,1/2為NR,符合單個常染色體顯性遺傳的規(guī)律。DHR可以通過致敏T細(xì)胞傳遞給同基因小鼠,而不能傳遞給不同基因之小鼠,DHR也可傳遞給有一個單體型相同之小鼠,如雜交子一代,但超敏反應(yīng)程度介于前兩者之間。雜交子一代的致敏T細(xì)胞亦可把DHR傳遞給親代。Miller等又進(jìn)一步證明,對GAT遲發(fā)型超敏應(yīng)答的補(bǔ)動傳遞不要求供體與受體基因型完全相同,而只有I-A亞區(qū)相同。
3.人的免疫應(yīng)答基因 胡蜀山等(1985)請用3H-TdR法,以體外誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)為指標(biāo),發(fā)現(xiàn)在無關(guān)志愿者中對(H,G)-A-L、(T、G)-A-L、(Phe、G)-A-L、GLPhe和GAT抗原應(yīng)答的百分率分別為64%、54%、30%、36%和76%。通過家系調(diào)查表明:(1)人類對人工合成抗原泊應(yīng)答也符合孟德爾單染色體顯性遺傳的規(guī)律;(2)控制(T、G)-A-L和(H,G)-A-L和Ir基因是不同的;(3)通過HLA內(nèi)重組家系的HLA抗原的分析,提示控制(T、G)-A-L和(H、G)-A-L的Ir基因Ir-TGAL和Ir-HGAL位于HLA-A與B位點(diǎn)之間而與D/DR無關(guān)。
Ir基因與MHC連鎖的現(xiàn)象,除豚鼠、小鼠和人外,也見于大鼠、恒河猴等多種動物,表明這種現(xiàn)象具有普遍的生物學(xué)意義。
4.免疫應(yīng)答基因的作用模式 對某些抗原不起應(yīng)答或呈低免疫應(yīng)答,可能是由于Ir基因缺陷,Ir基因所編碼的Ia抗原不能與該抗原結(jié)合,或?qū)乖奶岢誓芰Φ,不能激活Th,或只能引起低免疫應(yīng)答。有關(guān)Ir基因通過其基因產(chǎn)物Ia抗原在Mφ與Th間傳遞抗原的水平上起作用的模式主要有Benacerraf(1978)提出的決定基選擇模型(determinant selectionmodel)(圖6-17),該模式認(rèn)為的Mφ表面的Ir基因產(chǎn)物有數(shù)量不限的特異性結(jié)合點(diǎn),能特異地與一定的氨基酸順序結(jié)合,這些特異的氨基酸順序約由3~4個氨基酸組成,使一個復(fù)雜的外來抗原物。T細(xì)胞抗原受體(TCR)只能識別復(fù)合物分子才發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。如果某個外來抗原結(jié)構(gòu)中不具備這種特定的氨基酸順序,或Mφ表面Ir基因產(chǎn)物不能與外來抗原特定的決定簇結(jié)合,都不能被TCR所識別,表現(xiàn)出對這種抗原的無應(yīng)答狀態(tài)。
5.Is基因和Ts細(xì)胞 Debre(1975)發(fā)現(xiàn)GT抗原可在某些小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)Ts細(xì)胞而抑制對GT-MBSA(甲基化的牛血清白蛋白)的免疫應(yīng)答。這種控制抑制誘導(dǎo)的基因是顯性遺傳的,與H-2基因復(fù)合體有關(guān)。為了與位于H-2的Ir基因相區(qū)別,Debre等稱之為Is基因。開始有人認(rèn)為Is基因位于I-J亞區(qū),最近www.med126.com的研究表明,Is基因可能位于I-A亞區(qū)內(nèi),而目前I-J亞區(qū)并未得到證實(shí)。某些小鼠對一些抗原(如CT,GAT)的無應(yīng)答性是由于這些抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生了Ts細(xì)胞的結(jié)果,小鼠接受這些抗原誘導(dǎo)的能力受Is基因控制。如選擇性地除去Ts細(xì)胞后,無應(yīng)答者可變不應(yīng)答者。
圖6-17 決定基選擇模型
免疫應(yīng)答基因已逐漸超出原來的概念:一是在MHC內(nèi)除與Ⅱ類基因有關(guān)外,還與I類基因有關(guān),如流感病與HLA-B7親和性高,DNFB與HLA-A2親和性高,HLA-B34、B22者對風(fēng)疹疫苗接種所產(chǎn)生的抗體效價較高,而HLA-B16者對流感疫苗無免疫應(yīng)答。雜合個體比純合個體有更多可能性對多種抗原發(fā)生應(yīng)答,即有更強(qiáng)的抗感染能力,稱之為“雜交優(yōu)勢”。二是Ir基因還可能與非MHC基因相連鎖,如免疫球蛋白VH基因、X染色體以及其它基因等。
(一)抗原/MHC復(fù)合物的形成
外源性蛋白質(zhì)被APC攝入細(xì)胞內(nèi),在溶酶體內(nèi)被水解成肽段。同時,MHc Ⅱ類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中裝配成αβ異二聚體,由高爾基器轉(zhuǎn)送到溶酶體,與該處帶有免疫原性或主導(dǎo)師決定簇的抗原肽相結(jié)合形成抗原肽/MHC復(fù)合物,補(bǔ)轉(zhuǎn)送到APC表面,被CD4+T細(xì)胞所識別。
內(nèi)源性抗原以病毒抗原為例。病毒DNA整合到細(xì)胞核DNA中,通過轉(zhuǎn)錄和翻譯,在胞漿內(nèi)生成特異的病毒蛋白質(zhì)抗原,繼而被蛋白酶體(proteasome)攝取并酶解成肽段。與此同時,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中合成MHc I類抗原及β2微球蛋白。加工處理后的肽段進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔與MHc I類抗原結(jié)合形成穩(wěn)定的聚合體之后,被高爾基器運(yùn)往細(xì)胞表面,被CD8+T細(xì)胞所識別。HLa Ⅱ類基因DQ和DP之間的蛋白酶體相關(guān)基因(proteasome-relatedgenes,)和ABC轉(zhuǎn)運(yùn)物基因(ABCtransporter genes)基因產(chǎn)物參與內(nèi)源性抗原的處理和抗原片段的轉(zhuǎn)運(yùn)。
(二)T細(xì)胞識別抗原/MHC復(fù)合物
T細(xì)胞是一類重要的免疫活性細(xì)胞。T細(xì)胞本身的活化及效應(yīng)功能的發(fā)揮,不僅與外來抗原和絲裂原和絲裂刺激和多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)密切相關(guān),而且有賴于T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞(APC)之間、不同T細(xì)胞亞群相互之間以及T細(xì)胞與靶細(xì)胞之間的直接接觸。CD4+陽性T細(xì)胞TCR/CD3識別外來抗原與MHc Ⅱ類抗原(多態(tài)部分)的復(fù)合物,CD8+T細(xì)胞TCR/CD3識別外來抗原與MHc I類抗原(多態(tài)部分)復(fù)合物。此外在T細(xì)胞識別過程中還有賴于多種細(xì)胞表面分子的輔助,這些分子包括CD4、CD8、MHc I類、Ⅱ類抗原,LFA-1(CD11a/CD18)、ICAM-1(CD54)、LFA-2(CD2)和LFA-3(CD58)等。其中CD4和CD8分子分別與MHCⅡ類抗原和I類抗原的非多態(tài)部分(即Ⅱ類分子上α2和β2結(jié)構(gòu)和I類分子上重鏈α3結(jié)構(gòu)域)結(jié)合。有關(guān)內(nèi)容請參考“白細(xì)胞分化抗原”和“粘附分子”兩章。
MHC另一個重要的生物學(xué)功能是約束免疫應(yīng)答過程中各類免疫細(xì)胞的相互作用,又稱為MHC的約束性(MHc restriction),包括免疫應(yīng)答感應(yīng)階段Mφ-Th之間,反應(yīng)階段Th-B之間,以及效應(yīng)階段Tc-靶細(xì)胞之間的相互作用。MHc I類和Ⅱ類抗原分別對不同細(xì)胞起約束作用。
(一)Mφ、T、B細(xì)胞相互作用過程中的MHC約束性
Rosenthal和Shevach(1973)首先在豚鼠中觀察到T細(xì)胞只能被具有相同MHc I區(qū)基因(Ⅱ類基因)的抗原提呈細(xì)胞所激活(表6-13)。同年Katz等人也發(fā)現(xiàn)Th與B細(xì)胞相互作用時,只有在兩者M(jìn)Hc I區(qū)(Ⅱ類基因)相同的條件才會出現(xiàn)協(xié)作應(yīng)(表6-14)。
表6-13 豚鼠T細(xì)胞對胸腺信賴抗原的免疫應(yīng)答中Mφ提呈抗原與Ia抗原的關(guān)系
OVA預(yù)處理T細(xì)胞 | OVA加Mφ | DNA合成的增加 |
品系2 | 品系2 | ++++ |
品系13 | 品系13 | ++++ |
品系2 | 品系13 | — |
品系13 | 品系2 | — |
(2*13)F1 | 品系2 | +++ |
(2*13)F1 | 品系13 | +++ |
(2*13)F1 | (2*13)F1 | ++++ |
注:豚鼠用卵清蛋白(OVA)加完全弗氏佐劑(CFA)免疫,腹腔滲出物分離的T細(xì)胞即為OVA預(yù)處理T細(xì)胞,在體 外與OVA加Mφ-起培養(yǎng),用3H-胸腺嘧啶核苷摻入法作為T細(xì)胞特異性免疫應(yīng)答。品系2和13僅在MHC的I區(qū)不同
表6-14 小鼠T-B細(xì)胞協(xié)作中受I區(qū)基因限制
DNP-KLH抗原預(yù)致敏B細(xì)胞的品系 | BGG載體預(yù)致敏T細(xì)胞的品系 | 受照射(a*b)F1受體對DNP-BGG抗體應(yīng)答再次反應(yīng) |
a | a | ++++ |
b | b | ++++ |
a | b | - |
b | a | - |
b | (a*b)F1 | ++++ |
a | (a*b)F1 | ++++ |
(a*b)F1 | a | ++++ |
(a*b)F1 | b | ++++ |
注:(1)DNP-DLH:二硝基苯酚-鑰孔墄血蘭素;DGG:牛r球蛋白。
(2)DNP-KLH預(yù)致敏B細(xì)胞為DNP-KLH免疫小鼠的脾細(xì)胞經(jīng)抗Thy-1加補(bǔ)體處理去除T細(xì)胞而獲得。
(3)BGG免疫小鼠脾細(xì)胞除去B細(xì)胞后為BGG載體預(yù)致敏T細(xì)胞。
(4)將DNP-KLH預(yù)致敏B細(xì)胞和BGG預(yù)致敏T細(xì)胞輸入經(jīng)照射后(a*b)F1受體,再用DNP-BGG抗原刺激,檢測機(jī)體對DNP抗體應(yīng)答的再次反應(yīng)。
(二)MHC對Tc殺傷病毒感染靶細(xì)胞的約束
1.Zinkernagel-Doherty現(xiàn)象 Zinkernagel和Doherty(1974)道德證明受牛痘病毒感染的CBA(H-2k)小鼠中的Tc只能殺傷H-2單體型相同的病毒感染靶細(xì)胞,而不能殺死牛痘苗病毒感的H-2b細(xì)胞,稱為“Zinkernagel-Dohertyphenomenon”。1975年Doherty用淋巴細(xì)胞脈絡(luò)膜腦膜炎病毒(lymphocyte-choriomeningitis virus,LCM病毒)感染H-2d小鼠,取出Tc在體外只能殺傷LCM病毒感染的H-2d單體型細(xì)胞,不能殺傷LCM病毒感染的H-2k細(xì)胞(見圖6-18)。上述實(shí)驗(yàn)表明,Tc對于只具有MHC抗原或病毒抗原中單獨(dú)一種抗原的靶細(xì)胞都不起殺傷作用。
圖6-18 MHC對Tc殺傷病毒感染靶細(xì)胞的約束作用
2. MHC I類抗原對Tc殺傷靶細(xì)胞的限制作用 參與免疫應(yīng)答殺傷相(效應(yīng)相)的H-2抗原是由K、D區(qū)決定的,I區(qū)并不參與,這不同于前述的免疫應(yīng)答感應(yīng)階段中Mφ-Th,Th-B細(xì)胞之間相互作用受I區(qū)控制(表6-15)。
用三硝基苯(TNP)修飾自體的脾細(xì)胞為靶細(xì)胞也同樣證實(shí)了MHC對Tc殺傷TNP修飾靶細(xì)胞的約束現(xiàn)象。在人類殺傷病毒感染或半抗原修飾的靶細(xì)胞也同樣受到I類抗原的約束,如McMicheal等(1977)發(fā)現(xiàn)殺傷流感病毒感染的靶細(xì)胞主要受HLA-B位點(diǎn)抗原的約束,Dickmeiss(1977)實(shí)驗(yàn)表明殺傷DNFB致敏淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)Tc殺傷靶細(xì)胞中,HLA-A抗原必須一致。
由于自身MHC約束Tc細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的特異性,使體內(nèi)受病毒感染或癌腫惡變的靶細(xì)胞得以迅速有效地清除,從這個意義上來講,MHC參與機(jī)體抗感染及免疫監(jiān)視功能。
Tc對同種異體靶細(xì)胞的殺傷作用不受自身MHC的約束,Longo(1982)認(rèn)為體內(nèi)存在著兩類不同的T應(yīng)答細(xì)胞:一類針對外來抗原+自身MHC抗原發(fā)生免疫應(yīng)答;另一類對同種異體細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答。
表6-15 小鼠特異性Tc細(xì)胞的殺傷作用與靶細(xì)胞H-2的關(guān)系
靶細(xì)胞感染的病毒 | 靶細(xì)胞H-2遺傳背景 | 殺傷作用 | ||
K | I | D | ||
LCM | s | k | d | + |
LCM | q | p | q | - |
LCM | s | s | s | + |
LCM | d | d | d | + |
LCM | k | k | k | - |
仙臺病毒 | s | k | d | - |
注:小鼠特異性Tc細(xì)胞取自受LCM病毒致敏、H-2型別為KsIkDd小鼠的脾臟
八十年代初,采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將H-2b及H-2d的I類基因轉(zhuǎn)染小鼠白血病細(xì)胞系(L細(xì)胞系)。這些受I類基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞表面有I類抗原的表達(dá)。特異性Tc不能殺傷未經(jīng)I類基因轉(zhuǎn)染的病毒感染L細(xì)胞,但可殺傷經(jīng)I類基因轉(zhuǎn)染的病毒感染L細(xì)胞,表明轉(zhuǎn)染后所表達(dá)的I類抗原起約束作用。Ozato等切割I(lǐng)類基因的不同片斷進(jìn)行基因雜交,并將其轉(zhuǎn)染到L細(xì)胞系,成功地得到嵌合I類抗原分子,如α1及α2結(jié)構(gòu)域取自與殺傷細(xì)胞I類基因相同的基因片段,而α3、穿膜及胞漿區(qū)取自與殺傷細(xì)胞I類基因不同基因片段,則殺傷細(xì)胞可殺傷病毒感染的靶細(xì)胞,所之則不然。上述試驗(yàn)證明,α1及α2結(jié)構(gòu)域是參與殺傷和約束的有效部位。
利用突變品系小鼠研究發(fā)現(xiàn)靶細(xì)胞I類抗原突變分子的微小變化便能改變Tc細(xì)胞對它的識別。使如H-2kbml突變株(b為單倍體,m為突變)來自H-2Kb突變品系,只有個別氨基酸的差異,Kb約束病毒抗原特異性的CTL就不能識別和裂解多種病毒感染的Kb突變的bm1靶細(xì)胞,表明1~3個氨基酸的變化足以使I類抗原失去原有的約束作用(表6-16)。
3.MHC對Tc殺傷病毒感染靶細(xì)胞約束的機(jī)制 目前關(guān)于MHC對Tc細(xì)胞殺傷病毒感染靶細(xì)胞約束的機(jī)制一般認(rèn)為是通過聯(lián)合識別(associativerecognition),即Tc表面一個受體識別MHC編碼的抗原與病毒抗原的復(fù)合物。
Benacerraf認(rèn)為MHC I類Ⅱ類抗耕牛具有雙重功能,在誘導(dǎo)階段通過其結(jié)合部位選擇抗原決定基,激活Th、Ts、Tc等效應(yīng)細(xì)胞;在效應(yīng)階段,靶細(xì)胞上的I類和Ⅱ類抗原又約束Th、Ts、Tc發(fā)揮效應(yīng)。
(三)載體效應(yīng)(cerriereffect)
Benacerraf認(rèn)為載體不是單純起運(yùn)載半抗原的作用,還具有載體特異性。載體處于耐受狀態(tài)的動物,雖給予半抗原載體復(fù)合物,也不能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗半抗原的抗體。對半抗原再次應(yīng)答的發(fā)生有賴于對半原記憶的B細(xì)胞和對載體記憶T細(xì)胞同時存在時才能發(fā)生(圖6-19)。
表6-16 K(b)-約束的CTL(a)對Kb(b)突靶細(xì)胞上抗原的識別
CTL針對病毒抗原 | 對Kb突變靶細(xì)胞的裂解 | ||||||
bm5(1)(c) | bm6(2) | bm9(3) | bm3(2) | bm8(3) | bm11(1) | bm1(3) | |
LCM病毒 | ++ | ++ | ++ | + | - | ||
小鼠脫腳病病毒 | ± | + | + | - | |||
SV40 | ++ | ++ | + | + | - | ||
Moloney氏病毒 | ++ | ++ | ++ | ++ | - | ++ | - |
Seudai病毒 | ++ | ++ | ++ | + | + | - | - |
痘苗病毒 | ++ | + | + | - | |||
VSV | ++ | (+) | + | - | |||
甲型流感病毒 | ++ | (+) | - | - |
注:(a)CTL是Tc細(xì)胞,取自各種病毒致敏的小鼠脾,其本身的H-2型別為Kb;
(b)所有品系自B6突變而來,b為單倍型,m為突變;
(c)突變后氨基酸結(jié)構(gòu)改變的數(shù)目
圖6-19 載體效應(yīng)
注:①第二次注射與第一次相同的半抗原(DNP)和載體(牛血清白蛋白BSA) ,結(jié)果產(chǎn)生對DNP的再次反應(yīng)。
②第二次反注射的抗原中,半抗原與第一次相同,載體(卵白蛋白o(hù)valbumin)與第一次注射抗原的載體不同,結(jié)果不產(chǎn)生再次反應(yīng);
③第一次注射后,單獨(dú)注射卵白蛋白,經(jīng)過一定時間后再注射載體為卵白蛋白、半抗原為DNP的抗原,結(jié)果產(chǎn)生再次反應(yīng)。
Mitchison等載體效應(yīng)的過繼轉(zhuǎn)移(adoptive transfer of carrier effect)試驗(yàn),證實(shí)了上述關(guān)于載體效應(yīng)的結(jié)論(圖6-20)。
圖6-20 載體效應(yīng)的過繼轉(zhuǎn)移試驗(yàn)(Mitchison)
Raff等載體效應(yīng)阻斷實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)T細(xì)胞是載體特異的載體反應(yīng)細(xì)胞(carrier-reactivecell),B細(xì)胞是半抗原反應(yīng)細(xì)胞(hapten-reactivecgydjdsj.org.cn/sanji/ell)(圖6-21)。
圖6-21 半抗原、載體反應(yīng)淋巴細(xì)胞的鑒定(Raff等)