豬圓環(huán)病毒感染診斷方法
-----
豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus ，PCV)屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，為單股負鏈環(huán)狀DNA病毒。該病毒粒子直徑為14 nm～25 nm，為二十面體對稱結構，無囊膜，是獸醫(yī)學上已知動物病毒中最小的病毒之一。根據(jù)PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，將其分為PCV-1和PCV-2兩型。有關PCV引起疾病的最早報道發(fā)生在1991年的加拿大，是由PCV-2引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。至1994年PMWS已呈廣泛性流行，法國、美國、西班牙、北愛爾蘭及日本相繼報道了該病的發(fā)生，此后韓國、意大利、德國、丹麥、荷蘭、墨西哥等國家也證實了該病的存在。我國雖然自2000年才有對圓環(huán)病毒感染豬的報道并引起重視，但對于
豬血清中豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)抗體所作的回顧性檢測以及對豬的組織樣本所作的回顧性檢測結果表明，PCV-2抗體至少從1969年起就已經(jīng)存在于豬群中了。臨床上豬感染PCV-1很常見，普遍認為廣泛存在于豬體內(nèi)及豬源傳代細胞系，由于其無致病性，所以無法通過臨床癥狀或病理診斷來確定是否感染PCV-1。但PCV-2與豬群中發(fā)生的多種疾病相關，有其相應的臨床癥狀和病理表現(xiàn)，在臨床上主要引起PMWS、豬皮炎
腎病綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)、豬呼吸道疾病復合征(Porcine respiratory disease complex，PRDC)及A2型先天性
震顫(Congenital tremor，CT)。PCV-2與豬細小病毒(Porcine parvovirus，PPV)、
豬流感病毒(Swine influenza virus，SIV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)等病原可以混合感染，致病性增強。本文綜述了豬圓環(huán)病毒診斷學方法的研究進展，以供借鑒。 1 豬圓環(huán)病毒感染的臨床診斷 豬感染PCV-2后主要表現(xiàn)為漸進性消瘦，生長遲緩，采食量下降，被毛粗亂，精神差，相當一部分豬只出現(xiàn)呼吸困難呈腹式呼吸，少數(shù)豬只有拉稀癥狀，有的豬出現(xiàn)貧血，個別豬出現(xiàn)
黃疸癥狀；PCV-2感染豬引起的CT，震顫為雙側，影響骨骼肌肉，當臥下或睡覺時震顫消失，外界刺激可引發(fā)或加重震顫，有的在整個生長和發(fā)育期間都不斷發(fā)生震顫；PCV-2感染豬引起PDNS的臨床癥狀常見為皮膚發(fā)生圓型或不規(guī)則的隆起，呈現(xiàn)紅色或紫色中央為黑色病灶。 2 豬圓環(huán)病毒感染的病理學診斷 豬感染PCV-2后，最顯著的剖檢病變是全身淋巴結，特別是腹股溝淋巴結、縱隔淋巴結、肺門淋巴結、腸系膜淋巴結及下頜淋巴結腫大2倍～5倍，有時可達10倍；
肺臟腫脹、堅硬或似橡皮，部分病例形成固化、致密的病灶。嚴重病例肺泡出血，肺呈紫褐色，有的肺尖葉和心葉萎縮或?qū)嵸|(zhì)性病變；半數(shù)病例為輕度到中度的肝萎縮，花斑肝。肝小葉間結締組織增生明顯；脾臟常腫大，呈肉樣變化；腎為花斑腎，
水腫，呈灰白色，被膜下有時有白色壞死灶；胃的食管部黏膜水腫和非出血性潰瘍；回腸和結腸段腸壁變薄，
盲腸和結腸黏膜充血和出血。另外，經(jīng)常見到由繼發(fā)感染引起的
胸膜炎、腹膜炎、
心包炎(心包膜內(nèi)有大量炎性滲出物)和關節(jié)炎。當發(fā)現(xiàn)豬全身淋巴結腫大，肺退化不全或形成固化、致密病灶時，應懷疑為PCV-2感染。如病理組織學檢查可見全身淋巴組織的
淋巴細胞減少，單核巨噬細胞浸潤及形成多核巨細胞，并在這些細胞中觀察到嗜堿性或兩性染色的細胞質(zhì)內(nèi)包涵體，則基本可以確診。 3 豬圓環(huán)病毒感染的實驗室診斷 3.1 電鏡法 利用電鏡技術可以直觀、準確的鑒別病毒，根據(jù)病毒本身所具有的形態(tài)、結構和大小等不同特征，可即刻做出診斷。Stevenson首次在透射電鏡下對被PCV-2持續(xù)感染的PK-15細胞內(nèi)的PCV-2進行超微結構的觀察，并詳細描述了在細胞的細胞漿與細胞核內(nèi)的病毒包涵體及病毒粒子的形態(tài)。郎洪武從發(fā)病豬的脾臟和淋巴結組織的超薄切片中觀察到了大量直徑17 nm、圓形、無囊膜的PCV病毒粒子。 3.2 免疫組織化學檢測技術 Sorden等采用純化的PCV-2抗原免疫
兔子，得到兔抗PCV-2高免血清。利用此高免血清結合福爾馬林固定石蠟包埋組織中的PCV-2抗原，再采用生物素標記的抗兔二抗與
兔血清結合，最后用過氧化物酶標記的
鏈霉素染色。他們應用此法發(fā)現(xiàn)陽性細胞內(nèi)存在大量濃染的圓形結構，大小和形狀與包涵體相似。Chianini等也用兔抗PCV-2的陽性血清建立了免疫組織化學(immunohistochemistry)檢測技術。Magar等為了克服內(nèi)源性過氧化物酶對檢測結果的影響，將過氧化物酶標記的第二抗體改用免疫膠體銀標記，取得了更好的檢測效果。 3.3 免疫熒光技術 免疫熒光技術(immunofluorescence assay，IFA)可用于PCV的抗體檢測及抗原組織定位的研究。Allan利用接免疫熒光來檢測PCV，就是將組織病料以蓋玻片在PK-15細胞中培養(yǎng)，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清與細胞培養(yǎng)物中的PCV 反應，可對PCV 進行檢測和分型。崔尚金等 將接種PCV-2且經(jīng)多次傳代的PK-15細胞分散到96 孔細胞培養(yǎng)板上，制成抗原診斷板，檢測血清中PCV-2的抗體�，F(xiàn)在一般認為IFA是實驗室檢測PCV-2的一種快速、靈敏、成本低的方法，但操作上較復雜，不宜作為臨床快速診斷。 3.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)可以檢測抗體，也可以檢測抗原，具有靈敏、簡單、快捷的特點。采用Walker等的競爭ELISA來檢測PCV-2抗體，此法的檢出率為99.58%。Allan等也利用單抗建立了抗原捕獲ELISA來檢測PCV-2特異性抗體。琚春梅等 利用PCV-2-ORF2基因原核表達產(chǎn)物建立了ELISA檢測方法。崔尚金等 以重組桿狀病毒表達PCV衣殼蛋白作為ELISA抗原，提高了HRP標記的二抗的稀釋倍數(shù)，降低了背景的非特異性。林彥星等 應用原核表達的PCV-2 Cap蛋白建立了間接ELISA。張曉勇等 利用巴斯德畢赤酵母高效表達PCV-2-ORF2基因編碼蛋白建立了。 (
-----
根據(jù)臨床癥狀
-----
實驗室檢查
畜牧導航:
養(yǎng)豬資訊 豬價格行情 養(yǎng)豬技術 豬病防治 飼養(yǎng)管理 養(yǎng)豬問答 養(yǎng)豬視頻 豬品種
