| 公開(公告)號 | CN1990044A |
| 公開(公告)日 | 2007.07.04 |
| 申請(專利)號 | CN200510112381.3 |
| 申請日期 | 2005.12.30 |
| 專利名稱 | 人體免疫活性細胞DCCIK抗腫瘤細胞制劑的制備方法及應用 |
| 主分類號 | A61K45/00(2006.01)I |
| 分類號 | A61K45/00(2006.01)I;A61K35/14(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 上海中科英達生物技術有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 劉祥麟;王定華 |
| 地址 | 200031上海市岳陽路320號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王 巍 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權項 | 一種人體免疫活性細胞DCCIK抗腫瘤細胞制劑，其特征在于該制劑是通過下列方法制得的， (1)外周血單個核細胞PBMC的制備 無菌條件下用血分器取腫瘤患者抗凝外周血，用生理鹽水對倍稀釋后，用淋巴細胞分離液Ficoll，1.077，離心2000rpm×25’，分離得PBMC，再用Hanks液洗滌2次，鏡下計細胞數，最后用無血清培養(yǎng)液AIM-V調節(jié)細胞密度使成4×106/ml細胞懸液； (2)非粘附與粘附細胞分離 將細胞懸液移入6孔板Nuclon，37℃，5％CO2，培養(yǎng)2-6h，然后用移液管輕輕沖吸細胞，將非粘附細胞懸液收集在離心管中作誘導CIK細胞備用，粘附細胞就留在6孔板上，加入DC培養(yǎng)液3ml/孔待用； (3)非粘附CIK細胞的誘導和擴增 把離心管中的非粘附細胞懸液接種到含有IFN-γ1000U/ml AIM-V培養(yǎng)液的25cm2培養(yǎng)瓶，100ml/瓶，置37℃，5％CO2培箱中24-36h后，把用Hanks液配制的抗CD3單抗5μg/ml包被25cm2培養(yǎng)瓶，同時加入終濃度IL-1β 100U/ml AIM-V，IL-2300U/mlAIM-V繼續(xù)培養(yǎng)48-72h，鏡下計數，用CIK培養(yǎng)液調細胞密度為4×105/ml，每隔48h按上述相同條件擴增1次，培養(yǎng)至第5-7天即收集CIK細胞備用； 抗CD3單抗包被方法：在AIM-V培液中加入抗CD3單抗，使成為抗CD3單抗?jié)舛葹?～10μg/ml的包被液，在25cm2培瓶中加入5ml包被液，4℃過夜或者37℃溫育2h后，棄去全部包被液即可； (4)粘附DC細胞的誘導和擴增 在留有粘附細胞的6孔板上，每孔添加DC培液3ml內含有GM-CSF 800U/ml和IL-4500U/ml，于37℃，5％CO2培養(yǎng)2天后，在各孔添加α-Galcer 100ng/ml或CI(200ng/ml)，每天加1次，共3次，連續(xù)刺激3天后，于第5-7天收集細胞備用； (5)DC與CIK 1∶5混合共培養(yǎng)制取DCCIK細胞 取培養(yǎng)至第5-7天之DC和CIK細胞，計數，離心，分別收集DC和CIK細胞，用AIM-V無血清培液調兩細胞的密度分別為2×105和1×106，按DC∶CIK＝1∶5等體積混合后移入25cm2培養(yǎng)瓶10ml/瓶，于37℃，5％CO2培養(yǎng)，每隔48-72h按以上細胞密度分瓶擴大培養(yǎng)1次，經5次擴大培養(yǎng)后即可獲5×109～1×1010的DCCIK細胞； (6)DCCIK細胞制劑 離心收集1～5×109細胞，用0.9％氯化鈉注射液洗滌2次，離心，棄上清，將細胞移至250ml輸液瓶中，加2g人血清白蛋白和250ml 0.9％氯化鈉注射液，制成細胞懸液制劑。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人體免疫活性細胞(DCCIK)抗腫瘤細胞制劑及制備方法。該方法用有關細胞因子對取自患者外周血分別誘導成DC與CIK，在應用α-Galcer或CI對DC反復沖擊后與CIK細胞按比例作混合共培養(yǎng)，即獲DCCIK細胞。與同源CIK比較，其增殖活性和細胞毒活性均有較大提高。該DCCIK為未經相關腫瘤抗原沖擊而對同源腫瘤具有特異靶向和高效廣譜殺瘤作用�？捎行Х乐鼓[瘤術后和放化療后的轉移和復發(fā)。在與其他療法配合下，可延長患者生存期并改善生活質量。 |
| 國際公布 |
