龜齡集－人參皂苷Rg1的測定－薄層掃描法 2

本方法采用薄層掃描法測定龜齡集中人參皂苷Rg₁的含量。

本方法適用于龜齡集中人參皂苷Rg1含量的測定。

供試品于索氏提取器中，加乙醚加熱回流，揮盡殘渣中的乙醚，加甲醇回流提取，提取液回收甲醇至干，殘渣用正丁醇飽和的水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取合并提取液，用氫氧化鈉溶液洗滌，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水洗液，回收正丁醇至干，殘渣用適量乙醇溶解，加在中性氧化鋁－D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱上，用乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用適量甲醇溶解，制成供試液，點樣、展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長λs=541nm， λ_R=700nm測量人參皂苷 Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄)吸收度積分值，計算其含量。

1. 乙醚

2 .甲醇

3 .正丁醇

4 .氫氧化鈉

5 .乙醇 70％

6 .氯仿

7 .硫酸 10％硫酸乙醇溶液

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3 D101型大孔吸附樹脂

2.4中性氧化鋁

1. 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂著Rg₁對照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品 20粒的內(nèi)容物，精密稱取，求出每粒重量，混勻，精密稱取約 2.5g，置索氏提取器中，加乙醚 60mL，加熱回流提取至回流提取液近無色，棄去乙醚液，揮盡殘渣中的乙醚，加甲醇 70mL，加熱回流提取至回流提取液近無色，將提取液回收甲醇至干，殘渣用正丁醇飽和的水 15mL溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15mL，合并提取液，用1％氫氧化鈉溶液洗滌3次（15mL、15mL、10mL)，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水洗液，回收正丁醇至干，殘渣用適量70%乙醇溶解，加在中性氧化鋁－D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1cm，下層：D₁₀₁型大孔吸附樹脂，高7cm；上層：中性氧化鋁，100～120目，高 3cm)上，用 70%乙醇 80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2. 點樣

精密吸取供試品溶液 10μL、對照品溶液 2μL與 4μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以氯仿－甲醇－水（13：7：2)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出。

4.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長：λs=541nm， λ_R=700nm， 測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算。

用外標(biāo)法測定時，若對照品各數(shù)據(jù)點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.476。