龜齡集－人參皂苷Rg1的測定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定龜齡集中人參皂苷Rg₁的含量。

本方法適用于中成藥龜齡集。

供試品經(jīng)提取，過氧化鋁大孔樹脂柱，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行雙波長反射法鋸齒掃描，λ_Ｓ=541nm，λ_Ｒ=700nm測量人參皂苷Rg₁吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1.氯仿

2.甲醇

3.鹽酸

4.硫酸

5.乙醇

6.人參皂苷Rg₁ (中國藥品生物制品檢定所)

1 儀器

1.1 薄層掃描儀

1.2 點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.3 展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

1.4吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2 色譜條件

2.1薄層板

硅膠G薄層板0.5% CMC-Na板，105℃活化30min。

2.2展開劑

氯仿＋甲醇＋水＝65＋35＋10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，4.2.3 顯色方式

噴以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.4 掃描條件

雙波長反射法鋸齒掃描，λ_Ｓ=541nm，λ_Ｒ= 700nm；靈敏度：中；狹縫：0.4mm×0.4mm；線性化參數(shù)：S_X=3。

1. 對照品溶液的制備

精密稱取用五氧化二磷干燥至恒重的人參皂苷Rg₁對照品10mg，置10mL量瓶中，用少量甲醇溶解后，加甲醇至刻度(1mg/mL)，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混勻，取約2 5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚60mL，回流提取至近無色，棄去乙醚液，殘?jiān)鼡]干乙醚，加甲醇70mL，回流提取至近無色，回收甲醇至干，殘?jiān)�用正丁醇飽和的�?5mL溶解并移入分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次(15、15、15mL)，合并提取液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次(15、15、10mL)，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水層，回收正丁醇至干，殘?jiān)��?0%乙醇適量溶解，移入已凈化處理的氧化鋁—D101型大孔樹脂柱[內(nèi)徑1cm，D101型大孔樹脂高7cm(下層)；100～120目中性氧化鋁高3cm(上層)]上，再用70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�加甲醇使溶解，定量轉(zhuǎn)移至2mL量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6μL，分別點(diǎn)于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑展開，噴以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。用薄層掃描儀依法進(jìn)行掃描， 以濃度為橫坐標(biāo)，斑點(diǎn)面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程Y=773.3X 334.2，r=0.996；線性范圍為1.03～6.18μg。

2.供試品含量測定

精密吸取供試品溶液10μL，對照品溶液2μL與4μL，分別交叉點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠G薄層板上，依法展開，顯色，掃描測定，按外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算人參皂苷Rg₁的含量。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

精密吸取對照品溶液4μL，在同一薄層板上點(diǎn)樣6次，依法展開，顯色，掃描測定，結(jié)果RSD為1.8%。