復(fù)方丹參片—原兒茶醛和丹參酮ⅡA的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定復(fù)方丹參片中原兒茶醛和丹參酮ⅡA的含量。

本方法適用于中藥制劑復(fù)方丹參片。

供試品于錐形瓶中，分別加水和85%乙醇進行超聲處理，放冷，離心，上清液濾過，得濾液進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長280nm和269nm處檢測原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，計算出其含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 乙醇

3. 醋酸

4. 醋酸銨

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Shimpack CLC-ODS色譜柱（150×6.0mm，5μm)。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：甲醇 0.2mol/L醋酸銨緩沖液（pH=2.2) = 10 90 和甲醇 水 = 85 15

2.2 檢測波長：280nm、269nm

2.3柱溫：35℃

1. 稱取供試品

精密稱取本品12片研細(xì)的藥粉（過5號篩，80目)，分為2份，一份相當(dāng)于4片藥粉，另一份相當(dāng)于8片藥粉。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取原兒茶醛對照品適量，水溶解制成1.53，3.06，6.12，12.24，18.36μg/mL的系列

濃度對照品溶液。

精密稱取丹參酮ⅡA對照品適量，用95%乙醇溶解制成1.56，3.12，6.24，12.48，18.72μg/mL

的系列濃度對照品溶液。

3.供試品溶液的制備

取一份供試品置100mL錐形瓶中，加水30mL，超聲處理30分鐘后，放冷，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶，用水稀釋至刻度，以10000r/min離心5min，上清液濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液Ⅰ（測定原兒茶醛)。

取另一份供試品置100mL錐形瓶中，加85%甲醇30mL，超聲處理15分鐘后，放冷，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶，用85%甲醇稀釋至刻度，以10000 r/min離心5min，上清液濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液Ⅱ（測定丹參酮ⅡA)。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長280nm和269nm處測定原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測定

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長280nm和269nm處測定原兒茶醛和丹參酮ⅡA的吸收值，計算出其含量。

李元智，黃英，劉三康等. HPLC測定復(fù)方丹參片中原兒茶醛和丹參酮ⅡA. 華西藥學(xué)雜志，1996，11（4)：213-215.