醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:加味桃核承氣湯對(duì)肝纖維化大鼠TGF�拨�1蛋白表達(dá)的影響

1.2 方法

1.2.1 模型復(fù)制方法[1] 將 CCl4與橄欖油以4∶6(體積比)配成 40%油劑，首劑按0.5ml/100g體重腹腔注射，以后按 0.3ml/100 g體重腹腔注射，2次/周，第4周末，大鼠中期肝纖維化形成并開(kāi)始治療，治療期間繼續(xù)CCl4腹腔注射，以維持病因刺激至第12周末。

1.2.2 分組 造模過(guò)程共死亡8只大鼠，將余下的132只大鼠肝纖維化模型隨機(jī)分為加味桃核承氣湯低劑量組27只、加味桃核承氣湯中劑量組27只、加味桃核承氣湯高劑量組26只、秋水仙堿組26只、模型對(duì)照組26只;造模前設(shè)有正常對(duì)照組10只。共6組。

1.2.3 給藥方法 于第4周末開(kāi)始給藥。加味桃核承氣湯低、中、高劑量組分別按每100g體重 0.25ml、 0.5ml、1.0ml的劑量灌胃給藥;秋水仙堿組按每kg體重0.1mg的劑量，秋水仙堿用生理鹽水溶解后灌胃;模型對(duì)照組、正常對(duì)照組以同體積生理鹽水灌胃。療程均為每天1次，連用8周。

1.2.4 標(biāo)本的提取方法 治療8周后，股動(dòng)脈取血作肝功能指標(biāo)檢測(cè);取肝組織用10%福爾馬林固定，用作組織病理學(xué)觀察。

1.2.5 觀察指標(biāo) (1)一般情況：觀察大鼠精神、食欲、毛色、二便及舌質(zhì)的變化，觀察肝臟質(zhì)地。(2)肝功能指標(biāo)血清ALT、AST測(cè)定：日本島津7200型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。(3)肝組織病理學(xué)觀察：肝組織經(jīng)石蠟包埋、切片，作HE染色、苦味酸-天狼紅膠原染色，觀察肝細(xì)胞變性、纖維組織增生情況。按2000年全國(guó)肝炎防治會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)(2000標(biāo)準(zhǔn))觀察肝纖維化變化情況[2]，再按肝纖維化組織半定量計(jì)分系統(tǒng)(SSS)計(jì)分[3]。(4)肝組織TGF�拨�1的蛋白表達(dá)，采用免疫組織化學(xué)染色法。肝組織經(jīng)石蠟包埋、切片、二甲苯脫蠟、乙醇水化;PBS液洗5min，共3次;3%H2O2室溫孵育30min;PBS液洗3次，5min/次;加抗TGF�拨�1抗體，濕盒內(nèi)置37℃孵箱內(nèi)2h;PBS液洗3次，5min/次;加二抗，37℃孵箱內(nèi)置1h;PBS液洗3次，5min/次;DAB顯色10min;流水終止反應(yīng)3min;蘇木素復(fù)染3min;流水洗1min;1%鹽酸酒精分化;流水藍(lán)化10min;梯度酒精脫水5min;中性樹(shù)膠封片。檢測(cè)TGF�拨�1蛋白表達(dá)的半定量方法：用彩色病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)在低倍鏡(100×)下計(jì)算每視野棕黃色陽(yáng)性面積占視野總面積百分比(%)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 模型對(duì)照組大鼠疲軟、不喜活動(dòng)、飲食減少、皮毛雜亂、便溏、明顯消瘦、舌質(zhì)紫暗、7只出現(xiàn)腹水;秋水仙堿組精神狀態(tài)及活動(dòng)情況一般，有2只大鼠出現(xiàn)腹水;高、中、低治療組精神狀態(tài)相對(duì)較好，皮毛有光澤，無(wú)腹水。肝臟質(zhì)地：模型對(duì)照組肝臟顏色灰暗，質(zhì)硬，腫脹，呈顆粒狀;各治療組情況較好，肝臟質(zhì)地較軟，邊緣規(guī)則，顏色較前紅潤(rùn)，無(wú)顆粒狀改變醫(yī).學(xué)全.在.線(xiàn)網(wǎng)站gydjdsj.org.cn。

2.2 對(duì)肝纖維化大鼠ALT、AST的影響 見(jiàn)表1。

2.3 肝纖維化 模型對(duì)照組天狼紅染色可見(jiàn)匯管區(qū)和小葉間有大量粗大增生的膠原纖維，大量膠原沉積，相互連接的纖維隔將肝小葉重新分割，形成結(jié)節(jié)樣的假小葉;加味桃核承氣湯高、中劑量組天狼紅染色可見(jiàn)匯管區(qū)有很細(xì)很少的纖維隔，且尚未連接;秋水仙堿組有膠原沉積，小葉間有細(xì)纖維隔相連，但未見(jiàn)結(jié)節(jié)樣的假小葉。加味桃核承氣湯高、中劑量治療組及秋水仙堿組的肝纖維化SSS計(jì)分較模型對(duì)照組減少，加味桃核承氣湯高、中劑量治療組SSS計(jì)分低于秋水仙堿組。見(jiàn)表1。表1 對(duì)肝纖維化大鼠肝功能及SSS計(jì)分結(jié)果的影響與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型對(duì)照組比較，^P<0.05，^^P<0.01;與秋水仙堿組比較△P<0.05

2.4 肝組織TGF�拨�1的表達(dá) 在CCl4肝纖維化模型大鼠肝組織中TGF�拨�1表達(dá)廣泛且特點(diǎn)相似，在纖維間隔、肝竇、纖維間隔周?chē)�的肝�?xì)胞、匯管區(qū)和中央靜脈等均可見(jiàn)表達(dá)，顯著高于正常對(duì)照組;加味桃核承氣湯高、中、低劑量組及秋水仙堿組的TGF�拨�1的表達(dá)水平均低于模型對(duì)照組。見(jiàn)表2及圖1～6。表2 加味桃核承氣湯對(duì)肝纖維化大鼠TGF�拨�1表達(dá)的影響

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