第八章病原學診斷與防治

第一節(jié)  細菌學診斷

一、病原菌檢測

1.標本(specimens):

2.細菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查：注意涂片鏡檢可初步診斷的病原菌。

3．分離與鑒定（isolation and identification): 確診最可靠的方法。

4．病原菌抗原的檢測（detection of bacterialantigens):

簡便快速的診斷方法： 免疫熒光法 ( IF )，酶免疫測定（EIA)，放射免疫測定等。

5．其他檢測方法： 如分子生物學方法檢測細菌核酸： PCR ，核酸雜交。

二、 血清學診斷：用已知抗原檢測血清中未知抗體。

血清學診斷方法有多種：如：凝集試驗、中和試驗、ELISA等。

第二節(jié)  病毒學診斷

一、標本：

1.采集時間：發(fā)病初期或急性期；

2.采集部位：根據(jù)V感染部位，采取適宜標本；

3.標本送檢：冷藏速送

組織塊：置50%中性甘油鹽水中送檢。

4.

污染標本：加抗生素處理。

二、病毒的分離、培養(yǎng)與鑒定（金標準，但方法復雜)

（一)病毒的分離

1．動物接種

2．雞胚培養(yǎng)

3．細胞培養(yǎng)：最常用

病毒在細胞中生長繁殖的指標：

（1) 細胞病變效應（cytopathic effect,CPE ): 有些病毒在細胞內(nèi)增殖時可引起細胞發(fā)生特有的形態(tài)學變化（細胞病變)，稱為細胞病變效應（CPE )。

（2)包涵體 (inclusion body):

（3)紅細胞吸附：

（4)干擾現(xiàn)象：

（二)病毒數(shù)量與感染性的測定： 蝕斑測定法、TCID50測定法。

三、病毒感染的血清學診斷：

1．中和試驗(neutralizing test)

2．血凝抑制試驗(hemagglutinatia inhibitiontest, HI test)

四、病毒感染的快速診斷

（一)形態(tài)學檢查：

1．電鏡、免疫電鏡

2．光學顯微鏡：查包涵體

（二)病毒蛋白抗原檢測：免疫熒光法 (IF)、酶免疫測定（EIA)等

（三)特異性IgM抗體的檢測

（四)病毒核酸檢測：實時定量熒光PCR (real -timePCR)，RT- PCR， Gene chip

等。

第三節(jié)   真菌學診斷

一、標本的采集：

二、病原真菌的檢查與鑒定： 形態(tài)學、分離培養(yǎng)。

1.直接鏡檢：

2.分離培養(yǎng)： 沙保氏培養(yǎng)基

三、 真菌的快速診斷：

 1.  血清學實驗（ELISA、熒光抗體法)： 可用于深部真菌感染的輔助診斷。

 2.  核酸的檢測：PCR

 3． 真菌毒素的檢測

第四節(jié)   特異性預防與治療
一、人工主動免疫

將疫苗及類毒素（抗原)接種于人體，使機體主動產(chǎn)生獲得性免疫力。主要用于預防。

（一)疫苗

1. 死疫苗(killed vaccine):

2. 活疫苗(living vaccine)亦稱減毒疫苗(attenuatedvaccine):如： BCG、脊髓灰質(zhì)、麻疹等減毒活疫苗

3. 新型活疫苗:

4.基因工程疫苗: 利用基因工程方法獲得帶有病原體保護性抗原表位的目的基因，將其導入原核或真核表達系統(tǒng)，表達該種保護性抗原，提純后研制成疫苗 。

5. 重組載體疫苗

6. 合成疫苗

7. 亞單位疫苗(subunit vaccine)：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原)制

成不含有中國衛(wèi)生人才網(wǎng)核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗，稱gydjdsj.org.cn/shiti/為亞單位疫苗 。

8.  DNA疫苗：又稱基因疫苗或核酸疫苗

9.轉(zhuǎn)基因植物疫苗

（二)類毒素(toxoid)：

  是外毒素經(jīng)0.3 %—0.4%甲醛處理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品。

二、人工被動免疫

輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細胞因子等免疫制劑，使機體立即獲得特異性免疫力的過程叫人工被動免疫。用于緊急預防或治療。

 1.抗毒素  (antitoxin) ：將類毒素或外毒素給馬進行多次免疫后，待馬匹產(chǎn)生高效價抗毒素后采血，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素。

  抗毒素主要用于外毒素所致疾病的治療和緊急預防。

臨床常用的有破傷風抗毒素、白喉精制抗毒素等。

2. 抗菌血清

3. 胎盤丙種球蛋白

4．他免疫制劑：如 IFN, IL

三、細菌感染的治療：主要采用抗菌藥物。

（一)抗菌藥物的種類

（二)抗菌藥物的主要作用機制

 1．影響細菌細胞壁的合成，

 2．影響細胞膜的功能，

 3．影響細菌細胞蛋白質(zhì)的合成

 4．影響核酸合成

四、病毒感染的治療

（一)抗病毒化學制劑

1. 核苷類藥物

(1) 無環(huán)鳥苷(acyclovir,ACV,) ：是目前最有效的抗皰疹病毒藥物之一。

  機制：競爭病毒DNA復制酶。

(2) 拉米呋定(lamivudine) ：抑制慢性乙型肝炎患者體內(nèi)HBV的復制。

機制：抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶。

2. 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 

nevirapine：是第一個新合成的非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，1996年獲準用于治療HIV。

3. 蛋白酶抑制劑：英迪納瓦(indinavir)是1996年批準的新一代蛋白酶抑制劑，用于HIV。

4. 其他抗病毒藥物：

  金剛烷胺能阻止脫殼，主要用于治療甲型流感。

 (二)干擾素和干擾素誘生劑的應用

1． 干擾素(IFN)

2． IFN誘生劑

3.  中草藥防治病毒感染

4.  基因治療(gene therapy)：

目前還處于研究階段

(1)反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide, asON)：人工合成的，與靶基

因或mRNA某一區(qū)段互補的核酸片斷，可以通過堿基互補原則結(jié)合于靶基因/mRNA上,從而封閉基因的表達。包括：反義DNA，反義RNA， 其來源可有人工合成和體內(nèi)表達兩類。

(2) 核酶 (ribozyme)：是既能與靶基因序列結(jié)合又具酶活性的一類RNA分子。

(2)干擾RNA (shortinterfering RNA,siRNA)：一些小的雙鏈RNA可以高效、特

異的阻斷體內(nèi)特定基因表達，促使mRNA降解，誘使細胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型。

RNA干擾也是體內(nèi)抵御外在感染的一種重要保護機制。由于可以作為一種簡單、有效的代替基因敲除的遺傳工具，RNAi正在功能基因組學領(lǐng)域掀起一場真正的革命。為此被Science評為2001年最重要的的成果之一。

五、真菌的治療

1.局部治療: 咪康唑霜、克霉唑軟膏等局部涂搽

2.全身用藥治療:  口服/靜脈用抗真菌藥，兩性霉素B、制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑等