二、免疫金銀法
1983年，Holgate等人將IGS與銀顯影方法相結合創(chuàng)立了免疫金銀法（Immunogold—sliver staining, IGSS)IGSS的基本原理是通過免疫反應沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子（Ag+)還原成銀原子（Ago)。被還原的銀原子于是圍繞金顆粒形成一個“銀殼”，“銀殼”一旦形成本身亦具有催化作用，從而使更多銀離子還原并促使“銀殼”越長越大“，最終抗原位置得到清楚放大。請參見圖5-4。
圖5-4 用銀增敏示意圖
�。ㄒ�)石蠟切片的IGSS染色
以人肝細胞內HBsAg定位舉例說明。
�。�1)切片常規(guī)脫蠟至水。
�。�2)Lugol＇s液，5min.
�。�3)5%硫代硫酸鈉水溶液脫碘5min。
�。�4)用雙蒸餾水沖洗干凈。
�。�5)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
（6)用0.1%胰蛋白酶消化10min或用3mol/L尿素消化20min。
�。�7)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min一次。
�。�8)1%卵白蛋白封閉15min。
�。�9)馬抗HBsAg抗體1：1000稀釋，37℃1～2h 或4℃過夜。
�。�10)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
�。�11)1%卵白蛋白封閉10min。
�。�12)1：40，PAG，37℃45min。
�。�13)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
�。�14)雙蒸水洗5min，兩次。
�。�15)物理顯影見后所述。
（16)雙蒸水洗5min，兩次。
�。�17)蘇木素襯染。
�。�18)酒精常規(guī)脫水，透明，封固。
結果，光鏡下見肝細胞胞漿內有膜或包涵體形分布的陽性黑色狀顆粒，背景干凈。
�。ǘ�)冰凍切片的IGSS染色
作冰凍切片的組織，若在動物試驗可以先經過固定液灌注或浸泡固定，也可不固定先做冰凍切片。人的組織也可通過浸泡固定或不固定，這主要根據(jù)保存抗原性的需要而定。固定過的組織可用20%蔗糖PBS（0.01mol/l pH7.2)浸泡2～4h或在切片時用OCT包埋，以減少冰凍切片過程中冰晶的形成。如果切片還準備用于電鏡包埋，則可經過5%，10%，20%濃度逐級遞增的蔗糖溶液。在冰凍切片前，可先入氟里昂–22 （Freon--22)驟冷，這樣可使組織的結構保存更好，適用于電鏡觀察。
（1)冰凍切片。
（2)Lugol＇s液，5min.
以下步驟同人肝HBsAg的染色方法。
