二、免疫金銀法
1983年，Holgate等人將IGS與銀顯影方法相結(jié)合創(chuàng)立了免疫金銀法（Immunogold—sliver staining, IGSS)IGSS的基本原理是通過(guò)免疫反應(yīng)沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對(duì)苯二酚還原劑將銀離子（Ag+)還原成銀原子（Ago)。被還原的銀原子于是圍繞金顆粒形成一個(gè)“銀殼”，“銀殼”一旦形成本身亦具有催化作用，從而使更多銀離子還原并促使“銀殼”越長(zhǎng)越大“，最終抗原位置得到清楚放大。請(qǐng)參見(jiàn)圖5-4。
圖5-4 用銀增敏示意圖
（一)石蠟切片的IGSS染色
以人肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg定位舉例說(shuō)明。
（1)切片常規(guī)脫蠟至水。
（2)Lugol＇s液，5min.
�。�3)5%硫代硫酸鈉水溶液脫碘5min。
�。�4)用雙蒸餾水沖洗干凈。
�。�5)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
�。�6)用0.1%胰蛋白酶消化10min或用3mol/L尿素消化20min。
�。�7)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min一次。
�。�8)1%卵白蛋白封閉15min。
�。�9)馬抗HBsAg抗體1：1000稀釋?zhuān)?7℃1～2h 或4℃過(guò)夜。
�。�10)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
�。�11)1%卵白蛋白封閉10min。
（12)1：40，PAG，37℃45min。
�。�13)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min兩次。
�。�14)雙蒸水洗5min，兩次。
（15)物理顯影見(jiàn)后所述。
（16)雙蒸水洗5min，兩次。
�。�17)蘇木素襯染。
�。�18)酒精常規(guī)脫水，透明，封固。
結(jié)果，光鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有膜或包涵體形分布的陽(yáng)性黑色狀顆粒，背景干凈。
�。ǘ�)冰凍切片的IGSS染色
作冰凍切片的組織，若在動(dòng)物試驗(yàn)可以先經(jīng)過(guò)固定液灌注或浸泡固定，也可不固定先做冰凍切片。人的組織也可通過(guò)浸泡固定或不固定，這主要根據(jù)保存抗原性的需要而定。固定過(guò)的組織可用20%蔗糖PBS（0.01mol/l pH7.2)浸泡2～4h或在切片時(shí)用OCT包埋，以減少冰凍切片過(guò)程中冰晶的形成。如果切片還準(zhǔn)備用于電鏡包埋，則可經(jīng)過(guò)5%，10%，20%濃度逐級(jí)遞增的蔗糖溶液。在冰凍切片前，可先入氟里昂–22 （Freon--22)驟冷，這樣可使組織的結(jié)構(gòu)保存更好，適用于電鏡觀察。
�。�1)冰凍切片。
�。�2)Lugol＇s液，5min.
以下步驟同人肝HBsAg的染色方法。
