1990年Hoshina等首行應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)成功檢出胃粘膜活檢標(biāo)本內(nèi)的Hp。我院從今年1995的1月份開(kāi)始，在短短3個(gè)月中對(duì)70例胃鏡受檢者應(yīng)用PCR檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌，并采用目前廣泛使用的快速尿素酶試驗(yàn)作了對(duì)比，收到滿意效果，報(bào)告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
①取材：對(duì)70例胃鏡受檢者（十二指腸球部潰瘍31例，胃潰瘍2例，胃癌2例，各類(lèi)胃炎28例，十二指腸球炎7例)均在幽門(mén)前區(qū)鉗取組織1～2塊，供尿素酶試驗(yàn)和PCR檢測(cè)。②藥盒深圳愛(ài)利國(guó)公司提供的1min快速尿素酶試劑檢測(cè)Hp，在1min～5min內(nèi)觀看結(jié)果。廈門(mén)長(zhǎng)城生物工程有限公司提供的幽門(mén)螺桿菌DNa PCR診斷試劑盒，測(cè)Hp保守區(qū)的DNA片斷，擴(kuò)增產(chǎn)物為456bp，一步法提取模板，直接擴(kuò)增，無(wú)需分裝。③樣品處理將小塊胃粘膜研磨后用生理鹽水洗滌。1.5萬(wàn)r/min離心5min，去上清，沉淀用50μl樣品處理液混懸，96℃加熱10min，1.5萬(wàn)r/min離心5min，取上清8μl加入反應(yīng)管內(nèi)混勻，置PCR儀，同時(shí)和陽(yáng)性和陰性對(duì)照。④PCR擴(kuò)增94℃加熱300S后進(jìn)入循環(huán)，94℃—30s，55℃—30s，72℃—60s，共循環(huán)36次，最后72℃保溫300s。取后應(yīng)產(chǎn)物10μl直接點(diǎn)樣于含溴乙錠瓊脂糖膠板孔中，電泳80V，10min～25min停止電泳，于紫外檢測(cè)儀觀看結(jié)果。
表1 兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較
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n |
PCR |
尿素酶試驗(yàn) |
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35 |
＋ |
＋ |
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17 |
＋ |
－ |
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9 |
－ |
－ |
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5 |
－ |
弱陽(yáng) |
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3 |
＋ |
弱陽(yáng) |
|
3 |
－ |
＋ |
3 討論
在眾多檢測(cè)Hp感染方法中，PCR具有高效、特異、敏感、簡(jiǎn)便、快速和自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，可檢出少至100個(gè)細(xì)菌的水平，如取材不便還可從胃液和唾液中檢測(cè)Hp，是我國(guó)進(jìn)行流行病學(xué)研究的理想方法；快速尿素酶觀察的時(shí)間尚需作嚴(yán)格規(guī)定，過(guò)快可致假陰性，過(guò)長(zhǎng)又易產(chǎn)生尿素酶污染菌致假陽(yáng)性，認(rèn)為本組織果不能排除此類(lèi)因素。
李延年 劉先賢
武漢市東西湖區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科（430071)
