自從Warren和Mashall從人胃粘膜中分離出幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pyloi,Hp)以來(lái)，國(guó)內(nèi)外大量的研究資料表明它與非自身免疫性慢性胃炎和十二指腸潰瘍病關(guān)系密切。對(duì)該菌的免疫學(xué)研究也已有不少進(jìn)展，這對(duì)弄清其致病機(jī)制、診斷和治療均有重要意義。我們僅就近年來(lái)國(guó)外對(duì)Hp的免疫學(xué)研究現(xiàn)狀作一綜述。
1 局部和系統(tǒng)免疫
Hp做為一種致病菌，可引起人體特異性和非特異性免疫反應(yīng)。Wyatt等應(yīng)用免疫過(guò)氧化物酶染色法研究了非潰瘍性消化不良病人Hp感染時(shí)的局部免疫反應(yīng)，在所有活動(dòng)性胃炎病人及部分非活動(dòng)性胃炎病人均可見(jiàn)細(xì)菌被IgA包裹，并且發(fā)現(xiàn)IgG和IgM包裹和胃炎的活動(dòng)性有關(guān)。被包裹的細(xì)菌多位于粘膜表面，位于胃小凹深部的有些細(xì)菌則未被包裹，從而提示這一部位的細(xì)菌可以保存下來(lái)，免受抗體的傷害。
Kazi等用免疫過(guò)氧化物酶染色法對(duì)53塊胃竇活檢標(biāo)本進(jìn)行了細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)的研究，發(fā)現(xiàn)Hp相關(guān)性胃炎與無(wú)菌的慢性胃炎和正常對(duì)照間有明顯差異。IgA、分泌成分和補(bǔ)體C3包裹的細(xì)菌可見(jiàn)于所有慢性活動(dòng)性胃炎病人。C3總是與IgA、IgM或兩者共同包裹有關(guān)，這種現(xiàn)象罕見(jiàn)于沒(méi)有中性多形核粒細(xì)胞浸潤(rùn)的病人，在26例Hp相關(guān)性慢性胃炎中，有18例出現(xiàn)上皮內(nèi)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)。這些上皮內(nèi)單個(gè)核細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞染色陽(yáng)性。研究結(jié)果提示Hp相關(guān)性慢性胃炎時(shí)的細(xì)胞和體液免疫均顯著增強(qiáng)。
Attar等用免疫組化技術(shù)研究了21例胃炎的胃粘膜活檢標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)Hp陽(yáng)性胃炎組的總T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞出現(xiàn)例數(shù)的比率顯著高于該菌陰性組；輔助性T細(xì)胞的檢出率、自然殺傷細(xì)胞的存在與否和B細(xì)胞的分布在2組間無(wú)差異；粘膜中的IgA，IgG，IgM漿細(xì)胞出現(xiàn)于所有病人，但3種產(chǎn)生免疫球蛋白的漿細(xì)胞有較高的密度在Hp陽(yáng)性胃炎則高于陰性者。研究表明有Hp陽(yáng)性胃炎胃粘膜中漿細(xì)胞有較高的密度，且炎癥主要是由于過(guò)多存在的總T細(xì)胞尤其是抑制T細(xì)胞所介導(dǎo)，結(jié)果提示：Hp在胃粘膜中既引起體液免疫反應(yīng)，又引起細(xì)胞免疫反應(yīng)。
Das等比較了不同來(lái)源的人血清對(duì)Hp的調(diào)理素活性， 發(fā)現(xiàn)不論是沒(méi)有胃炎或消化性潰瘍病癥狀的對(duì)照組或是分離出或未分離出Hp的有癥狀病人的血清，對(duì)Hp有同樣好的調(diào)理素作用。同時(shí)發(fā)現(xiàn)調(diào)理素作用取決于補(bǔ)體激活的旁路途徑而不取決于抗體。上述發(fā)現(xiàn)提示：特異性抗體并無(wú)防御Hp的作用，血清中抗體僅具有診斷價(jià)值。
Bernatowska等用化學(xué)熒光系統(tǒng)和電鏡檢查法研究了三種不同彎曲菌和Hp對(duì)中性粒細(xì)胞的調(diào)理素作用，發(fā)現(xiàn)胎兒彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌和空腸彎曲菌的調(diào)理素作用是由抗體介導(dǎo)，由補(bǔ)體增強(qiáng)，而對(duì)Hp的吞噬作用則由于它能直接激活補(bǔ)體活化的經(jīng)典途徑而不需要抗體。我們認(rèn)為這一不尋常的特性在Hp相關(guān)性胃炎和十二指腸潰瘍的發(fā)病機(jī)理中可能起重要作用。
2 細(xì)胞毒性因子
現(xiàn)有資料提示：Hp可能分泌有一種或多種可使細(xì)胞發(fā)生變性的細(xì)胞毒性因子，這在其致病機(jī)理中可能具重要作用。Cover和Blaser于1989年在Hp的肉湯培養(yǎng)上清液中發(fā)現(xiàn)一種能使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生空泡變性的細(xì)胞毒素，并證明這個(gè)Mr132000的細(xì)胞毒素相關(guān)性蛋白在活體內(nèi)可為Hp感染的病人所識(shí)別。他們推測(cè)這種蛋白質(zhì)的表達(dá)可能在消化性潰瘍病的發(fā)生機(jī)理中起重要作用。
Figura檢驗(yàn)了77株Hp細(xì)胞毒素產(chǎn)生情況，其中24株來(lái)自消化性潰瘍病（和慢性胃炎)病人，53株來(lái)自慢性胃炎但無(wú)潰瘍的病人，前者有16株（66.6%)、后者亦有16株（30.1%)產(chǎn)生細(xì)胞毒素。兩者間差異有顯著性，提示該毒性物質(zhì)在消化性潰瘍病的發(fā)生上起著病因?qū)W作用。Morgan給3窩小豬分別口服2株產(chǎn)毒和1株非產(chǎn)毒的Hp，僅產(chǎn)毒株在胃粘膜中定居并出現(xiàn)炎癥、粘液減少、細(xì)胞內(nèi)空泡形成和免疫反應(yīng)，Hp的細(xì)胞毒性因子可能是其致病的重要因素。
3 單克隆抗體的制備
國(guó)外已有數(shù)篇Hp單克隆抗體研制成功的報(bào)道。Negrini等把從培養(yǎng)皿中分離的6株Hp混合后免疫小鼠，32d后將小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞P3X63.Ag8.653融合，細(xì)胞融合懸液于96孔板上培養(yǎng)生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞集落，用整個(gè)Hp作靶細(xì)胞的間接ELISA法篩選抗體，共獲得21株陽(yáng)性單克隆抗體，其中以CB-26為最好。
研究證明單克隆抗體CB-26具有很強(qiáng)的特異性，它不與人紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、胃竇腺細(xì)胞和胃小凹細(xì)胞起反應(yīng)，也不與非彎曲菌屬的Gram陰性菌、甚至空腸、結(jié)腸和胎兒彎曲菌起反應(yīng)。作者等還對(duì)60名經(jīng)內(nèi)鏡檢查的病人鑒定 了單克隆抗體CB-26辨認(rèn)胃粘膜刷片中Hp的能力。用間接過(guò)氧化物酶染色法在所有32名培養(yǎng)陽(yáng)性病人中均觀察到大量Hp，而在28名培養(yǎng)陰性的病人中也有8例觀察到少量細(xì)菌，可能是這些病人的活檢標(biāo)本中細(xì)菌量過(guò)少，不足以培養(yǎng)出來(lái)的緣故。這些研究提示單克隆抗體CB-26可能在Hp的快速和特異性檢出中具有較高的價(jià)值。
4 尿素酶的分子結(jié)構(gòu)
Hp是突出的特點(diǎn)之一是具有活性很高的尿素酶，有人認(rèn)為它同該菌的致病性和耐酸能力有關(guān)，而尿素酶的分子結(jié)構(gòu)則與其免疫學(xué)特性密切相關(guān)。
Hu和Mobley研究了尿素酶的分子結(jié)構(gòu)，將經(jīng)柱層析純化的尿素酶進(jìn)行分析，證明純化的尿素酶所占Hp菌體粗提取物可溶性蛋白5.9%,Mr為550 000,由兩個(gè)Mr分別為66 000和29 500的亞單位組成,兩者在分子中的比例約為1:1，6對(duì)這樣的亞單位構(gòu)成一個(gè)基本的酶分子。并推測(cè)Hp強(qiáng)大的尿素酶活力是由于大量的尿素酶分子作用的結(jié)果，而不是單一酶分子活性特別高。
N-末端分析顯示29 500亞單位氨基酸順序上同刀豆尿素酶亞單位的氨基末端以及奇異變形桿菌和摩氏摩根菌（Morganella morganii)尿素酶3個(gè)亞單位中最小者具有很高的相似性。66 000亞單位同奇異變形桿菌、摩氏摩根菌和產(chǎn)生氣克雷白桿菌尿素酶3個(gè)亞單位中最大者具有相似的內(nèi)順序（氨基酸271～285)。再者，摩氏摩根菌和刀豆的尿素酶亞單位可被Hp66000亞單位的特異性抗血清所識(shí)別。從而表明至少有部分相同的抗原決定簇留在不同種系的尿素酶中。
目前國(guó)內(nèi)外已有用粗制尿素酶提取物做ELISA的包被抗原檢測(cè)血清中的Hp抗體。由于分子結(jié)構(gòu)的相似性及存在相同的抗原決定簇，用尿素酶提取物作抗原在臨床上診斷Hp感染，有可能同含有尿素酶的其他菌群發(fā)生交叉反應(yīng)，如泌尿道菌群等。但這種交叉是否嚴(yán)重到影響臨床診斷、以及交叉頻度、范圍等問(wèn)題，尚有待進(jìn)一步的研究。
5 免疫學(xué)診斷方法
自從發(fā)現(xiàn)Hp后，血清學(xué)診斷方法迅速出現(xiàn)，并不斷得到改進(jìn)。早期應(yīng)用的是血凝法和補(bǔ)體結(jié)合法，目前應(yīng)用較多的是ELISA法。更精確的蛋白印跡法雖然能查出多種多樣的人體全身抗原抗體反應(yīng)，但并不適于流行病學(xué)調(diào)查。
作為常規(guī)應(yīng)用的抗原選擇仍存在問(wèn)題，理想的抗原應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①特異性強(qiáng)；②致免疫性高；③制備容易；④貯存穩(wěn)定。早期的抗原制備如全菌超聲粉碎抗原，由于含有多種抗原包括鞭毛蛋白，特異性差，可同其他菌種如空腸彎曲菌起反應(yīng)。酸提抗原或超速離心全菌上清液是更純化的制備，使ELISA的結(jié)果更可靠。
應(yīng)用Hp特有的蛋白質(zhì)如尿素酶作為測(cè)定的基礎(chǔ)是另外一個(gè)可行的途徑。其特異性雖好但蛋白印跡法顯示在不同人對(duì)每一個(gè)別抗原有顯著不同的反應(yīng)，即對(duì)某一單一抗原試驗(yàn)并非所有人都反應(yīng)強(qiáng)烈，這種測(cè)定較之應(yīng)用大范圍的多種抗原雖然特異性強(qiáng)，但敏感性低。因此血清學(xué)檢測(cè)仍有待進(jìn)一步研究和改進(jìn)。
6 分子免疫學(xué)
Clayton等于1989年首次在大腸桿菌內(nèi)構(gòu)建了Hp的DNA基因庫(kù)。他們篩選出一株能同特異性抗血清反應(yīng)的陽(yáng)性克隆（γcp2)。該克隆的表達(dá)產(chǎn)物系Mr66 000的多肽片斷。免疫印跡分析多肽能同特異性Hp抗血清反應(yīng)。將該DNA提取物經(jīng)內(nèi)切酶分析顯著該DNA尚含有一個(gè)17 000的DNA除編碼Mr66 000的蛋白外，尚可編碼Mr31 000的蛋白質(zhì)抗原。免疫印跡顯示在大腸桿菌中表達(dá)的這些抗原同在Hp菌體的抗原具有相同的Mr，并存于所有Hp菌株內(nèi)。點(diǎn)雜交和間接免疫熒光染色證實(shí)由這些多肽產(chǎn)生的抗血清僅同Hp反應(yīng)。表達(dá)這些抗原的DNA經(jīng)用32p標(biāo)記顯示僅能同Hp菌株雜交。用親和純化的尿素酶多克隆抗體的免疫印跡顯示這些克隆的抗原是尿素酶分子的一部分，但并無(wú)尿素酶活性。
用上述DNA探針和重組DNA表達(dá)Hp特異性抗原對(duì)探知無(wú)法培養(yǎng)的Hp，如唾液、糞便中細(xì)菌，探討其致病機(jī)理和血清學(xué)診斷會(huì)有較大幫助。一旦篩選出的DNA克隆能夠表達(dá)出特異性強(qiáng)、致免疫性高的抗原后，將會(huì)在臨床應(yīng)用中發(fā)揮更大的作用。
丁松澤 賈博琦
北京醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院胃腸科（北京 100034)
