九、實驗動物采血方法
實驗研究中，經(jīng)常要采集實驗動物的血液進行常規(guī)檢查或某些生物化學(xué)分析，故必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術(shù)。
采血方法的選擇，主要決定于實驗的目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動脈血液。
采血時要注意：⑴采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃為宜；⑵采血用具有采用部位一般需要進行消毒；⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。現(xiàn)將采用血方法按動物和部位分別加以介紹。
不同動物采血部位與采血量的關(guān)系可參考表11-7。
表11-7 不同動物采血部位與采血量的關(guān)系
| 采血量 | 采血部位 | 動物品種 |
| 取少量血 | 尾靜脈
耳靜脈 眼底靜脈叢 舌下靜脈 腹壁靜脈 冠、腳蹼皮下靜脈 |
大鼠、小鼠
兔、大鼠、小鼠 兔 青蛙、蟾蜍 雞、鴨、鵝 |
| 取中量血 | 后肢外側(cè)皮下小隱靜脈
前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈 耳中央動脈 頸靜脈 心臟 斷頭 翼下靜脈 頸動脈 |
狗、猴、貓
狗、猴、貓 兔 狗、貓、兔 豚鼠、大鼠、小鼠 大鼠、小鼠 雞、鴨、鴿、鵝 雞、鴨、鴿、鵝 |
| 取大量血 | 股動脈、頸動脈
心臟 頸靜脈 摘眼球 |
狗、猴、貓、兔
狗、猴、貓、兔 馬、牛、山羊、綿羊 大鼠、小鼠 |
常用實驗動物的最大安全采血量與最小的致死采用血量，見表11-8。
表11-8 常用實驗動物的最大安全采血量與最小致死采血量
|
動物品種 |
最大安全采血量（ml) |
最小致死采血量（ml) |
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小鼠 |
0.2 |
0.3 |
|
大鼠 |
1 |
2 |
|
豚鼠 |
5 |
10 |
|
兔 |
10 |
40 |
|
狼狗 |
100 |
500 |
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獵狗 |
50 |
200 |
|
猴 |
15 |
60 |
(一)小鼠、大鼠采血法
1.割(剪)尾采血
當(dāng)所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。
2.鼠尾刺血法
大鼠用血量不多時（僅做白細(xì)胞計數(shù)或血紅蛋白檢查)，可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果長期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。
3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套)，應(yīng)防止動物窒息。當(dāng)取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號針頭的1ml注射器或長頸（3～4cm)硬質(zhì)玻璃滴管（毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm)，使采血器與鼠面成45℃的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約2～3mm，大鼠約4～5mm。當(dāng)感到有阻力時即停止推進，同時，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢�，即除去加于頸部的壓力，同時，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。
若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學(xué)項目的檢驗。
