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第三節(jié) 氣相色譜法
氣相色譜法：以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。
原理：各組分在固定相與載氣(流動相)間分配系數(shù)不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。
一、基本原理：
(一)、基本概念：
一個組分的色譜峰用三項參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示，用于定性)、峰寬(用于衡量柱效)。
(1)、保留時間 (tR) ：從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔。
(2)、死時間 (t0)：分配系數(shù)為零的組分的保留時間。
(3)、相對保留值 (r)：兩組分的調(diào)整保留值之比。
(4)、半峰寬 (Wh/2)：峰高一半處的峰寬。
(二)、塔板理論：
塔板理論方程式(高斯方程式)：
理論塔板式數(shù)： 理論塔板高度：
(三)、速率理論： H=A+B/u+Cu
影響塔板高度的因素：1、渦流擴散 2、縱向擴散 3、傳質(zhì)阻抗
二、氣相色譜儀：
(1)、色譜柱：固定相與柱管組成。 填充柱、毛細管柱； 分配柱、吸附柱
(2)、固定液：高沸點的液體，操作下為液態(tài)。 甲基硅油、聚乙二醇等
選擇原則：按相似性、按主要差別、按麥氏差別選擇。
(3)、載體：化學惰性的多孔性微粒
(4)、毛細管色譜柱：開管型、填充型
(5)、檢測器：1、濃度型檢測器：熱導檢測器和電子捕獲檢測器
2、質(zhì)量型檢測器：氫焰離子化檢測器
中國藥典2000對氣相色譜規(guī)定：除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意更改外，其他均可適當改變，色譜圖于30min內(nèi)記錄完畢。
第四節(jié) 高效液相色譜法
1、 基本原理：影響柱效的主要因素是渦流擴散和傳質(zhì)阻抗。
分類：1、液固吸附色譜法：流動相為液體，固定相是固體吸附劑。
2、液--液分配色譜法：固定相幾乎全是化學鍵合硅膠，又稱化學鍵合相色譜法。
按固定相和流動相的極性2又分：正相色譜法和反相色譜法
正相色譜法：流動相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團物質(zhì)的分離。 極性弱組分先流出
反相色譜法：……………大于……………………… 用于分離非極性至中等極性的分子型化合物
2、 高效液相色譜儀：
1、高壓輸液泵 2、色譜柱 3、進樣閥
4、檢測器：紫外吸收檢測器、熒光檢測器、差示折光檢測器、電化學檢測
中國藥典2000對高效液相色譜法規(guī)定：除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意更改外，其余均可適當改變，色譜圖于20min內(nèi)記錄完畢。
第5節(jié) 色譜系統(tǒng)適用性試驗和定量分析方法
一、系統(tǒng)適用性試驗
1、 色譜柱的理論板數(shù)：
2、 分離度：應大于1.5
3、重復性
3、 拖尾聲因子：0.95-1.05之間
二、定量測定法：
1、內(nèi)標法加較正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量
2、外標法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量
3、加較正因子的主成分自身對照法
不加較正因子的主成分自身對照法
第六節(jié) 電泳法
電泳法：在電場的作用下，依據(jù)各組分之間淌度的不同實現(xiàn)分離的方法。分離程度取決于淌度之差。
一、基本原理： 電泳遷移速度為： ：電泳淌度 ：電場強度
影響電泳分離的條件：1、緩沖液的PH值和離子強度 2、電場強度 3、樣品濃度
二、電泳儀： 醫(yī)學全在線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn
3、 各類電泳法：
(1)、紙電泳法 (2)、醋酸纖維素電泳法：主要用于測定蛋白質(zhì)相對百分含量
(3)、瓊脂糖凝膠電泳法： (4)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法
(5)、SDS聚丙烯胺凝膠電泳法：測定蛋白質(zhì)的分子量
四、毛細管電泳法簡介：以彈性石英毛細管為分離通道，高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的分析方法。
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