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第六章 分光光度法
第一節(jié) 紫外可見分光光度法
一、基本原理
紫外--可見分光光度法：是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。
波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射線 紫外區(qū) 可見區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無線電波區(qū)
Beer-lambert定律： A=E l c A--吸收度 E-吸收系數(shù) l ---液層厚度 c---溶液濃度
吸收度濃度與厚度的關(guān)系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/L , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
百分吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1%(W/V) , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響B(tài)eer定律因素：化學(xué)因素，光學(xué)因素
二、紫外--可見分光光度計： 主要部件：
1、 光源：要求光譜的光源，2、 氫燈和鎢燈(350nm)
3、 單色器：進(jìn)口狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件(棱鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
4、 吸收池：用光學(xué)玻璃制成的吸收池，5、 只能用于可見光區(qū)。用熔融石英(氧化硅)，6、 可見紫外光區(qū)。
7、 檢測器：光電池：(硒光電池：用于可見光；硅光電池：紫外可見光) 內(nèi)阻小，8、 易疲勞。
光電管：內(nèi)阻高，電流易放大 。
9、 訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法：
(一)、定性鑒別：是多數(shù)有機化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特征數(shù)據(jù) 2、對比吸收度(或吸收系數(shù))比值 3、對比吸收光譜的一致性
(二)、純度檢查：雜質(zhì)檢查與雜質(zhì)限量檢測
(三)、含量測定：
1、吸收系數(shù)法 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法 3、對照法
第二節(jié) 熒光分析法
熒光分析法：利用熒光的物理特性而進(jìn)行定性與定量測定的方法。熒光法比紫外可見靈敏。
熒光光度計：激發(fā)光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
第三節(jié) 紅外分光光度計
紅外線：波長大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來描述分子的伸縮振動。
當(dāng)分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產(chǎn)生吸收。伸縮振動和彎曲振動。
基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(tài)(V=0)躍遷至第一激發(fā)態(tài)時產(chǎn)生的吸收峰。
倍頻峰：振動能級由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。
吸收峰：用于鑒別官能團(tuán)存在的吸收峰稱特征吸收峰。
指紋區(qū)：1250-400cm (8.0-25um)的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。
紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器(棱鏡和光柵)和檢測器(真空熱電偶)及記錄裝置。
第七章 色譜法
第一節(jié) 概述
色譜法：是一種物理或物理化學(xué)分離方法。用于定性鑒別、純度檢查、含量測定。
分配系數(shù)：組分在固定相和流動相之間的分配平衡時的濃度之比。 K=
容量因子：又稱質(zhì)量分配系數(shù)，即達(dá)到分配平衡后，組分在固定相和流動相中的質(zhì)量之比。
第二節(jié) 薄層分析法
一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。K值越大隨展開劑移動的速度越慢。
比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離( )與展開劑的遷移距離( )之比稱為比移值( ) 。
R 最佳范圍是0.3-0.5 ，可用范圍是0.2-0.8 。
吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。常用吸附劑有：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚酰胺。
硅膠：在105-110 C加熱30分，使硅膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質(zhì)。
氧化鋁：堿性、中性、酸性。中性用得多。 醫(yī).學(xué)全.在.線gydjdsj.org.cn
制備薄層板：要求吸附劑涂布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機械涂布法。活化。
吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強的組分時，宜選用活性低(活度級別高)的薄層板，以極性強的展開劑展開。反之
點樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm 。
顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。
定性分析方法、純度檢查、定量分析方法(洗脫測定法和直接測定法)。
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