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實用免疫細胞與核酸:第一章 總論

免疫細胞化學又稱免疫組織化學、其主要原理是用標記的抗體(或抗原)對細胞或組織內的相應抗原(或抗體)進行定性、定位或定量檢測,經過組織化學的呈gydjdsj.org.cn/yaoshi/色反應之后,用顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。凡是能作抗原、半抗原的物質,如蛋白質、…

免疫細胞化學又稱免疫組織化學、其主要原理是用標記的抗體(或抗原)對細胞或組織內的相應抗原(或抗體)進行定性、定位或定量檢測,經過組織化學的呈gydjdsj.org.cn/yaoshi/色反應之后,用顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。凡是能作抗原、半抗原的物質,如蛋白質、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受體及病原體等都可用相應的特異性抗體的組織、細胞內將其用免疫細胞化學手段檢出和研究。

免疫細胞化學的突出優(yōu)點是:

1.高度特異性 抗原抗體反應是特異性最強的反應之一,免疫細胞化學所用的抗體必須是特異性強的多價或單價抗體,具有高度的識別能力,在抗原識別上可達到單個氨基酸的水平,這是其它組織化學難以相比的。

2.敏感性高 現(xiàn)代免疫細胞化學采用各種有效方法最大限度保存細胞和組織內待檢物質的抗原性,或采用各種增敏方法,使用高度敏感的和高親和力的抗體,保證可檢出細胞內超微量的抗原成分,用顯微鏡或電子顯微鏡觀察結果,因此,它是在細胞、分子水平或基因水平的檢測技術。

3.方法步驟統(tǒng)一 若掌握一種技術操作方法步驟,則一通百通。

4.形態(tài)、機能和代謝密切結合 是一種綜合定性、定位和定量密切結合;形態(tài)、機能和代謝密切結合為一體的研究和檢測技術。

免疫細胞化學技術在細胞、染色體或亞細胞水平原位檢測抗原分子,是其它任何生物技術難以達到和代替的,它以在細胞、基因和分子水平同時原位顯示基因及其表達產物,形成了新的檢測系統(tǒng),為生物學、醫(yī)學和各個領域分子水平的研究與診斷,開拓了廣闊的前景。

免疫細胞化學技術日新月異,以驚人的速度發(fā)展。尤其是和分子生物學的理論和技術日益結合密切,基因探針、核酸分子雜交技術、原位PCR技術、核酸雜交和免疫細胞化學雙標記技術、電鏡雜交技術等成為免疫細胞化學技術的新發(fā)展成員,標志著免疫細胞化學又進入一個新的發(fā)展階段。核酸分子探針-雜交-免疫細胞化學放大和顯示雜交信號,可以稱為雜交免疫細胞化學。所以,核酸分子探針的研制已成為免疫細胞化學實驗室中必需的試劑生產技術,需要學習引進分子生物學的有關技術和設備,建立相應的基因工程實驗條件,把基因重組技術、單克隆抗體技術和免疫細胞化學技術融合在一起,就形成了現(xiàn)代免疫細胞化學的新主體。更高倍電鏡技術和圖像分析,流式細胞儀技術和激光共聚焦顯微技術和不斷更新,把原位定性、定位和定量技術提高到了更新的水平,形成了免疫細胞化學發(fā)展的兩翼,向著生命科學更廣闊領域飛翔。

免疫細胞化學的全過程包括:①抗原提取和純化;②免疫動物或細胞融合(單克隆抗體);③抗體效價檢測和提取;④標記抗體;⑤細胞和組織切片標志的制備;⑥免疫細胞化學反應和顯色;⑦觀察和記錄結果。

由此可見,免疫細化學的基本理論是抗原抗體反應,標記化學反應和呈色化學反應。由于免疫細胞化學和原位核酸分子雜交是在細胞和組織上進行抗原抗體反應,所以,必須熟練掌握顯微標本制備的全過程,要求待檢標本形態(tài)結構和抗原性保存良好,抗原不從原位擴散或丟失。所以從事免疫細胞化學的工作者必須了解以下有關理論及掌握有關細胞和組織學技術。

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