動脈粥樣硬化:第四節(jié)　非酯化脂肪酸測定

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臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸（free fatty acid,FFA）或非酯化脂肪酸（nonesterifiedfatty acid,NFFA），正常血清中含有油酸（18:1,W9）占54%，軟脂酸（16：0）占34%，硬脂酸（18：0）占6%，是其主要的NFFA。另外還有月桂酸（12：0）、肉豆蔻酸（14：0）和花生…

臨床上將C₁₀以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸（free fatty acid,FFA)或非酯化脂肪酸（nonesterifiedfatty acid,NFFA)，正常血清中含有油酸（18:1,W⁹)占54%，軟脂酸（16：0)占34%，硬脂酸（18：0)占6%，是其主要的NFFA。另外還有月桂酸（12：0)、肉豆蔻酸（14：0)和花生四烯酸（20：4，W⁶^{，9，12，15})等含量很少的脂肪酸。與其他脂質(zhì)比較，NFFA在血中濃度很低，其含量水平極易受脂代謝，糖代謝和內(nèi)分泌機能等因素影響，血中NFFA半壽期為1～2min，極短。血清中的NFFA是與清蛋白結(jié)合進行運輸，屬于一種極簡單的脂蛋白。

測定血清NFFA法有滴定法。比色法，原子分光光度法，高壓液相層析法和酶法等。一般多以酶法測定。作NFFA測定的標本一定要注意在4℃條件下分離血清并盡快進行測定。因為血中有各種脂肪酶存在，極易也極快使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中NFFA值上升。貯存標本僅限于24h內(nèi)，若保存三天，其值約升高30%，使結(jié)果不準確。

gydjdsj.org.cn1．非酶法測定

非酶法測定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高壓液相層析法。前三種方法準確性差；高壓液相層析法，儀器太昂貴，不便于批量操作。

2．酶測定法

主要用脂肪酶測定。血清中游離脂肪酸可分別測定酶水解后的產(chǎn)物乙酰CoA或AMP或輔酶A（CoA)進行定量。酶法測定結(jié)果準確可靠，快速，易于批量檢測。測定原理如圖15-6所示。

圖15-6 血清主要FFA酶法測定圖

□：內(nèi)物質(zhì)作為生成量與變化量進行測定；ACS：乙酰CoA合成酶；MK：肌激酶；　PK：丙酮酸激酶；POD：丙酮酸氧化酶；DTNB：α-磺基苯甲酸；ACO：乙酰CoA氧化酶；ACD：乙酰CoA脫氫酶。

一、亮度法

1．原理

血清中游離脂肪酸經(jīng)抽提到高密度銅試劑中，形成銅皂在上層溶劑中，再用二苯卡巴肼與銅顯色，進行定量。

2．試劑組成

代號	種類	濃度	組成	貯存2～8℃	有效期
R-1	抽提劑		氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1（V/V)
R-2	緩沖液	33mmol/L	KH₂PO₄4.539g/L 100ml+Na₂HPO₄·2H₂O5.983g/l 50ml調(diào)pH至6.4
R-3	銅貯液	500mmol/L	Cu（NO₃)₂·3H₂o 12.07g加H₂O→100ml
R-4	三乙醇胺	1.0mol/L	三乙醇胺10ml，加水→100ml
R-5	NaOH液	1mol/L
R-6	銅試劑		R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml +H₂O→100ml調(diào)pH至8.1
R-7	二苯卡巴肼液		二苯卡巴肼（乙醇)液（4g/L)10ml+R-4 0.1ml		臨用前配制
R-8	軟脂酸標準貯存液	2mmol/L	軟脂酸51.2mg溶于100ml R-1液	冷藏
R-9	R-8gydjdsj.org.cn/wsj/的應用液	500μmol/L	用R-1液稀釋	冷藏

3．操作

按圖15-7操作。

4．計算

血清游離脂肪酸（μmol/L)=E_SA/E_ST×500

二、酶法

1．原理

血清中游離脂肪酸或非酯化脂肪酸（NEFA)，經(jīng)酶試劑作用生成紫色化合物，其顏色深淺與NEFA含量成正比。

2．試劑組成

代號	種類	組成	濃度貯存	貯存
R1	緩沖液	磷酸緩沖液 MgCl₂液去垢劑	0.04mmol/LpH6.9 3mol/L
R2	酶/輔酶	乙酰CoA合成酶抗壞血酸氧化酶 CoA ATP 4-AAP 溶于10ml R1液中	≥0.3U/ml ≥1.5U/ml 0.9mmol/L 5.0mmol/L 1.5mmol/L	冷藏5日
R3	酶稀釋液	苯氧乙醇去垢劑	0.3%(V/V)
R4		馬來酰亞胺該試劑與R3等體積混合	10.6mmol/L
R5	酶試劑	乙酰CoA氧化酶過氧化物酶 TOOS 混合上述試劑，再等體積R4試劑混合	≥10U/ml 7.5U/ml 0.2mmol/L	冷藏5日
R6	標準液		1mmol/L	冷藏